本文主要研究内容
作者何媛平（2019）在《十字花科黑腐病菌中与全局转录后调控蛋白RsmA结合的蛋白鉴定》一文中研究指出：RsmA(Repressor of secondary metabolism A,次生代谢抑制蛋白),在有些细菌中也叫CsrA(Carbon storage regulator A,碳储存调控蛋白),广泛存在于各种细菌中,作为全局转录后调控因子在中心碳代谢、糖异生、糖原合成、生物被膜形成、鞭毛产生、群体感应和致病等生理过程中发挥非常重要的调控作用。我们课题组之前的研究发现,在十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv.campestris,Xcc)4中,RsmA作为全局转录后调控因子在致病、HR反应、胞外多糖产生、胞外酶活性、细胞运动以及生物膜形成等多个生理过程中起重要作用,但作用机制尚未完全清楚。RsmA是一个典型的RNA结合蛋白,长期以来,人们普遍认为RsmA只能通过与靶标mRNA的结合来行使其调控功能。但是,最近的研究发现,RsmA也能够通过与其它蛋白的结合来发挥作用。我们猜测,在Xcc中,RsmA可能也会通过蛋白-蛋白互作来发挥作用。基于这个推测,本研究拟通过交联和免疫共沉淀技术,在全基因组水平上鉴定Xcc细胞中与RsmA结合的蛋白。为了鉴定Xcc细胞中所有与RsmA结合(包括瞬间结合和弱结合)的蛋白,我们在丰富培养基NYGB中分别培养表达RsmA-3F蛋白(RsmA蛋白C端带有3×Flag抗原标签)的菌株,即2506-3F,以及对照菌株Xcc8004(表达不带任何抗原标签的RsmA蛋白),菌体经紫外交联(使得RsmA与其靶蛋白发生共价结合)后进行总蛋白提取,接着用3×Flag磁珠将‘RsmA-蛋白复合体’从总蛋白中共沉淀出来,最后通过质谱分析来确定沉淀出来的’RsmA-蛋白复合体’中包含的蛋白种类,从而发现与RsmA结合的蛋白。结果显示,从2506-3F菌株中获得的’RsmA-蛋白复合体’中有76种蛋白,而从对照菌株Xcc8004中获得的’RsmA-蛋白复合体’中只有16种。经过比较分析,我们确定了 48个蛋白作为与RsmA结合的候选蛋白。有意思的是,在这48个候选蛋白中,有19个蛋白是Xcc中心碳代谢途径中的酶,预示RsmA可以通过蛋白-蛋白互作来调控中心碳代谢。为了明确这48个候选蛋白是否真的与RsmA结合,我们采用细菌双杂交技术对部分候选蛋白与RsmA的互作进行了验证。结果证明了一个强互作的蛋白ProA(XC1880)以及7个弱的互作蛋白[Conserved hypothetical protein(XC0932)、PpsA(XC1952)、RpfA(XC2329)、RpoA(XC3316)、RpsG(XC3344)、RpoB(XC3347)和RplA(XC3350)]。为了进一步确认这些在细菌双杂交实验中显示为阳性的蛋白是否真的与RsmA直接结合,我们采用了交互免疫共沉淀技术进行再次验证。结果证明,ProA蛋白确实能够与RsmA直接结合。本研究证明了Xc 的RsmA能够与ProA蛋白直接结合,预示Xcc中RsmA也能通过与蛋白互作来发挥其调控作用。ProA是继FliW和CesT之后,第三个发现的与RsmA结合的蛋白。我们的研究拓宽了人们对RsmA作用机制的认识。
Abstract
RsmA(Repressor of secondary metabolism A,ci sheng dai xie yi zhi dan bai ),zai you xie xi jun zhong ye jiao CsrA(Carbon storage regulator A,tan chu cun diao kong dan bai ),an fan cun zai yu ge chong xi jun zhong ,zuo wei quan ju zhuai lu hou diao kong yin zi zai zhong xin tan dai xie 、tang yi sheng 、tang yuan ge cheng 、sheng wu bei mo xing cheng 、bian mao chan sheng 、qun ti gan ying he zhi bing deng sheng li guo cheng zhong fa hui fei chang chong yao de diao kong zuo yong 。wo men ke ti zu zhi qian de yan jiu fa xian ,zai shi zi hua ke hei fu bing jun (Xanthomonas campestrispv.campestris,Xcc)4zhong ,RsmAzuo wei quan ju zhuai lu hou diao kong yin zi zai zhi bing 、HRfan ying 、bao wai duo tang chan sheng 、bao wai mei huo xing 、xi bao yun dong yi ji sheng wu mo xing cheng deng duo ge sheng li guo cheng zhong qi chong yao zuo yong ,dan zuo yong ji zhi shang wei wan quan qing chu 。RsmAshi yi ge dian xing de RNAjie ge dan bai ,chang ji yi lai ,ren men pu bian ren wei RsmAzhi neng tong guo yu ba biao mRNAde jie ge lai hang shi ji diao kong gong neng 。dan shi ,zui jin de yan jiu fa xian ,RsmAye neng gou tong guo yu ji ta dan bai de jie ge lai fa hui zuo yong 。wo men cai ce ,zai Xcczhong ,RsmAke neng ye hui tong guo dan bai -dan bai hu zuo lai fa hui zuo yong 。