导读:本文包含了重组肝素结合域多肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:侵袭,转移,整合素,基质金属酶
重组肝素结合域多肽论文文献综述
林佳[1]（2016）在《重组FN肝素结合域多肽对人胰腺癌细胞株bxpc-3侵袭转移能力的影响》一文中研究指出目的:研究重组人纤维连接蛋白N端和C端肝素结合域多肽(rh FNHN29和rh FNHC36)对人胰腺癌细胞bxpc-3体内外侵袭转移能力的影响,并探讨其可能的机制。研究方法和内容:1、通过粘附实验检测rh FNHN29和rh FNHC36对人胰腺癌细胞株bxpc-3粘附能力的影响;2、通过Transwell小室法检测rh FNHN29和rh FNHC36对人胰腺癌细胞株bxpc-3迁移和侵袭能力的影响;3、通过Western Blot测定rh FNHN29和rh FNHC36对人胰腺癌细胞株bxpc-3相关整合素αV、β1等蛋白表达量的影响;4、通过ELISA法测定rh FNHN29和rh FNHC36对人胰腺癌细胞株bxpc-3基质金属酶9活性的影响;5、利用尾静脉接种荧光素酶标记的bxpc-3细胞建立胰腺癌血行肺转移模型,研究rh FNHN29和rh FNHC36对bxpc-3细胞在裸鼠体内血行肺转移的影响。结果:1、经不同浓度rh FNHN29(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞对FN的粘附率分别为89.44±5.38%、79.17±3.56%、75.96±3.99%,经不同浓度rh FNHC36(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞对FN的粘附率分别为75.99±4.34%、69.69±3.14%、60.91±0.31%,均明显低于对照组(将对照组的OD值换算成粘附率为100%),差别具有统计学意义(P<0.05);经不同浓度rh FNHN29(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞对基质胶的粘附率分别为88.73±7.26%、77.25±9.37%、52.92±3.22%,经不同浓度rh FNHC36(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞对基质胶的粘附率分别为65.82±3.75%、58.44±2.33%、44.73±3.39%,rh FNHN29中、高浓度组以及rh FNHC36各浓度组均明显低于对照组(将对照组的OD值换算成粘附率为100%),差别具有统计学意义(P<0.05)。2、经不同浓度rh FNHN29(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞迁移数[单位:个]分别为21±2、13±2、9±2,经不同浓度rh FNHC36(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞迁移数[单位:个]分别为19±4、11±2、8±2,均明显低于对照组(37±8),差别具有统计学意义(P<0.01);经不同浓度rh FNHN29(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞侵袭数[单位:个]分别为23±3、13±3、9±1,经不同浓度rh FNHC36(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞侵袭数[单位:个]分别为23±9、14±2、7±3,仅rh FNHN2及rh FNHC36中、高浓度组明显低于对照组(30±7),差别具有统计学意义(P<0.05)。3、经不同浓度rh FNHN29(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞的整合素αV的表达分别为0.37?0.02、0.34?0.01、0.27?0.01,经不同浓度rh FNHC36(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞的整合素αV的表达分别为0.34?0.02、0.27?0.01、0.17?0.01,均明显低于对照组(0.47?0.03),差别具有统计学意义(P<0.01);经不同浓度rh FNHN29(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞的整合素β1的表达分别为0.38?0.01、0.33?0.03、0.23?0.02,经不同浓度rh FNHC36(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)处理的bxpc-3细胞的整合素β1的表达分别为0.43?0.02、0.26?0.01、0.19?0.01,均明显低于对照组(0.76?0.04),差别具有统计学意义(P<0.01)。4、rh FNHN29组和rh FNHC36组裸鼠的肺肿瘤光子总数(单位:p/s)分别为5.97E7?3.52E7、6.99E7?4.70E7,均明显低于PBS对照组(4.96E8?2.52E8),差别具有统计学意义(P<0.01)。结论:rh FNHN29和rh FNHC36均能抑制胰腺癌细胞bxpc-3的体外的粘附、迁移、侵袭能力,并且可在裸鼠体内抑制bxpc-3细胞向肺转移;rh FNHN29和rh FNHC36可能通过抑制整合素αVβ1、基质金属酶9的表达来发挥作用。(本文来源于《福建医科大学》期刊2016-05-01）
耿海丽[2]（2015）在《重组FN C端肝素结合域多肽对CLP诱导的脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响》一文中研究指出目的:利用小鼠盲肠结扎穿刺(CLP)诱导的脓毒血症动物模型,研究重组FN C端肝素结合域多肽(rh FNHC-36)对脓毒血症小鼠的保护作用,从单核巨噬细胞功能的角度研究其在脓毒血症中起保护作用的机制。方法:1.建立盲肠结扎穿刺脓毒血症模型小鼠腹白线处切开,在盲肠中点结扎,穿刺针在结扎处与盲肠远端中点穿刺,穿孔处挤出一滴粪便后将盲肠放回腹腔,分两层缝合切口。术后通过鉴定小鼠腹腔及血液中细菌的种类验证模型是否构建成功。2.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠的保护作用实验小鼠分为正常组(Normal)、伪手术组(Sham)、盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)、rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36),治疗组于盲肠结扎穿刺术前半小时及术后1小时、2小时分别尾静脉注射40 mg/kg的rh FNHC-36,盲肠结扎穿刺组小鼠注射等体积的PBS作为对照。