本文主要研究内容
作者赫彬彬（2019）在《大菱鲆源蜂房哈夫尼亚菌群体感应halI/halR基因表达及其抑制剂的研究》一文中研究指出：研究表明,致腐微生物的腐败特性表达与群体感应（Quorum sensing,QS）系统密切相关,然而目前研究大多集中在腐败菌QS系统的表型,而对QS调控基因的研究相对较少。本文主要以腐败大菱鲆中分离得到的一株蜂房哈夫尼亚菌为研究对象,利用分子生物学技术筛选获得该菌的QS调控基因halI/halR,利用分子对接及荧光定量PCR技术探究不同环境因素对其表达情况的影响,并探究该菌对外源信号分子的感受能力;其次,本文使用紫色杆菌（Chromobacterium violaceum）CV026作为生物传感器菌株,探究香兰素对该菌QS系统的腐败表型,并利用荧光定量PCR技术和分子对接技术分析香兰素对蜂房哈夫尼亚菌（Hafnia alvei）QS系统的作用机制;最后,将QS抑制剂香兰素应用于冷藏大菱鲆鱼片中,验证其保鲜效果。本文旨在深层次探究腐败微生物的QS机制,及QS抑制剂香兰素的作用机制,为建立靶向控制腐败微生物QS为基础的水产品保鲜技术提供理论依据。主要结论如下:1.通过对蜂房哈夫尼亚菌进行16S rRNA鉴定,并利用BLAST方法筛选并验证蜂房哈夫尼亚菌QS的调控基因halI/halR。2.利用荧光定量PCR技术检测不同环境因素对蜂房哈夫尼亚菌QS调控基因halI/halR表达情况的影响,以16S rRNA为内参基因,通过??Ct计算得出不同碳源培养时,halI基因的表达量从大到小依次为:木糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖;halR基因表达量从大到小依次为:木糖、果糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖,可见,木糖的添加可显著上调halI和halR基因的表达;其次,当两个基因处于碱性条件时（pH>7）,会抑制其表达;而低温条件（15℃）下两个基因表达量明显上升,当超过其最适温度（28℃）后表达量有所下降。此外,当环境中存在外源信号分子时,荧光定量结果表明,该菌可利用外源环境中存在的信号分子,且外源信号分子的添加显著上调halR基因的表达,其中C6-HSL最显著,且通过分子对接结果推测,AHLs与受体蛋白HalR间结合能力越强,则越会刺激halR基因的表达。3.以紫色杆菌CV026为生物传感器菌株,检测出香兰素具有抑制活性,并进一步探究不同浓度香兰素对蜂房哈夫尼亚菌QS腐败表型及相关基因的抑制机理。结果表明:亚抑菌浓度香兰素可显著降低CV026紫色菌素产量,当其浓度为1 mg/mL时,紫色菌素的产量降低了58.95%,且该菌C6-HSL和C8-HSL的产量仅有0.535和0.874μg/mL;通过光学显微镜和扫描电镜观察可知,香兰素处理后,生物膜膜状物减少,膜结构变得稀疏,且随着其浓度增加,生物膜表面出现裂痕。最后,利用荧光定量和分子对接技术从基因角度探究香兰素对蜂房哈夫尼亚菌QS的作用机制,荧光定量结果表明:香兰素可同时显著抑制halI和halR基因的表达,且呈浓度依赖;最后通过分子对接分析香兰素和天然配体C6-HSL与信号分子受体蛋白HalR的相互作用可得知,香兰素、C6-HSL与受体蛋白之间均形成两个氢键作用力和疏水相互作用,同时存在一个共同的氢键作用力,因此推测香兰素与天然配体C6-HSL存在竞争结合机制。4.将QS抑制剂香兰素应用于冷藏大菱鲆鱼片保鲜中,通过对菌落总数、TVB-N、pH和风味物质的测定验证其保鲜效果,结果表明香兰素处理组与空白组之间的菌落总数差异不显著,但却显著降低了TVB-N值,且pH的波动范围较小,这表明香兰素作为群体感应抑制剂可延长大菱鲆鱼片货架期2-3 d。
Abstract
yan jiu biao ming ,zhi fu wei sheng wu de fu bai te xing biao da yu qun ti gan ying （Quorum sensing,QS）ji tong mi qie xiang guan ,ran er mu qian yan jiu da duo ji zhong zai fu bai jun QSji tong de biao xing ,er dui QSdiao kong ji yin de yan jiu xiang dui jiao shao 。ben wen zhu yao yi fu bai da ling ping zhong fen li de dao de yi zhu feng fang ha fu ni ya jun wei yan jiu dui xiang ,li yong fen zi sheng wu xue ji shu shai shua huo de gai jun de QSdiao kong ji yin halI/halR,li yong fen zi dui jie ji ying guang ding liang PCRji shu tan jiu bu tong huan jing yin su dui ji biao da qing kuang de ying xiang ,bing tan jiu gai jun dui wai yuan xin hao fen zi de gan shou neng li ;ji ci ,ben wen shi yong zi se gan jun （Chromobacterium violaceum）CV026zuo wei sheng wu chuan gan qi jun zhu ,tan jiu xiang lan su dui gai jun QSji tong de fu bai biao xing ,bing li yong ying guang ding liang PCRji shu he fen zi dui jie ji shu fen xi xiang lan su dui feng fang ha fu ni ya jun （Hafnia alvei）QSji tong de zuo yong ji zhi ;zui hou ,jiang QSyi zhi ji xiang lan su ying yong yu leng cang da ling ping yu pian zhong ,yan zheng ji bao xian xiao guo 。ben wen zhi zai shen ceng ci tan jiu fu bai wei sheng wu de QSji zhi ,ji QSyi zhi ji xiang lan su de zuo yong ji zhi ,wei jian li ba xiang kong zhi fu bai wei sheng wu QSwei ji chu de shui chan pin bao xian ji shu di gong li lun yi ju 。zhu yao jie lun ru xia :1.tong guo dui feng fang ha fu ni ya jun jin hang 16S rRNAjian ding ,bing li yong BLASTfang fa shai shua bing yan zheng feng fang ha fu ni ya jun QSde diao kong ji yin halI/halR。