导读:本文包含了伯氏嗜线虫致病杆菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:伯氏嗜线虫致病杆菌,蛋白酶抑制剂,豌豆蚜,杀虫活性
伯氏嗜线虫致病杆菌论文文献综述
金丹娟,薛仁风,张河庆,曾凡荣,董双林[1]（2012）在《伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum Harris生物活性的研究》一文中研究指出蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白水解酶活性的小分子蛋白质,在昆虫肠道内通过抑制蛋白酶的活性,可以干扰昆虫的正常生长和发育。本文利用体外重组表达的蛋白酶抑制剂Xbpi-1,研究了Xbpi-1对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum Harris的杀虫活性及其生化机制。结果表明,取食含蛋白酶抑制剂Xbpi-1浓度为50、200、400、800μg.mL 1人工饲料的豌豆蚜,96 h后的校正死亡率分别为2.1%、9.4%、19.7%和50.9%,虫重分别减少12.3%、20.3%、25.7%和33.7%。生化测定结果表明,4种浓度处理的豌豆蚜体内总蛋白酶、氨肽酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性均有显着降低,浓度为800μg.mL 1时,其酶活性分别降低了29.6%、26.1%、23.5%和23.8%。本研究结果说明,蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜具有较好的生物活性,为进一步开发应用于豌豆蚜等刺吸式害虫的防治提供了理论依据。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2012年04期）
安欣,王国红,王永宏,张兴[2]（2012）在《伯氏嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus bovienii YL002对4种抗生素抗性突变株的筛选及抑菌活性分析》一文中研究指出为了提高伯氏嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus bovienii YL002抑菌活性,采用紫外线照射和吖啶橙复合诱变的方法,对其进行诱变改良,并在抗生素最小抑制浓度选择压力下筛选对4种抗生素具有抗性的突变菌株。以枯草芽孢杆菌为指示菌,得到了17株抑菌活性有显着变化且遗传稳定的突变菌株。其中菌株L0420-3对枯草芽孢杆菌的抑制活性最强,连续转接5次的抑菌圈直径增大率均在80%以上;菌株Q025-1和L0314-4对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率为75.66%和73.41%,分别是野生菌株的1.35倍和1.31倍;接种灰霉病菌后5 d对番茄果实灰霉病的防效为95.74%和93.62%,分别是野生菌株的1.71倍和1.67倍。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2012年04期）
金丹娟[3]（2012）在《伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂对豌豆蚜Acythosiphon pisum Harris的杀虫活性及其作用机制》一文中研究指出蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白水解酶活性的小分子蛋白质,广泛存在于微生物、植物和动物中。根据活性位点的氨基酸,蛋白酶抑制剂可以分成四类：丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑制剂。在昆虫肠道内,蛋白酶抑制剂通过抑制蛋白酶的活性,可以干扰昆虫的正常生长和发育。随着近年转基因技术的发展,蛋白酶抑制剂在害虫防治上的应用前景越来越广阔。伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂Xbpi-1是从伯氏嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus bovienii)中克隆、表达、纯化的一种蛋白酶抑制剂,能明显抑制烟蚜(Myzus persicae)和绿盲蝽(Lygus lucorum Meyer-Dur)的生长、发育和繁殖。为了探索Xbpi-1对豌豆蚜的杀虫活性和机制,本文利用人工饲料掺入法测定了伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜生长和发育的影响；研究了Xbpi-1对豌豆蚜体内主要蛋白酶活性及游离氨基酸水平的抑制作用；探讨了Xbpi-1在豌豆蚜体内的分布及对组织学的影响。主要结果如下：1.采用饲喂法和浸渍法测定了蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜存活、生长和发育的影响。