导读:本文包含了日本刺沙蚕论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:日本刺沙蚕,酪氨酸,胺类神经递质,表达分析
日本刺沙蚕论文文献综述
曹艳秋[1]（2018）在《酪氨酸相关胺类神经递质在日本刺沙蚕脑中的表达分析》一文中研究指出目的本实验是以日本刺沙蚕Neanthes japonica作为实验的对象,用兔抗TDC2多克隆抗体、兔抗TA多克隆抗体、兔抗OA多克隆抗体、兔抗α1肾上腺素受体多克隆抗体对TA合成的限速酶TDC2和TA、OA和α1肾上腺素受体进行标记。以期提供酪胺、章鱼胺和去甲肾上腺素、肾上腺素存在的证据,以证明在低等无脊椎动物体内酪胺系统、章鱼胺系统和肾上腺素能系统是独立并存的。方法1、运用Western blot实验方法,检测TDC2、TA、OA、α1肾上腺素受体在日本刺沙蚕脑内是否有表达。2、CP包埋切片技术联合SP免疫组织化学方法,运用免疫组化技术,检测TDC2、TA、OA、α1肾上腺素受体在日本刺沙蚕中枢神经系统内的表达分布情况。结果日本刺沙蚕Neanthes japonica脑组织内TDC2、TA、OA和α1肾上腺素受体均表现出较强的阳性免疫反应。1、TDC2在细胞中主要分布在细胞膜上,极少部分位于细胞液中,而细胞核中基本不含有TDC2。2、TA以分布于细胞膜上为主,少量分布于细胞液和细胞核内。3、OA全部分布于细胞膜上。4、α1肾上腺素受体在细胞内主要分布于细胞膜上,细胞核中无分布,发现有四个充满整个胞体的阳性免疫结果。5、TDC2、TA、OA和α1肾上腺素受体均未在全脑中体现出明显的静脉曲张样的神经纤维或神经纤维束。结论本研究结果表明在日本刺沙蚕Neanthes japonica脑内可能共存独立的酪胺、章鱼胺和儿茶酚胺类神经递质。(本文来源于《锦州医科大学》期刊2018-03-01）
王顺[2]（2017）在《芳香族氨基酸羟化酶及单胺类神经递质在日本刺沙蚕（Neanthes japonica）中枢神经系统的分化研究》一文中研究指出本研究以低等无脊椎环节动物门的典型模式动物——日本刺沙蚕Neanthes japonica为研究对象,采用本实验室CP(Colophony–Paraffin)包埋切片专利技术结合免疫组织化学技术(SP法)及cDNA末端快速克隆(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,阐述了芳香族氨基酸羟化酶(aromatic amino acid hydroxylase,AAAHs)家族中叁种羟化酶即色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)、苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH),以及多巴胺β羟化酶(dopamine-beta-hydroxylase,DβH)、苯乙醇胺-N-甲基转移酶(phenylethanolamine-N-methyltransferase,PNMT)在其中枢神经系统(主要是脑)内的表达和分布情况,对芳香族氨酸羟化酶与单胺类神经递质之间的关系进行了分析与讨论,并分析与探讨芳香族氨基酸羟化酶的基因进化节点问题,获得以下主要结论:1.应用羊抗TPH多克隆抗体和兔抗5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)抗血清,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑和腹神经索连续和相邻切片进行免疫组织化学染色,结果表明5-HT表现出较强的阳性免疫反应,而TPH的阳性免疫反应较弱。5-HT和TPH的同步阳性免疫反应体现出广泛和一致的分布模式,TPH呈免疫阳性反应神经元细胞的类型、分布和投射与5-HT阳性免疫反应神经元细胞是相一致的,TPH和5-HT共定位于同一细胞的相同位置,具有共定位的现象存在。因此,TPH和5-HT互为判定中枢神经系统5-HT能神经元标记物,同时也从蛋白质水平证明了TPH在日本刺沙蚕中枢神经系统内的存在。应用RACE克隆技术对日本刺沙蚕中枢神经系统内的神经型TPH全序列进行了克隆,通过构建基因进化树,进行系统进化分析,证明神经型TPH在基因水平的存在,为AAAHs中tph和pah基因分化的节点由节肢动物门向前推进到环节动物门提供了证据。