导读:本文包含了心肌细胞模型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:心肌细胞,缺氧复氧,物理性,化学性
心肌细胞模型论文文献综述
宁小伟,苏和,张瑞芬[1]（2019）在《不同方法构建的心肌细胞缺氧/复氧模型》一文中研究指出心肌细胞缺氧/复氧模型(hypoxia/re-oxygenation,H/R)是体外从细胞水平研究心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MI/RI)的理想模型,在MI/RI科学研究中发挥着重要作用。文中分别对物理性及化学性等方法构建的H/R模型进行整理总结,阐述各模型的造模方法,比较各模型的优缺点,为客观、合理地选择与建立H/R模型提供参考。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2019年93期）
严斐斐,张超,王艾丽,徐亭[2]（2019）在《二甲双胍调控PI3K/Akt通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响研究》一文中研究指出目的:探讨二甲双胍调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二甲双胍低(150 mg·kg-1)、中(300 mg·kg-1)、高(500 mg·kg-1)剂量组、自噬激动剂组(雷帕霉素,5 mg·kg-1),制备心肌缺血再灌注大鼠模型,药物处理组于建模前3 d以不同剂量二甲双胍及雷帕霉素每天灌胃治疗,模型组及假手术对照组采用等体积生理盐水灌胃,持续3 d。造模成功12 h后,处死大鼠,叁苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察各组大鼠心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测血清中磷酸肌酸同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白I(c Tn I)含量,免疫组织化学检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3、P62阳性细胞比例,蛋白免疫印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3(包括LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、P62及PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、血清中CK-MB、c Tn I含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p-PI3K、pAkt蛋白表达明显升高,心肌组织中Beclin-1、LC3阳性细胞比例、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05);心肌组织中LC3-Ⅰ、PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,各药物处理组大鼠心肌梗死面积、血清中CK-MB、c Tn I含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低,心肌组织中Beclin-1、LC3阳性细胞比例、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达明显升高(P<0.05),且二甲双胍各组呈剂量依赖性。二甲双胍低、中剂量组与自噬激动剂组比较,以上各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二甲双胍通过促进心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬,发挥心肌保护作用,其机制可能与下调PI3K/Akt通路有关。(本文来源于《中国药师》期刊2019年11期）
