导读:本文包含了人毛乳头细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:加味六味地黄汤,毛乳头细胞,细胞增殖,VEGF
人毛乳头细胞论文文献综述
占永久,孟一峰,陈佳,严雪妹,徐丰[1]（2019）在《加味六味地黄汤对人毛乳头细胞增殖及VEGF表达的影响》一文中研究指出目的观察加味六味地黄汤对人毛乳头细胞增殖和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法分别采用低、中、高浓度的含加味六味地黄汤大鼠血清作用于体外培养的人毛乳头细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白含量。结果与对照组相比,加味六味地黄汤对细胞增殖的影响不明显,无统计学意义(P﹥0.05);在分泌VEGF方面,中、高浓度的加味六味地黄汤组促分泌作用明显,且具有量效关系,差异有统计学意义(P﹤0.05,P﹤0.01)。结论加味六味地黄汤对人毛乳头细胞增殖无显着影响,但能明显促进毛乳头细胞VEGF的分泌,加味六味地黄汤可能是通过增加毛乳头细胞VEGF的分泌来促进毛发的生长。(本文来源于《现代中医药》期刊2019年05期）
潘霄汝,赵玉磊,杨玉花,田婷,张汝芝[2]（2019）在《雌激素对体外培养人毛乳头细胞生物钟基因表达的影响》一文中研究指出目的:探讨雌激素雌二醇(E2)对于体外培养的原代毛乳头细胞(DPC)的生物钟基因活性的影响。方法:体外分离培养6个月胎龄畸形引产胎儿头皮毛乳头细胞,2周后同步所有细胞生物钟活性,随机分为雌激素E2实验组和对照组。24 h中每间隔6 h提取一次总RNA,采用荧光定量PCR方法检测细胞中Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3等主要生物钟基因的表达量。结果:贴壁后的原代DPCs呈放射状向外生长,单个细胞形态呈长梭形。无论雌激素E2实验组和空白对照组,DPCs生物钟基因均呈节律性表达。雌激素E2处理后,相对于对照组,实验组生物钟基因(Clock, Bmal1, Per1, Per2)的表达量显着增加(P<0.05)。结论:雌激素E2显着调节体外培养人毛乳头细胞生物钟基因的表达水平,其生物学意义值得深入研究。(本文来源于《临床皮肤科杂志》期刊2019年09期）
王青[3]（2019）在《低氧微环境下脂肪间充质干细胞促进毛乳头细胞生长机制的研究》一文中研究指出毛囊是控制毛发生长的皮肤附属器官,经过周期性的结构改变可以实现自我更新。成熟的毛囊结构复杂,包含角质形成细胞、黑色素细胞及毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)等。DPCs由起源于真皮间质的成纤维细胞高度特化而成,在毛囊的周期改变中起到关键作用,即使是体外传代培养的DPCs仍可以继续诱导毛囊形成,促进毛囊生长。围绕DPCs外层的脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)可以优化毛嚢微环境促进毛嚢生长。ADSCs起源于中胚层,具有多向分化潜能,由于其来源丰富、免疫原性低,近年来在细胞治疗和组织工程方面具有广泛的应用前景。氧气是干细胞微环境的重要组成成分,干细胞生存、维持和行为均离不开氧气的调节。低氧微环境对于促进ADSCs增殖、保持其正常形态和多向分化潜能有重要影响。因此,利用低氧微环境培养ADSCs可以促进毛囊生长。然而这一过程具体涉及哪些分子机制目前尚不清楚,因此深入研究低氧微环境下ADSCs对毛囊生长的促进机制具有非常重要的理论意义。本研究以阿尔巴斯白绒山羊DPCs和ADSCs为研究对象,首先建立ADSCs低氧微环境,研究低氧微环境下ADSCs功能的变化。进一步收集ADSCs条件培养基培养DPCs,观察DPCs生长的变化,并且探究相关生长因子的表达机制,从而为研究毛囊生长原理及其分子机制提供实验依据。一、低氧微环境的建立及其对脂肪间充质干细胞功能的影响为了建立ADSCs低氧微环境,本研究首先检测不同浓度低氧模拟物去铁胺(desferrioxamine,DFO)和氯化钴(cobalt chloride,CoCL_2)作用24 h、48 h和72 h对ADSCs增殖活性的影响。结果发现25μM DFO和150μM CoCl_2培养ADSCs 48 h的增殖活性最强,因此选择此浓度与时间作为最佳处理条件。与此同时对细胞进行物理低氧培养,与未处理常氧培养的ADSCs比较发现,无论物理低氧培养还是低氧模拟物培养均提高了ADSCs的增殖活性。