ji yu zhe ge tui ce ,ben yan jiu ni tong guo jiao lian he mian yi gong chen dian ji shu ,zai quan ji yin zu shui ping shang jian ding Xccxi bao zhong yu RsmAjie ge de dan bai 。wei le jian ding Xccxi bao zhong suo you yu RsmAjie ge (bao gua shun jian jie ge he ruo jie ge )de dan bai ,wo men zai feng fu pei yang ji NYGBzhong fen bie pei yang biao da RsmA-3Fdan bai (RsmAdan bai Cduan dai you 3×Flagkang yuan biao qian )de jun zhu ,ji 2506-3F,yi ji dui zhao jun zhu Xcc8004(biao da bu dai ren he kang yuan biao qian de RsmAdan bai ),jun ti jing zi wai jiao lian (shi de RsmAyu ji ba dan bai fa sheng gong jia jie ge )hou jin hang zong dan bai di qu ,jie zhao yong 3×Flagci zhu jiang ‘RsmA-dan bai fu ge ti ’cong zong dan bai zhong gong chen dian chu lai ,zui hou tong guo zhi pu fen xi lai que ding chen dian chu lai de ’RsmA-dan bai fu ge ti ’zhong bao han de dan bai chong lei ,cong er fa xian yu RsmAjie ge de dan bai 。jie guo xian shi ,cong 2506-3Fjun zhu zhong huo de de ’RsmA-dan bai fu ge ti ’zhong you 76chong dan bai ,er cong dui zhao jun zhu Xcc8004zhong huo de de ’RsmA-dan bai fu ge ti ’zhong zhi you 16chong 。jing guo bi jiao fen xi ,wo men que ding le 48ge dan bai zuo wei yu RsmAjie ge de hou shua dan bai 。you yi sai de shi ,zai zhe 48ge hou shua dan bai zhong ,you 19ge dan bai shi Xcczhong xin tan dai xie tu jing zhong de mei ,yu shi RsmAke yi tong guo dan bai -dan bai hu zuo lai diao kong zhong xin tan dai xie 。wei le ming que zhe 48ge hou shua dan bai shi fou zhen de yu RsmAjie ge ,wo men cai yong xi jun shuang za jiao ji shu dui bu fen hou shua dan bai yu RsmAde hu zuo jin hang le yan zheng 。jie guo zheng ming le yi ge jiang hu zuo de dan bai ProA(XC1880)yi ji 7ge ruo de hu zuo dan bai [Conserved hypothetical protein(XC0932)、PpsA(XC1952)、RpfA(XC2329)、RpoA(XC3316)、RpsG(XC3344)、RpoB(XC3347)he RplA(XC3350)]。wei le jin yi bu que ren zhe xie zai xi jun shuang za jiao shi yan zhong xian shi wei yang xing de dan bai shi fou zhen de yu RsmAzhi jie jie ge ,wo men cai yong le jiao hu mian yi gong chen dian ji shu jin hang zai ci yan zheng 。jie guo zheng ming ,ProAdan bai que shi neng gou yu RsmAzhi jie jie ge 。ben yan jiu zheng ming le Xc de RsmAneng gou yu ProAdan bai zhi jie jie ge ,yu shi Xcczhong RsmAye neng tong guo yu dan bai hu zuo lai fa hui ji diao kong zuo yong 。ProAshi ji FliWhe CesTzhi hou ,di san ge fa xian de yu RsmAjie ge de dan bai 。wo men de yan jiu ta kuan le ren men dui RsmAzuo yong ji zhi de ren shi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自广西大学的何媛平，发表于刊物广西大学2019-10-14论文，是一篇关于十字花科黑腐病菌论文,全局转录后调控因子论文,交联与免疫共沉淀论文,蛋白蛋白互作论文,广西大学2019-10-14论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自广西大学2019-10-14论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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