罗敏,陈昌林,李明兵,侯崧[3]（2019）在《右美托咪定对心肌缺血再灌注大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响》一文中研究指出目的分析右美托咪定对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响。方法取30只SD大鼠,随机分为对照组(仅穿线而不结扎)、MIR组(建立MIR模型)、干预组(建立MIR模型前给予右美托咪定预处理),叁组各10只。比较干预组与MIR组大鼠心肌梗死面积、危险区面积和心肌细胞凋亡率的差异,并比较叁组大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及补体3蛋白表达水平的差异。结果相比MIR组,干预组大鼠心肌梗死面积和危险区面积明显缩小,心肌细胞凋亡率显着降低(P <0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达水平均显着升高(P <0. 01);相比MIR组,干预组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显着升高,而Bax蛋白表达水平显着降低(P <0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠补体3蛋白表达水平均显着升高(P <0. 01);相比MIR组,干预组大鼠补体3蛋白表达水平显着降低(P <0. 01)。结论通过右美托咪定预处理可提高MIR大鼠模型心肌Bcl-2蛋白表达,降低Bax和补体3蛋白表达,减少心肌梗死面积,缓解大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2019年18期）
熊伟,钱金桥[4]（2019）在《心肌细胞缺氧/复氧模型的构建及研究进展》一文中研究指出心肌细胞缺氧/复氧模型是模拟心肌缺血再灌注损伤及相关疾病的经典细胞模型,具有操作便捷、直观形象、稳定性好等优势,可准确反映疾病细胞水平的病理改变,广泛应用于药物与疾病的分子机制研究。缺氧/复氧是导致多种心血管疾病的主要机制之一,构建理想的心肌细胞缺氧/复氧模型是深入研究心血管疾病机制的基础,目前该模型的构建方法较多,主要包括物理法(混合气体培养法、厌氧袋/罐法、液体石蜡封闭法)、化学法(氧耗法、超氧法、酶抑法和缺氧液法)和联合法等,其中混合气体培养法和氧耗法最常用。(本文来源于《医学综述》期刊2019年18期）
邢红艳,张艺哲,王美婷,赵琪,汪溪洁[5]（2019）在《人诱导多能干细胞分化的心肌细胞在疾病模型和药物筛选中的应用》一文中研究指出在寻求改进心脏疾病表型建模方法和准确筛选潜在治疗化合物的药效和毒性的方法中,人诱导多能干细胞成为促进药物开发和改善疾病建模能力的一个重要工具。它们源自体细胞,又具有增殖分化能力,使其能够开发成个性化的医疗策略和特异性的疾病模型。目前基于人诱导多能干细胞分化的心肌细胞的体外疾病模型已用于药物发现与验证、有效性及安全性评价,对未知的疾病机制的阐明,为开展临床试验奠定了基础。本文主要概述了基于人诱导多能干细胞分化的心肌细胞作为心脏疾病模型的研究进展及其在药物筛选中的应用。(本文来源于《中国医药工业杂志》期刊2019年08期）
常冰,李昌[6]（2019）在《血府逐瘀汤对冠心病模型大鼠血管及心肌细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的:观察血府逐瘀汤对冠心病模型大鼠的血管重塑效应及对心肌细胞凋亡的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组及干预组,每组10只。模型组及干预组大鼠接受高脂饲料喂养7周以制备冠心病模型,造模后中药干预组大鼠接受血府逐瘀汤灌胃,模型组及空白组大鼠接受等剂量生理盐水灌胃,连续灌胃4周,干预结束后测量3组大鼠心功能及冠状动脉血流量,随后将大鼠处死后取冠状动脉及左心室组织,进行HE染色观察冠状动脉及左心室组织的病理学变化。采用Western blotting法测定PI3K、AKT、Bcl-2、Bax的表达差异。结果:1)与空白组比较,模型组LVSP、-dp/dtmax、+dp/dtmax绝对值明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05),其中干预组上述指标较模型组高; 2)与假手术大鼠心肌组织比较,模型组及干预组大鼠左心室心肌均出现明显的病理损害征象;与模型组大鼠比较,干预组心肌组织受损程度明显减轻;与空白组比较,模型组及干预组大鼠冠状动脉内中膜均出现明显增厚,经过血府逐瘀汤干预后的干预组大鼠动脉内中膜厚度比值明显低于模型组,差异有统计学意义(P <0. 05); 3) Western blotting法检测结果显示:与空白组比较,2组接受造模的大鼠心肌组织PI3K、Bcl-2表达降低,Bax升高,血府逐瘀汤可上调PI3K及AKT的磷酸化程度,提高了Bcl-2表达,抑制了Bax的水平。结论:血府逐瘀汤有抑制冠心病模型大鼠血管重塑及保护心脏的效应,其作用机制可能与介导PI3K-AKT信号通路有关。(本文来源于《世界中医药》期刊2019年08期）