鉴定低氧微环境中低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1)的表达发现,连续低氧培养24 h、48 h和72h后HIF-1α均有表达,其中48 h表达最高。此外,低氧培养后ADSCs表面标记基因CD44、CD90表达呈阳性,造血干细胞标记基因CD34和CD45表达呈阴性;多能性基因NANOG、OCT4和SOX2不仅在低氧培养后持续表达,而且每个基因的表达量均有提高。与此同时,在物理低氧组中,增殖基因TERT表达增加,促进细胞增殖;抑癌基因p53表达减少,凋亡基因Bcl-2/BAX比例增加,抑制细胞凋亡。以建立好的物理低氧模型为实验对象,检测低氧对ADSCs细胞功能的影响,包括细胞迁移能力、成血管能力以及旁分泌水平。结果显示:低氧微环境下ADSCs的细胞迁移能力更强;在基质胶的作用下,体外培养ADSCs可以形成血管样结构,且无论是单位面积的血管数量还是长度,低氧培养均显着高于常氧培养;此外,低氧条件培养基(hypoxic conditioned medium,Hypo-cm)中含有更多的生长因子VEGF、bFGF和PDGF。二、脂肪间充质干细胞条件培养基对毛乳头细胞生长的影响使用Hypo-cm和常氧条件培养基(normoxic conditioned medium,Nor-cm)培养初级毛乳头细胞(primary hair follicle dermal papilla cells,PHF-DPCs)和次级毛乳头细胞(secondary hair follicle dermal papilla cells,SHF-DPCs)发现,条件培养基特别是Hypo-cm可以显着提高PHF-DPCs和SHF-DPCs的增殖能力,除了EdU阳性细胞率较高外,细胞增殖基因Ki67的表达量也明显高于对照组。细胞周期检测结果显示,使用条件培养基后,进入S期细胞比例明显增多,且周期蛋白CDK2表达增加;此外,细胞凋亡比例减少。这证明条件培养基可以提高PHF-DPCs和SHF-DPCs的增殖活性。PHF-DPCs和SHF-DPCs特异性标志基因ALP检测结果显示,使用条件培养基后,ALP染色情况及活性明显高于对照组。其他特异性标志基因SOX2、α-SMA、NCAM和Version的检测结果显示,使用条件培养基后,特别是Hypo-cm可以提高这些基因的表达。这同样证明了条件培养基可以促进PHF-DPCs和SHF-DPCs的生长,增强其毛囊诱导能力。叁、ERK1/2信号通路及HIF-1α调控ADSCs促进DPCs生长的机制通过检测ADSCs分泌生长因子VEGF、bFGF和PDGF所涉及的调控网络发现,低氧微环境会激活ADSCs ERK1/2信号通路,使用ERK1/2抑制剂PD98059处理ADSCs时,会使低氧微环境下提高的生长因子表达降低,这表明ERK1/2诱导了VEGF、bFGF和PDGF的表达。与此同时,HIF-1α在低氧微环境下发挥重要作用,一方面HIF-1α会提高ADSCs中VEGF、bFGF和PDGF表达,且这种提高受到HIF-1α抑制剂YC-1抑制。另一方面,HIF-1α会抑制ADSCs中BMP2、BMP4和BMP7表达,其中BMP7在过表达HIF-1α后显著降低,而在添加YC-1后得到恢复。进一步构建HIF-1α表达载体PcDNA3.1-HIF-1α与BMP7启动子荧光素酶报告载体pGL4.1-BMP7,检测发现HIF-1α转录因子对BMP7启动子活性有明显的抑制作用,从而负性调控BMP7表达。综上所述,本研究揭示了低氧微环境具有提高ADSCs增殖能力、加强ADSCs细胞功能的作用。使用ADSCs条件培养基特别是Hypo-cm可以促进DPCs生长、提高DPCs特异性标志基因的表达。ERK1/2信号通路和HIF-1α共同参与调控了低氧微环境下ADSCs对DPCs生长的促进机制。上述结果对于理解毛囊发育及其再生机理具有重要的理论和现实意义。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-30）
