本文主要研究内容
作者吕阳欧（2019）在《犬小孢子菌转录组测序分析及Zrta基因转化株的构建》一文中研究指出：犬小孢子菌（Microsporum Canis）是一种常见的人畜共患皮肤癣菌,主要感染皮肤、毛发和甲等角化组织,引起浅部真菌病。在真菌的生长和繁殖中,锌是一种必须微量元素,参与许多生物过程,对真菌的生长和代谢具有重要作用。在病原真菌与宿主相互作用过程中,宿主的营养免疫限制病原真菌对锌的摄取,为了能在锌限制条件下存活和增殖,病原真菌进化出特殊的锌稳态调控机制。锌响应激活蛋白（Zap1）及其同系物是调节锌稳态基因的主要转录因子,在酿酒酵母、烟曲霉、念珠菌等真菌中已被证实。但目前锌缺乏对犬小孢子菌基因表达的影响尚不清楚,关于犬小孢子菌锌响应激活蛋白参与的生物过程尚不明确。确定锌缺乏对犬小孢子的影响,明确锌响应转录激活因子在犬小孢子菌锌稳态调节中的作用,对犬小孢子菌锌稳态调控的相关研究具有重要意义。本试验通过对正常组（NORM）和锌限制条件下（Zn200和Zn800）生长的犬小孢子菌进行转录组测序,对所得数据进行的原始数据质控、比对分析、表达定量分析、差异表达分析、差异表达基因的功能富集和注释等,明确锌缺乏对犬小孢子菌基因表达的影响。通过根癌农杆菌介导的遗传转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）构建了犬小孢子菌锌响应转录激活因子Zrta基因缺失株,为后续Zrta基因功能分析奠定基础。研究结果如下;1.获得大量基因数据,差异表达基因数目统计显示,Zn800组和Zn200组与NORM组相比,上调基因分别为798、764个,下调基因分别为585、631个,其中MCYG04486、MCYG06235在锌限制组与正常组相比中均显著上调,MCYG02504只在Zn200中显著上调;Zn800组与Zn200组相比上下调基因的数目分别为3个和8个。差异表达基因功能注释分析表明MCYG06235（zinc-responsiveness transcriptional activator）可能为重要的锌转运因子。2.高保真扩增了犬小孢子菌锌响应转录激活因子基因MCYG06235（zinc-responsiveness transcriptional activator,Zrta）,构建了含有Zrta基因两侧同源片段及潮霉素B抗性基因（hph）的双元载体pDHt/ZrtaⅠ、Ⅱ::hph,酶切和PCR验证证实双元载体构建成功。3.构建成功的双元载体转化入根癌农杆菌中,PCR结果验证转化成功后,用带有双元载体的根癌农杆菌转化犬小孢子菌,通过PCR和Southern blot对转化子进行鉴定,筛选出犬小孢子菌Zrta基因与潮霉素B抗性基因发生同源重组的菌株,获取的Zrta基因缺失株连续3次传代培养后,遗传性状稳定。本研究通过转录组测序明确了锌缺乏对犬小孢子菌基因表达和生物代谢等的影响,其中Zrta基因的基因注释结果表明其在锌代谢中可能起关键作用,成功构建了Zrta基因转化用的双元载体pDHt/ZrtaⅠ、Ⅱ::hph,通过ATMT成功获得犬小孢子菌Zrta基因缺失株,为Zrta基因的致病性和功能验证奠定了基础。
Abstract
quan xiao bao zi jun （Microsporum Canis）shi yi chong chang jian de ren chu gong huan pi fu xuan jun ,zhu yao gan ran pi fu 、mao fa he jia deng jiao hua zu zhi ,yin qi jian bu zhen jun bing 。zai zhen jun de sheng chang he fan shi zhong ,xin shi yi chong bi xu wei liang yuan su ,can yu hu duo sheng wu guo cheng ,dui zhen jun de sheng chang he dai xie ju you chong yao zuo yong 。zai bing yuan zhen jun yu su zhu xiang hu zuo yong guo cheng zhong ,su zhu de ying yang mian yi xian zhi bing yuan zhen jun dui xin de she qu ,wei le neng zai xin xian zhi tiao jian xia cun huo he zeng shi ,bing yuan zhen jun jin hua chu te shu de xin wen tai diao kong ji zhi 。xin xiang ying ji huo dan bai （Zap1）ji ji tong ji wu shi diao jie xin wen tai ji yin de zhu yao zhuai lu yin zi ,zai niang jiu jiao mu 、yan qu mei 、nian zhu jun deng zhen jun zhong yi bei zheng shi 。dan mu qian xin que fa dui quan xiao bao zi jun ji yin biao da de ying xiang shang bu qing chu ,guan yu quan xiao bao zi jun xin xiang ying ji huo dan bai can yu de sheng wu guo cheng shang bu ming que 。que ding xin que fa dui quan xiao bao zi de ying xiang ,ming que xin xiang ying zhuai lu ji huo yin zi zai quan xiao bao zi jun xin wen tai diao jie zhong de zuo yong ,dui quan xiao bao zi jun xin wen tai diao kong de xiang guan yan jiu ju you chong yao yi yi 。