观察14天内rh FNHC-36对CLP诱导的脓毒血症小鼠生存率的影响;采用菌落培养并计数评估小鼠腹腔及血液巨噬细胞对细菌的杀灭、清除作用;计算CLP术后小鼠胸腺和脾脏指数;组织病理学检查肝脏、脾脏、肺脏的病理形态学改变,评估rh FNHC-36对脓毒血症小鼠的保护作用。3.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,贴壁培养4小时后进行巨噬细胞鉴定,制备单细胞悬液,加入细菌脂多糖LPS(1μg/m L)刺激18个小时以诱导巨噬细胞的分化;ELISA法检测小鼠血浆中IL-6的含量;Griess试剂盒检测血清及巨噬细胞培养上清NO的水平;Transwell小室检测巨噬细胞趋化功能的变化;流式细胞术检测巨噬细胞表面抑制性配体PD-L1的表达。结果:1.成功建立盲肠结扎穿刺模型造模后小鼠表现为体重明显减轻,竖毛、寒战、腹泻,心率加快,喜独居等;对模型小鼠进行解剖,发现其盲肠末端缺血、变黑坏死,伴有弥漫性脓肿及大面积粘连。rh FNHC-36治疗组小鼠生理情况明显优于盲肠结扎穿刺组,经菌群鉴定,腹腔及血液中均以E.coli-inactive及A.lwoffii为主,从而证实血中细菌来源于腹腔,脓毒血症模型建立成功。2.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠具有保护作用14天内正常组(Normal)以及伪手术组(Sham)均无小鼠死亡,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的死亡率达70%,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的死亡率为50%,差别有显着意义(P<0.05);正常组(Normal)以及伪手术组(Sham)小鼠腹腔及血液中均未检测到细菌菌落生长,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠血液及腹腔中菌落计数分别为3.4×10^4±3.9×10^3个/ml、3.9×10^4±1.0×10^4个/ml,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠血液及腹腔中菌落计数分别为1.4×10^3±2.1×10^2个/ml、4.0×10^3±3.3×10^3个/ml,差别有显着意义(P<0.01);伪手术组(Sham)与正常组(Normal)小鼠的脾脏及胸腺指数无明显差异,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠术后6h及24h脾脏指数分别为的3.0±0.4、2.9±0.5,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠术后6h及24h脾脏指数分别为的3.6±0.5、4.2±0.6,差别有显着意义(P<0.05);盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠术后6h及24h胸腺指数分别为的1.6±0.3、0.8±0.2,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠术后6h及24h胸腺指数分别为的2.7±0.5、1.8±0.2,差别有显着意义(P<0.05);病理组织学观察发现盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠肝、脾、肺可出现广泛的炎症细胞浸润、变性及坏死,而rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠肝、脾、肺仅见局灶性的炎症细胞浸润。3.rh FNHC-36增强脓毒血症小鼠巨噬细胞功能正常组(Normal)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.2±1.6umol/L,伪手术组(Sham)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.6±1.1umol/L。盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为13.4±3.3umol/L,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.4±3.2umol/L,差别有显着意义(P<0.01);正常组(Normal)与伪手术组(Sham)小鼠血浆IL-6浓度分别为(6.3±6.3)pg/ml、(181±42)pg/ml,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠血浆IL-6的浓度为(64000±29000)pg/ml,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠血浆IL-6的浓度为(19000±19000)pg/ml,差别有显着意义(P<0.05);盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的巨噬细胞趋化指数为3.8±0.9,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬细胞趋化指数为7.8±1.9,差别有显着意义(P<0.05);正常小鼠(Normal)腹腔巨噬细胞LPS刺激后PD-L1阳性率为69.0±10.9%,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的巨噬细胞表面PD-L1阳性率为91.5%±3.2%,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬细胞表面PD-L1阳性率为80.4%±3.9%,差别有显着意义(P<0.05)。结论:rh FNHC-36对CLP诱导的脓毒血症小鼠具有保护作用,可能是通过下调内毒素引起的IL-6及NO水平的升高,促进巨噬细胞趋化功能,下调巨噬细胞表面PD-L1的表达起到保护作用。(本文来源于《福建医科大学》期刊2015-06-01）