曹丹霞[4]（2019）在《外泌体对毛乳头细胞生物学活性的影响》一文中研究指出背景和目的近年来人们的脱发发病率逐渐增长,严重影响患者的身心健康。治疗脱发方法包括自体毛囊移植术、口服非那雄胺、外用米诺地尔等,但存在副作用、停药后脱发进程会继续,因此探索新的有效的方法有必要。关于其实验研究包括组织工程毛囊重建、毛囊细胞克隆、毛囊细胞移植疗法等,其中得益于组织工程研究发展迅猛,毛囊重建在治疗脱发的研究中较有前景。毛囊的重建需要大量及具有生物学活性的种子细胞,包含有毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSC)及毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPC)。毛囊是皮肤附属器的器官,由真皮组分和表皮组分组成。DPC聚集在毛乳头(DP)内,DP在毛球部被毛母质细胞等包绕。HFSC与DPC相互作用形成新的毛囊,DPC被认为是毛囊形态发生和周期性生长必需的。但DPC在体外经过多次扩增培养,它的生物学活性逐渐消失,因此,改善或维持DPC在体外培育扩增后的诱导活性,是组织工程毛囊重建中重要一步。外泌体,为来源细胞通过旁分泌细胞外排形成的囊泡,直径约为30-150nm,其内携带有来源细胞的DNA、RNA、多种蛋白质等物质,可存在于细胞培养上清液、血液等。因此我们在本实验中通过使用低代数DPC来源的外泌体培养高代数DPC,尝试以其改善DPC的生物学活性,为毛囊重建提供有效的种子细胞,为脱发治疗提供新的研究思路。方法:1.鼠触须垫DPC的分离培养及外泌体的提取与鉴定通过显微解剖+酶消化法获取小鼠触须垫的DP,观察其形态、贴壁和迁出情况,并对细胞进行传代培养扩增。收集低代数DPC的培养上清液并通过超速离心法提取外泌体,并采用粒径检测、电镜观察和外泌体表面标志蛋白检测鉴定。2.外泌体培养DPC对其生物学活性的检测通过添加外泌体培养第3代(P3)和第8代(P8)的DPC,并通过CCK8、qRT-PCR、WB检测其生物学活性。3.经外泌体培养的DPC诱导毛囊再生的研究使用外泌体培养后的DPC及新生鼠的上皮细胞通过注射法进行毛囊重建,通过体视镜、组织切片H&E染色观察情况。结果:1.通过显微解剖+酶消化法能获取小鼠触须垫的DP,细胞正常迁出,扩增培养后DPC呈聚集性生长,但随着传代次数的增加,DPC逐渐失去聚集性生长的特性,且细胞增殖能力减弱。通过超速离心法能提取出直径30-150nm、表达特异性标志蛋白的外泌体。2.添加外泌体培养不同代数的DPC结果显示P3、P8实验组细胞增殖能量较对照组高,P3、P8实验组细胞的相对特异性标记物也较对照组的表达水平高。3.使用外泌体培养的P3和P8的DPC用于毛囊重建,可见P3实验组及对照组均能诱导毛囊再生,而P8组仅实验组能诱导毛囊重建,且再生毛囊数量少。结论:1.通过显微解剖+酶消化法可获取小鼠触须垫的DP,并未影响细胞迁出及DPC的形态、生长特性和增殖活性。通过粒径检测、电镜观察和外泌体表面标志蛋白检测鉴定使用超速离心法可提取出较纯丰富的外泌体。2.添加外泌体培养不同代数的DPC,可部分改善DPC的生物学活性。3.使用外泌体培养的高代数DPC仍能诱导毛囊再生。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-20）
刘秉承[5]（2019）在《基于仿生策略的新型生物材料制备及其用于毛乳头细胞培养和毛囊重建的研究》一文中研究指出背景和目的组织工程与再生医学的发展让人们看到了秃发治疗的希望。现如今该领域面临两大挑战:(1)毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)是毛囊重建重要的种子细胞,但目前缺乏能兼顾细胞数量扩增与诱导能力维持的培养方法;(2)毛囊重建缺乏能精细化处理细胞与微环境关系的研究模型。要解决这些问题,都离不开新型生物材料所起的关键作用。近年来,仿生学在生物材料领域的运用极大的丰富了材料的实用性和功能性。仿生生物材料有多种实现形式,如直接选用模仿对象的功能性成分参与材料制备,或使用材料模拟出目标组织特定的结构或理化性能。综上所述,本实验将从两个方面进行研究(1)用仿生细胞膜包裹技术修饰具有类细胞外机制微结构的静电纺纳米纤维,探究其作为新型毛乳头细胞培养支架的可行性;(2)使用水凝胶微球和细胞成分作为功能构件,模块化构建具有仿生结构的大体积毛囊重建研究模型。上述研究以期为组织工程方向的秃发治疗研究提出一个新的综合性解决方案。方法1.细胞膜包裹纳米纤维支架材料的构建及生物功能性评价鼠DPCs作为细胞膜来源。使用静电纺丝和细胞膜包裹技术制备仿生DPCs培养支架材料。通过接触角测量、免疫印迹法、荧光表达等方法鉴定细胞膜包裹结果。使用细胞活死染色和CCK-8等方法对材料的生物相容性及DPCs的增殖表现做出评价。2.