导读:本文包含了限制修饰论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:热量限制,衰老,自噬,表观遗传修饰
限制修饰论文文献综述
李峻昊,魏元基,戴薇薇[1]（2018）在《热量限制延缓衰老的自噬与表观遗传修饰交互关系》一文中研究指出衰老是多因素作用下的组织、器官功能性衰退进程。自噬是真核细胞溶酶体介导而降解细胞质成分的过程,参与衰老及相关的各种生理病理过程。环境因素所致衰老则大多数伴随着表观遗传修饰的改变。热量限制被认为是调节衰老、延长寿命的干预措施。本综述围绕自噬与表观遗传修饰,阐述了热量限制引发自噬、通过表观遗传修饰延缓衰老的分子机制,以及两者在热量限制中的交互作用。以期为衰老与延缓衰老的机制研究提供新思路。(本文来源于《生理科学进展》期刊2018年05期）
李贺丹[2]（2018）在《谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株cglI限制修饰系统相关基因的表达及应用》一文中研究指出谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是重要的工业微生物,已经被广泛用于各种氨基酸的工业化生产。目前,代谢工程育种已成为C.glutamicum菌种改造的主要方式。但是C.glutamicum的低转化率成为代谢工程育种的主要障碍之一。影响C.glutamicum转化率的一个重要因素是C.glutamicum菌株中存在限制修饰系统。限制修饰系统(Restriction and Modification system)是指由限制性内切酶和甲基转移酶所组成的单亚基或多亚基的复合酶系统。这两种酶通常是成对出现的,它们具有相同的DNA识别位点,但功能是相反的。限制性内切酶通常作用于DNA的特定位点,造成DNA链的断裂;而甲基转移酶通过对DNA序列的甲基化修饰使得限制性内切酶对该位点不再起作用,从而保护了菌体免受噬菌体和外源DNA的入侵。C.glutamicum ATCC13032是C.glutamicum的模式菌株,由R.cglI,M.cglI和H.cglI基因组成的cglI限制修饰系统严重影响其外源DNA的转化效率。为解决C.glutamicum转化率低的问题,本文进行了通过M.cglI基因的染色体整合构建E.coli中间宿主菌的研究;为了解决限制性内切酶基因表达困难的问题,本文进行了严谨控制型表达载体的构建,并对R.cglI进行了表达;本文还探索了H.cglI基因的可替代性。主要研究成果如下:构建了用于基因敲除/敲入的同源重组载体pAU4-Larm-M.cglI-cat-Rarm。选择E.coli染色体gal操纵元3个结构基因galE(差向异构酶),galT(半乳糖转移酶)和galK(半乳糖激酶)中的galT基因作为待替换序列。左臂Lram选自galT基因的下游区域,包括galT 3'末端119 bp的DNA序列和终止密码子后的0.79 kb的DNA序列。右臂Rarm选自galT基因的上游区域,包括galT 5'末端147 bp的DNA序列和galT的起始密码子前0.85 kb的DNA序列。cat基因用作E.coli整合体的选择标记。通过连续克隆操作实现质粒pAU4与同源左臂Larm、同源右臂Rarm、cat基因和M.cglI基因的连接。构建了大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌株E.coli AU1。将来自于C.glutamicum ATCC13032菌株cglI限制修饰系统中编码甲基转移酶的M.cglI基因通过同源重组整合到E.coli TG1基因组上进行表达。