本文主要研究内容
作者姜维雨（2019）在《新城疫病毒M蛋白K119和K260泛素化修饰有助于病毒样颗粒的形成》一文中研究指出：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染禽引起的高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征,具有很高的发病率和病死率,对养禽业造成巨大的危害。NDV为单股负链RNA病毒,属于单负链病毒目(Mononegavirales)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、禽副粘病毒属(Avulavirus)。泛素化修饰对于蛋白的亚细胞定位、结构和功能以及降解,都非常重要。有报道表明泛素化修饰帮助副粘病毒M蛋白出核和形成病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP);然而,NDV M蛋白的泛素化修饰以及泛素化修饰在病毒感染周期中的作用尚未得到鉴定。本研究通过共转染和表达NDV Flag-M和HA-Ubiquitin,以免疫沉淀及Western Blot检测,发现M蛋白存在HA-ubiquitin修饰。通过不同副粘病毒M蛋白的序列比对以及在线软件预测分析,推测M蛋白的潜在的泛素化位点为保守赖氨酸K83、K119、K158、K222、K248和K260。通过定点突变,把相应K位点突变为丙氨酸(A)或精氨酸(R),发现K119A、K222A、K248A、K260A、K119R、K222R、K248R、K260R的泛素化条带有所减少,初步鉴定K119、K222、K248和K260具有泛素化修饰。副粘病毒中,NiV、hPIV、SiV以及NDV等的M蛋白可形成VLP,释放到细胞外。有报道表明NiV和人副粘病毒5型的M蛋白的泛素化修饰,对VLP的形成至关重要。本研究中,我们分别表达野生型M蛋白或泛素化位点突变型M蛋白,检测和比较VLP的产量。结果表明,突变K119和K260为A或者R,降低了VLP的形成和释放。由于M蛋白翻译合成后,先进入细胞核,再出核,迁移至细胞膜,完成病毒的组装和出芽释放。NDV M蛋白K119位于副粘病毒保守的NES序列,而K260位于副粘病毒的NLS序列。为了探讨M蛋白泛素化和M蛋白核输出的关系,我们通过间接免疫荧光检测,发现突变体K119R滞留在细胞膜,而K260R滞留在细胞核,因而影响了VLP的形成。进一步检测K119R和K260R蛋白突变体与宿主蛋白的相互作用,发现跟野生型M蛋白相比较,K119R突变导致跟宿主的互作蛋白增多,揭示K119泛素化可能遮盖了蛋白互作位点,使其能顺利从细胞膜释放。综上所述,NDV M蛋白存在泛素化修饰,且K119和K260泛素化修饰有助于VLP的出芽或释放。
Abstract
xin cheng yi (Newcastle disease,ND)shi you xin cheng yi bing du (Newcastle disease virus,NDV)gan ran qin yin qi de gao du jie chu xing chuan ran bing 。yi gao re 、hu xi kun nan 、xia li 、shen jing wen luan 、nian mo he jiang mo chu xie wei te zheng ,ju you hen gao de fa bing lv he bing si lv ,dui yang qin ye zao cheng ju da de wei hai 。NDVwei chan gu fu lian RNAbing du ,shu yu chan fu lian bing du mu (Mononegavirales)、fu nian bing du ke (Paramyxoviridae)、qin fu nian bing du shu (Avulavirus)。fan su hua xiu shi dui yu dan bai de ya xi bao ding wei 、jie gou he gong neng yi ji jiang jie ,dou fei chang chong yao 。you bao dao biao ming fan su hua xiu shi bang zhu fu nian bing du Mdan bai chu he he xing cheng bing du yang ke li (Virus-like particle,VLP);ran er ,NDV Mdan bai de fan su hua xiu shi yi ji fan su hua xiu shi zai bing du gan ran zhou ji zhong de zuo yong shang wei de dao jian ding 。ben yan jiu tong guo gong zhuai ran he biao da NDV Flag-Mhe HA-Ubiquitin,yi mian yi chen dian ji Western Blotjian ce ,fa xian Mdan bai cun zai HA-ubiquitinxiu shi 。tong guo bu tong fu nian bing du Mdan bai de xu lie bi dui yi ji zai xian ruan jian yu ce fen xi ,tui ce Mdan bai de qian zai de fan su hua wei dian wei bao shou lai an suan K83、K119、K158、K222、K248he K260。tong guo ding dian tu bian ,ba xiang ying Kwei dian tu bian wei bing an suan (A)huo jing an suan (R),fa xian K119A、K222A、K248A、K260A、K119R、K222R、K248R、K260Rde fan su hua tiao dai you suo jian shao ,chu bu jian ding K119、K222、K248he K260ju you fan su hua xiu shi 。fu nian bing du zhong ,NiV、hPIV、SiVyi ji NDVdeng de Mdan bai ke xing cheng VLP,shi fang dao xi bao wai 。you bao dao biao ming NiVhe ren fu nian bing du 5xing de Mdan bai de fan su hua xiu shi ,dui VLPde xing cheng zhi guan chong yao 。ben yan jiu zhong ,wo men fen bie biao da ye sheng xing Mdan bai huo fan su hua wei dian tu bian xing Mdan bai ,jian ce he bi jiao VLPde chan liang 。jie guo biao ming ,tu bian K119he K260wei Ahuo zhe R,jiang di le VLPde xing cheng he shi fang 。you yu Mdan bai fan yi ge cheng hou ,xian jin ru xi bao he ,zai chu he ,qian yi zhi xi bao mo ,wan cheng bing du de zu zhuang he chu ya shi fang 。NDV Mdan bai K119wei yu fu nian bing du bao shou de NESxu lie ,er K260wei yu fu nian bing du de NLSxu lie 。wei le tan tao Mdan bai fan su hua he Mdan bai he shu chu de guan ji ,wo men tong guo jian jie mian yi ying guang jian ce ,fa xian tu bian ti K119Rzhi liu zai xi bao mo ,er K260Rzhi liu zai xi bao he ,yin er ying xiang le VLPde xing cheng 。jin yi bu jian ce K119Rhe K260Rdan bai tu bian ti yu su zhu dan bai de xiang hu zuo yong ,fa xian gen ye sheng xing Mdan bai xiang bi jiao ,K119Rtu bian dao zhi gen su zhu de hu zuo dan bai zeng duo ,jie shi K119fan su hua ke neng zhe gai le dan bai hu zuo wei dian ,shi ji neng shun li cong xi bao mo shi fang 。zeng shang suo shu ,NDV Mdan bai cun zai fan su hua xiu shi ,ju K119he K260fan su hua xiu shi you zhu yu VLPde chu ya huo shi fang 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的姜维雨，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于新城疫病毒论文,蛋白论文,泛素化修饰论文,出芽论文,病毒样颗粒论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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