支架材料特性对DPCs生物学特性影响的研究我们使用SEM和共聚焦叁维重建等检测方法对DPCs进行形态学观察,通过对DPCs毛发诱导标记物进行基因表达分析、蛋白定性和定量表达和体内毛囊重建实验来探讨培养模型提供的细胞间交互模拟对DPCs生物学特性的影响,并根据结果进行相关机制的初步讨论。3.基于水凝胶微球模块化构建毛囊重建模型的研究使用生物相容性极好的明胶甲基丙烯酸酰氯(GelMA)作为制备水凝胶微球的原料。首先优化微球直径,微球细胞比例等参数。随后,通过悬滴法制备毛乳头细胞球,在transwell小室中依据毛囊及其微环境的结构特征,有序安排载细胞微球、毛乳头细胞球、新生鼠表皮细胞在空间上的分布,构建仿生化毛囊重建模型并进行体内验证。结果1.通过静电纺丝和细胞膜包裹技术,成功构建了仿生纳米纤维支架细胞培养模型,证实该模型有良好的生物相容性并支持DPCs增殖生长。2.仿生支架材料培养的DPCs表达与毛囊诱导能力相关特异性标记物ALP、β-catenin和Versican,且介导细胞间交互的N钙黏蛋白表达增强。经支架材料培养后的DPCs能在体内诱导毛囊再生。3.使用载细胞水凝胶微球、毛乳头细胞球和毛囊细胞作为功能构件,成功在体外构建出大体积含仿生真皮微环境的毛囊重建模型,并在移植裸鼠后实现毛囊再生。结论1.细胞膜包裹的纳米纤维支架材料是一种新型的DPCs培养模型。2.支架材料中仿生结构与细胞表面交互活性的协同作用可有效增强以非聚集性方式生长的DPCs的细胞间交互作用,使其恢复特异性标记物的表达以及诱导毛囊再生的能力,为组织工程毛囊提供了新的种子细胞培养工具。3.基于模块化的组织构建模式能有效恢复毛囊细胞与真皮微环境的位置关系,有助于构建细胞节省型的毛囊重建模型。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-17）
韦菊梅[6]（2019）在《盐酸左西替利嗪对人毛乳头细胞生长影响的初步研究》一文中研究指出目的:通过观察不同浓度的盐酸左西替利嗪对体外培养的人毛乳头细胞(Human Dermal Papilla Cells,hDPCs)生长、增殖以及前列腺素相关信号分子表达的影响,初步探讨其影响毛发生长的作用及分子机制,为盐酸左西替利嗪应用于治疗雄激素性秃发(Androgenetic alopecia,AGA)的进一步研究提供理论依据。方法:将人毛乳头细胞原代细胞系培养至第3代,碱性磷酸酶(AKP)染色及平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)免疫荧光染色鉴定,显微镜下观察。选择不同浓度的盐酸左西替利嗪作用于第3代人毛乳头细胞培养48h,设置空白对照组,通过α-SMA免疫荧光染色观察细胞的生长情况,噻唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖活力。采用含有1、10、100、1 000、10 000 ng/ml盐酸左西替利嗪培养人毛乳头细胞48h,设置空白对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测环氧化酶2(COX-2)、前列腺素D合酶(PTGDS)、前列腺素E2(PGE2)、前列腺素F2α(PGF2α)、G蛋白偶联受体44(GPR44)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的mRNA表达水平;Western印迹法检测PTGDS、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(pGSK3β)蛋白的水平;采用以上浓度盐酸左西替利嗪培养24h,酶联接免疫吸附法(ELISA)检测人毛乳头细胞培养上清液中前列腺素D2(PGD2)及PGD2受体(PGD2R)的分泌水平。SPSS17.0统计软件分析数据,Graphpad prism 6软件绘制统计图。不同浓度组间观察指标的比较采用单因素方差分析,两两比较使用LSD-t检验。结果:1、人毛乳头细胞AKP染色和α-SMA免疫荧光染色均阳性。α-SMA免疫荧光染色显示,100ng/ml浓度处理组细胞生长良好,融合度超过90%。MTT法显示,不同浓度盐酸左西替利嗪组与对照组人毛乳头细胞细胞的增值率差异有统计学意义(F=42.218,P<0.05),100 ng/ml处理组增值率(115.80%±5.10%)高于对照组(100%,t=28.265,P<0.05)。