通过将不同来源的质粒电转化C.glutamicum ATCC13032来验证M.cglI甲基化对转化率的影响,抽提自E.coli TG1的质粒pAU4转化效率为1.80±0.21×10~2cfu/μg质粒DNA,而抽提自E.coli AU1的pAU4转化效率达到5.22±0.33×10~6cfu/μg质粒DNA。结果表明,E.coli AU1能够赋予质粒特异性的M.cglI甲基化模式,使抽提自E.coli AU1的质粒对R.cglI限制性内切酶有抗性并能高效转化C.glutamicum ATCC13032菌株中。构建了严谨控制型E.coli表达载体pAU10。该表达载体利用高效可控制的T7-LacO启动子/操纵子和T7启动子上游的强转录终止子rrnBT2的组合来严格控制极毒基因的转录。此外,与T7启动子方向相反的trp启动子/操纵子产生的反义RNA能阻断渗漏mRNA的翻译。在未添加IPTG和L-色氨酸的情况下,T7启动子高度抑制极毒基因的转录,而trp启动子产生反义RNA,严格阻遏极毒基因的渗漏表达。在培养基中添加IPTG和L-色氨酸后,T7启动子开始有效转录极毒基因,而L-色氨酸的存在使trp启动子关闭不产生反义RNA,这保证了载体在E.coli中高效表达极毒蛋白质。在E.coli中成功表达了限制性内切酶BamHI,表明pAU10是一个优秀的用于表达极毒基因的表达载体。构建了重组质粒pAU10-R.cglI,将重组质粒转化至E.coli JM109(DE3)表达菌株中进行表达。表达后的蛋白质经Western Blot检测大小为40 KDa,表明在E.coli中成功表达了限制性内切酶R.cglI。pAU4-R.cglI重组质粒转化E.coli Top10实验,结果并无转化子生长。表明E.coli中具有H.cglI类解旋酶的DEAD家族同源蛋白,其同家族蛋白亦能协助R.cglI蛋白发挥对外源DNA的限制功能。另外,在E.coli中成功进行了H.cglI基因的表达及纯化。(本文来源于《河北农业大学》期刊2018-05-30）
陈超[3]（2017）在《DNA磷硫酰化修饰的基因组定位及其与DNA甲基化限制—修饰系统间的相互影响》一文中研究指出早在1952年,Alfred Hershey与Martha Chase合作利用噬菌体侵染细菌的实验,证实了生命的遗传物质是DNA而非蛋白质,与前人的肺炎双球菌转化实验一起,推翻了二十世纪早期生物学家所相信的蛋白质是遗传物质这一观点。这一发现是利用35S特异性标记的噬菌体蛋白质与32P特异性标记的噬菌体DNA,因为当时的观点认为,硫元素是蛋白质的特征元素,而核酸DNA中仅含有碳、氢、氧、氮和磷这5种元素。而近年来,科研人员在细菌的DNA的骨架上寻觅到了硫元素的踪迹,并把这种特殊的DNA修饰结构称之为DNA磷硫酰化修饰(phosphorothioation,PT)。进一步研究表明,这种新型修饰由5个修饰蛋白(DndABCDE)共同催化,将来自于半胱氨酸的硫原子序列特异性地取代DNA磷酸骨架上的非桥连氧原子。DNA磷硫酰化修饰修饰常常与DndFGH蛋白共同组成限制-修饰系统,以此来抵御外源DNA的入侵,保持自身遗传物质稳定。前期研究中,利用液相色谱-质谱联用技术,科研人员已经对来自于不同菌属的DNA中的磷硫酰化修饰情况,在d(XPSY)(X=A、T、C或者G,Y=A、T、C或者G)这一的二核苷酸水平上,进行了定性分析和定量检测,发现其修饰序列与修饰频率在不同细菌中的具有不同的修饰特征,但是,由于技术手段的限制,DNA磷硫酰化修饰所需的更长的保守基序,一直以来是一个研究难点,针对DNA磷硫酰化修饰的细菌基因组定位也一直是一个谜,而这一科学问题的回答,则可能是揭示DNA磷硫酰化修饰这一新型修饰的生理功能的突破口。