2.应用鼠抗PAH多克隆抗体,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑连续切片进行免疫组织化学染色,结果表明鼠抗PAH多克隆抗体在全脑中均标记出大量伴随长长投射发出的蝌蚪状神经元细胞,而且在中脑和后脑的中央神经区也布满了静脉曲张样的神经纤维,对以往应用兔抗PAH多克隆抗体的标记结果进行了很好的补充。该结果中也推翻了以前根据兔抗PAH多克隆抗体标记结果所做出的关于PAH只能在细胞液中使苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)转变为酪氨酸(tyrosine,Tyr),而不需要分泌到胞外远端去发挥作用的假设。PAH在全脑的分布情况说明PAH既可以在神经元细胞内催化苯丙氨酸转变为酪氨酸,也可以分泌到远端(主要是中脑和后脑的中央神经区)去发挥作用。PAH的免疫组化标记结果说明在低等的环节动物日本刺沙蚕Neanthes japonica体内PAH和TPH已经各自分化为独立基因,有各自独立的表达产物,进一步证实了tph和pah基因分化的节点可能存在于环节动物门。3.应用兔抗TH多克隆抗体,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑连续切片进行免疫组织化学染色,结果表明TH在全脑中均有分布,其分布形式与TPH和5-HT相似,但却又不完全相同,与PAH在脑内的分布特点也不一样。根据TH是多巴胺能(Dopaminergic)神经元细胞良好标记物的观点,由免疫组织化学结果分析可知多巴胺能神经元细胞在全脑的额切片中均有分布,但强阳性免疫反应多巴胺能神经元细胞相对较少,而弱阳性反应多巴胺能神经元细胞偏多。多巴胺能神经元细胞主要分布于背侧,胞体大多无神经突,只有少量呈TH免疫阳性神经元发出短的阳性纤维投射到大脑的中央神经区,说明酪氨酸主要在多巴胺能神经元细胞内被TH所羟化,只有少量的酶被运送到近处和中远处被用于羟化反应。同时证明在环节动物日本刺沙蚕体内叁种AAAHs是各自独立存在的,为tph、pah、th基因进化节点问题的分析提供了依据。4.应用兔抗DβH和兔抗PNMT多克隆抗体,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑连续切片进行免疫组织化学染色,结果表明DβH在前脑分布细胞群较多,而中脑和后脑细胞群相对分布较少,细胞胞体大于前脑。但PNMT形成的细胞群却相对少,DβH在细胞内主要分布于细胞膜上,少量充满细胞的胞体,其在细胞内的分布与在高等生物细胞内的两种存在方式即溶解状态和膜结合状态相一致,而PNMT则主要位于细胞液中,细胞核中无分布。从DβH和PNMT这两种酶的免疫组化标记结果可知,低等无脊椎环节动物脑内也是存在去甲肾上腺素能和肾上腺素能神经元细胞的,进而在脑的不同部位发挥调节作用。5.综上可知,单胺类神经递质5-HT和儿茶酚胺(多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素)在环节动物日本刺沙蚕体内各自独立存在,其在体内的生成与叁种AAAHs的存在是密切相关的。(本文来源于《东北师范大学》期刊2017-05-01）
任桂敏,董哲,刘超,刘乙蒙,栾治东[3]（2016）在《苯丙氨酸羟化酶在日本刺沙蚕脑内的表达分析》一文中研究指出苯丙氨酸羟化酶(PAH)是芳香族氨基酸羟化酶家族(AAAHs)的一员,催化苯丙氨酸(Phe)转化为酪氨酸(Tyr)。运用Western blotting技术检测沙蚕PAH免疫原性。制作沙蚕头部石蜡切片,运用免疫组织化学技术,检测PAH蛋白表达定位情况。解剖剥离沙蚕脑组织,提取总RNA,运用RT-PCR技术克隆pah基因片段,构建质粒并转化入大肠杆菌中扩增,挑单一均匀菌落培养,双酶切鉴定后测序并比对同源性。Western blotting结果表明pah表达的蛋白存在于沙蚕脑内,免疫组化标记技术结果表明苯丙氨酸羟化酶主要分布在日本刺沙蚕前脑中腹侧、中脑背侧和两侧。RT-PCR结果表明沙蚕脑内存在苯丙氨酸羟化酶基因,且与多种动物pah具有同源性。在蛋白质和核酸水平鉴定了低等环节动物日本刺沙蚕脑组织内苯丙氨酸羟化酶的存在,为进一步研究无脊椎动物中枢神经系统内芳香族氨基酸羟化酶的基因分化奠定基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2016年04期）