吴帆[7]（2019）在《“标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞骨架蛋白的影响》一文中研究指出目的心肌缺血再灌注损伤是在冠心病救治过程中导致心肌损伤加重的重要危险因素。本研究以心肌缺血再灌注模型大鼠为研究对象,以心肌细胞收缩相关骨架蛋白为切入点,在中医“治病求本”思想指导下,运用“标本配穴”方法选择“内关”、“足叁里”、“关元”叁个腧穴进行电针预处理,观察“标本配穴”电针预处理对心肌细胞中肌小节超微结构及骨架蛋白结蛋白(desmin)和α-辅肌动蛋白(α-actinin)表达的影响,探讨“标本配穴”电针预处理防治缺血性心脏病的可能作用机制,为针刺防治心肌缺血再灌注损伤提供实验依据。方法1.采用SPF级雄性SD大鼠,体重为220-250g,适应性喂养1周后随机分为5组,每组10只,共50只。即模型组(myocardial ischemia/reperfusion injury group,MI/RI组)、假手术组(sham operation group,SO组)、内关预处理组(MI/RI+PC6组)、足叁里预处理组(MI/RI+ST36组)、标本配穴预处理组(myocardial ischemia reperfusion group with acupuncture pretreatment on Neiguan,Zusanli and Guanyuan,MI/RI+AP组)。2.MI/RI组、SO组均采用捆绑1次/天,每次捆绑20min,连续捆绑7天,第8天开胸后进行心肌缺血再灌注动物造模,缺血20min,再灌注40min;但SO组在第8天手术造模时只开胸穿线,不结扎左冠状动脉前降支。MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组、MI/RI+AP组均在造模前7天,每天同一时间对大鼠进行电针预处理,第8天行心肌缺血再灌注术。MI/RI+PC6组在造模前7天每天针刺大鼠双侧“内关”穴,同时在“内关”穴外侧旁开0.3cm-0.5cm处浅刺一针作辅助电极,与“内关”穴组成一对电极;MI/RI+ST36组在造模前7天每天针刺大鼠双侧“足叁里”穴、同时在“足叁里”穴外侧旁开0.3cm-0.5cm非穴处浅刺一针作辅助电极,与“足叁里”穴组成一对电极;MI/RI+AP组在造模前7天针刺大鼠双侧“内关”、“足叁里”及“关元”穴,同侧“内关”、“足叁里”穴位组成一对电极,在“关元”穴外侧旁开0.3cm-0.5cm处浅刺一针作辅助电极,与“关元”穴组成一对电极。连接韩氏电针治疗仪,选用连续波,频率2Hz,强度1mA,通电20min。每日治疗1次,每次20min,共7天。第8天行心肌缺血再灌注术。3.在针刺预处理治疗结束后,第8天开始每组按照3ml/kg·BW腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠并气管插管,连接小动物呼吸机机械通气,开胸后于左心耳和肺动脉根部下方2mm处缝扎阻断左冠状动脉前降支造成左室前壁心肌缺血20min,然后开放左冠状动脉前降支恢复血供应再灌40min,造成MI/RI模型。分别记录结扎前、结扎20min,再灌注40min的心电图ST段改变情况。以ST段抬高大于0.2mv标志心肌缺血,ST段回落标志再灌注。4.在第8天行MI/RI造模成功后,对大鼠进行腹主动脉采血和心脏取材,用ELISA检测各组大鼠的心肌缺血标志物缺血修饰白蛋白(IMA)与脑利钠肽(BNP)的含量,用光学显微镜观察HE染色切片的心肌损伤程度,用高倍透射电子显微镜观察肌小节的超微结构,用蛋白质印迹法检测心肌细胞骨架蛋白结蛋白(desmin)和α-辅肌动蛋白(α-actinin)的表达情况,并对各组数据进行统计分析。结果1.大鼠心电图ST段数值比较:(1)结扎20 min与结扎前比较:除SO组,其余四组ST段数值都极显着地升高(P<0.01),表明各组心肌缺血模型造模成功。(2)再灌注40 min与结扎20min比较:除SO组,其余四组ST段数值均明显下降(P<0.05),再灌注后ST段明显回落,表明再灌注造模成功。(3)再灌注40min后:与MI/RI组比较,其余四组的大鼠ST段数值均极显着地下降(P<0.01);与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+ST36组再灌注后ST段数值显着升高(P<0.05),MI/RI+AP组再灌注后ST段数值显着下降(P<0.05);与MI/RI+ST36组比较,MI/RI+AP组再灌注后ST段数值极显着下降(P<0.01)。