本研究以Vibrio cyclitrophicusFF75为研究对象,通过第叁代测序技术——单分子实时(single molecularrealtime,SMRT)测序技术,找到了在FF75中,DNA磷硫酰化修饰的核心基序列为5'-CPSCA-3',我们没有找到更长的保守序列或者侧翼序列,但是其下游序列具有一定的偏好性,DNA磷硫酰化修饰倾向于发生在5'-CCAA-3'或者5'-CCAG-3'这样的序列上,而发生在5'-CCAT-3'上的概率最低;在FF75基因组上,仅有14%的5'-CCA-3'序列发生了磷硫酰化修饰,且其在FF75中呈现出一种单链修饰状态;在此基础上,我们绘制基于基因组水平的DNA磷硫酰化修饰图谱,对FF75中的DNA磷硫酰化修饰进行了基因组的精细定位,发现了其在基因组上随机、均匀的分布特征,且在不同细菌个体中,表现出异质性的特定,揭示了其部分、动态的修饰特征。此外,在本项工作中,我们还发现DNA磷硫酰化限制-修饰系统的功能能够与DNA甲基化依赖的限制-修饰系统产生相互影响。一方面,发生于DNA骨架的磷硫酰化修饰与发生在DNA碱基上的甲基化修饰可以共享同一段DNA序列,得到同时具有两种修饰的杂合结构d(GPS6mA),且其构型与细菌体内的DNA磷硫酰化修饰一样具有RP的构型;同时,在体外条件下,具有磷硫酰化修饰结构的DNA序列能够降低Dam甲基转移酶的甲基化效率;另一方面,本研究还发现DNA磷硫酰化限制系统是一种温度依赖的限制系统,其在低温条件下,dndFGH的转录水平会有所上升,而有意思的是这种低温依赖的磷硫酰化限制作用能够被甲基化的DNA阻碍,即DNA甲基化修饰能代替DNA磷硫酰化修饰,保护DNA免受DndFGH的限制作用。(本文来源于《武汉大学》期刊2017-10-01）
潘荣荣[4]（2017）在《乳酸杆菌破壁方法及限制-修饰系统对转化效率影响的研究》一文中研究指出乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类能够发酵碳水化合物并产生乳酸的革兰氏染色阳性细菌的统称。乳酸菌具有诸多益生功能,如:提高机体抗氧化能力延缓衰老,增加肠内有益菌减少有害菌,治疗传染性疾病和消化道疾病,刺激机体的免疫机能,降胆固醇降血压等。现已发现的乳酸菌有近30个属,包括双歧杆菌属(Bifidobacterium)、链球菌属(Streptococcus)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、片球菌属(Pediococcus)、罗氏菌属(Rothia)、明串菌属(Leuconoostoc)等。乳杆菌属、乳球菌属等乳酸菌因能够在胃肠道、泌尿、生殖系统中或粘膜部位粘附存活且无病原性等特点而尤其受到人们的重视。近十几年来,运用基因工程技术,构建乳酸杆菌表达系统表达外源蛋白以及作为新型疫苗载体等方面已引起了广泛关注,但由于乳酸杆菌属于革兰氏阳性菌,细胞壁厚而致密,不仅其内源蛋白、表达的非分泌性外源蛋白、核酸以及其他非分泌性代谢产物的提取效率极低,而且外源DNA的转化效率也极低,这严重制约了乳酸杆菌分子机制的研究和基因工程技术的发展,且要实现外源基因在乳酸杆菌中异源表达,首先要实现乳酸杆菌的高效转化。因此,乳酸杆菌分子机制研究和基因工程发展的过程中迫切需要解决的关键问题是探索一种有效的乳酸菌破壁方法及提高其转化效率。主要研究内容分为以下2个部分:1.乳酸杆菌破壁方法的探究试验通过反复冻融破壁法、溶菌酶破壁法、氧化锆珠破壁法、超声波破壁法对植物乳杆菌Lactobacillus.plantarum1.557进行破壁处理,并以革兰氏染色和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为评价方法,比较破壁效果和破壁时间的差异。