林玲[3]（2015）在《重组FN C端肝素结合域多肽对人胃癌细胞株SGC-7901转移能力的影响》一文中研究指出目的:研究重组人纤维连接蛋白C端肝素结合域多肽(rh FNHC36)对人胃癌细胞SGC-7901体内外迁移转移能力的影响,初步探讨其可能涉及的机制。方法:1、通过结晶紫法检测rh FNHC36对人胃癌细胞株SGC-7901粘附能力的影响;2、通过Transwell小室检测rh FNHC36对人胃癌细胞SGC-7901迁移侵袭能力的影响;3、通过Westernblot测定rh FNHC36对人胃癌细胞株SGC-7901相关整合素αV、β1、β3及上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达量的影响;4、通过明胶酶谱法测定rh FNHC36对人胃癌细胞株SGC-7901基质金属酶9活性的影响;5、通过荧光素酶标记的人胃癌细胞株SGC-7901血行转移模型[1]观察rh FNHC36对细胞裸鼠体内转移能力的影响。结果:1、rh FNHC36不同浓度组(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的SGC-7901细胞的基质胶粘附率分别为81.04?1.50%、74.77?1.20%、68.62?2.37%,明显低于对照组(假定粘附率为100%),差别具有统计学意义(P<0.01);rh FNHC36不同浓度组(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的SGC-7901细胞对FN粘附率分别为80.63?5.22%、79.00?2.26%、73.38?2.02%,与对照组相比(假定粘附率为100%),中、高剂量组有统计学意义(P<0.05)。2、rh FNHC36不同浓度组(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的SGC-7901细胞迁移数[单位:个]分别为77?15、65?15、35?6,与对照组(130?7)相比,差别有统计学意义(P<0.01);rh FNHC36各组细胞侵袭数分别为24?4、17?4、12?5,与对照组(48?9)相比,差别有统计学意义(P<0.05)。3、、rh FNHC36不同浓度组(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的SGC-7901细胞的整合素αV的表达分别为0.54?0.14、0.45?0.16、0.31?0.08,明显低于对照组0.94?0.07(P<0.01);且整合素β1的表达分别为0.38?0.13、0.35?0.11、0.35?0.12,低于对照组0.79?0.03(P<0.01);而各组的整合素蛋白β3、E-cadherin、Vimentin的表达均无明显变化。4、rh FNHC36不同浓度组(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的SGC-7901细胞的pro-MMP9表达活性分别为723?49.42、622?36.12、564?38.19,明显低于对照组966?49.78(P<0.01);各组act-MMP9的活性表达,分别为248?23.16、191?23.90、164?22.28,明显低于对照组308?38.56(P<0.05)。5、rh FNHC36组的肝脏肿瘤光子总数[单位:p/s]为6.41E8?6.45E8,与对照组相比(1.48E10?1.83E10),差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:rh FNHC36能抑制胃癌细胞SGC-7901体外的粘附、迁移、侵袭能力,同时能在体内抑制细胞向肝脏转移。可能系通过下调整合素αVβ1、基质金属酶MMP-9的表达来发挥作用。(本文来源于《福建医科大学》期刊2015-06-01）
方海宗[4]（2013）在《重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤cAMP/PKA信号传导通路的影响》一文中研究指出本研究共包括两大部分，每部分都通过建立SAP大鼠模型进行研究。第一部分探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制。第二部分采用重组纤维连接蛋白（fibronection，FN）肝素结合域多肽进行治疗，观察其对重症急性胰腺炎肺损伤的治疗效果、研究其可能的机制，为临床寻找如何阻止SAP患者肺损伤的方法提供实验依据。第一部分环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路在重症急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用目的：探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制。方法：健康雄性SD大鼠56只,按完全随机法分为假手术（SO）组、重症急性胰腺炎组（SAP组）、SAP+H89(cAMP抑制剂)组，后两组按取材时间不同又分为6、12及24h叁个亚组，共7组，每组8只。采用酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、IL-1β，同时观察胰腺和肺组织的病理变化，免疫组织化学蛋白方法检测cAMP依赖PKA催化亚基C(PKA C)和磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白（p-VASP），荧光定量聚合酶链反应检测肺组织VSAPmRNA表达水平。结果：与S0组比较，SAP组各时间点血清TNF-α、IL-1β明显上升（P<0.05），胰腺、肺病理学改变明显，肺组织PKA C蛋白、VASP磷酸化水平及VASPmRNA表达水平明显增强（P<0.05），12h达高峰。TNF-α（266.07±17.14）pg/mL、IL-1β（169.17±25.92）pg/mL、PKA C（210.69±6.32）×103、p-VASP（56.62±0.57）×103、VASPmRNA（2.06±0.21），且与TNF-α、IL-1β之间存在明显的正相关性。与SAP组比较，SAP+H89组各时间点胰腺、肺病理学改变明显减轻，肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VSAPmRNA表达水平明显下降（P<0.05）。结论：提示cAMP/PKA信号传导通路的活化参与了重症急性胰腺炎肺损伤的病理过程，可能与TNF-α及IL-1β水平上调及VASP磷酸化而发挥作用。第二部分重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤治疗作用的研究目的：观察重组纤维连接蛋白（fibronection，FN）肝素结合域多肽对重症急性胰腺炎肺损伤的干预效果及其可能机制。方法：将健康雄性SD大鼠56只按完全随机法分为假手术（SO）组、重症急性胰腺炎组（SAP组）、重组FN肝素结合域多肽治疗组(重组FN组)，后两组按取材时间不同又分为6、12及24h叁个亚组，共7组，每组8只。