说明电针预处理可降低心肌缺血再灌注的损伤程度,对心脏具有一定的保护作用,而标本配穴电针预处理组ST段数值回落得最明显,说明MI/RI+AP组对心脏的保护作用优于MI/RI+PC6组与MI/RI+ST36组。2.大鼠心肌组织的形态学比较:MI/RI组大鼠心肌损伤破坏最明显,纤维排列紊乱、水肿,间隙增宽,大部分心肌纤维有扭曲挤压、溶解、断裂的现象。心肌纤维凝固性缺血坏死,胞浆嗜酸性强,并伴有炎性细胞浸润,部分细胞核固缩丢失,甚至碎裂溶解。SO组大鼠心肌组织结构未见明显异常。MI/RI+AP组大鼠心肌组织结构轮廓完整,心肌纤维排列较为整齐清晰,心肌细胞伴有少量炎性细胞浸润,轻度间质水肿。MI/RI+AP组心肌组织形态学的病变改变程度轻于MI/RI+PC6组和MI/RI+ST36组。3.大鼠心肌缺血血清标志物浓度含量:(1)与MI/RI组相比较:SO组、MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组、MI/RI+AP组大鼠血清中IMA与BNP的浓度都显着降低(P<0.01)。SO组<MI/RI+AP组<MI/RI+PC6组<MI/RI+ST36组<MI/RI组。(2)与MI/RI+PC6组比较:MI/RI+ST36组大鼠血清中IMA的浓度明显升高(P<0.01)、BNP的浓度升高(P<0.05);MI/RI+AP组大鼠血清中IMA的浓度明显降低(P<0.01)、BNP的浓度降低不明显,无显着性差异(P>0.05)。(3)与MI/RI+ST36组比较:MI/RI+AP组大鼠血清中IMA与BNP的浓度显着降低(P<0.01)。4.大鼠心肌细胞中肌小节的超微结构比较:MI/RI组大鼠心肌损伤非常严重,肌原纤维萎缩、断裂、溶解,肌小节明、暗带结构区域严重破坏,呈现碎片状,排列模糊紊乱。M线弯曲或消失,部分细胞骨架甚至完全断裂,肌小节蛋白链的末端肌动蛋白丝断裂减少、分离溶解,细胞间质水肿、空泡变性。MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组较MI/RI组有轻度改善;MI/RI+AP组心肌细胞超微结构破坏较MI/RI组明显减轻,大鼠心肌肌原纤维排列较为整齐,肌丝清晰,基本无断裂,肌小节中明带、暗带结构清晰可见,分布均匀,Z线与M线清晰完整。5骨架蛋白desmin和α-actinin表达水平5.1骨架蛋白desmin灰度值比值含量:(1)与SO组相比:MI/RI组、MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组、MI/RI+AP组中的desmin表达明显降低(P<0.01);(2)与MI/RI组相比:MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组、MI/RI+AP组中的desmin表达明显升高(P<0.01);(3)与MI/RI+PC6组相比:MI/RI+ST36组中desmin表达降低,但无显着性差异(P>0.05),MI/RI+AP组中desmin表达升高,但无显着性差异(P>0.05);(4)与MI/RI+ST36组相比:MI/RI+AP组中desmin表达升高(P<0.01)。5.2骨架蛋白α-actinin蛋白灰度值比值含量:(1)与SO组相比:MI/RI组、MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组、MI/RI+AP组中α-actinin的蛋白表达都显着降低(P<0.01);(2)与MI/RI组相比:MI/RI+PC6组、MI/RI+ST36组、MI/RI+AP组中的α-actinin蛋白表达都显着升高(P<0.01);(3)与MI/RI+PC6组相比:MI/RI+ST36组中α-actinin的表达降低,但无显着性差异(P>0.05),MI/RI+AP组中α-actinin表达明显升高(P<0.05);(4)与MI/RI+ST36组相比:MI/RI+AP组中α-actinin表达升高(P<0.01)。结论1.“标本配穴”电针预处理可以对MI/RI模型大鼠心肌细胞或组织进行有效保护,促使心电图ST段回落,改善心肌组织受损的程度,降低血清中IMA与BNP的含量,从而降低心肌缺血再灌注损伤程度,达到保护心肌、改善心功能的目的。2.“标本配穴”电针预处理能明显稳定模型大鼠心肌细胞的肌小节结构,减少心肌纤维的损伤,改善心脏的收缩功能,对稳定心肌细胞骨架结构进行了良性诱导。3.电针预处理叁组均能上调心肌细胞骨架蛋白desmin、α-actinin表达水平,但标本配穴预处理组上调更显着(MI/RI+AP组>MI/RI+PC6组>MI/RI+ST36组),说明MI/RI+AP组对心肌的保护效应更佳。(本文来源于《湖北中医药大学》期刊2019-05-29）