2.li yong ying guang ding liang PCRji shu jian ce bu tong huan jing yin su dui feng fang ha fu ni ya jun QSdiao kong ji yin halI/halRbiao da qing kuang de ying xiang ,yi 16S rRNAwei nei can ji yin ,tong guo ??Ctji suan de chu bu tong tan yuan pei yang shi ,halIji yin de biao da liang cong da dao xiao yi ci wei :mu tang 、guo tang 、pu tao tang 、mai ya tang 、ru tang 、zhe tang ;halRji yin biao da liang cong da dao xiao yi ci wei :mu tang 、guo tang 、zhe tang 、pu tao tang 、ru tang 、mai ya tang ,ke jian ,mu tang de tian jia ke xian zhe shang diao halIhe halRji yin de biao da ;ji ci ,dang liang ge ji yin chu yu jian xing tiao jian shi （pH>7）,hui yi zhi ji biao da ;er di wen tiao jian （15℃）xia liang ge ji yin biao da liang ming xian shang sheng ,dang chao guo ji zui kuo wen du （28℃）hou biao da liang you suo xia jiang 。ci wai ,dang huan jing zhong cun zai wai yuan xin hao fen zi shi ,ying guang ding liang jie guo biao ming ,gai jun ke li yong wai yuan huan jing zhong cun zai de xin hao fen zi ,ju wai yuan xin hao fen zi de tian jia xian zhe shang diao halRji yin de biao da ,ji zhong C6-HSLzui xian zhe ,ju tong guo fen zi dui jie jie guo tui ce ,AHLsyu shou ti dan bai HalRjian jie ge neng li yue jiang ,ze yue hui ci ji halRji yin de biao da 。3.yi zi se gan jun CV026wei sheng wu chuan gan qi jun zhu ,jian ce chu xiang lan su ju you yi zhi huo xing ,bing jin yi bu tan jiu bu tong nong du xiang lan su dui feng fang ha fu ni ya jun QSfu bai biao xing ji xiang guan ji yin de yi zhi ji li 。jie guo biao ming :ya yi jun nong du xiang lan su ke xian zhe jiang di CV026zi se jun su chan liang ,dang ji nong du wei 1 mg/mLshi ,zi se jun su de chan liang jiang di le 58.95%,ju gai jun C6-HSLhe C8-HSLde chan liang jin you 0.535he 0.874μg/mL;tong guo guang xue xian wei jing he sao miao dian jing guan cha ke zhi ,xiang lan su chu li hou ,sheng wu mo mo zhuang wu jian shao ,mo jie gou bian de xi shu ,ju sui zhao ji nong du zeng jia ,sheng wu mo biao mian chu xian lie hen 。zui hou ,li yong ying guang ding liang he fen zi dui jie ji shu cong ji yin jiao du tan jiu xiang lan su dui feng fang ha fu ni ya jun QSde zuo yong ji zhi ,ying guang ding liang jie guo biao ming :xiang lan su ke tong shi xian zhe yi zhi halIhe halRji yin de biao da ,ju cheng nong du yi lai ;zui hou tong guo fen zi dui jie fen xi xiang lan su he tian ran pei ti C6-HSLyu xin hao fen zi shou ti dan bai HalRde xiang hu zuo yong ke de zhi ,xiang lan su 、C6-HSLyu shou ti dan bai zhi jian jun xing cheng liang ge qing jian zuo yong li he shu shui xiang hu zuo yong ,tong shi cun zai yi ge gong tong de qing jian zuo yong li ,yin ci tui ce xiang lan su yu tian ran pei ti C6-HSLcun zai jing zheng jie ge ji zhi 。4.jiang QSyi zhi ji xiang lan su ying yong yu leng cang da ling ping yu pian bao xian zhong ,tong guo dui jun la zong shu 、TVB-N、pHhe feng wei wu zhi de ce ding yan zheng ji bao xian xiao guo ,jie guo biao ming xiang lan su chu li zu yu kong bai zu zhi jian de jun la zong shu cha yi bu xian zhe ,dan que xian zhe jiang di le TVB-Nzhi ,ju pHde bo dong fan wei jiao xiao ,zhe biao ming xiang lan su zuo wei qun ti gan ying yi zhi ji ke yan chang da ling ping yu pian huo jia ji 2-3 d。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自渤海大学的赫彬彬，发表于刊物渤海大学2019-10-16论文，是一篇关于香兰素论文,蜂房哈夫尼亚菌论文,群体感应论文,腐败变质论文,大菱鲆论文,渤海大学2019-10-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自渤海大学2019-10-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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