导读:本文包含了酵母突变体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人凝血因子Ⅸ高活性突变体,毕赤酵母,蛋白表达
酵母突变体论文文献综述
戴永刚[1]（2019）在《人凝血因子Ⅸ-V107A-R338A高活性突变体在毕赤酵母中的表达及活性测定》一文中研究指出目的人凝血因子Ⅸ(h FⅨ)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用。h FⅨ表达量绝对或相对不足会导致B型血友病。本研究用毕赤酵母生产重组高活性突变体h FⅨ-V107A-R338A。方法首先构建p PICZa A-h FⅨ-V107A-R338A酵母分泌表达载体,其次将其用电转化入毕赤酵母SMD1168中,再次利用G418抗药性的能力筛选表达量高的单克隆重组菌株,培养并将表达产物纯化,稀释后检测其凝血活性。结果通过本研究获得的重组SMD1168-hFⅨ-V107A-R338A表达量达到80-120 mg/L;活力约为人血中野生型hFⅨ凝血活性的(44.06±2.3)%,比野生型的酵母重组hFⅨ高7.75倍,比单突变R338A高13.17%。结论人凝血因子Ⅸ高活性突变体V107A-R338A是潜在的天然凝血因子替代品。(本文来源于《临床输血与检验》期刊2019年03期）
夏静[2]（2019）在《CotA漆酶突变体在毕赤酵母中分泌表达及对伊文斯蓝降解机制研究》一文中研究指出漆酶催化酚类和芳香基类化合物的氧化还原反应,利用O_2作为电子受体催化底物,不需辅因子参与,水是反应过程唯一副产物,是典型的环境友好“绿色催化剂”。真菌漆酶虽已商业化,但由于在碱性环境下活性很低甚至失活,热稳定性也较差,大大限制了在印染废水等碱性废水中的应用。相较之下,芽孢杆菌的CotA漆酶,虽天然催化活性略低,但在碱性pH及高温下具有良好酶活,pH与热稳定性非常好,能耐受较高的盐浓度和有机溶剂,更适合在印染废水处理中推广应用。然而CotA漆酶为芽孢外壁蛋白,呈不溶状态,难以分离纯化,限制了CotA漆酶的应用。本论文以巴斯德毕赤酵母表达系统实现CotA漆酶D501G/L386W/G417L/G57F(缩写为GWLF)的分泌表达,该漆酶是本实验室前期构建的来源于短小芽孢杆菌且催化效率有大幅提高的一个优异突变体。根据毕赤酵母的密码子偏好性对GWLF基因进行密码子优化,将优化后的基因整合到毕赤酵母基因组上,成功实现了GWLF在毕赤酵母中的分泌表达。重组GWLF为分子量约75 kDa的二聚体蛋白。在摇瓶水平优化重组毕赤酵母诱导条件,结果表明,将重组毕赤酵母在含有0.25 mmol·L~(-1) Cu~(2+)和0.5%(w/v)山梨醇的BMMY诱导培养基(pH 7.0)中,每隔24 h补加1.0%(v/v)甲醇,在26℃下诱导表达144 h,最终获得GWLF最高酶活为4092 U·L~(-1)。参考摇瓶最适诱导条件,在5 L发酵罐高密度发酵中,重组GWLF最终酶活达到17080 U·L~(-1)。生物毒性实验表明重组GWLF可以有效催化降解偶氮染料伊文斯蓝。通过液相质谱联用技术进一步研究了GWLF对伊文斯蓝的脱色和降毒反应机制,显示伊文斯蓝中的偶氮键在降解过程中转化成氮气而不会生成有毒的苯胺类物质。本研究为首次阐明细菌漆酶催化伊文斯蓝降解机制。(本文来源于《江南大学》期刊2019-06-01）
赵萌[3]（2019）在《甜味蛋白Brazzein在毕赤酵母中的表达纯化及其突变体的构建》一文中研究指出天然植物甜蛋白brazzein是一种由Ming和Hellekant于1994年从西非热带植物Pentadiplandra brazzeana Baillon的红色鲜果中分离出的小分子植物蛋白,具有强耐热性、热量低、甜度及营养价值高等优点。但是,天然植物来源的该甜味蛋白产量低,无法满足市场需求。此外,该甜味蛋白目前在原核生物(如大肠杆菌)中的异源重组表达往往存在不能正确折迭或易形成包涵体等问题,限制了其商业化生产和应用。本研究将根据毕赤酵母密码子偏好性优化的brazzein基因序列克隆入载体pGAPZαA(含His-Tag),将重组质粒通过电转导入毕赤酵母细胞中。随后,通过酵母异源表达以及后续培养液的浓缩纯化透析等操作得到目的蛋白。实验表明成功表达的野生型重组蛋白具有明显甜味,其甜味阈值达到了125μg/mL。