此外,通过β-葡萄糖醛酸酶(GUS)活力的测定对氧化锆珠破壁法所提蛋白进行活性检测,通过琼脂糖凝胶电泳对氧化锆珠破壁法所提RNA的质量进行了检测。结果表明:氧化锆珠破壁法优胜于其他几种处理方法,该法所提取的GUS蛋白具有蛋白活性,该法所提取的RNA的OD260/OD280的比值在1.8～2.1之间,符合标准的比值,纯度较高,降解程度低。因此,氧化锆珠破壁法适用于快速提取乳酸杆菌菌体蛋白和总RNA。然后,试验在菌体重量、研磨buffer和研磨时间这3方面对氧化锆珠破壁法进行了优化,并通过SDS-PAGE来分析其破壁效果。在优化后条件下,同时对6株乳酸菌进行破壁处理并通过SDS-PAGE来分析其破壁效果。结果表明:在菌体重量、研磨buffer、锆珠叁者的加入比例(W/V/W)为0.013 g:300uL:1g的条件下,研磨15min,提取的蛋白图谱条带清晰,丰度高;RIPA、PBS、PENP、GUS作为研磨buffer时,提取的蛋白图谱条带清晰且丰度高,而8M尿素作为研磨buffer时,图谱条带模糊且丰度低;6株乳酸菌经该方法破壁处理后,蛋白图谱条带均具有较高的丰度和清晰度。因此,对于乳酸菌的破壁,氧化锆珠破壁法具有快速、高效、经济的优点。本试验所探究的成功提取乳酸菌蛋白的方法也为下一步研究乳酸杆菌限制-修饰系统对转化效率的影响(电转化经乳酸菌胞浆蛋白体外修饰的质粒DNA)奠定了平台基础。2.乳酸杆菌限制-修饰系统对转化效率影响的探究本研究利用电转化方法探究了乳酸杆菌限制-修饰系统对电转化效率的影响,以期提高乳酸杆菌的电转化效率。试验通过测定5株乳酸杆菌—植物乳杆菌(L.plantarum1.557)、植物乳杆菌(L.plantarum WCFS1)、副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌的生长曲线,来确定这5株菌的对数生长期,然后选择处于对数生长期的5株菌分别转接到含不同浓度甘氨酸的培养基中培养并通过测定生长曲线,来探索细胞壁弱化剂(甘氨酸)的适宜浓度及加入时间,在此基础上,制备5株乳酸杆菌的感受态细胞。同时,通过观察5株乳酸杆菌在含不同浓度红霉素的培养基中的生长情况来确定电转化后用于筛选转化子的红霉素浓度。研究结果表明:植物乳杆菌(L.plantarum1.557)、植物乳杆菌(L.plantarum WCFS1)、副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌分别在12h、16h、16h、20h、20h时达到对数末期且分别在红霉素浓度为0.5 μg/mL、10 μg/mL、5μg/mL、1 μg/mL、1 μg/mL时生长受到明显抑制,2%的甘氨酸即可对这5株乳酸杆菌的细胞壁起到较好的弱化作用,有利于感受态细胞的形成。然后,在乳酸杆菌感受态细胞成功制备的条件下,试验通过温度处理、体内DNA修饰、体外DNA修饰这3种方法进一步研究了乳酸杆菌限制-修饰系统对于转化效率的影响。研究结果表明:适宜温度(50℃)处理乳酸杆菌可以明显提高一些菌株(L.plantarum 1.557、L.acidophilus 1.1878、L.delbrueckii subsp.bulgaricus 1.2161)的转化效率,电转入经乳酸乳球菌体内修饰的质粒可以明显提高一些菌株(L.plantarum 1.557、L.acidophilus l.1878、L.delbrueckii subsp.bulgaricus 1.2161)的转化效率。本研究为进一步构建乳酸杆菌表达系统以及为乳酸杆菌分子机制的研究和基因工程技术的发展,提供可行依据。(本文来源于《扬州大学》期刊2017-04-01）