检测血清淀粉酶（AMY, amylase），HE染色观察肺组织病理，酶联免疫吸附法检测血清TNF-α及FN，免疫组化对肺组织磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白（phosphorylatedvasodilator-stimulated phosphoprotein，p-VASP）定位，Western Blotting检测肺组织的p-VASP蛋白及PKA C蛋白变化。结果：与SO组比较，SAP组各时间点血清AMY、TNF-α水平、p-VASP蛋白及PKA C蛋白均显着上调(P<0.05),血清FN明显减少(P<0.05)，肺组织病理明显加重；与SAP组比较，重组FN组各时间点血清AMY、TNF-α水平、p-VASP蛋白及PKA C蛋白均显着下调(P<0.05),血清FN明显增加(P<0.05)，肺组织病理明显改善。结论：重组FN肝素结合域多肽可一定程度上改善重症急性胰腺炎相关肺损伤，可能通过降低血浆型FN消耗程度、改变TNF-a水平及抑制cAMP/PKA信号传导通路而减轻肺组织毛细血管渗漏起作用。(本文来源于《福建医科大学》期刊2013-06-01）
元小红[5]（2009）在《重组纤维连接蛋白氨基端肝素结合域多肽的制备和在大鼠体内的药代动力学研究》一文中研究指出纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)是一种多功能的糖蛋白,能与肝素、胶原、纤维蛋白以及整合素家族的细胞表面受体结合,参与细胞的黏附、迁移、止血、抗感染以及维持血管的完整性等多种作用。FN分子中有多个功能结构域,其中的两个肝素结合域,分别位于其N端和C端。已有的研究表明FN的肝素结合域多肽具有以下多种功能:增强血管内皮生长因子的活性,促进血管的生成;增强细胞结合域介导的细胞黏附与增殖,抑制肝癌的生长和转移;通过抑制p53和c-Myc基因调节细胞的凋亡,同时参与调节造血干细胞的增殖与分化,并能与淋巴细胞表面的CD44结合,参与免疫的调节;具有刺激组织纤溶酶原激活和激活纤溶酶的活性。本课题组的邹起练博士、吴勇博士等前期成功构建了FN N端肝素结合域多肽的酵母表达载体,并成功转化GS115酵母菌株,用酵母表达出了FN N端肝素结合域多肽(FNNHBDPP),且通过动物实验表明FNNHBDPP具有治疗小鼠败血症和弥漫性血管内凝血(DCI)的作用。实验研究还发现FNNHBDPP可以抑制黑色素瘤及肝癌的侵袭和转移,可见FNNHBDPP在治疗败血症、DIC和肿瘤方面具有巨大的潜力。但是FNNHBDPP在动物体内的代谢模式、组织分布、排泄方式等都还不清楚,有待进一步深入研究。本实验在前期研究的基础上,用发酵罐自动表达和纯化出FNNHBDPP,并利用~(125)I-FNNHBDPP作为示踪剂,采用同位素示踪-高效液相色谱法(HPLC-RAD)研究了FNNHBDPP在大鼠体内的药代动力学过程,考察了该药在大鼠体内的代谢、排泄情况和在小鼠体内的组织分布情况,为新药临床前药效和药理学实验提供了重要的药动学信息。实验结果表明:1采用全自动发酵罐表达的FNNHBDPP,表达量高,纯化以后经过电泳纯度和色谱纯鉴定,FNNHBDPP纯度可达98%以上;2静注FNNHBDPP后在大鼠体内的药代动力学模型符合二房室模型,大鼠高、中、低剂量的体内平均分布半衰期T1/2α分别为:6.28±0.29min、6.23±0.33min、5.55±0.34min,平均消除半衰期T1/2β分别为:94.37±4.49min、89.49±4.04min、82.22±2.86min,AUC与剂量的线性相关性为99.3%。144h内约有74%的代谢物从尿排出,同时约有6.3%的代谢物从粪便中排出,72h内约有6.5%代谢物从胆汁排出,说明~(125)I-FNNHBDPP代谢物主要通过肾脏排泄。~(125)I-FNNHBDPP在小鼠各组织中随时间的动态分布状况,5min时放射活性在各脏器的分布顺序为肾>肺>肝>脾>胃>心>骨>肠>睾丸>肌肉>脑;1h后肾组织的放射性活性明显降低,肺组织的放射性增强,其放射活度分布顺序为肺>肾>肝>脾>胃>骨>心>肠>睾丸>肌肉>脑;8h后,除肺脏外,所有组织的放射性活性都低于平均值。研究发现FNNHBDPP的主要分布于肾、肺、肝、脾等血供丰富的组织中,且不能通过血脑屏障。同时发现FNNHBDPP代谢片段在肺脏有短暂聚集,但随着时间的延长其代谢片段会消除。(本文来源于《福建医科大学》期刊2009-05-01）
郑雪萍[6]（2009）在《重组纤维连接蛋白N端及C端肝素结合域多肽对大肠杆菌感染败血症小鼠模型的治疗作用研究》一文中研究指出败血症是临床常见的危重症,尽管大量高效抗生素的不断问世和日臻完善的器官支持和重症监护技术,其病死率仍较高。所以,人们一直在研究开发有效的治疗药物。纤维连接蛋白是一种多功能的糖蛋白,能与肝素、胶原、纤维蛋白以及整合素家族的细胞表面受体结合,参与细胞的黏附、迁移、止血、抗感染以及维持血管的完整性等作用。实验研究表明纤维连接蛋白(Fibronectin FN)具有抗败血症的作用,临床上人们应用富含Fn的冷沉淀物治疗败血症取得了较好的效果。但尚未见纯Fn制剂应用于临床败血症的报道。从血浆分离FN存在着血浆资源不足和可能传播血源性传染病的问题,同时由于FN分子量大,分子量约为450 kDa,运用基因重组的方法全分子表达又存在技术上的难题。Fn分子上存在多种功能结构域如肝素结合域、细胞结合域、纤维蛋白结合域等,FN的功能是通过这些功能结构域来实现的,因此利用基因工程技术表达FN的功能区多肽并研究其功能,以代替FN的作用不失为一种可行的方法。本课题组前期成功地用大肠杆菌表达系统表达纯化了FN的细胞结合域多肽(rhFN55多肽),实验表明rhFN55多肽具有治疗半乳糖胺敏化内毒素血症及内毒素诱导的大鼠DIC的作用;还应用基因工程方法构建了FN N端及C端的肝素结合域多肽的酵母表达载体,并筛选出了高表达的酵母表达菌株,进一步表达纯化出FNN端和C端两个肝素结合域多肽FNNHBDPP和FNCHBDPP,研究其对半乳糖胺敏化内毒素血症小鼠的作用,动物实验表明二者均具有治疗半乳糖胺敏化内毒素血症小鼠的作用。而半乳糖胺敏化内毒素血症与临床上由革兰氏阴性菌感染引起的败血症虽然在发病机制上类似,即均涉及内毒素的主导作用,但临床上革兰氏阴性菌所致的败血症除了与内毒素血症密切相关外,还与细菌本身的侵袭力有关。因此应用革兰氏阴性菌直接感染引起的败血症模型与临床败血症的发病机制更接近。为了了解这两种多肽对不同败血症模型的作用,本实验将在前期研究的基础上,进一步研究FNCHBDPP和FNNHBDPP两种多肽单用及与最大无效剂量抗菌素联用时大肠杆菌感染小鼠败血症的作用,为FNNHBDPP及FNCHBDPP的临床应用提供理论及实验依据。该研究目前在国内外尚未见报道。本文的主要研究包括以下几个部分:1两种肝素结合域多肽FNNHBDPP、FNCHBDPP制备FNNHBDPP、FNCHBDPP由本研究所自行自备的酵母表达载体中表达和制备2研究两种多肽FNNHBDPP、FNCHBDPP对大肠杆菌感染败血症小鼠的作用(1)建立大肠杆菌感染小鼠败血症模型将大肠杆菌菌株在BALB/C小鼠体内增毒,将增毒后的菌株孵育18小时后用5%高活性干酵母稀释为各种不同的菌液浓度,摸出最低致死浓度(MLD)。