周姝,卜法芹,常巧玉,陈红伟,赵舒才[8]（2019）在《Tollip在左前降支结扎的心肌梗死小鼠模型心肌细胞凋亡中的作用及其机制》一文中研究指出目的研究Tollip在左前降支结扎的心肌梗死(AMI)小鼠模型的作用及可能机制。方法将实验动物分4组,NTG对照(NTG-Sham)组、NTG AMI(NTG-MI)组、TG对照(TG-Sham)组、TG AMI(TG-MI)组。AMI组永久性结扎左冠状动脉前降支,Sham组分离出左前降支但只做挂线不结扎。术后4 w先后采用超声(Echo)和右颈总动脉内插管检测血流动力学(PV)的方法评价小鼠的心脏功能。小鼠心脏样本中,病理取材用于石蜡包埋切片,苏木素-伊红(HE)染色评价AMI面积,免疫荧光(IF)染色观察炎症反应,分生样本则用于分子生物学、凋亡和信号通路相关蛋白检测。结果与NTG-MI组比较,TG-MI组心脏梗死面积显着扩大,心功能紊乱更严重。与NTG-MI组比较,TG-MI组Mac-1、LY6G、CD3阳性率显着增加(P<0.05)。与NTG-MI组比较,TG-MI组抗凋亡Bcl-2、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3蛋白水平显着降低,促凋亡基因Bax、活化的(Cleaved)Cacpase3蛋白水平显着升高(P<0.05)。与NTG-MI组比较,TG-MI组丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)1/2,丝裂原活化蛋白激酶(ERK)1/2,c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/2和P38的磷酸化水平与总水平差异无统计学意义(P>0.05);与NTG-MI组比较,TG-MI组Akt、mTOR、GSK3β、S6和叉头框蛋白(FOX)O1的磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论 Tollip可通过抑制Akt信号通路促进炎性细胞浸润、加重危险区或缺血区的心肌细胞凋亡,导致AMI面积扩大、心脏功能紊乱加重。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2019年10期）
关一诺[9]（2019）在《MicroRNA-210对自噬的调控在大鼠心肌细胞缺血损伤模型中的作用》一文中研究指出研究背景心血管疾病的患病率和死亡率均位于世界前列,心血管疾病的治疗和预防是现在临床研究的重点。缺血性损伤是导致心血管疾病的主要原因之一。当心脏血管出现阻塞或狭窄时,心脏组织局部缺血、缺氧,会造成组织的损伤。在心肌缺血阶段,及时恢复血流可以去除在缺血期间积聚在细胞外的氢离子,提供有氧呼吸ATP产生所需的氧气和底物。然而,很多研究表明,及时再灌注虽然能够在一定程度上挽救缺氧组织,但随着缺血时间的延长,恢复血流灌注后受损组织中会产生更加剧烈的损伤反应,放大组织损伤,这种损伤被称为缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/R injury)。缺血再灌注损伤会造成细胞内发生钙超载、活性氧及活性氮产物增多、内质网应激、线粒体损伤等一系列损伤性变化,进而导致细胞的凋亡、坏死等过程。有研究表明,短暂无害的I/R能提高心脏组织对随后暴露于长时间缺血的损害的耐受性,使得缺血后损伤显着降低,这展现出了I/R有益的一面。研究发现缺血及缺血再灌注损伤与细胞自噬、凋亡、坏死等过程密不可分。在细胞应对损伤的过程中,由于功能的多面性,自噬是近年来研究的重点。其被证明在心血管疾病中起到不同程度的调节作用。自噬是细胞内持续发生的一种生化过程,其作用是通过自噬体的形成包裹受损的细胞器和错误的蛋白,将其运送至溶酶体降解。因此,自噬在正常细胞中执行管家功能,主要作用是清除细胞内受损、衰老的大分子蛋白质以及细胞器。一方面,其提供氨基酸、核苷酸等物质供给细胞进行能量循环利用,促进细胞在饥饿状态下存活,另一方面也可能作为一种细胞防御机制保护受损细胞。在I/R过程中,由于能量供给不足、氧化应激以及内质网应激的发生,自噬途径被激活,并通过产生氨基酸和脂肪酸以维持细胞功能,或通过去除受损的细胞器来促进细胞存活。此外,由于局部缺血导致缺血部位细胞饥饿,因此自噬调控的细胞组分的分解可通过提供维持细胞能量水平的底物来促进细胞存活。