本文主要研究内容
作者申雪静,张二芹,许倩茹,刘林科,万博,刘运超,孙亚宁,赵东,牛香香,邓瑞广,张改平（2019）在《狂犬病病毒G蛋白在水稻中的表达及遗传稳定性鉴定》一文中研究指出：狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录号:ABI53869.1)序列插入到中间载体pMP3上,成功构建中间载体pMP3-G,然后将中间载体pMP3-G和植物载体pCAMBIA1300通过双酶切、连接,成功地构建了植物表达载体pCAMBIA1300-G。挑选空白未转基因水稻(Oryza sativa)种子TP309消毒,在愈伤诱导培养基上31℃光照3 d,使其长出愈伤组织,用已经转入狂犬病G基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105去侵染愈伤组织,并与愈伤组织共培养3 d,将狂犬病G基因导入水稻愈伤组织中。愈伤组织再经过潮霉素抗性筛选、分化、出芽、生根,获得313株植株,取313株植株的叶片通过十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)法提取叶片基因组DNA,对其进行PCR扩增,经核酸胶进行初步鉴定,有79株为阳性,经过炼苗、种植共获得50株阳性表达植株。分别随机挑选50株阳性植株的种子,切半,标记,将不含胚乳的一半研磨,用提取液提取蛋白后通过抗原检测试纸条和Western blot检测,结果表明,G蛋白在转基因水稻种子中成功表达,且具有良好的反应原性。从50株阳性表达植株中挑选出高表达、反应原性最好的4个株系,将这4个株系T1代中与检测阳性结果相对应的含有胚乳的另一半种子进行组织培养种植,在植株移栽大田前后,再次用CTAB法提取T1代植株叶片基因组DNA,并以水稻的内源基因水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)为内参基因,通过相对荧光定量PCR(relative fluorescence quantitative PCR)方法筛选阳性植株中的纯合植株,通过绝对荧光定量PCR(absolute real-time PCR)计算纯合植株的拷贝数,结果显示,132株植株中35株为纯合植株。纯合植株的拷贝数分别为1、2、3、5、7、11、16。本研究为今后制备新型狂犬病亚单位疫苗奠定基础。
Abstract
kuang quan bing bing du (Rabies virus, RV) Gdan bai shi wei yi neng ji fa ji ti chan sheng xi bao mian yi ,bing you dao chan sheng zhong he kang ti de jie gou dan bai ,ye shi kuang quan bing bing du zhong wei yi tang ji hua de jie gou dan bai ,ci wai hai jie dao xi bao rong ge 、shou ti jie ge yi ji can yu bing du de zhi bing deng 。ben yan jiu jiang you hua de kuang quan bing Gji yin (GenBankdeng lu hao :ABI53869.1)xu lie cha ru dao zhong jian zai ti pMP3shang ,cheng gong gou jian zhong jian zai ti pMP3-G,ran hou jiang zhong jian zai ti pMP3-Ghe zhi wu zai ti pCAMBIA1300tong guo shuang mei qie 、lian jie ,cheng gong de gou jian le zhi wu biao da zai ti pCAMBIA1300-G。tiao shua kong bai wei zhuai ji yin shui dao (Oryza sativa)chong zi TP309xiao du ,zai yu shang you dao pei yang ji shang 31℃guang zhao 3 d,shi ji chang chu yu shang zu zhi ,yong yi jing zhuai ru kuang quan bing Gji yin de gen ai nong gan jun (Agrobacterium tumefaciens)EHA105qu qin ran yu shang zu zhi ,bing yu yu shang zu zhi gong pei yang 3 d,jiang kuang quan bing Gji yin dao ru shui dao yu shang zu zhi zhong 。yu shang zu zhi zai jing guo chao mei su kang xing shai shua 、fen hua 、chu ya 、sheng gen ,huo de 313zhu zhi zhu ,qu 313zhu zhi zhu de xie pian tong guo shi liu wan ji san jia ji xiu hua an (hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)fa di qu xie pian ji yin zu DNA,dui ji jin hang PCRkuo zeng ,jing he suan jiao jin hang chu bu jian ding ,you 79zhu wei yang xing ,jing guo lian miao 、chong zhi gong huo de 50zhu yang xing biao da zhi zhu 。fen bie sui ji tiao shua 50zhu yang xing zhi zhu de chong zi ,qie ban ,biao ji ,jiang bu han pei ru de yi ban yan mo ,yong di qu ye di qu dan bai hou tong guo kang yuan jian ce shi zhi tiao he Western blotjian ce ,jie guo biao ming ,Gdan bai zai zhuai ji yin shui dao chong zi zhong cheng gong biao da ,ju ju you liang hao de fan ying yuan xing 。cong 50zhu yang xing biao da zhi zhu zhong tiao shua chu gao biao da 、fan ying yuan xing zui hao de 4ge zhu ji ,jiang zhe 4ge zhu ji T1dai zhong yu jian ce yang xing jie guo xiang dui ying de han you pei ru de ling yi ban chong zi jin hang zu zhi pei yang chong zhi ,zai zhi zhu yi zai da tian qian hou ,zai ci yong CTABfa di qu T1dai zhi zhu xie pian ji yin zu DNA,bing yi shui dao de nei yuan ji yin shui dao dian fen fen zhi mei ji yin (rice starch branching enzyme,RBE4)wei nei can ji yin ,tong guo xiang dui ying guang ding liang PCR(relative fluorescence quantitative PCR)fang fa shai shua yang xing zhi zhu zhong de chun ge zhi zhu ,tong guo jue dui ying guang ding liang PCR(absolute real-time PCR)ji suan chun ge zhi zhu de kao bei shu ,jie guo xian shi ,132zhu zhi zhu zhong 35zhu wei chun ge zhi zhu 。chun ge zhi zhu de kao bei shu fen bie wei 1、2、3、5、7、11、16。ben yan jiu wei jin hou zhi bei xin xing kuang quan bing ya chan wei yi miao dian ding ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自农业生物技术学报的申雪静,张二芹,许倩茹,刘林科,万博,刘运超,孙亚宁,赵东,牛香香,邓瑞广,张改平，发表于刊物农业生物技术学报2019年02期论文，是一篇关于狂犬病病毒论文,基因论文,转基因水稻论文,荧光定量论文,纯合子论文,拷贝数论文,农业生物技术学报2019年02期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自农业生物技术学报2019年02期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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