任桂敏[4]（2016）在《苯丙氨酸羟化酶在日本刺沙蚕中枢神经系统内的表达分析》一文中研究指出目的使用叁种实验方法,在蛋白质和核酸水平,找出苯丙氨酸羟化酶在日本刺沙蚕中枢神经系统内存在的证据,为进一步寻找无脊椎动物体内芳香族氨基酸羟化酶基因分化的节点提供实验依据。方法1、运用Western blot实验方法,检测苯丙氨酸羟化酶在日本刺沙蚕中枢神经系统内是否有表达。2、制作石蜡切片,运用免疫组化技术,检测苯丙氨酸羟化酶在日本刺沙蚕中枢神经系统内的表达分布情况。3、运用RT-PCR技术,克隆PAH部分基因片段,通过构建重组质粒,筛选阳性克隆后测序,比对分析与其他物种PAH基因的同源性。结果1、Western blot结果标记出一条分子量大约为52 k Da的条带,表明在日本刺沙蚕中枢神经系统内存在PAH。2、免疫组织化学标记技术显示,PAH阳性神经元细胞主要分布在日本刺沙蚕前脑和中脑中腹处、背侧和两侧;腹神经索中也有阳性神经元胞体的分布。3、RT-PCR PAH基因克隆结果表明日本刺沙蚕中枢神经系统内有苯丙氨酸羟化酶基因存在。4、通过对克隆序列进行Blast比对分析,表明序列与多个物种PAH基因具有同源性。结论本实验证明了在低等无脊椎环节动物日本刺沙蚕中枢神经系统内存在PAH基因及其表达的蛋白,且与多种动物PAH具有同源性。(本文来源于《锦州医科大学》期刊2016-03-01）
张建一,洪新雨,崔佳乐,李春花,吴天歌[5]（2015）在《日本刺沙蚕纤溶酶活性与其抗急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的作用》一文中研究指出目的探讨日本刺沙蚕酸性丝氨酸蛋白酶ASP_(NJ)纤溶酶活性与抗淋巴细胞白血病Jurkat细胞的作用关系,为抗白血病研究与治疗提供一个新的思路。方法常规传代培养淋巴细胞白血病Jurkat细胞,MTT法检测不同时间-浓度活性ASP_(NJ)对细胞增殖抑制的影响;纤维蛋白平板法,检测不同时间-浓度的细胞培养上清液中ASP_(NJ)酶活性;不同浓度的ASP_(NJ)联合长春新碱干预细胞生长一定时间,MTT法检测细胞的增值抑制状况。结果具有纤溶酶活性的ASP_(NJ)对细胞的增殖抑制作用明显,并呈现时间剂量依赖性;灭活的ASP_(NJ)对细胞的增殖作用不明显;同一时间点时,细胞培养上清液中ASP_(NJ)酶活性与浓度成正比,而同一浓度时细胞培养上清液中ASP_(NJ)酶活性随加药时间延长呈降低趋势;联合用药显示ASP_(NJ)显着增加长春新碱的杀伤作用。结论:ASP_(NJ)早期对细胞增殖抑制作用与其纤溶酶活性直接相关,而随着时间延长,ASP_(NJ)对细胞的作用不与其酶活性直接相关,而是通过某种机制间接抑制细胞增殖。同时,ASP_(NJ)协同长春新碱对细胞产生显着杀伤作用。因此,具有纤溶酶活性的ASP_(NJ)与其抗白血病作用密切相关,值得深入研究。(本文来源于《第五届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会论文集》期刊2015-08-19）
王少华,洪新雨,薄其青,葛鑫,崔佳乐[6]（2012）在《日本刺沙蚕纤溶酶对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用》一文中研究指出目的:观察日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用,并探讨其作用机制。方法:60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、NJF组(0.25、0.50和1.00mg.kg-1)和尿激酶组(UK,15 000U.kg-1),每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。术后24h,对大鼠进行神经功能损害评分,TTC染色计算脑梗死范围,湿重干重法测量脑含水量,化学比色法检测大鼠海马组织中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与模型组比较,NJF各给药组大鼠神经功能损害评分明显降低(P<0.05);脑梗死范围显着降低(P<0.001),脑含水量下降(P<0.05或P<0.01),且脑缺血海马组织中MDA水平降低(P<0.001),同时SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),具有明显的剂量依赖性。