文旭,邢晓宇[5]（2014）在《“限制”与“描写/非限制”之争的破与立:汉语名词修饰语研究新视角》一文中研究指出"破与立"是汉语语法研究中的重要思想。经过几十年的讨论,汉语名词修饰语研究的既有模式"限制与描写"、"限制与非限制",在理论自洽和对语言现象的解释方面,仍有争议。本文把限制性界定为言语交际双方对名词所指事物进行指别的策略,提出"限制性包含描写性"的新模式,对既有模式下存有争议的语言现象进行解释,并从入景理论的视角探讨这一模式的认知理据。(本文来源于《外语与外语教学》期刊2014年04期）
郑峰,张凤玉,郝丽娜,龚秀芳,朱进[6]（2013）在《SsuDAT1I限制修饰系统在不同背景猪链球菌2型分离株中的分布》一文中研究指出目的探索SsuDAT1I限制修饰系统在不同背景的猪链球菌2型(SS2)分离株中的分布规律。方法选取29个不同背景SS2分离株,通过分析其全基因组序列或PCR检测purH和purD基因间是否含有SsuDAT1Ⅰ插入序列,并分别用MobⅠ和DpnⅠ酶切SS2基因组以鉴定其5′-GATC-3′序列位点是否存在甲基化。结果 29株SS2中有6株携带SsuDAT1Ⅰ限制修饰系统,且均为无(弱)毒株;其他23株不带SsuDAT1Ⅰ的SS2中有22株为强毒株,仅有1株为1980年代在荷兰分离的弱毒株T15。酶切显示,含有SsuDAT1Ⅰ的SS2菌株的基因组DNA可被DpnⅠ完全酶切,但不能被MobⅠ所酶切;其他缺失SsuDAT1Ⅰ的SS2菌株的酶切图谱则完全相反。证明SsuDAT1Ⅰ系统可对SS2基因组的5′-GATC-3′位点进行甲基化修饰。结论作为SS2基因组获得的外来遗传元件,对SsuDAT1Ⅰ的鉴定有助于分析SS2菌株的系统进化关系和毒力强弱。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2013年09期）
李洪微[7]（2013）在《限制发酵法结合后修饰工艺生产无醇啤酒》一文中研究指出本文介绍在不引进新设备的情况下,采用限制发酵法结合后修饰工艺酿造无醇啤酒,并对几种无醇啤酒生产工艺进行了分析。(本文来源于《啤酒科技》期刊2013年10期）
吴波,何明雄,冯红,张艳,胡启春[8]（2013）在《运动发酵单胞菌限制-修饰系统缺失突变株的构建及其性质分析(英文)》一文中研究指出低遗传转化率阻碍了产乙醇模式菌——运动发酵单胞菌的遗传或分子生物学操作.本研究将运动发酵单胞菌菌株ZM4的5个限制-修饰系统相关基因失活,构建了5个限制-修饰系统突变菌株.研究结果表明:在突变株Zmmrr和Zm1933中,甲基化穿梭表达质粒pBBR1MCS-tet的电转化率分别提高了17倍和2倍,而限制修饰基因ZMO0575的失活则明显降低了甲基化修饰质粒和非甲基化质粒的转化率.较之其它3个突变株,突变株Zmmrr和Zm1933具有更高的遗传稳定性.发酵实验结果进一步表明这些限制-修饰系统突变株并未显着改变运动发酵单胞菌的主要性质,例如细胞生长、葡萄糖利用率和乙醇产量等.研究运动发酵单胞菌的限制-修饰系统将有助于构建适合于分子遗传操作的基因工程菌株.(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2013年02期）
张成普,李宁,马洁,吴松锋,朱云平[9]（2013）在《非限制翻译后修饰鉴定方法的研究进展》一文中研究指出蛋白质翻译后修饰在真核生物细胞内广泛存在,对蛋白质的结构和功能有着十分重要的影响.串联质谱技术的快速发展为翻译后修饰鉴定提供了高通量、高灵敏度和高分辨率的分析平台,但传统搜索引擎鉴定修饰的方法无法满足数据分析的需求,非限制翻译后修饰鉴定已成为目前蛋白质组修饰分析的重要手段之一.非限制翻译后修饰鉴定不需要在分析前指定修饰类型,可以直接从样品中找出大量已知或未知的修饰,对提高质谱图谱解析率以及揭示蛋白质的生物学功能具有十分重要的意义.本文首先介绍了非限制翻译后修饰鉴定的定义和发展历程,然后从序列匹配和谱图匹配两个方面详细综述了目前非限制翻译后修饰鉴定的主流算法,分析了非限制翻译后修饰鉴定的质量控制问题,最后结合非限制翻译后修饰鉴定的实际应用讨论了修饰鉴定算法的不足和发展方向.(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2013年04期）