2、不同浓度盐酸左西替利嗪组的COX-2、PGF2α、PTGDs、GPR44、AKT mRNA表达差异均有统计学意义(F值分别为1.972、3.662、2.172、2.658、7.325,均P<0.05),PGE2、GSK3β表达差异无统计学意义(F值分别为0.872、1.189,均P>0.05);100 ng/ml浓度处理组COX-2、PTGDs、GPR44 mRNA表达(0.84±0.08、0.81±0.10、0.85±0.09)低于对照组(t值分别为1.972、2.172、2.658,均P<0.05),PGF2α、AKT的表达(1.96±0.25、1.74±0.32)高于对照组(t值分别为3.662、7.325,均P<0.05)。不同浓度盐酸左西替利嗪组PTGDS、pAKT、pGSK3β、PGD2、PGD2R水平差异均有统计学意义(F值分别为11.84、3.892、4.065、66.15、44.33,均P<0.05),100 ng/ml浓度处理组PTGDS、PGD2、PGD2R蛋白水平(0.32±0.05、141.62±5.44、215.08±9.55)低于对照组(0.73±0.06、180.08±6.15、273.24±3.18,t值分别为5.667、45.07、92.05,均P<0.05),pAKT、pGSK3β蛋白水平(0.59±0.05、0.46±0.03)高于对照组(0.46±0.02、0.35±0.042,t值分别为16.598、7.734,均P<0.05)。结论:1、100ng/ml盐酸左西替利嗪能促进体外培养的人毛乳头细胞的生长;高于1000ng/ml浓度的盐酸左西替利嗪能抑制体外培养的人毛乳头细胞的生长。2、盐酸左西替利嗪可能通过抑制PGD2-GPR44通路,激活AKT/GSK3β信号通路,促进体外培养的人毛乳头细胞的生长。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
包家娟[7]（2019）在《双氢睾酮梯度浓度变化对人毛乳头细胞及Wnt、凋亡通路的影响》一文中研究指出目的:观察不同浓度双氢睾酮对体外培养人毛乳头细胞生长、增殖、凋亡以及Wnt转导通路、凋亡通路的相关信号分子的影响,初步阐明双氢睾酮与人毛乳头细胞生长发育的相关性及作用机制,为雄激素性秃发防治新方案、新方法的设计提供科学依据。方法:设置空白对照组及0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml浓度双氢睾酮组,分别与人毛乳头细胞共培养,α-SMA免疫荧光染色鉴定毛乳头细胞;MTT法检测人毛乳头细胞增殖情况;流式细胞计数法测定其细胞凋亡情况;提取人毛乳头细胞RNA,行RNA-Seq检测Wnt、凋亡通路基因的表达量;采用SPSS23.0软件分析数据,计量资料的组间差异采用单因素方差分析,LSD法对空白对照组和各个实验组的上述结果分别进行比较,统计变量以x±s表示。结果:(1)免疫荧光鉴定毛乳头细胞:红色是细胞质染色,蓝色是细胞核染色,细胞呈梭形,部分多角形,鉴定为毛乳头细胞,镜下可见对照组和0.1ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml DHT组的毛乳头细胞较稀疏,1ng/mlDHT组和10ng/mlDHT组密度明显变大,10ng/mlDHT组细胞最为密集,呈旋涡状凝集生长。(2)MTT法检测双氢睾酮对毛乳头细胞增殖的影响:与空白对照组比较,0.1ng/ml双氢睾酮对毛乳头细胞无促进增殖的作用(P﹥0.05),1ng/ml、10ng/ml双氢睾酮促进毛乳头细胞增殖(P﹤0.01、P﹤0.01)。100ng/ml双氢睾酮对毛乳头细胞的增殖无抑制作用(P﹥0.05),1000ng/ml双氢睾酮抑制毛乳头细胞增殖(P﹤0.05)。(3)流式细胞计数检测双氢睾酮对毛乳头细胞凋亡的影响:DHT浓度为0.1ng/ml、1ng/ml、100ng/ml时,双氢睾酮不会促进DHPCs凋亡活动(P﹥0.05)。1000ng/ml双氢睾酮可促进DPCs的凋亡(P﹤0.01)。(4)RNA-Seq检测双氢睾酮对Wnt通路的影响:低浓度DHT(﹤10ng/ml),Wnt10b、LEF1基因表达上调,Axin2、GSK-3β、DKK-1基因表达下调;高浓度DHT(﹥100ng/ml)时,Wnt10b、LEF1基因表达下调,Axin2、GSK-3β、DKK-1基因表达上调。RNA-Seq检测双氢睾酮对凋亡通路的影响:低浓度DHT(﹤10ng/ml),Bcl-2基因表达上调,Bax、Fas基因表达下调;高浓度DHT(﹥100ng/ml)时,Bcl-2基因表达下调,Bax、Fas基因表达上调。结论:1、一定浓度(1ng/ml、10ng/ml)的双氢睾酮促进毛乳头细胞增殖,而高浓度(1000ng/ml)双氢睾酮则抑制毛乳头细胞增殖并促进毛乳头细胞凋亡。该梯度浓度变化的意义对指导临床用药具有重要作用。2、不同浓度的双氢睾酮对Wnt通路、凋亡通路中的信号因子表现为上调或下调,从而影响人毛乳头细胞的增殖和凋亡,该梯度浓度变化的意义对治疗雄激素性脱发新方案的设计具有参考意义。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