NJF0.50mg.kg-1组大鼠脑梗死范围和脑含水量变化与UK 15 000U.kg-1组比较差异无统计学意义。结论:NJF对大鼠缺血再灌注损伤大脑有潜在的神经保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化及提高内源性抗氧化酶活性有关。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2012年05期）
王顺,暴学祥[7]（2011）在《日本刺沙蚕Neanthes japonica(环节动物,多毛纲)体内神经性TPH存在的免疫组化研究》一文中研究指出目的:色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)是5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)在动物体内合成的关键酶。在果蝇Drosophila melanogaster体内存在特异的神经性色氨酸羟化酶(DTRH,TPHn),在中枢神经系统表达和行使功能,并与外周色氨酸羟化酶(DTPH,TPHu)共同调解果蝇体内5-HT的合成。神经性色氨酸羟化酶(TPHn)与哺乳动物中色氨酸羟化酶2(TPH2)同源。本实验(本文来源于《泛环渤海地区九省市生物化学与分子生物学会——2011年学术交流会论文集》期刊2011-08-04）
王少华[8]（2011）在《日本刺沙蚕蛋白酶的纯化、鉴定及日本刺沙蚕纤溶酶的部分药效学研究》一文中研究指出血栓性疾病(thrombotic disease, TD)包括血栓形成(thrombosis)和血栓栓塞(thromboembolism)。血栓性疾病已经成为严重危害人类生命健康的“头号杀手”,不仅发病率高居各种疾病之首,而且致残率、致死率和复发率也很高。目前,临床上常用的抗栓治疗方法主要是溶栓治疗。过去十年中,国内外临床常用的溶栓剂有尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤溶酶原激活剂、蛇毒降纤酶类(东菱迪芙)及蚓激酶等。但是所有这些溶栓剂都有不可避免的副作用,包括需要加大剂量治疗、有限的纤维蛋白特异性、再阻塞和出血倾向等。所以,从各种天然生物资源中寻找和研发溶解纤维蛋白特异性高、出血副作用小及相对较便宜的溶栓剂一直是研究的热点。日本刺沙蚕是一种海洋无脊椎动物,广泛分布于我国的渤海、黄海沿岸及长江口等地区,此外还有日本太平洋沿岸。目前日本刺沙蚕主要被用作鱼虾的优质饵料,同时也是海洋垂钓的优质钓饵。本实验室前期已经从日本刺沙蚕体内发现了一种新的名为日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的丝氨酸蛋白酶,该实验过程中还发现有另外一种特殊纤溶活性及性质的蛋白酶—日本刺沙蚕蛋白酶(NJP),有可能开发成新的溶栓剂,更好的实现其经济和社会价值。本论文主要包括两个部分的研究,第一部分包括前叁章,是关于日本刺沙蚕蛋白酶(NJP)的分离纯化工艺的建立,分子特征及酶学性质的检测；第二部分包括第四章,是关于NJF的体内部分药效学实验。现将主要研究结果分述如下：1.通过酶的粗提、硫酸铵分级盐析、苯柱疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,最终得到单一成分的、纯度较高的酶制剂,命名为日本刺沙蚕蛋白酶(N.japonica protease, NJP),最终纯化了1556倍,回收率为13%；以S-2238为特异性底物时,生色底物法测得NJP的特异性酶活力为10113.9 U/mg。2.通过MALDI-TOF MS和SDS-PAGE电泳检测NJP是一个相对分子量为28.6～33.5kDa的单链蛋白质；2-DE检测其等电点为9.2。3.通过串联质谱MALDI-TOF/TOF MS测序并进行De Novo分析,获得3段共28个氨基酸序列,分别是：V-T-V-V-Q-Y-R; S-T-N-A-S-S-G-Y-L-N-L-R和V-Y-L-L-D-T-G-L-R.