但矛盾的是,虽然适度的自噬对维持细胞内稳态有重要作用,但过度的自噬则会引起相应组织脏器的功能障碍,进而发展至各种心血管疾病疾病。因此,自噬一直是细胞学研究的重点,寻找自噬的可能调控因子也是目前研究的热点之一。MicroRNAs(miRNAs)是由20-24个核苷酸组成的、具有高度保守序列的单链非编码RNA。在众多的miRNAs中,microRNA-210(miR-210)是公认的缺氧相关miRNA,并在多种细胞系中产生非常稳定的生物学效应。MiR-210调控的基因众多,但是只有一部分基因被证明可以在心血管相关模型中发挥调控作用。这些基因从凋亡、自噬、增殖、细胞迁移、能量代谢、血管生成等多个方面共同调节心血管系统面对缺氧时的保护反应,并提高细胞和个体对缺氧的适应能力。已知miR-210在多种心血管疾病患者的血浆中检测出有意义的变化,如动脉粥样硬化,急性冠脉综合征,心力衰竭,心脏瓣膜病,糖尿病心肌病等。所以,miR-210在心血管系统中的应用前景十分广泛,具有很好的研究价值。目前研究发现在众多的下游靶基因中,miR-210通过调控Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)可以影响多种细胞过程。BNIP3是BH3-only蛋白家族的一员,是一种典型的受缺氧调控的蛋白。由于其较BH3-only家族其他蛋白的结构及功能特殊性,其在凋亡过程中所行使的功能更加多样。其BH3-only区域可以与Bcl-2抗凋亡蛋白特异性结合,行使促凋亡功能。另外,其C端跨膜结构域还可以调控线粒体膜电位等相关功能,导致线粒体功能的破坏,从而进一步加剧细胞损伤。另外,BNIP3还在多个细胞系中证实可以对细胞自噬产生影响。研究表明BNIP3在心血管疾病中可以发生上调,且抑制BNIP3可以改善心肌损伤情况。所以,BNIP3在心血管疾病中的诊断及治疗意义有待进一步研究。研究目的在本研究中,我们利用缺氧培养大鼠心肌细胞H9c2构建心肌缺血模型。在模型中,我们通过检测细胞的凋亡、自噬等相关蛋白表达变化,探究此过程中凋亡和自噬信号通路是否被激活。通过检测miR-210及BNIP3蛋白的表达变化,以及miR-210表达对细胞活性、BNIP3和自噬的影响,探究miR-210在心肌缺血过程中的作用及其对自噬和BNIP3的调控作用。另外,我们还利用H9c2细胞构建缺血-再灌注模型,检测再灌注损伤过程中凋亡和自噬相关通路的变化探究自噬在此过程的调控作用,从而为miR-210在心血管系统的保护作用提供新的理论支持。研究方法1.对H9c2细胞进行缺氧培养,构建心肌缺血模型。使用CCK-8活性检测试剂盒检测细胞生存率,乳酸脱氢酶检测试剂盒检测LDH释放量,DCFH-DA探针检测细胞中ROS含量等方法评估缺氧期间细胞的损伤程度,并用Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase3,Bak,Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,观察缺血模型中细胞的损伤变化。利用Western blot检测缺血模型中自噬相关蛋白LC3B,p62的表达,并利用免疫荧光染色的方法检测LC3B蛋白含量及在细胞中的分布,探究缺血模型中自噬相关蛋白的变化。2.利用实时定量PCR的方法检测缺血模型中miR-210的表达变化。利用慢病毒转染构建空载质粒阴性对照及miR-210高表达及低表达模型,用荧光显微镜观察并利用实时定量PCR检测转染效率。检测转染后缺氧H9c2细胞活性、LDH释放量的变化,探究miR-210对细胞活性及损伤程度的影响。在miR-210高表达及对照组模型中检测凋亡相关蛋白Caspase3,Bak,Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,探究miR-210在H9c2细胞缺氧中对凋亡通路的调控作用。利用Western blot法检测miR-210高、低表达H9c2细胞中LC3B蛋白的表达,并用免疫荧光染色观察LC3B的点状聚集,探究miR-210对自噬的作用。利用实时定量PCR及Western blot检测缺血模型中BNIP3 mRNA及蛋白的表达变化及在miR-210高表达及低表达模型中miR-210对BNIP3的调控作用。利用siRNA构建BNIP3低表达模型,利用实时定量PCR及western blot方法检测BNIP3表达水平变化。在缺血模型中继续检测H9c2细胞活性、凋亡相关蛋白Caspase3表达,并利用Western blot观察LC3B的变化,探究BNIP3在缺血模型中的作用及其对凋亡、自噬通路的调控。