ben shi yan tong guo dui zheng chang zu （NORM）he xin xian zhi tiao jian xia （Zn200he Zn800）sheng chang de quan xiao bao zi jun jin hang zhuai lu zu ce xu ,dui suo de shu ju jin hang de yuan shi shu ju zhi kong 、bi dui fen xi 、biao da ding liang fen xi 、cha yi biao da fen xi 、cha yi biao da ji yin de gong neng fu ji he zhu shi deng ,ming que xin que fa dui quan xiao bao zi jun ji yin biao da de ying xiang 。tong guo gen ai nong gan jun jie dao de wei chuan zhuai hua （Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）gou jian le quan xiao bao zi jun xin xiang ying zhuai lu ji huo yin zi Zrtaji yin que shi zhu ,wei hou xu Zrtaji yin gong neng fen xi dian ding ji chu 。yan jiu jie guo ru xia ;1.huo de da liang ji yin shu ju ,cha yi biao da ji yin shu mu tong ji xian shi ,Zn800zu he Zn200zu yu NORMzu xiang bi ,shang diao ji yin fen bie wei 798、764ge ,xia diao ji yin fen bie wei 585、631ge ,ji zhong MCYG04486、MCYG06235zai xin xian zhi zu yu zheng chang zu xiang bi zhong jun xian zhe shang diao ,MCYG02504zhi zai Zn200zhong xian zhe shang diao ;Zn800zu yu Zn200zu xiang bi shang xia diao ji yin de shu mu fen bie wei 3ge he 8ge 。cha yi biao da ji yin gong neng zhu shi fen xi biao ming MCYG06235（zinc-responsiveness transcriptional activator）ke neng wei chong yao de xin zhuai yun yin zi 。2.gao bao zhen kuo zeng le quan xiao bao zi jun xin xiang ying zhuai lu ji huo yin zi ji yin MCYG06235（zinc-responsiveness transcriptional activator,Zrta）,gou jian le han you Zrtaji yin liang ce tong yuan pian duan ji chao mei su Bkang xing ji yin （hph）de shuang yuan zai ti pDHt/ZrtaⅠ、Ⅱ::hph,mei qie he PCRyan zheng zheng shi shuang yuan zai ti gou jian cheng gong 。3.gou jian cheng gong de shuang yuan zai ti zhuai hua ru gen ai nong gan jun zhong ,PCRjie guo yan zheng zhuai hua cheng gong hou ,yong dai you shuang yuan zai ti de gen ai nong gan jun zhuai hua quan xiao bao zi jun ,tong guo PCRhe Southern blotdui zhuai hua zi jin hang jian ding ,shai shua chu quan xiao bao zi jun Zrtaji yin yu chao mei su Bkang xing ji yin fa sheng tong yuan chong zu de jun zhu ,huo qu de Zrtaji yin que shi zhu lian xu 3ci chuan dai pei yang hou ,wei chuan xing zhuang wen ding 。ben yan jiu tong guo zhuai lu zu ce xu ming que le xin que fa dui quan xiao bao zi jun ji yin biao da he sheng wu dai xie deng de ying xiang ,ji zhong Zrtaji yin de ji yin zhu shi jie guo biao ming ji zai xin dai xie zhong ke neng qi guan jian zuo yong ,cheng gong gou jian le Zrtaji yin zhuai hua yong de shuang yuan zai ti pDHt/ZrtaⅠ、Ⅱ::hph,tong guo ATMTcheng gong huo de quan xiao bao zi jun Zrtaji yin que shi zhu ,wei Zrtaji yin de zhi bing xing he gong neng yan zheng dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的吕阳欧，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于犬小孢子菌论文,转录组测序论文,根癌农杆菌介导的遗传转化论文,锌响应转录激活因子论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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