将此序列在NCBI的non-redundant protein sequences (nr)和Swiss-Prot数据库利用protein-protein BLAST (blastp)软件进行比对,发现NJP是一种新发现的蛋白酶；将此序列登陆UniProt knowledgebase数据库中,获得登录号P86834, EC 3.4.21.-。4. Azocasein水解法测定NJP的最适温度为40℃,且在30℃-60℃比较稳定；其最适pH为9.0,且在pH7.0-pH11.0时能保持最大活性的80%以上,表明NJP是-种碱性蛋白酶。5. Azocasein水解法测定的结果表明Hg2+几乎能完全抑制NJP的酶活性,Co2+和Mg2+也能部分抑制其酶活性,其它金属离子对酶活性的抑制和活化作用都不明显。6. Azocasein水解法测定的结果表明NJP的酶活性可以完全被典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF抑制,其他蛋白酶抑制剂的抑制作用均不明显,表明NJP属于典型的丝氨酸蛋白酶类。7.纤维蛋白平板法表明,NJP可以直接降解纤维蛋白,基本上无激酶作用,不是纤溶酶原激活剂；NJP具有很强的纤溶活性,以UK标准品为对照,NJP的纤溶活力为12000U/mg；8.采用SDS-PAGE电泳法分析NJP水解纤维蛋白原的活性,结果表明NJP水解纤维蛋白原的先后顺序是：Aα链>Bp链>γ链。9.生色底物法表明,NJP对凝血酶特异性底物S-2238特异性较高,其特异性水解活性为10.11±2.7 mmol/min/mg;以上结果表明NJP是一种新的碱性凝血酶样丝氨酸蛋白酶。10.采用纤维蛋白平板法,以UK为对照,本实验所用的NJF酶制剂的纤溶活力为30000U/mg,我们将NJF的纤溶活性定为10BU/mg。。11.本实验采用管腔内线栓法成功建立了大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。12.通过神经功能损害评分和TTC染色,结果表明静脉输注NJF可以显着降低神经功能损害评分并剂量依赖性的降低缺血再灌注引起的脑梗死。13.静脉输注NJF可以剂量依赖性的降低缺血再灌注引起的脑水肿。14.静脉输注NJF可以显着降低MDA水平,提高SOD的活性,对抗脂质过氧化,提高内源性的抗氧化功能。15.静脉输注5BU/kg的NJF和临床等效剂量的15000U/kg的UK在减少脑梗死和降低脑水肿,以及对抗脂质过氧化和增强抗氧化活性等方面有几乎相等的功效；NJF对缺血再灌注大鼠大脑引起的局灶性脑缺血有潜在的神经保护功能；NJF具有神经保护功能的机制可能是：抑制脂质过氧化和增强内源性的抗氧化酶类。综上所述,本论文从日本刺沙蚕体内分离纯化并鉴定出一种明显不同于NJF和其他纤溶酶的新蛋白酶(NJP)。NJP是一种具有很高纤溶活性的碱性凝血酶样丝氨酸蛋白酶,可以直接降解纤维蛋白而不同于纤溶酶原激活剂。以上结果表明NJP具有成为防治血栓的新的溶栓剂的潜能；同时,本论文首次证明NJF对大鼠大脑中动脉阻断再灌注引起的局灶性脑缺血有很强的神经保护作用,此结果为NJF的进一步药效学和临床实验研究奠定了坚实的基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-04-01）
郭秋平[9]（2011）在《日本刺沙蚕纤溶酶的纤维蛋白原降解机制、药效与部分毒理研究》一文中研究指出本论文报告了日本刺沙蚕纤溶酶的降纤及降纤机制、药效与部分毒理学研究,为进一步明确此酶在体内降纤、体外溶栓及药物制剂的安全性评价提供理论依据。首先通过一次性静脉给予日本刺沙蚕纤溶酶后不同时间测定家兔纤维蛋白原含量,观察该酶的体内降纤作用;通过SDS-PAGE电泳研究日本刺沙蚕纤溶酶对纤维蛋白原的水解作用机制;通过在体外测定日本刺沙蚕纤溶酶对不同时间血凝块的溶解百分率及D-二聚体含量,研究该酶体外溶解血栓作用特点;为评价药物制剂的安全性,在体外观察日本刺沙蚕纤溶酶的溶血性及该酶对注射部位的刺激性。实验结果如下:日本刺沙蚕纤溶酶与尿激酶均可使家兔纤维蛋白原含量降低,大、中、小3个剂量日本刺沙蚕纤溶酶在给药后30 min分别使纤维蛋白原降低34.7%、12.5%、11.3%左右,呈现剂量依赖正相关,并在给药后60、120 min纤维蛋白原逐渐回复,表现出显效快、作用维持时间适中的特点;而尿激酶在给药后30 min使纤维蛋白原降低7.5%左右,至给药后120 min降低至最低点,表现出显效慢、维持时间长的特点。