3.利用H9c2细胞缺氧及缺氧后复氧过程构建H9c2细胞缺血-再灌注模型,检测模型中细胞的活性及LDH释放量变化以及ROS含量变化,并检测模型中凋亡和自噬蛋白表达水平变化。利用3-MA抑制细胞中的自噬发生后,再次检测H9c2细胞活性、LDH释放量,并用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3的表达,探究自噬在缺血及再灌注过程中所起到的作用。研究结果1.不同缺氧时间引起心肌细胞H9c2氧化损伤,同时激活细胞凋亡过程和细胞自噬途径,通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2,促进Bak和Bax活化激活细胞凋亡。2.在缺氧诱导H9c2细胞损伤过程中,miRNA-210显着上调。高表达的miR-210可以提高缺氧条件下的H9c2细胞的活性,抑制凋亡相关蛋白Caspase3及Bax、Bak的表达,并可以使抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,从而对缺氧细胞起到一定的保护作用。低表达miR-210则会降低H9c2细胞在缺氧状态下的活性,加剧细胞损伤。3.BNIP3是直接受到miR-210调控的基因。BNIP3在H9c2细胞缺氧模型中升高,起到促凋亡的作用。抑制BNIP3的表达可以抑制H9c2细胞缺氧模型中的凋亡,并可以部分抵消miR-210低表达所造成的凋亡增加。另外,抑制BNIP3可以减少缺氧过程中自噬的发生。4.在H9c2细胞缺血-再灌注模型中,复氧过程细胞损伤程度较缺氧时加剧,且凋亡和自噬的水平均发生上调。在缺氧时抑制自噬H9c2细胞活性升高,细胞内自噬的发生对细胞存活不利。而在缺血再灌注过程中,细胞的凋亡和自噬的发生更加剧烈,细胞自噬发挥了主导作用,被激活的细胞自噬通过抑制细胞凋亡信号通路发挥细胞保护作用,同时升高的miR-210也发挥了一定的细胞保护作用。结论在H9c2细胞缺血及缺血再灌注损伤模型中,凋亡及自噬的信号通路被激活。在细胞缺氧损伤过程中,miR-210通过抑制靶基因BNIP3进而抑制细胞凋亡及自噬信号通路,发挥细胞保护作用。而在缺血再灌注过程中,被激活的细胞自噬通过抑制细胞凋亡信号通路发挥细胞保护作用,同时升高的miR-210也通过抑制凋亡发挥了一定的细胞保护作用。创新点及研究意义本研究首次证实了心肌细胞缺血及再灌注阶段过程中自噬对细胞活性及凋亡途径的不同影响,以及miR-210在此过程中对凋亡和自噬的调控,并进一步发现了miR-210通过抑制BNIP3的蛋白表达来发挥细胞保护作用。本研究为心血管疾病缺血再灌注损伤发生机制以及自噬在其中的作用的研究提供了新的理论支持,为miR-210在缺血再灌注损伤中的保护作用提供理论基础,为心血管疾病缺血再灌注损伤的临床治疗和预防提供了新的思路。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
杜玉颖,孟思妤,常莉,夏钰晰,赵韵茗[10]（2019）在《两种不同方法建立H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤模型比较》一文中研究指出目的探讨氮气(N_2)与连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)在构建H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤模型中的应用价值。方法培养H9C2心肌细胞,当细胞生长状态良好时,分别用N_2、不同浓度的Na_2S_2O_4作用于心肌细胞,在不同时间点检测心肌细胞存活率。结果与空白组比较,各浓度Na_2S_2O_4组的心肌细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常氧对照组比较,各缺氧组的细胞存活率均下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 N_2与Na_2S_2O_4均能造成H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤,效果均较为显着。(本文来源于《临床军医杂志》期刊2019年04期）