赵大贺,蔡磊,向华[10]（2012）在《地中海富盐菌限制修饰系统的确定及其特点》一文中研究指出限制修饰系统主要由功能性的限制性内切酶和甲基转移酶组成,可保护细胞免于外源DNA(如质粒,病毒)的侵入。特异地存在于H.mediterranei的HFX_3001和HFX_3002被预测是可能的限制修饰系统功能蛋白,其中HFX_3001具有DNA甲基转移酶的保守序列,位于其下游且与其共转录的HFX_3002具有DNA结合序列,可能具有DNA内切酶的功能。本文通过遗传学方法对其进行了确定。HFX_3002(本文来源于《2012年第五届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集》期刊2012-10-13）
限制修饰论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是重要的工业微生物,已经被广泛用于各种氨基酸的工业化生产。目前,代谢工程育种已成为C.glutamicum菌种改造的主要方式。但是C.glutamicum的低转化率成为代谢工程育种的主要障碍之一。影响C.glutamicum转化率的一个重要因素是C.glutamicum菌株中存在限制修饰系统。限制修饰系统(Restriction and Modification system)是指由限制性内切酶和甲基转移酶所组成的单亚基或多亚基的复合酶系统。这两种酶通常是成对出现的,它们具有相同的DNA识别位点,但功能是相反的。限制性内切酶通常作用于DNA的特定位点,造成DNA链的断裂;而甲基转移酶通过对DNA序列的甲基化修饰使得限制性内切酶对该位点不再起作用,从而保护了菌体免受噬菌体和外源DNA的入侵。C.glutamicum ATCC13032是C.glutamicum的模式菌株,由R.cglI,M.cglI和H.cglI基因组成的cglI限制修饰系统严重影响其外源DNA的转化效率。为解决C.glutamicum转化率低的问题,本文进行了通过M.cglI基因的染色体整合构建E.coli中间宿主菌的研究;为了解决限制性内切酶基因表达困难的问题,本文进行了严谨控制型表达载体的构建,并对R.cglI进行了表达;本文还探索了H.cglI基因的可替代性。主要研究成果如下:构建了用于基因敲除/敲入的同源重组载体pAU4-Larm-M.cglI-cat-Rarm。选择E.coli染色体gal操纵元3个结构基因galE(差向异构酶),galT(半乳糖转移酶)和galK(半乳糖激酶)中的galT基因作为待替换序列。左臂Lram选自galT基因的下游区域,包括galT 3'末端119 bp的DNA序列和终止密码子后的0.79 kb的DNA序列。右臂Rarm选自galT基因的上游区域,包括galT 5'末端147 bp的DNA序列和galT的起始密码子前0.85 kb的DNA序列。cat基因用作E.coli整合体的选择标记。通过连续克隆操作实现质粒pAU4与同源左臂Larm、同源右臂Rarm、cat基因和M.cglI基因的连接。构建了大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌株E.coli AU1。将来自于C.glutamicum ATCC13032菌株cglI限制修饰系统中编码甲基转移酶的M.cglI基因通过同源重组整合到E.coli TG1基因组上进行表达。