证明该酶能显着降低家兔纤维蛋白原含量。日本刺沙蚕纤溶酶能有效地水解纤维蛋白原的α-链、β-链和γ-链,其中用药后可立即水解α-链,对α-链的水解作用出现最快;用药后10 min开始明显水解β-链,60 min内完全被水解;用药后60 min开始明显水解γ-链, 180 min几乎水解完全。证实其具有直接水解纤维蛋白原的活性。日本刺沙蚕纤溶酶体外溶解血凝块作用显着,作用优于尿激酶;每单位溶解的血凝块所产生的D-D含量(比值)与日本刺沙蚕纤溶酶对血凝块的溶解作用是相对应的,即溶解血凝块作用越强,比值越高。日本刺沙蚕纤溶酶制剂无溶血和无使红细胞凝聚的作用;低剂量和中等剂量的日本刺沙蚕纤溶酶对注射部位刺激性不明显,但是大剂量有刺激作用。综上所述:日本刺沙蚕纤溶酶具有体内降纤作用;具有体外溶栓作用;体内体外都无溶血性作用;低剂量和中等剂量无注射部位刺激性。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-04-01）
张连芝,王少华,邓志会,薄其青,葛鑫[10]（2011）在《日本刺沙蚕纤溶酶的酶学性质及其分类》一文中研究指出目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的最适反应温度和最适反应pH值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类。方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的最适温度及最适pH值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+、Ca2+、Zn2+、Co2+、Fe2+、Fe3+、Al 3+和Hg2+)确定金属离子对NJF酶活性的影响;采用9种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、EGTA、β-巯基乙醇、苯甲脒、碘乙酸、抑肽酶、胃酶抑素A和大豆胰蛋白酶抑制剂)确定NJF的蛋白酶分类。结果:NJF具有较宽的热稳定性及pH稳定性范围,在40～80℃及pH7～11范围内有较好的稳定性,NJF酶最适温度为60℃,最适pH值为9;Hg2+能够强烈地抑制NJF的酶活性,Cu2+具有较弱的抑制作用,而其他金属阳离子对酶活性无明显抑制作用;NJF的酶活性能被典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF完全抑制。结论:NJF是一种典型的丝氨酸蛋白酶。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2011年02期）
日本刺沙蚕论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究以低等无脊椎环节动物门的典型模式动物——日本刺沙蚕Neanthes japonica为研究对象,采用本实验室CP(Colophony–Paraffin)包埋切片专利技术结合免疫组织化学技术(SP法)及cDNA末端快速克隆(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,阐述了芳香族氨基酸羟化酶(aromatic amino acid hydroxylase,AAAHs)家族中叁种羟化酶即色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)、苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH),以及多巴胺β羟化酶(dopamine-beta-hydroxylase,DβH)、苯乙醇胺-N-甲基转移酶(phenylethanolamine-N-methyltransferase,PNMT)在其中枢神经系统(主要是脑)内的表达和分布情况,对芳香族氨酸羟化酶与单胺类神经递质之间的关系进行了分析与讨论,并分析与探讨芳香族氨基酸羟化酶的基因进化节点问题,获得以下主要结论:1.