心肌细胞模型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨二甲双胍调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二甲双胍低(150 mg·kg-1)、中(300 mg·kg-1)、高(500 mg·kg-1)剂量组、自噬激动剂组(雷帕霉素,5 mg·kg-1),制备心肌缺血再灌注大鼠模型,药物处理组于建模前3 d以不同剂量二甲双胍及雷帕霉素每天灌胃治疗,模型组及假手术对照组采用等体积生理盐水灌胃,持续3 d。造模成功12 h后,处死大鼠,叁苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察各组大鼠心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测血清中磷酸肌酸同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白I(c Tn I)含量,免疫组织化学检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3、P62阳性细胞比例,蛋白免疫印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3(包括LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、P62及PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、血清中CK-MB、c Tn I含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p-PI3K、pAkt蛋白表达明显升高,心肌组织中Beclin-1、LC3阳性细胞比例、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05);心肌组织中LC3-Ⅰ、PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,各药物处理组大鼠心肌梗死面积、血清中CK-MB、c Tn I含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低,心肌组织中Beclin-1、LC3阳性细胞比例、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达明显升高(P<0.05),且二甲双胍各组呈剂量依赖性。二甲双胍低、中剂量组与自噬激动剂组比较,以上各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二甲双胍通过促进心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬,发挥心肌保护作用,其机制可能与下调PI3K/Akt通路有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
心肌细胞模型论文参考文献
[1].宁小伟,苏和,张瑞芬.不同方法构建的心肌细胞缺氧/复氧模型[J].世界最新医学信息文摘.2019
[2].严斐斐,张超,王艾丽,徐亭.二甲双胍调控PI3K/Akt通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响研究[J].中国药师.2019
[3].罗敏,陈昌林,李明兵,侯崧.右美托咪定对心肌缺血再灌注大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响[J].临床和实验医学杂志.2019
[4].熊伟,钱金桥.心肌细胞缺氧/复氧模型的构建及研究进展[J].医学综述.2019
[5].邢红艳,张艺哲,王美婷,赵琪,汪溪洁.人诱导多能干细胞分化的心肌细胞在疾病模型和药物筛选中的应用[J].中国医药工业杂志.2019
[6].常冰,李昌.血府逐瘀汤对冠心病模型大鼠血管及心肌细胞凋亡的影响[J].世界中医药.2019
[7].吴帆.“标本配穴”电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞骨架蛋白的影响[D].湖北中医药大学.2019
[8].周姝,卜法芹,常巧玉,陈红伟,赵舒才.Tollip在左前降支结扎的心肌梗死小鼠模型心肌细胞凋亡中的作用及其机制[J].中国老年学杂志.2019
[9].关一诺.MicroRNA-210对自噬的调控在大鼠心肌细胞缺血损伤模型中的作用[D].吉林大学.2019
[10].杜玉颖,孟思妤,常莉,夏钰晰,赵韵茗.两种不同方法建立H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤模型比较[J].临床军医杂志.2019