此外,该表达体系下目的蛋白的产量约为60 mg/L,且熔点温度为86.7℃,表明经毕赤酵母表达体系表达的重组目的蛋白和天然的甜味蛋白具有同样好的热稳定性。在成功构建上述表达体系的前提下,我们根据蛋白氨基酸带电性以及结构,设计6个单突变体。实验结果表明,我们设计的6种单突变体蛋白甜味有不同程度增加,表明甜味蛋白brazzein与甜味受体之间通过多位点之间的静电相互作用结合。本研究获得了蛋白甜度明显提高的突变体蛋白D40K、E41A和D50K,其中D50K甜度可达野生型的6倍,甜味阈值达到了20μg/mL。为了进一步理解突变体甜味蛋白结构与功能的关系,本实验测定了突变体蛋白与野生型brazzein甜蛋白的二级结构。结果表明,突变体蛋白基本保留野生型二级结构。经圆二色谱逐步升温法可知突变体D40K、E41A、D50K的熔点温度均高于野生型brazzein甜蛋白。此外,经不同温度热处理发现,野生型与突变体蛋白在85℃加热6 h仍能尝到甜味,其中E41A在90℃加热6 h具有较弱甜味。以上结果表明,本研究构建的突变体蛋白具有较好的应用潜力。(本文来源于《齐鲁工业大学》期刊2019-05-28）
秦淑贞[4]（2019）在《以胱抑素及其突变体为例研究毕赤酵母表达外源蛋白的影响》一文中研究指出毕赤酵母是一种高效的真核表达系统,已被广泛的应用于生产重组蛋白药物。现有研究表明,二硫键异构酶PDI(Protein Disulfide Isomerase)在宿主菌里过表达会显着提高酵母对外源蛋白的表达量。PDI在催化新生蛋白质二硫键形成的同时参与蛋白折迭;另一方面它兼具分子伴侣的功能,能帮助错误折迭的蛋白折迭成其天然构象。为了深度剖析PDI提高淀粉样蛋白表达效率的机理及涉及的细胞通路及信号因子,我们以鸡胱抑素为模型蛋白,分别构建了鸡胱抑素的各种突变体(淀粉样突变体I66Q、不稳定型突变体ΔW和α螺旋II解体突变E82P),并在PDI正常表达及过表达的毕赤酵母GS115菌株中进行分泌型表达。经SDS-PAGE及Western Blot检测各菌株胞内及胞外蛋白发现,除表达I66Q的两个重组菌株没有检测到胞内蛋白外,其余菌株在胞内均检测到外源蛋白的单体。胞外蛋白的检测结果显示,除E82P在PDI正常表达及过表达菌株中的表达量变化不明显外,其余外源蛋白在PDI过表达菌株的表达量均显着高于PDI正常表达的菌株。蛋白质表达的实验结果符合蛋白构象决定表达效率的既有科学假说。利用转录组测序技术对各菌株进行了深度分析,对I66Q VS WT和ΔW VS WT的两组菌株绘制维恩图,分别筛选出203个和210个差异表达基因。随后进行KEGG途径的分类和统计,发现在I66Q VS WT及ΔW VS WT组分别有145,148个基因注释到KEGG数据库中,差异基因在遗传信息处理中的差距较大,特别是在DNA复制过程中I66Q VS WT中只有gene3858上调,而在ΔW VS WT中有五个上调基因注释到DNA复制的通路中。因此,推测引起较大差距的原因是I66Q虽然是淀粉样突变体,但其主体构象与野生型相比变化较小,而ΔW则是去掉了一个包含9个氨基酸的α螺旋II的截短体,并缺失一个二硫键,这需要调动更多的基因来提高其复制、转录和翻译等蛋白质合成相关功能的效率。本次研究及转录组测序分析结果一方面确定了PDI对毕赤酵母分泌淀粉样蛋白的调控作用,另一方面,比较鸡胱抑素各突变体与野生型鸡胱抑素的异同。有助于阐明新生蛋白的淀粉样突变体、不稳定突变体与野生型天然蛋白在胞内的产生过程,为深入理解真核生物的品质管理系统提供理论和实验依据。(本文来源于《辽宁大学》期刊2019-05-01）
张潘潘,许延吉,王之可,刘晓,李素霞[5]（2018）在《重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究》一文中研究指出目的:研究R122位点突变重组猪胰蛋白酶,与野生型酶相比较,该位点对重组猪胰蛋白酶(RPT)性质的影响。方法:以毕赤酵母GS115作为表达宿主,对RPT、突变体mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T)进行表达及纯化。并对其性质和稳定进行对比研究。结果:重组胰蛋白酶及其突变体在毕赤酵母中均获得了高效表达。