陈倩[8]（2019）在《羟基酪醇调控自噬缓解毛乳头细胞氧化应激损伤机制研究》一文中研究指出背景和目的脱发是一种多基因疾病,其不仅受机体内部基因调控,同时也受外部环境因素影响。氧化应激在雄激素秃发疾病机制中扮演着重要的作用,尤其是男性模式秃发患者。毛乳头细胞(demal papilla cells,DPCs)具有诱导毛囊形成和调控毛发生长关键作用。氧化应激中将导致毛乳头细胞增殖减少以及毛发生长抑制因子分泌增加。自噬作为真核生物重要的生理过程,能通过降解氧化应激损伤蛋白维持机体内环境稳定。在脱发疾病中,自噬通过阻止毛囊干细胞耗竭被认为重要的毛囊细胞保护机制。轻基酪醇(Hydroxytyrosol,HT)是橄榄油主要的抗氧化成分,可激活自噬缓解氧化应激炎性损伤。临床研究表明,地中海饮食有助于降低雄性激素秃发风险。羟基酪醇作为地中海饮食丰富的来源之一,其是否能保护毛囊细胞促进毛发生长是个值得探讨的环节。因此本实验将观察羟基酪醇对过氧化氢(H_20_2)处理的DPCs作用。该研究结果将为脱发防治提出了新策略,同时也为地中海饮食有益于毛发生长作出新解释。方法1.HT对氧化应激诱导的小鼠来源DPCs生物学研究原代分离培养鼠触须垫毛乳头细胞,取第叁代细胞加入不同浓度H_2O_2(50,100,200,400umol/ml)处理后24小时,用CCK-8测量细胞的增殖活性。接下来用100 umol/ml H-2O2处理毛乳头细胞2小时,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS表达量。以上判断H_2O_2处理后氧化应激对DPCs损伤。为进一步观察HT对DPCs保护作用,采用HT 75μM预处理DPCs 30分钟,使用PCR,ELISA,DCFH-DA技术检测HT对H_2O_2处理后的DPCs生物学活性和特性的影响。2.HT对氧化应激诱导的小鼠来源DPCs作用机制研究采用 100umol/ml H_2O_2和 100umol/ml H_2O_2+75umol/ml HT处理DPCs 2小时,用Western Blot和PCR检测细胞自噬相关蛋白LC3和基因Beclin-1。为进一步明确调控自噬对于HT保护DPCs作用机制,使用自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ),再进行相关的生物学活性和特性的检测。结果1.HT对小鼠来源DPCs氧化应激中的生物学研究CCK-8结果显示,与空白对照组相比,H_2O_2对细胞的活性下降呈浓度依赖性。H_20_2处理后ROS水平以及炎性因子(IL-6,TNF-α)明显升高,毛发生长因子(FGF,PDGF,VEGF)分泌降低。由此可见,H_2O_2对DPCs具有细胞毒性。相反,使用HT预处理的DPCs明显改善了 H_2O_2.对细胞的氧化应激损害。2.HT对小鼠来源的DPCs氧化应激中机制研究H_2O_2处理后的DPCs明显降低了细胞LC3和Beclin-1表达,提示H_2O_2抑制自噬的表达。相反HT预处理的DPCs逆转了这一趋势,明显增强了自噬的表达。加入自噬抑制剂氯喹,HT所介导的氧化应激中DPCs保护作用被明显逆转,进一步论证调节自噬是HT保护DPCs免受氧化应激损伤的重要机制。结论HT通过增强自噬保护DPCs,缓解氧化应激诱导的炎性损伤,促进毛发生长因子分泌。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-04-15）