应用羊抗TPH多克隆抗体和兔抗5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)抗血清,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑和腹神经索连续和相邻切片进行免疫组织化学染色,结果表明5-HT表现出较强的阳性免疫反应,而TPH的阳性免疫反应较弱。5-HT和TPH的同步阳性免疫反应体现出广泛和一致的分布模式,TPH呈免疫阳性反应神经元细胞的类型、分布和投射与5-HT阳性免疫反应神经元细胞是相一致的,TPH和5-HT共定位于同一细胞的相同位置,具有共定位的现象存在。因此,TPH和5-HT互为判定中枢神经系统5-HT能神经元标记物,同时也从蛋白质水平证明了TPH在日本刺沙蚕中枢神经系统内的存在。应用RACE克隆技术对日本刺沙蚕中枢神经系统内的神经型TPH全序列进行了克隆,通过构建基因进化树,进行系统进化分析,证明神经型TPH在基因水平的存在,为AAAHs中tph和pah基因分化的节点由节肢动物门向前推进到环节动物门提供了证据。2.应用鼠抗PAH多克隆抗体,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑连续切片进行免疫组织化学染色,结果表明鼠抗PAH多克隆抗体在全脑中均标记出大量伴随长长投射发出的蝌蚪状神经元细胞,而且在中脑和后脑的中央神经区也布满了静脉曲张样的神经纤维,对以往应用兔抗PAH多克隆抗体的标记结果进行了很好的补充。该结果中也推翻了以前根据兔抗PAH多克隆抗体标记结果所做出的关于PAH只能在细胞液中使苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)转变为酪氨酸(tyrosine,Tyr),而不需要分泌到胞外远端去发挥作用的假设。PAH在全脑的分布情况说明PAH既可以在神经元细胞内催化苯丙氨酸转变为酪氨酸,也可以分泌到远端(主要是中脑和后脑的中央神经区)去发挥作用。PAH的免疫组化标记结果说明在低等的环节动物日本刺沙蚕Neanthes japonica体内PAH和TPH已经各自分化为独立基因,有各自独立的表达产物,进一步证实了tph和pah基因分化的节点可能存在于环节动物门。3.应用兔抗TH多克隆抗体,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑连续切片进行免疫组织化学染色,结果表明TH在全脑中均有分布,其分布形式与TPH和5-HT相似,但却又不完全相同,与PAH在脑内的分布特点也不一样。根据TH是多巴胺能(Dopaminergic)神经元细胞良好标记物的观点,由免疫组织化学结果分析可知多巴胺能神经元细胞在全脑的额切片中均有分布,但强阳性免疫反应多巴胺能神经元细胞相对较少,而弱阳性反应多巴胺能神经元细胞偏多。多巴胺能神经元细胞主要分布于背侧,胞体大多无神经突,只有少量呈TH免疫阳性神经元发出短的阳性纤维投射到大脑的中央神经区,说明酪氨酸主要在多巴胺能神经元细胞内被TH所羟化,只有少量的酶被运送到近处和中远处被用于羟化反应。同时证明在环节动物日本刺沙蚕体内叁种AAAHs是各自独立存在的,为tph、pah、th基因进化节点问题的分析提供了依据。4.应用兔抗DβH和兔抗PNMT多克隆抗体,通过对日本刺沙蚕Neanthes japonica大脑连续切片进行免疫组织化学染色,结果表明DβH在前脑分布细胞群较多,而中脑和后脑细胞群相对分布较少,细胞胞体大于前脑。但PNMT形成的细胞群却相对少,DβH在细胞内主要分布于细胞膜上,少量充满细胞的胞体,其在细胞内的分布与在高等生物细胞内的两种存在方式即溶解状态和膜结合状态相一致,而PNMT则主要位于细胞液中,细胞核中无分布。从DβH和PNMT这两种酶的免疫组化标记结果可知,低等无脊椎环节动物脑内也是存在去甲肾上腺素能和肾上腺素能神经元细胞的,进而在脑的不同部位发挥调节作用。5.综上可知,单胺类神经递质5-HT和儿茶酚胺(多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素)在环节动物日本刺沙蚕体内各自独立存在,其在体内的生成与叁种AAAHs的存在是密切相关的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
日本刺沙蚕论文参考文献
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