相对于RPT,突变体mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T)在以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为底物时,具有更强底物结合力,叁者的米氏常数分别为18.8μmol/L、9.0μmol/L和11.0μmol/L;两突变体耐高温耐碱能力增强;在Ca2+存在及去除的条件下,突变体具有更强的抗自降解能力。结论:可以利用毕赤酵母高效表达重组胰蛋白酶及其突变体。mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T)相对于野生型RPT,对高p H条件和高温的耐受性增强,该稳定性的提高主要归因于R122位点的突变。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2018年05期）
包汭琪,刘洒洒,高宁,林心萍[6]（2017）在《圆红冬孢酵母T-DNA突变体类胡萝卜素生产及其插入位点分析》一文中研究指出本研究采用农杆菌转化法(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)对圆红冬孢酵母进行随机突变,利用颜色表型筛选出8株颜色不一的突变株,对这8株突变株的类胡萝卜素产量进行分析,然后利用TAILPCR技术,对突变株的T-DNA插入位点进行分析,并分析这些插入位点可能对类胡萝卜素代谢合成途径造成的影响。结果显示,本研究共获得到2株高产红酵母红素,5株高产β-胡萝卜素,1株不产类胡萝卜素的突变株。与野生型相比,红酵母红素和β-胡萝卜素的最高产量分别提高了2.10倍和1.49倍。染色体步移结果显示T-DNA的插入是随机的。纯白色菌株中八氢番茄红素脱氢酶基因被破坏,菌株表型和基因功能注释相吻合。该方法获得了红酵母红素和β-胡萝卜素高产菌株,提高了两种色素的生产选择性。此外,步移出的位点为进一步的基因操作提供了有用的靶点信息。(本文来源于《2017中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2017-11-08）
李静[7]（2017）在《酵母孢子包埋葡萄糖脱氢酶突变体与(S)-羰基还原酶Ⅱ高效手性合成》一文中研究指出酿酒酵母的子囊孢子是种休眠体,抗逆性强,用于包埋酶完成催化反应具有较好的应用前景。近平滑假丝酵母(S)-羰基还原酶Ⅱ(SCRⅡ)与枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶(GDH)偶联于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AN120孢子中,孢子微胶囊酶催化合成(S)-苯基乙二醇过程中,需添加葡萄糖作为辅助底物加强辅酶循环,但葡萄糖的存在极易造成孢子萌发。除天然底物葡萄糖外,GDH催化D-木糖的活性最高,且木糖的存在不会引起孢子萌发。因而为了提高微胶囊酶的稳定性,本研究在GDH底物结合口袋附近实施定点突变,进一步提高酶催化木糖的酶活。将(S)-羰基还原酶Ⅱ与突变酶偶联后在酿酒酵母孢子中表达,形成孢子微胶囊酶。孢子微胶囊酶在无需添加放线菌酮抑制孢子萌发的条件下,实现高效多批次的不对称手性合成。具体研究内容包括:(1)构建7种葡萄糖脱氢酶定点突变的重组大肠杆菌菌株Escherichia coli BL21/pET-gdh/K207A、E.coli BL21/pET-gdh/E220K、E.coli BL21/pET-gdh/Q252K、E.coli BL21/pET-gdh/A258F、E.coli BL21/pET-gdh/A258H、E.coli BL21/pET-gdh/A258W、E.coli BL21/pET-gdh/A258Y。突变酶在大肠杆菌中均实现高效表达,重组蛋白经过镍离子亲和层析柱和分子筛凝胶层析柱两个步骤的纯化后,获得了单一条带的纯酶。(2)测定突变酶催化木糖的酶活。突变酶A258F、A258H、A258W和A258Y催化木糖的酶活比野生型提高了1–4倍,其中A258F催化木糖的酶活最高。在最适反应条件:pH 7.0、55℃下,A258F对木糖比活为7.59 U?mg-1,与野生型相比提高了3.7倍。与野生型相似,A258F具有良好的有机溶剂耐受性,在50%浓度的辛烷和壬烷中室温放置1h后,残余酶活力高达90%,在环己烷和葵烷中,残余酶活维持在85%以上,在辛酸乙酯和乙二醇中,残余酶活力也保持在50%以上。