陈宇新[9]（2019）在《低代毛乳头细胞来源外泌体对毛囊再生及毛囊周期的影响及其机制的研究》一文中研究指出背景和目的毛囊(HF)是哺乳动物一个复杂的小器官,由上皮和间充质成分相互作用而组成。毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)被认为是一种独特的间充质干细胞,具有自体干细胞治疗的潜力,位于毛囊底端的毛球部,被真皮鞘和毛母质细胞包绕。DPCs作为HF的信号中心,在调节毛发生长、形成和循环中发挥重要作用。外泌体(exosome or extracellular vesicles,EV)是由不同细胞类型分泌的纳米囊泡,它们本身携带大量生物信息:如调节蛋白、mRNA和microRNA(miRNA)。干细胞来源的外泌体具有类似干细胞的功能,在多种病理模型中起积极的治疗作用,且具有细胞疗法所不具备的优势。因此,我们在本实验中通过体内和体外实验验证DP来源的外泌体(DP derived exosome,DP-Exo)在部分损伤毛囊中的作用并验证其对毛囊周期的影响,最后,通过对外泌体miRNA测序和生信分析,进一步研究DP-Exo作用靶点基因及其相关通路,探讨其作用机制。方法1.人DPCs来源的外泌体对人毛母质细胞的作用利用显微解剖法联合酶消化法分别提取培养人的毛乳头细胞,收集低代毛乳头细胞(P1-P3)的条件培养基,通过高速离心法提取人DPCs来源的外泌体,将不同浓度的外泌体加入到人毛母质细胞培养基中,用CCK8增殖试验检测毛母质细胞增殖情况,并进行免疫荧光、划痕实验、细胞周期检测,评估外泌体在体外对毛母质细胞的生物学活性和特性的影响。2.小鼠DPCs来源的外泌体对小鼠HFSCs的作用利用显微解剖法和酶消化法获取小鼠的毛囊干细胞并进行培养。将小鼠毛乳头细胞外泌体以不同的浓度梯度加入到毛囊干细胞培养基中,观测小鼠DPCs来源的外泌体对小鼠毛囊干细胞增殖、迁移活性的影响。3.小鼠毛乳头细胞来源的外泌体对部分损伤后的毛囊再生的影响构建部分损伤毛囊再生动物模型:取C57小鼠触须垫,分离单根生长期鼠须毛囊,将进行下叁分之一横断后的上叁分之二横断毛囊移植入裸鼠背部中线左侧皮下,完整毛囊作为对照移植入背部中线右侧皮下。对模型分别用低代小鼠毛乳头细胞,低代DP-Exo和PBS进行干预,30天后观测横断毛囊再生情况并进行HE染色。4.毛乳头细胞来源的外泌体对毛囊生长周期的影响取7周龄C57雌性小鼠,进行背部脱毛,每隔2天注射小鼠毛乳头细胞来源的外泌体,局部涂抹米诺地尔作为阳性对照,PBS注射作为阴性对照,每隔7天观测鼠背毛囊生长情况,并取材做组织学检测,评估毛囊生长周期。5.毛乳头来源的外泌体生发作用的机制探讨提取小鼠毛乳头细胞外泌体miRNA,并送检做miRNA高通量测序,检测外泌体miRNA成分并进行定量,利用miRWalk 2.0和DAVID 6.8生信分析软件进行miRNA靶基因预测,利用GO和KEGG基因富集通路,并用STRING database数据库进行靶基因相关蛋白互作分析,并筛选出外泌体miRNA作用的关键通路靶基因。免疫荧光染色检测外泌体干预后再生毛囊干细胞标记物变化,细胞增殖情况,利用RT-PCR,Western-blot和免疫荧光检测关键靶基因在治疗中期和末期的表达情况的变化。结果1.外泌体促进毛母质细胞的增殖,迁移细胞周期测试以及Ki67免疫荧光结果提示:人来源的DP-Exos被毛母质细胞摄取后,能显着促进毛母质细胞的增殖,其中10μg/ml的外泌体具有最强的促毛母质细胞增殖的作用。划痕实验实验结果提示,DP-Exos能显着促进毛母质细胞的迁移能力,其中10μg/ml浓度的外泌体作用效果最为显着。2.DPCs来源的外泌体对毛囊干细胞的作用CCK-8和Ki67免疫荧光提示:10μg/ml小鼠来源外泌体能显着促进小鼠HFSCs的增殖。Transwell迁移实验结果提示:10μg/ml小鼠来源外泌体能显着促进小鼠HFSCs的迁移。3.小鼠DP-Exo对部分损伤的毛囊再生的影响上叁分之二横断毛囊移植30天后有一定几率获得再生,再生率低且再生毛乳头小,再生毛囊细小,上叁分之二横断毛囊移植并用毛乳头细胞和毛乳头来源外泌体干预后毛囊再生率显着提高,细胞治疗组和外泌体治疗组间无显着性差异。用Dil标记毛乳头细胞和外泌体,治疗后30天进行荧光示踪,结果为发现:移植的毛乳头细胞大部分整合于真皮鞘,少量进入毛乳头内部,毛乳头移植组和外泌体注射组毛乳头里可以看到Dil点状荧光信号。4.毛乳头细胞来源的外泌体对毛囊生长周期的影响DP-Exo治疗开始后14天内显示超过80%的毛干长出皮外,毛囊完全再生,到第21天几乎完全毛发再生。米诺地尔治疗组21天毛发再生率约为77%,而PBS组为35%。在14天时,DP-Exo是米诺地尔组背部毛发覆盖率的3.8倍,是对照组14倍。治疗21天后DP-Exo治疗组皮肤厚度高于米诺地尔组和PBS组。5.毛乳头来源的外泌体生发作用的机制探讨miRNA高通量测序定量分析得出Top30外泌体miRNA,GO富集到66个关键靶基因,KEGG富集到41条通路。