结果表明,Xbpi-1对豌豆蚜具有较好的胃毒活性。取食含Xbpi-1浓度为50、200、400和800人工饲料的豌豆蚜,96h后的校正死亡率分别为2.1%、9.4%、19.7%和50.9%,虫重分别减少12.3%、20.3%、25.7%和33.7%。但Xbpi-1对豌豆蚜不显示触杀活性,利用浸渍法处理豌豆蚜24h和72h后,不同浓度(50-800μg/mL)Xbpi-1处理组的蚜虫死亡率和对照组间均无显着差异。2.为探讨蛋白酶抑制剂Xbpi-1杀虫活性的生化机制,测定了Xbpi-1对虫体内蛋白酶活性的影响。结果表明,取食含Xbpi-1浓度为50、200、400和800μg/mL人工饲料的豌豆蚜96h后,豌豆蚜体内总蛋白酶较对照组活力分别降低13.1%、13.6%、23.2%和29.6%,均达到显着水平；处理组豌豆蚜体内氨肽酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性也均有显着降低。处理浓度为800μg/mL时,3种酶的活性分别降低了26.1%、23.5%和23.8%。3.Xbpi-1对虫体内游离氨基酸影响的分析结果表明,4个浓度处理组豌豆蚜体内游离氨基酸的总量分别比对照降低了0.85%、13.50%、14.76%和20.81%,并且在处理浓度为800μ/mL时,15种游离氨基酸的含量显着降低。因此,Xbpi-1的杀虫作用机制在于抑制了豌豆蚜体内主要蛋白酶的活性,进而降低了游离氨基酸的含量。4.为了明确Xbpi-1在虫体内的分布及其组织学影响,构建含Xbpi-1绿色荧光蛋白(GFP)的原核表达载体pET-Xbpi-GFP,并在大肠杆菌中进行大量表达和纯化,获得融合蛋白。将该融合蛋白掺入人工饲料中饲养豌豆蚜,然后进行组织切片并观察。结果显示,蚜虫消化道和脂肪体组织均有绿色荧光,说明Xbpi-GFP除在消化道中外,还可以进入到血腔中发挥作用；同时发现,Xbpi-1勺作用引起中肠和脂肪体组织的降解。(本文来源于《南京农业大学》期刊2012-06-01）
张河庆[4]（2012）在《伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂在烟草中的表达及抗蚜功能研究》一文中研究指出蛋白酶抑制剂能够抑制昆虫肠道中蛋白酶活性影响昆虫的生长和发育，因而可以应用于农业害虫防治。研究发现来自伯氏嗜线虫致病杆菌（Xenorhabdus bovienii strain BJFS526）的蛋白酶抑制剂（Xbpi-1）对蚜虫有良好的防治效果。为探讨Xbpi-1在植物中的抗蚜功能，本研究将Xbpi-1基因导入烟草，检测了该基因在烟草中的整合、转录和表达，检验了转基因烟草对烟蚜的抗虫效果并分析了转基因烟草的农艺性状与生理指标。本研究获得的主要结果如下：（1）构建了伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂基因（Xbpi-1）与绿色荧光蛋白（Greenfluorescent protein, gfp）基因的植物融合表达载体pCAMBIA2300-35S-Xbpigfp-Ocs和对照载体pCAMBIA2300-35S-gfp-Ocs。对载体进行了酶切和测序检验，将检验正确的载体通过冻融法转化到根癌农杆菌EHA105中。通过根癌农杆菌介导转化与抗生素筛选获得了烟草转化子，并将其繁育至T2代。（2）通过PCR检测初步确认了阳性转化株，Southern blot分析表明了Xbpigfp基因在烟草基因组中的整合模式，RT-PCR验证了目的基因在烟草中的转录，ELISA，Western blot和荧光蛋白检测证实了目的基因在烟草中的表达。（3）转基因和野生型烟草的农艺性状与生理指标研究表明，转基因烟草的PPO活性和5184株系的叶片重显着增加，其他农艺性状没有显着变化。（4）鉴定了转基因烟草对烟蚜的抗性，与取食表达gfp烟草的烟蚜相比，取食表达Xbpigfp烟草的烟蚜存活率没有显着变化，但成虫体重降低了33.7%，繁殖量降低了36.2%；通过分析取食表达Xbpigfp基因烟草后烟蚜体内蛋白酶活性，发现与取食表达gfp基因烟草的烟蚜相比，取食表达Xbpigfp基因烟草的烟蚜体内总蛋白酶活性和氨肽酶活性都显着下降。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2012-06-01）
薛仁风[5]（2009）在《伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制因子基因的克隆、表达及生物活性的研究》一文中研究指出天然的蛋白酶抑制因子(PI)是一类对蛋白水解酶有抑制活性的小分子蛋白质。它们能与蛋白酶的活性部位或变构部位结合,抑制酶的活性。昆虫体内存在着大量蛋白酶,在食物的消化等很多新陈代谢过程中起重要作用。昆虫摄食蛋白酶抑制因子后,导致其消化功能失调,生长发育受阻,易受环境中不利因素的影响,以至昆虫发育不正常甚至死亡。