(3)测定突变酶的动力学参数。相较于野生型,A258F对木糖的kcat值增加了2.6倍,Km值减少了3.0倍,kcat/Km值是野生型的7.8倍,表明A258F对木糖的催化效率明显提高。A258F催化葡萄糖的kcat/Km值是野生型的1.3倍,表明A258F催化葡萄糖的效率略有提高。(4)构建重组酵母菌株S.cerevisiae AN120/TEF-scr Ⅱ-gdh/A258F,以醋酸钾为营养物质培养重组酵母,诱导其产生孢子包埋重组蛋白SCRⅡ-GDH(A258F),制备酿酒酵母孢子微胶囊酶。通过免疫蛋白印记分析,表明目标蛋白SCRⅡ和GDH(A258F)在酿酒酵母孢子中成功表达。(5)以孢子微胶囊酶为生物催化剂进行不对称转化反应,添加木糖作为辅酶循环的辅助底物,考察微胶囊酶的最适反应条件和多批次使用性能。微胶囊酶催化20 g?L-1底物2-羟基苯乙酮,在2-羟基苯乙酮与木糖最佳比例1:1,最适温度35℃和最适pH 6.0条件下反应4 h,产物(S)-苯基乙二醇的光学纯度和得率高达99.7%和95.8%。不添加放线菌酮情况下,微胶囊酶反复使用10次后,其催化合成(S)-苯基乙二醇的得率仍保持在60%以上。(本文来源于《江南大学》期刊2017-06-01）
陈韵,牛纯青,宋小双,苏畅,华子春[8]（2016）在《DSPAα1缺失突变体在毕赤酵母中的表达及活性研究》一文中研究指出吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂(Desmodus salivary plasminogen activators,DSPAs)共有4种:DSPAα1、α2、β及γ。其中,DSPAα含有指形区(F)、表皮生长因子区(E)、kringle区(K)和丝氨酸蛋白酶区(P),DSPAβ含E、K、P区,DSPAγ含K和P区。以DSPAα1为基础,研究其结构对纤溶活性的影响。采用重迭延伸PCR技术(splicing overlap extension PCR,SOE-PCR)获得缺失E区的DSPAα1突变体(m DSPAα1),分别构建m DSPAα1/p PIC9K、DSPAβ/p PIC9K和DSPAγ/p PIC9K重组质粒并转化到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115中表达,纤维平板法测活。结果显示未检测到DSPAγ的表达,DSPAα1活性为2.64×105 U/mg,DSPAβ的活性为1.32×104 U/mg,m DSPAα1活性为151.52 U/mg;同时使用DSPAα1、m DSPAα1、DSPAβ时,总活性几乎不受影响,单独使用任意两者时,发现活性均降低2-3倍。m DSPAα1纤溶活性几乎没有,同时DSPAβ与野生型DSPAα1相比保留了相当的催化活性。DSPAα1的N端区域可以影响其溶栓活性,而缺失E区后几乎丧失活性,说明E区在DSPAα1溶栓过程中起着至关重要的作用。(本文来源于《生物技术通报》期刊2016年09期）
张小华,刘向勇,卞伟华,徐岩艳,许聪[9]（2016）在《酵母SOD1基因缺失突变体应答真菌细胞壁抑制剂CFW的转录组学分析》一文中研究指出以酿酒酵母为研究材料,采用酵母全基因组表达谱芯片,分析超氧化物歧化酶SOD1基因缺失(sod1Δ)对酵母细胞应答真菌细胞壁抑制剂钙荧光白(CFW)全基因组转录表达谱的影响,为揭示植物病原真菌细胞壁调控机制以及植物抗真菌基因工程改造提供新的理论基础。结果表明:CFW(10μg/m L)处理1 h后,与野生型酵母细胞相比,sod1Δ酵母细胞中211个基因发生了显着差异表达(97个基因表达上调、114个基因表达下调)。随机选取5个差异表达基因采用定量PCR验证,结果与芯片分析结果一致。差异表达基因功能主要涉及细胞壁、细胞代谢、蛋白质合成、细胞防御以及大量功能未知蛋白。以上结果表明,SOD1基因缺失可显着改变酵母细胞应答真菌细胞壁抑制剂CFW胁迫的全基因组转录表达谱。(本文来源于《河南农业科学》期刊2016年01期）