PPI蛋白互作结果显示:Wnt5a,BMP2和BMP4为关键的中枢基因。免疫荧光实验结果提示,外泌体治疗中期和晚期,再生毛囊中K15、CD34阳性细胞显着增加,免疫荧光、Wb和RT-PCR等实验结果提示,关键通路基因Wnt5a,BMP2和BMP4表达量较对照组显着下调。结论1.低代毛乳头来源的外泌体能促进毛母质细胞的增殖迁移。2.代毛乳头来源的外泌体能促进毛囊干细胞增殖迁移。3.DP-Exo能促进部分损伤的毛囊再生。4.DP-Exo能促进毛囊由休止期向生长期转换。5.DP-Exo通过其携带的miRNA影响毛囊信号通路,通过作用于Wnt5a,BMP2,BMP4等关键通路基因,下调相关毛囊抑制信号蛋白从而促进毛囊再生和进入生长期。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-02-25）
林恩,祝宁侠,蔡博治,黄铿,林常敏[10]（2018）在《LncRNAs和miRNAs在毛乳头细胞衰老与毛囊再生中的作用》一文中研究指出毛乳头(dermal papilla,DP)细胞衰老能使毛囊失去诱导功能,是雄激素性脱发的主要机制。而Wnt信号通路与DP细胞衰老进程虽密切相关,但具体机制不明确。长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)和非编码单链小RNA(micro RNAs,miRNAs)以各种不同的方式在基因表达的各个水平发挥着重要作用,并已证实在Wnt信号通路也存在这样的调控方式。因此,备受关注的lncRNAs和miRNAs,很可能是通过激活Wnt信号通路而发挥DP细胞的抗衰老作用,最终维持毛囊诱导功能。笔者结合国内外文献,旨在通过对与DP细胞、毛囊再生以及与某些细胞衰老密切相关的lncRNAs/miRNAs和Wnt信号通路调控方式作一总结,以探讨完善脱发的分子机制,并提出可能的药物治疗靶点,从而为DP细胞衰老机制的研究提供新的思路。(本文来源于《中国美容整形外科杂志》期刊2018年07期）
人毛乳头细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨雌激素雌二醇(E2)对于体外培养的原代毛乳头细胞(DPC)的生物钟基因活性的影响。方法:体外分离培养6个月胎龄畸形引产胎儿头皮毛乳头细胞,2周后同步所有细胞生物钟活性,随机分为雌激素E2实验组和对照组。24 h中每间隔6 h提取一次总RNA,采用荧光定量PCR方法检测细胞中Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3等主要生物钟基因的表达量。结果:贴壁后的原代DPCs呈放射状向外生长,单个细胞形态呈长梭形。无论雌激素E2实验组和空白对照组,DPCs生物钟基因均呈节律性表达。雌激素E2处理后,相对于对照组,实验组生物钟基因(Clock, Bmal1, Per1, Per2)的表达量显着增加(P<0.05)。结论:雌激素E2显着调节体外培养人毛乳头细胞生物钟基因的表达水平,其生物学意义值得深入研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人毛乳头细胞论文参考文献
[1].占永久,孟一峰,陈佳,严雪妹,徐丰.加味六味地黄汤对人毛乳头细胞增殖及VEGF表达的影响[J].现代中医药.2019
[2].潘霄汝,赵玉磊,杨玉花,田婷,张汝芝.雌激素对体外培养人毛乳头细胞生物钟基因表达的影响[J].临床皮肤科杂志.2019
[3].王青.低氧微环境下脂肪间充质干细胞促进毛乳头细胞生长机制的研究[D].内蒙古大学.2019
[4].曹丹霞.外泌体对毛乳头细胞生物学活性的影响[D].南方医科大学.2019
[5].刘秉承.基于仿生策略的新型生物材料制备及其用于毛乳头细胞培养和毛囊重建的研究[D].南方医科大学.2019
[6].韦菊梅.盐酸左西替利嗪对人毛乳头细胞生长影响的初步研究[D].广西医科大学.2019
[7].包家娟.双氢睾酮梯度浓度变化对人毛乳头细胞及Wnt、凋亡通路的影响[D].广西医科大学.2019
[8].陈倩.羟基酪醇调控自噬缓解毛乳头细胞氧化应激损伤机制研究[D].南方医科大学.2019
[9].陈宇新.低代毛乳头细胞来源外泌体对毛囊再生及毛囊周期的影响及其机制的研究[D].南方医科大学.2019
[10].林恩,祝宁侠,蔡博治,黄铿,林常敏.LncRNAs和miRNAs在毛乳头细胞衰老与毛囊再生中的作用[J].中国美容整形外科杂志.2018