因此,蛋白酶抑制因子在农业害虫防治中具有十分重要的作用,本项研究应用基因工程手段,克隆了伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制因子基因,构建了高效重组表达载体,进行了重组蛋白的纯化及生物活性的研究,结果表明重组蛋白对桃蚜(Myzus persicae)、绿盲蝽(lygus lucorum Meyer-Dur)及白粉虱(Trialeurodes vaporariorum)都具有良好的防治效果,而且对哺乳动物细胞和植物本身没有不良影响。本实验取得如下研究结果:1参照Genbank中已知的蛋白酶抑制因子基因序列和ATG起始位点、TAA终止位点,设计合成了两条寡核苷酸引物,以伯氏嗜线虫致病杆菌BJFS-526菌株的基因组DNA为模板,进行聚合酶链式反应(PCR)扩增得到长度约为360bp的蛋白酶抑制因子基因片段,命名为Xbpi-1(Xenorhabdus bovienii protease inhibitor gene 1)。2将扩增出的目的片段插入pMD18-T Vector克隆载体获得重组质粒pT-PI。重组质粒经大肠杆菌转化后进行抗生素筛选,提取阳性菌落的质粒进行PCR检测和酶切鉴定,结果所得片段大小和目的片段一致。鉴定后的菌株送交北京叁博远志生物技术有限责任公司测序并进行blast比对分析。结果表明所克隆的插入片段长360bp,与预期设计的大小一致,同已知基因序列相似性达到78%。3设计合成两条5’端分别含有限制性内切酶NedI和XhoI酶切位点的寡核苷酸引物,以pT-PI为模板,进行PCR获得目的片段,将扩增出的目的片段插入pMD18-T Vector克隆载体获得重组质粒pT-PI-NX。重组质粒经大肠杆菌转化后进行抗生素筛选,提取阳性菌落的质粒进行PCR检测和酶切鉴定,结果所得片段大小和目的片段一致。将重组质粒pT-PI-NX和重组表达载体pET42a(+)经限制性内切酶NedI和XhoI双酶切,通过T4DNA连接酶,构建重组表达载体pET42a-PI,提取阳性菌落的质粒,酶切鉴定确定Xbpi-1基因已成功插入到表达载体中。4利用IPTG进行化学诱导并筛选最佳表达条件,使目的基因获得高效表达;对含有表达载体的大肠杆菌总蛋白进行电泳和Western blotting分析表明,外源基因获得高效表达,利用Ni SepharoseTM6 Fast flow(GE Healthcare)纯化柱进行纯化,以含有40mM咪唑的wash buffer上样,以含250mM咪唑的elution buffer洗脱,获得纯度较高的表达蛋白;将表达蛋白煮沸30min,没有明显改变蛋白的溶解度,说明重组表达蛋白是一种热稳定蛋白。5生物活性测定表明重组蛋白能明显抑制桃蚜和绿盲蝽的生长和发育,提高其死亡率,有效降低桃蚜繁殖数量,而且对绿盲蝽体内的蛋白酶活性具有明显的抑制作用,同时对温室中白粉虱也具有很好的防治效果,而对正常的哺乳动物细胞生长和植物本身蛋白酶活性没有影响。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2009-06-01）
伯氏嗜线虫致病杆菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了提高伯氏嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus bovienii YL002抑菌活性,采用紫外线照射和吖啶橙复合诱变的方法,对其进行诱变改良,并在抗生素最小抑制浓度选择压力下筛选对4种抗生素具有抗性的突变菌株。以枯草芽孢杆菌为指示菌,得到了17株抑菌活性有显着变化且遗传稳定的突变菌株。其中菌株L0420-3对枯草芽孢杆菌的抑制活性最强,连续转接5次的抑菌圈直径增大率均在80%以上;菌株Q025-1和L0314-4对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率为75.66%和73.41%,分别是野生菌株的1.35倍和1.31倍;接种灰霉病菌后5 d对番茄果实灰霉病的防效为95.74%和93.62%,分别是野生菌株的1.71倍和1.67倍。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
伯氏嗜线虫致病杆菌论文参考文献
[1].金丹娟,薛仁风,张河庆,曾凡荣,董双林.伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜AcyrthosiphonpisumHarris生物活性的研究[J].中国生物防治学报.2012
[2].安欣,王国红,王永宏,张兴.伯氏嗜线虫致病杆菌XenorhabdusbovieniiYL002对4种抗生素抗性突变株的筛选及抑菌活性分析[J].中国生物防治学报.2012
[3].金丹娟.伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂对豌豆蚜AcythosiphonpisumHarris的杀虫活性及其作用机制[D].南京农业大学.2012
[4].张河庆.伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制剂在烟草中的表达及抗蚜功能研究[D].中国农业科学院.2012
[5].薛仁风.伯氏嗜线虫致病杆菌蛋白酶抑制因子基因的克隆、表达及生物活性的研究[D].中国农业科学院.2009