王岁楼,王海翔,杨志萍,吴晓宗[10]（2015）在《红酵母超高压突变体的类胡萝卜素提取及特性研究》一文中研究指出采用酸-热法破壁和丙酮为提取溶剂,在所优化的最佳组合条件下,从红酵母超高压突变株提取类胡萝卜素,平均提取率可达718.1μg/g干细胞。色素粗提物采用柱色谱分离纯化后,通过薄层色谱(TLC)、紫外光谱和HPLC进行分析,发现该酵母突变体的发酵产物至少含β-胡萝卜素、园酵母素和红酵母红素等3种色素,其中β-胡萝卜素含量最多,超过50%的比例。该色素提取物的光热稳定性好于先前报道的同类色素;体外清除自由基实验也表明该类胡萝卜素提取物具有良好的抗氧化活性。因此,利用该突变株发酵生产类胡萝卜素值得进一步研究和开发。(本文来源于《中国食物与营养》期刊2015年09期）
酵母突变体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
漆酶催化酚类和芳香基类化合物的氧化还原反应,利用O_2作为电子受体催化底物,不需辅因子参与,水是反应过程唯一副产物,是典型的环境友好“绿色催化剂”。真菌漆酶虽已商业化,但由于在碱性环境下活性很低甚至失活,热稳定性也较差,大大限制了在印染废水等碱性废水中的应用。相较之下,芽孢杆菌的CotA漆酶,虽天然催化活性略低,但在碱性pH及高温下具有良好酶活,pH与热稳定性非常好,能耐受较高的盐浓度和有机溶剂,更适合在印染废水处理中推广应用。然而CotA漆酶为芽孢外壁蛋白,呈不溶状态,难以分离纯化,限制了CotA漆酶的应用。本论文以巴斯德毕赤酵母表达系统实现CotA漆酶D501G/L386W/G417L/G57F(缩写为GWLF)的分泌表达,该漆酶是本实验室前期构建的来源于短小芽孢杆菌且催化效率有大幅提高的一个优异突变体。根据毕赤酵母的密码子偏好性对GWLF基因进行密码子优化,将优化后的基因整合到毕赤酵母基因组上,成功实现了GWLF在毕赤酵母中的分泌表达。重组GWLF为分子量约75 kDa的二聚体蛋白。在摇瓶水平优化重组毕赤酵母诱导条件,结果表明,将重组毕赤酵母在含有0.25 mmol·L~(-1) Cu~(2+)和0.5%(w/v)山梨醇的BMMY诱导培养基(pH 7.0)中,每隔24 h补加1.0%(v/v)甲醇,在26℃下诱导表达144 h,最终获得GWLF最高酶活为4092 U·L~(-1)。参考摇瓶最适诱导条件,在5 L发酵罐高密度发酵中,重组GWLF最终酶活达到17080 U·L~(-1)。生物毒性实验表明重组GWLF可以有效催化降解偶氮染料伊文斯蓝。通过液相质谱联用技术进一步研究了GWLF对伊文斯蓝的脱色和降毒反应机制,显示伊文斯蓝中的偶氮键在降解过程中转化成氮气而不会生成有毒的苯胺类物质。本研究为首次阐明细菌漆酶催化伊文斯蓝降解机制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母突变体论文参考文献
[1].戴永刚.人凝血因子Ⅸ-V107A-R338A高活性突变体在毕赤酵母中的表达及活性测定[J].临床输血与检验.2019
[2].夏静.CotA漆酶突变体在毕赤酵母中分泌表达及对伊文斯蓝降解机制研究[D].江南大学.2019
[3].赵萌.甜味蛋白Brazzein在毕赤酵母中的表达纯化及其突变体的构建[D].齐鲁工业大学.2019
[4].秦淑贞.以胱抑素及其突变体为例研究毕赤酵母表达外源蛋白的影响[D].辽宁大学.2019
[5].张潘潘,许延吉,王之可,刘晓,李素霞.重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究[J].中国生物工程杂志.2018
[6].包汭琪,刘洒洒,高宁,林心萍.圆红冬孢酵母T-DNA突变体类胡萝卜素生产及其插入位点分析[C].2017中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛论文摘要集.2017
[7].李静.酵母孢子包埋葡萄糖脱氢酶突变体与(S)-羰基还原酶Ⅱ高效手性合成[D].江南大学.2017
[8].陈韵,牛纯青,宋小双,苏畅,华子春.DSPAα1缺失突变体在毕赤酵母中的表达及活性研究[J].生物技术通报.2016
[9].张小华,刘向勇,卞伟华,徐岩艳,许聪.酵母SOD1基因缺失突变体应答真菌细胞壁抑制剂CFW的转录组学分析[J].河南农业科学.2016
[10].王岁楼,王海翔,杨志萍,吴晓宗.红酵母超高压突变体的类胡萝卜素提取及特性研究[J].中国食物与营养.2015
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