用5%高活性干酵母稀释至感染动物所需的终浓度,腹腔注入0.5ml1MLD菌量致小鼠感染,建立大肠杆菌感染败血症小鼠模型。(2)观察FNNHBDPP、FNCHBDPP单用以及与最大无效剂量(DMNE)的头孢曲松联用对大肠杆菌感染败血症小鼠的作用①实验分组在前期研究的基础上将FNNHBDPP分20mg/kg,40mg/kg,FNCHBDPP分40mg/kg,60mg/kg两个剂量组,对感染小鼠进行保护试验,摸索出有效剂量分别为FNNHBDPP40mg/kg、FNCHBDPP60mg/kg。同时摸索头孢曲松对该模型的DMNE为20mg/kg。在以上实验基础上将实验组分为以下各组:正常组、生理盐水对照组、单用头孢曲松组(20mg/kg)、FNNHBDPP作用组(40mg/kg 4次给药)、FNCHBDPP作用组(60mg/kg 4次给药)、FNNHBDPP联用头孢曲松组、FNCHBDPP联用头孢曲松组。②观察各组菌液注射后小鼠的状况及72小时存活率;③测定各组菌液注射后18小时血清中总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、肌酸激酶(CK)、CK同工酶的水平;④用ELISA法检测各组菌液注射后8小时血浆中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;⑤各组菌液注射后18小时后肝脏组织病理形态学及超微结构学的观察。取得如下结果及结论:1建立了大肠杆菌感染小鼠败血症模型;2通过观察小鼠的72小时存活率表明:生理盐水对照组小鼠的存活率仅为5%, FNNHBDPP和FNCHBDPP作用组小鼠的存活率分别为22.5%和25.3%,与生理盐水对照组比较P<0.05。FNNHBDPP联合头孢曲松组及FNCHBDPP联合头孢曲松组小鼠的存活率分别为42.7%和43.5%,经X2检验,与生理盐水对照组比较P<0.01。FNNHBDPP作用组与FNNHBDPP联合头孢曲松组之间及FNCHBDPP作用组与FNCHBDPP联合头孢曲松组之间的存活率经X2检验P<0.05。另外在多肽剂量一致的基础上比较了不同给药次数小鼠的存活率,结果发现1次给药、2次给药模型小鼠的存活率提高的不明显,而若3次给药、4次给药,FNNHBDPP治疗组的存活率为20%、22.5%,FNCHBDPP治疗组的存活率为22.7%、25.3%,3次给药、4次给药组间比较无显着性差异。3通过AST、ALT、LDH和TBIL、CK、CK-MB的测定结果表明生理盐水对照组各指标明显升高,多肽治疗组有所下降,多肽联合头孢曲松组下降的尤为明显。4通过检测血浆中的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,表明生理盐水对照组各值明显升高,多肽治疗组有所下降,多肽联合头孢曲松组下降的更为明显。5通过病理组织和电镜学观察,表明FNNHBDPP和FNCHBDPP都能够减轻肝脏的损伤、变性、坏死。加头孢曲松的处理组呈现出更好的效应。6结论:实验表明FNNHBDPP和FNCHBDPP都具有改善大肠杆菌败血症小鼠的存活率,且若与最大无效剂量的头孢曲松联合治疗呈现出更好的效应。多肽可能是通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子的产生,减轻了炎症因子所致的生物学的效应及肝脏和其他脏器的损伤。FNNHBDPP和FNCHBDPP两种多肽对大肠杆菌败血症小鼠模型的治疗效果无统计学上的差异。(本文来源于《福建医科大学》期刊2009-04-01）
陈小芳[7]（2008）在《重组纤维连接蛋白C端及N端肝素结合域两种多肽的制备及其对小鼠败血症治疗作用的研究》一文中研究指出败血症是临床常见的危重症,尽管大量高效抗生素的不断问世和日臻完善的器官支持和重症监护技术,其病死率仍较高。所以,人们一直在研究开发有效的治疗药物。纤维连接蛋白是一种多功能的糖蛋白,能与肝素、胶原、纤维蛋白以及整合素家族的细胞表面受体结合,参与细胞的黏附、迁移、止血、抗感染以及维持血管的完整性等作用。大量研究表明纤维连接蛋白FN具有抗败血症的作用,但从血浆分离FN存在着血浆资源浪费和可能传播血源性传染病的问题,同时由于FN分子量大,全分子表达又存在技术上的难题。因此利用基因工程技术表达FN的功能区多肽并研究其功能,以代替FN的抗败血症作用不失为一种可行的方法。本课题组前期成功地用大肠杆菌表达系统表达纯化了FN的细胞结合域多肽(rhFN55多肽),用酵母表达系统表达纯化了FN N端肝素结合域多肽(FNNHBD),实验表明这两种多肽具有治疗小鼠败血症的作用;本课题前期也应用基因工程方法构建了FN C端的肝素结合域多肽的酵母表达载体,并筛选出了高表达的酵母表达菌株,但在酵母表达系统中纯化FN C端的肝素结合域多肽(FNCHBD)并研究其对鼠败血症的作用,目前国内外还未见报道。本实验在前期研究的基础上,表达纯化FNCHBD和FNNHBD多肽,研究FNCHBD多肽对鼠败血症的作用以及比较FNCHBD和FNNHBD两多肽对鼠败血症的治疗效果。通过离心、超滤、过离子交换层析柱和分子筛层析柱对两多肽的酵母发酵上清进行纯化,通过Western-blot对纯化的多肽进行鉴定,并证实了两多肽都能够与FN的多克隆抗体结合,具有抗原性;将发酵上清通过过肝素亲和层析柱表明两多肽都能够挂柱,都具有肝素结合活性;经质谱分析测定FNCHBD的分子量为30.5KD,FNNHBD的分子量约为27.9KD。本研究按照A.-H. Kwon等用半乳糖胺(GalN)敏化LPS小鼠建立败血症模型,小鼠72小时的死亡率仅为60%,因此本研究在此基础上摸索了LPS的剂量,最后确定给每只小鼠腹腔注射LPS(100ug/kg)和GalN(400mg/kg)使小鼠的死亡率达到90%,建立了我们的败血症小鼠模型。通过观察72小时小鼠的存活率表明在LPS/GlaN注射半小时前给予FNCHBD和FNNHB两多肽都能提高模型小鼠的存活率,在生理盐水对照组中,小鼠的存活率为11.1%,而在FNCHBD和FNNHB两多肽的5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg这叁个剂量组的存活率分别为33.3%、55.5%、66.7%和27.8%、50%、61.1%,都表现出剂量依赖效应。通过测定注射LPS/GalN注射后9小时血清中AST、ALT、LDH和TBIL的值,表明FNCHBD和FNNHB两多肽都能够降低血清中AST、ALT、LDH和TBIL的值,改善小鼠的肝功;通过用ELISA方法检测通过测定注射LPS/GalN注射后9小时小鼠血浆中的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,表明FNCHBD和FNNHB两多肽都能够抑制血浆中上述炎症因子的表达;通过病理组织学观察,FNCHBD和FNNHB两多肽都能够减轻肝脏的损伤;通过电镜和TUNEL方法表明FNCHBD和FNNHB两多肽都能够抑制肝细胞的凋亡;并且实验结果表明FNCHBD和FNNHB两多肽的上述作用都呈现出剂量依赖效应。