本文主要研究内容
作者刘豪丽（2019）在《马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定》一文中研究指出：马立克病(Marek’s disease,MD)是由马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)感染引起的一种重要的免疫抑制与快速发作的T淋巴细胞肿瘤病。MicroRNA(miRNA)是一类长度介于19~24 nt的非编码小分子RNA,可通过种子序列5’末端的2~7位核苷酸与靶基因mRNA的3’-UTR碱基配对结合抑制其表达。MDV基因组编码大量病毒miRNA,MDV-1共编码14个miRNA前体,表达26个成熟体miRNA。它们可能在MDV致病过程中的病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用。此前对这些病毒miRNA的体内动态表达谱分析发现,miR-M11-5p与MDV-1致病及致瘤的进程密切相关。在对Mid基因簇各个miRNA进行基因缺失的病毒致病性试验表明,与亲本毒株GX0101相比较,miR-M11-5p基因缺失毒株的致瘤率明显升高,预示miR-M11-5p在MDV致瘤过程中可能作为肿瘤抑制因子发挥抑癌作用。为了进一步揭示miR-M11-5p在MDV肿瘤发生发展中的调控机制,本研究利用鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA的cDNA为模板,通过hybrid-PCR扩增miR-M11-5p的候选宿主靶基因片段,然后连接至pMD19-T载体、转化至E.coli JM109中构建cDNA文库。对文库菌落进行PCR鉴定、测序分析以及Blast序列对比,共获得77个候选宿主靶基因,其中37个miRNA结合靶点位于候选靶基因的3’-UTR中。构建含有3’-UTR的候选靶基因结合位点的psiCHECK-2重组载体,与miR-M11-5p mimics重组质粒共转染HEK 293T细胞,进行双荧光素酶报告试验分析。结果显示,候选靶基因MAFB(v-maf avian musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,肌肉腱膜纤维肉瘤癌基因同源物B)、LOC776816和RFX7(regulatory factor X7,调节因子X7)的psiCHECK-2-3’-UTR质粒荧光素酶报告活性均受到miR-M11-5p mimics的显著抑制。而后我们构建了psiCHECK-2-mut-MAFB-3’-UTR、psiCHECK-2-mutLOC776816-3’-UTR和psiCHECK-2-mut-RFX7-3’-UTR与mut-miR-M11-5p mimics共转染HEK 293T,结果显示突变后的miR-M11-5p失去抑制MAFB、LOC776816和RFX7这三个3’-UTR双荧光素酶报告基因的活性,而3’-UTR重组质粒突变后不受miR-M11-5p所抑制。在CEF细胞中过表达miR-M11-5p,通过RT-qPCR检测MAFB、LOC776816和RFX7的mRNA表达水平,结果显示miR-M11-5p可显著下调这3个候选靶基因mRNA的表达水平。上述结果证实MAFB、LOC776816和RFX7是miR-M11-5p的宿主靶基因,为进一步阐明miRM11-5p在MDV肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。
Abstract
ma li ke bing (Marek’s disease,MD)shi you ma li ke bing bing du (Marek’s disease virus,MDV)gan ran yin qi de yi chong chong yao de mian yi yi zhi yu kuai su fa zuo de Tlin ba xi bao zhong liu bing 。MicroRNA(miRNA)shi yi lei chang du jie yu 19~24 ntde fei bian ma xiao fen zi RNA,ke tong guo chong zi xu lie 5’mo duan de 2~7wei he gan suan yu ba ji yin mRNAde 3’-UTRjian ji pei dui jie ge yi zhi ji biao da 。MDVji yin zu bian ma da liang bing du miRNA,MDV-1gong bian ma 14ge miRNAqian ti ,biao da 26ge cheng shou ti miRNA。ta men ke neng zai MDVzhi bing guo cheng zhong de bing du fu zhi 、qian fu gan ran ji zhong liu fa sheng zhong qi chong yao zuo yong 。ci qian dui zhe xie bing du miRNAde ti nei dong tai biao da pu fen xi fa xian ,miR-M11-5pyu MDV-1zhi bing ji zhi liu de jin cheng mi qie xiang guan 。zai dui Midji yin cu ge ge miRNAjin hang ji yin que shi de bing du zhi bing xing shi yan biao ming ,yu qin ben du zhu GX0101xiang bi jiao ,miR-M11-5pji yin que shi du zhu de zhi liu lv ming xian sheng gao ,yu shi miR-M11-5pzai MDVzhi liu guo cheng zhong ke neng zuo wei zhong liu yi zhi yin zi fa hui yi ai zuo yong 。wei le jin yi bu jie shi miR-M11-5pzai MDVzhong liu fa sheng fa zhan zhong de diao kong ji zhi ,ben yan jiu li yong ji pei cheng qian wei xi bao (CEF)zong RNAde cDNAwei mo ban ,tong guo hybrid-PCRkuo zeng miR-M11-5pde hou shua su zhu ba ji yin pian duan ,ran hou lian jie zhi pMD19-Tzai ti 、zhuai hua zhi E.coli JM109zhong gou jian cDNAwen ku 。dui wen ku jun la jin hang PCRjian ding 、ce xu fen xi yi ji Blastxu lie dui bi ,gong huo de 77ge hou shua su zhu ba ji yin ,ji zhong 37ge miRNAjie ge ba dian wei yu hou shua ba ji yin de 3’-UTRzhong 。gou jian han you 3’-UTRde hou shua ba ji yin jie ge wei dian de psiCHECK-2chong zu zai ti ,yu miR-M11-5p mimicschong zu zhi li gong zhuai ran HEK 293Txi bao ,jin hang shuang ying guang su mei bao gao shi yan fen xi 。jie guo xian shi ,hou shua ba ji yin MAFB(v-maf avian musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,ji rou jian mo qian wei rou liu ai ji yin tong yuan wu B)、LOC776816he RFX7(regulatory factor X7,diao jie yin zi X7)de psiCHECK-2-3’-UTRzhi li ying guang su mei bao gao huo xing jun shou dao miR-M11-5p mimicsde xian zhe yi zhi 。er hou wo men gou jian le psiCHECK-2-mut-MAFB-3’-UTR、psiCHECK-2-mutLOC776816-3’-UTRhe psiCHECK-2-mut-RFX7-3’-UTRyu mut-miR-M11-5p mimicsgong zhuai ran HEK 293T,jie guo xian shi tu bian hou de miR-M11-5pshi qu yi zhi MAFB、LOC776816he RFX7zhe san ge 3’-UTRshuang ying guang su mei bao gao ji yin de huo xing ,er 3’-UTRchong zu zhi li tu bian hou bu shou miR-M11-5psuo yi zhi 。zai CEFxi bao zhong guo biao da miR-M11-5p,tong guo RT-qPCRjian ce MAFB、LOC776816he RFX7de mRNAbiao da shui ping ,jie guo xian shi miR-M11-5pke xian zhe xia diao zhe 3ge hou shua ba ji yin mRNAde biao da shui ping 。shang shu jie guo zheng shi MAFB、LOC776816he RFX7shi miR-M11-5pde su zhu ba ji yin ,wei jin yi bu chan ming miRM11-5pzai MDVzhong liu fa sheng zhong de diao kong ji zhi dian ding le chong yao ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自河南科技大学的刘豪丽，发表于刊物河南科技大学2019-09-18论文，是一篇关于马立克病病毒论文,微小论文,靶基因论文,实时荧光定量论文,河南科技大学2019-09-18论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自河南科技大学2019-09-18论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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