通过将不同来源的质粒电转化C.glutamicum ATCC13032来验证M.cglI甲基化对转化率的影响,抽提自E.coli TG1的质粒pAU4转化效率为1.80±0.21×10~2cfu/μg质粒DNA,而抽提自E.coli AU1的pAU4转化效率达到5.22±0.33×10~6cfu/μg质粒DNA。结果表明,E.coli AU1能够赋予质粒特异性的M.cglI甲基化模式,使抽提自E.coli AU1的质粒对R.cglI限制性内切酶有抗性并能高效转化C.glutamicum ATCC13032菌株中。构建了严谨控制型E.coli表达载体pAU10。该表达载体利用高效可控制的T7-LacO启动子/操纵子和T7启动子上游的强转录终止子rrnBT2的组合来严格控制极毒基因的转录。此外,与T7启动子方向相反的trp启动子/操纵子产生的反义RNA能阻断渗漏mRNA的翻译。在未添加IPTG和L-色氨酸的情况下,T7启动子高度抑制极毒基因的转录,而trp启动子产生反义RNA,严格阻遏极毒基因的渗漏表达。在培养基中添加IPTG和L-色氨酸后,T7启动子开始有效转录极毒基因,而L-色氨酸的存在使trp启动子关闭不产生反义RNA,这保证了载体在E.coli中高效表达极毒蛋白质。在E.coli中成功表达了限制性内切酶BamHI,表明pAU10是一个优秀的用于表达极毒基因的表达载体。构建了重组质粒pAU10-R.cglI,将重组质粒转化至E.coli JM109(DE3)表达菌株中进行表达。表达后的蛋白质经Western Blot检测大小为40 KDa,表明在E.coli中成功表达了限制性内切酶R.cglI。pAU4-R.cglI重组质粒转化E.coli Top10实验,结果并无转化子生长。表明E.coli中具有H.cglI类解旋酶的DEAD家族同源蛋白,其同家族蛋白亦能协助R.cglI蛋白发挥对外源DNA的限制功能。另外,在E.coli中成功进行了H.cglI基因的表达及纯化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
限制修饰论文参考文献
[1].李峻昊,魏元基,戴薇薇.热量限制延缓衰老的自噬与表观遗传修饰交互关系[J].生理科学进展.2018
[2].李贺丹.谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株cglI限制修饰系统相关基因的表达及应用[D].河北农业大学.2018
[3].陈超.DNA磷硫酰化修饰的基因组定位及其与DNA甲基化限制—修饰系统间的相互影响[D].武汉大学.2017
[4].潘荣荣.乳酸杆菌破壁方法及限制-修饰系统对转化效率影响的研究[D].扬州大学.2017
[5].文旭,邢晓宇.“限制”与“描写/非限制”之争的破与立:汉语名词修饰语研究新视角[J].外语与外语教学.2014
[6].郑峰,张凤玉,郝丽娜,龚秀芳,朱进.SsuDAT1I限制修饰系统在不同背景猪链球菌2型分离株中的分布[J].中国病原生物学杂志.2013
[7].李洪微.限制发酵法结合后修饰工艺生产无醇啤酒[J].啤酒科技.2013
[8].吴波,何明雄,冯红,张艳,胡启春.运动发酵单胞菌限制-修饰系统缺失突变株的构建及其性质分析(英文)[J].应用与环境生物学报.2013
[9].张成普,李宁,马洁,吴松锋,朱云平.非限制翻译后修饰鉴定方法的研究进展[J].生物化学与生物物理进展.2013
[10].赵大贺,蔡磊,向华.地中海富盐菌限制修饰系统的确定及其特点[C].2012年第五届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集.2012