同时本研究发现在20mg/kg剂量的基础上,在注射LPS/GlaN后增加FNCHBD和FNNHB两多肽的给药次数对提高小鼠的存活率都没有意义,预防性地给予FNCHBD和FNNHB两多肽的治疗效果优于LPS/GlaN注射后给药。最后通过比较FNCHBD和FNNHBD两多肽对败血症小鼠的治疗效果,发现FNCHBD和FNNHBD治疗效果相近,无统计学上的差异。结论:本实验成功表达纯化出FNCHBD和FNNHBD多肽。成功建立了败血症小鼠模型,并表明了FNCHBD和FNNHBD肽都具有治疗鼠败血症的作用,且两者的治疗效果无统计学上的差异。治疗作用同样都具有剂量依赖性且作用机制相似,都是通过抑制TNF-α等炎症因子的产生,进而抑制肝细胞的凋亡,减轻肝脏的损伤。但在20mg/kg剂量的基础上,注射LPS/GlaN后增加给药次数都不能提高二者对鼠败血症的治疗效果,预防性地给予FNCHBD和FNNHB两多肽的治疗效果优于LPS/GlaN注射后给药。(本文来源于《福建医科大学》期刊2008-04-01）
张敕[8]（2008）在《纤连蛋白及其重组肝素结合域多肽对血管内皮细胞损伤的影响》一文中研究指出血管内皮细胞具有非常重要的生理功能,主要体现在:1.构成天然屏障,维持血管内膜光滑,防止血小板和白细胞粘附及有害物质侵入血管壁;2.组成渗透性屏障,调节物质交换和主动转运功能;3.参与血栓形成和止血过程,保持动态平衡,包括组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等。许多病理状态如严重感染、DIC等均涉及血管内皮细胞的功能损害,继而加剧病理性过程,形成恶性循环。因此如何恢复病理状态下失衡的血管内皮细胞的形态与功能一直是学术界研究的重点。纤连蛋白(Fibronectin,FN)是一种广泛存在于细胞外液、细胞表面及结缔组织等处的糖蛋白。在抗感染、维持微血管完整性及通透性等方面具有重要的作用,故曾有“调理性α2表面结合蛋白”、“细胞表面蛋白”及“细胞粘附分子”之称。已知FN主要分为细胞型和血浆型两种,细胞型FN主要由内皮细胞及成纤维细胞合成,它对于内皮细胞之间的连接及内皮细胞附着于内皮下层的胶原纤维起重要作用,从而保证了微血管完整性。因此,研究外源性FN对某些病理因素造成血管内皮细胞损伤的修复作用是很有价值的,鉴于从血浆分离FN存在着血浆资源不足和可能传播血源性传染病的问题,同时还由于FN分子量大,达450KD,全分子表达又存在技术上的难题。因此利用基因工程技术表达FN的功能区多肽并研究其功能,来代替FN可以说是一种可行的办法。TNF-α是一种重要的炎性介质,感染等病理情况下TNF-α增加,我们以往的研究表明,FN及肝素结合域多肽可防治脂多糖内毒素小鼠DIC的发生,其机制就涉及抑制TNF-α的表达。因此,根据前期研究基础,本实验的目的在于建立TNF-α损伤血管内皮细胞损伤的模型及半乳糖胺增敏的内毒素血症小鼠模型,通过体外和体内实验,研究FN及肝素结构域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP对血管内皮细胞的影响。1.人脐静脉内皮细胞的培养和鉴定采用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞;用免疫组化法检测Ⅷ因子鉴定内皮细胞。2.FN和两种肝素结合域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP制备用明胶亲和层析的方法从人新鲜血浆分离FN;经SDS-聚丙烯凝胶电泳和免疫印迹(Western blot)法鉴定FN纯度和特异性;两种肝素结合域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP由本研究所自行制备的酵母表达载体中表达和制备。3.建立TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞模型3.1实验分组:(1)空白对照组:不加TNF-α处理的正常生长的HUVECs;(2)不同浓度TNF-α处理组:分别用5ng/ml,10 ng/ml,20 ng/mlTNF-α作用18h;(3)不同时间TNF-α处理组:用10 ng/mlTNF-α分别作用6h,12h,,18h,24h。3.2用ELISA法检测各组内皮细胞培养上清中PAI-1、tPA、sICAM-1的含量4.研究FN及两种肝素结合域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP对TNF-α作用的内皮细胞的影响4.1实验分组:(1)空白对照组:不加TNF-α处理的正常生长的HUVECs;(2)TNF-α作用组:10ng/mlTNF-α作用18h,加入与多肽等体积的培养液6h;(3)TNF-α+FNNHBSPP作用组:10ng/ml TNF-α作用18h,加入浓度为600ug/ml的FNNHBSPP作用6h;(4)TNF-α+FNCHBSPP作用组:10ng/mlTNF-α作用18h,加入浓度为600ug/ml的FNCHBSPP作用6h;(5)TNF-α+FN作用组:10ng/mlTNF-α作用18h,加入浓度为600ug/ml的FN作用6h。4.2用倒置显微镜和透射电镜观察FN及其两种肝素结合域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP对TNF-α损伤的内皮细胞作用下的形态和超微结构4.3用ELISA法检测各组内皮细胞培养上清中PAI-1、tPA、sICAM-1的含量5.研究FN及其两种肝素结合域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP对内毒素血症小鼠肝、肺组织血管内皮细胞的影响5.1建立半乳糖胺增敏的内毒素血症小鼠模型应用半乳糖胺增敏内毒素脂多糖建立内毒素血症小鼠模型,即给小鼠腹腔注射半乳糖胺(400mg/kg)和内毒素(100ug/kg)。5.2实验分组:正常组、内毒素血症组、FN作用组、FNNHBSPP作用组和FNCHBSPP作用组。在注射半乳糖胺及内毒素前半小时从其尾静脉分别注射FN、FNNHBSPP、FNCHBSPP(20mg/kg),内毒素血症组给等体积生理盐水。5.3病理形态学观察各实验组小鼠肝、肺组织血管内皮细胞腹腔注射药物9小时后,颈椎脱臼法处死小鼠,取小鼠的肝、肺组织,用10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片,常规HE染色,做病理形态学观察。5.4免疫组织化学法检测肝、肺组织血管内皮细胞纤维连接蛋白(FN)表达取得了以下结果与结论:1.建立了稳定传代的人脐静脉内皮细胞培养体系。2.建立了TNF-α损伤内皮细胞的模型,不同浓度的TNF-α(5,10,20ng/ml)作用于HUVECs18h,培养液中PAI-1、sICAM-1的浓度与空白对照组相比,各组均增加(p﹤0.01),其中以10ng/ml的TNF-α作用最明显;用同一浓度10ng/ml的TNF-α作用6,12,18,24h,与空白对照组相比,PAI-1、sICAM-1的浓度均有明显增高(p﹤0.01),在18hTNF-α作用最明显;tPA各组无明显差异(p﹥0.05)。3.FN及其肝素结合域多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP作用组的内皮细胞,培养液上清中PAI-1及sICAM-1的浓度均比TNF-α组明显减低(p﹤0.01),FN及两种多肽的作用无明显差异(p﹥0.05)。4.建立了内毒素血症小鼠模型,予FN及多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP作用组的小鼠肝、肺组织血管内皮细胞病变明显减轻,血管内皮细胞的FN表达比内毒素血症小鼠增强。5.结论:FN及其多肽FNNHBSPP、FNCHBSPP对TNF-α及败血症所致的血管内皮细胞的损伤具有保护作用;FN及其两种肝素结合域多肽在这方面的作用无明显差异。(本文来源于《福建医科大学》期刊2008-04-01）
邹起练[9]（2006）在《重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽的制备及其对鼠败血症和弥漫性血管内凝血治疗作用的初步研究》一文中研究指出败血症(Sepsis)和DIC,是临床常见危重症。败血症尤其由其产生的感染性休克容易诱发DIC,而一旦形成DIC,又进一步加重休克。由DIC引起的出血危害性极大。DIC也可导致多器官功能衰竭等严重的并发症,病死率高。FN是细胞外基质的重要成份,为一种具有多种功能的糖蛋白大分子,能与肝素、胶原、纤维蛋白以及整合素家族的细胞表面受体结合,参与细胞的粘附与迁移、止血过程、损伤修复、在抗感染、维持微血管的完整性等方面具有重要作用,故曾有“调理性α2表面结合蛋白”,“细胞表面蛋白”及“细胞粘附因子”之称。大量的临床研究表明血浆纤维连接蛋白FN水平对于感染性休克、DIC的预后判断具有重要意义。这些病人血浆FN水平明显而急剧地下降。若给败血症患者补充富含FN的冷沉淀物(cryoprecipitate),则在患者血浆FN水平恢复的同时,伴有心肺功能的改善及败血症的控制,DIC的发生率也明显下降。Barkagan等给106例败血症伴DIC患者输注含FN的冷沉淀物,取得显着疗效。Brodin B等给26例严重感染住院患者补充冷沉淀物,观察血浆FN水平及DIC相关指标的变化,结果发现,患者血浆FN水平恢复正常,且无一例发生DIC。提示FN可用于治疗败血症及DIC。由于从血浆中分离FN将造成血资源的浪费和可能传播血源性传染病,同时由于FN是一种大分子量的糖蛋白,其分子量高达450kDa,利用基因工程合成整个FN分子,目前技术上存在着一定的困难。因此本研究在以往成功制备重组FN细胞结合域多肽(rhFN55),发现其具有治疗败血症小鼠和DIC大鼠作用的基础上,制备重组FN肝素结合域多肽,并研究其对败血症小鼠和DIC大鼠(本文来源于《福建医科大学》期刊2006-03-01）
郭江睿[10]（2006）在《纤维连接蛋白及重组FN肝素结合域多肽对血小板减少内毒素血症小鼠治疗作用的初步研究》一文中研究指出纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)是细胞外基质的重要成份,为一种具有多种功能的糖蛋白大分子,能与肝素、胶原、纤维蛋白以及整合素受体结合,参与细胞的粘附、迁移、止血、损伤修复等过程、在抗感染、维持微血管的完整性等方面具有重要作用。大量研究表明血浆FN水平的测定对感染的预后评价具有重要意义。严重感染,如败血症患者血浆FN水平明显且急剧降低,给其补充富含FN的冷沉淀素,则在患者血浆FN恢复的同时,伴有心肺功能的改善及内毒素血症的控制,死亡率也随之下降。我们前期工作表明FN能降低半乳糖胺敏化内毒素小鼠的死亡率,有助于改善内毒素血症的病情及预后。重组FN肝素结合域多肽(rhFNHN-29)位于FN的N端,由五个I型的同源结构组成,该结构域的分子量为29kDa,由237个氨基酸组成,可与肝素结合。应用FN肝素结合域多肽治疗鼠内毒素血症和血小板减少模型,目前国内外尚未见报道。在本研究中,为了更真实地反映血液病患者常见的感染和出血并存的情况,我们设计了血小板减少内毒素血症小鼠模型,观察FN及rhFNHN-29对其疗效作用,并初步探讨其作用机制,为FN及rhFNHN-29的临床应用提供理论及实验依据。本文的研究内容主要包括:1.血小板减少内毒素血症小鼠模型的构建每只小鼠腹腔注射血小板抗血清(APS)100μl,30分钟后腹腔注射500μl含内毒素脂多糖(LPS)300μg加半乳糖胺(GalN)10mg的混合液。通过血小板监测和72小时后小鼠的肝脏组织病理形态学观察验证模型是否成功构建。2.FN及rhFNHN-29对血小板减少内毒素血症小鼠的作用,并初步探讨其作用机制(本文来源于《福建医科大学》期刊2006-03-01）
重组肝素结合域多肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:利用小鼠盲肠结扎穿刺(CLP)诱导的脓毒血症动物模型,研究重组FN C端肝素结合域多肽(rh FNHC-36)对脓毒血症小鼠的保护作用,从单核巨噬细胞功能的角度研究其在脓毒血症中起保护作用的机制。方法:1.建立盲肠结扎穿刺脓毒血症模型小鼠腹白线处切开,在盲肠中点结扎,穿刺针在结扎处与盲肠远端中点穿刺,穿孔处挤出一滴粪便后将盲肠放回腹腔,分两层缝合切口。术后通过鉴定小鼠腹腔及血液中细菌的种类验证模型是否构建成功。2.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠的保护作用实验小鼠分为正常组(Normal)、伪手术组(Sham)、盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)、rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36),治疗组于盲肠结扎穿刺术前半小时及术后1小时、2小时分别尾静脉注射40 mg/kg的rh FNHC-36,盲肠结扎穿刺组小鼠注射等体积的PBS作为对照。观察14天内rh FNHC-36对CLP诱导的脓毒血症小鼠生存率的影响;采用菌落培养并计数评估小鼠腹腔及血液巨噬细胞对细菌的杀灭、清除作用;计算CLP术后小鼠胸腺和脾脏指数;组织病理学检查肝脏、脾脏、肺脏的病理形态学改变,评估rh FNHC-36对脓毒血症小鼠的保护作用。3.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,贴壁培养4小时后进行巨噬细胞鉴定,制备单细胞悬液,加入细菌脂多糖LPS(1μg/m L)刺激18个小时以诱导巨噬细胞的分化;ELISA法检测小鼠血浆中IL-6的含量;Griess试剂盒检测血清及巨噬细胞培养上清NO的水平;Transwell小室检测巨噬细胞趋化功能的变化;流式细胞术检测巨噬细胞表面抑制性配体PD-L1的表达。结果:1.成功建立盲肠结扎穿刺模型造模后小鼠表现为体重明显减轻,竖毛、寒战、腹泻,心率加快,喜独居等;对模型小鼠进行解剖,发现其盲肠末端缺血、变黑坏死,伴有弥漫性脓肿及大面积粘连。rh FNHC-36治疗组小鼠生理情况明显优于盲肠结扎穿刺组,经菌群鉴定,腹腔及血液中均以E.coli-inactive及A.lwoffii为主,从而证实血中细菌来源于腹腔,脓毒血症模型建立成功。2.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠具有保护作用14天内正常组(Normal)以及伪手术组(Sham)均无小鼠死亡,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的死亡率达70%,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的死亡率为50%,差别有显着意义(P<0.05);正常组(Normal)以及伪手术组(Sham)小鼠腹腔及血液中均未检测到细菌菌落生长,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠血液及腹腔中菌落计数分别为3.4×10^4±3.9×10^3个/ml、3.9×10^4±1.0×10^4个/ml,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠血液及腹腔中菌落计数分别为1.4×10^3±2.1×10^2个/ml、4.0×10^3±3.3×10^3个/ml,差别有显着意义(P<0.01);伪手术组(Sham)与正常组(Normal)小鼠的脾脏及胸腺指数无明显差异,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠术后6h及24h脾脏指数分别为的3.0±0.4、2.9±0.5,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠术后6h及24h脾脏指数分别为的3.6±0.5、4.2±0.6,差别有显着意义(P<0.05);盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠术后6h及24h胸腺指数分别为的1.6±0.3、0.8±0.2,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠术后6h及24h胸腺指数分别为的2.7±0.5、1.8±0.2,差别有显着意义(P<0.05);病理组织学观察发现盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠肝、脾、肺可出现广泛的炎症细胞浸润、变性及坏死,而rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠肝、脾、肺仅见局灶性的炎症细胞浸润。3.rh FNHC-36增强脓毒血症小鼠巨噬细胞功能正常组(Normal)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.2±1.6umol/L,伪手术组(Sham)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.6±1.1umol/L。盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为13.4±3.3umol/L,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.4±3.2umol/L,差别有显着意义(P<0.01);正常组(Normal)与伪手术组(Sham)小鼠血浆IL-6浓度分别为(6.3±6.3)pg/ml、(181±42)pg/ml,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠血浆IL-6的浓度为(64000±29000)pg/ml,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠血浆IL-6的浓度为(19000±19000)pg/ml,差别有显着意义(P<0.05);盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的巨噬细胞趋化指数为3.8±0.9,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬细胞趋化指数为7.8±1.9,差别有显着意义(P<0.05);正常小鼠(Normal)腹腔巨噬细胞LPS刺激后PD-L1阳性率为69.0±10.9%,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的巨噬细胞表面PD-L1阳性率为91.5%±3.2%,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬细胞表面PD-L1阳性率为80.4%±3.9%,差别有显着意义(P<0.05)。结论:rh FNHC-36对CLP诱导的脓毒血症小鼠具有保护作用,可能是通过下调内毒素引起的IL-6及NO水平的升高,促进巨噬细胞趋化功能,下调巨噬细胞表面PD-L1的表达起到保护作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组肝素结合域多肽论文参考文献
[1].林佳.重组FN肝素结合域多肽对人胰腺癌细胞株bxpc-3侵袭转移能力的影响[D].福建医科大学.2016
[2].耿海丽.重组FNC端肝素结合域多肽对CLP诱导的脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响[D].福建医科大学.2015
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[9].邹起练.重组纤维连接蛋白肝素结合域多肽的制备及其对鼠败血症和弥漫性血管内凝血治疗作用的初步研究[D].福建医科大学.2006
[10].郭江睿.纤维连接蛋白及重组FN肝素结合域多肽对血小板减少内毒素血症小鼠治疗作用的初步研究[D].福建医科大学.2006