导读:本文包含了类泛素蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:类泛素蛋白,秦冠苹果,转基因烟草,干旱胁迫
类泛素蛋白论文文献综述
豆芳芳,龚小庆,邹养军[1]（2019）在《苹果类泛素蛋白MdRAD23C2基因的分离及功能鉴定》一文中研究指出【目的】研究苹果类泛素蛋白RAD23基因(MdRAD23C2)的功能,为抗旱苹果新品种的培育奠定基础。【方法】以秦冠苹果(Malus domestica cv.‘Qinguan’)为材料,克隆MdRAD23C2基因,对其进行生物信息学和定位分析,通过实时定量PCR分析其在不同逆境胁迫下(干旱、盐、碱和ABA)的表达模式。构建过表达载体转化农杆菌,采用叶盘法转化烟草,选取相应的转基因烟草株系,分析干旱胁迫下转基因烟草的相对电导率和丙二醛、叶绿素、过氧化氢(H_2O_2)、超氧阴离子■含量以及二氨基联苯胺(DAB)、氮蓝四唑(NBT)染色情况,探讨MdRAD23C2过表达对转基因烟草抗旱能力的影响。【结果】苹果MdRAD23C2基因编码序列长1 146 bp,编码381个氨基酸,其定位于细胞核和细胞膜中,可响应干旱、盐和碱等逆境胁迫。干旱处理2周,野生型烟草株系萎蔫程度明显,且DAB和NBT染色加深,相对电导率、丙二醛、H_2O_2和■含量均极显着高于转基因型烟草,而叶绿素含量极显着低于转基因型烟草,说明过量表达MdRAD23C2的烟草株系对干旱胁迫的耐受性明显增强。【结论】分离克隆了苹果MdRAD23C2基因,该基因可提高转基因植物对干旱胁迫的耐受性。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2019年11期）
李权[2]（2019）在《氨基酸侧链基团与类泛素蛋白适盐性的关系研究》一文中研究指出目前对于蛋白适盐机制的研究多集中于定性方面,且比较笼统,存在一些自相矛盾的地方,而对于更细致的如氨基酸不同的位置及不同的氨基酸类型对蛋白质适盐性的定量影响还没有人研究过。前期研究发现嗜盐古菌类泛素蛋白Samp2在低盐下不如高盐下折迭的好,而单点突变体Samp2-D31G在低盐下就可达到完全折迭状态;根据序列分析发现真核类泛素蛋白在与Samp2第31位点相对应的结构位点上的氨基酸均为G(甘氨酸)。因此,我们把Samp2及其它类泛素蛋白作为研究对象,旨在通过对它们适盐性机制的研究,为根据特定应用环境的盐条件有针对性地对蛋白质进行改造或设计使其更好地适应应用环境提供理论基础。本研究运用定点突变结合远紫外圆二色谱、内源荧光、分子筛等方法研究不同位置及类型的氨基酸对Samp2和其它类泛素蛋白适盐性的影响。首先构建了Samp2第31位点不同氨基酸类型的突变体并表达纯化。内源荧光检测显示不同盐浓度下Samp2-D31位点各突变体的整体叁级结构基本不变;分子筛检测显示不同盐浓度下各突变体的四级结构也分别相同;但CD检测显示将31位点D(天冬氨酸)突变为带正点的氨基酸或不带电的氨基酸要比突变为带负电荷的氨基酸在低盐下折迭得好且热稳定性更高。这些结果说明Samp2的适盐性与氨基酸所带电荷相关。另外,本研究的结果还显示,Samp2上loop区的D/E突变为G的突变体在低盐条件下折迭情况比二级结构区域的相同类型突变体要好,说明Samp2的适盐性与负电氨基酸所在位置的柔性或溶液可及性相关。基于以上研究成果,将布氏椎体虫类泛素蛋白上与Samp2第31位点相对应的G突变为D,检测突变体的适盐性,以验证两种类型氨基酸在类泛素蛋白进化和适应不同盐环境中的角色。结果显示,虽然多数突变体在高盐环境中的二级结构和叁级结构与低盐下相同,且与野生型一致,但Tb-Nedd8-G36D在高盐下的折迭程度要高于低盐,支持负电氨基酸有助于蛋白质适应高盐环境的结论。不过,对蛋白质结构稳定性的检测结果显示,Tb-UB-G35D在低盐和高盐下的稳定性均低于Tb-UB,与以上结论相悖。这些结果提示氨基酸类型与蛋白质适盐性之间关系的复杂性,有待进一步深入研究来阐明。本研究对Samp2蛋白及其它类泛素蛋白适盐性的探索有助于我们加深对蛋白质适盐机制的理解,同时也为蛋白质进化和折迭机制的阐明提供了素材。(本文来源于《安徽大学》期刊2019-03-01）
郝术安,王钧[3]（2018）在《类泛素蛋白FAT10在肺鳞癌中的表达及生物学作用》一文中研究指出目的:探讨类泛素蛋白FAT10的异常表达在肺鳞癌进展中的作用及机制。方法:采用RT-PCR和Westerm blotting法检测40例肺鳞癌及癌旁组织中FAT10 mRNA和蛋白表达水平。通过电穿孔法分别将FAT10 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FAT10转染人肺鳞癌NCI-H226细胞,转染48 h后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化,RT-PCR和Westerm blotting检测Hsp90/Akt信号通路的变化。结果:FAT10基因和蛋白在人肺鳞癌组织中的表达量分别是(0.89±0.11)、(1.56±0.09),高于癌旁组织(0.42±0.06)、(0.67±0.04),差异有统计学意义(P<0.05);干扰NCI-H226细胞中FAT10表达后,NCI-H226细胞增殖(0.527±0.011)被抑制,对细胞周期分布无明显影响,细胞凋亡率(6.13±0.37)%增加,细胞的侵袭能力降低,Hsp90/Akt信号通路表达(0.25±0.04)下调;增强NCI-H226细胞中FAT10表达后,增殖能力(0.948±0.016)明显增强,对细胞周期分布无明显影响,细胞凋亡率(2.47±0.25)%降低,细胞的侵袭能力降低,Hsp90/Akt信号通路表达(0.84±0.06)上调。结论:FAT10可通过上调Hsp90/Akt信号通路表达,促进肺鳞癌细胞增殖,减少细胞凋亡,增强肺鳞癌细胞的侵袭能力,FAT10有可能成为预防和治疗作用的靶点。(本文来源于《中国中西医结合外科杂志》期刊2018年06期）
魏文毅,孙毅,曹诚,常智杰,陈策实[4]（2018）在《类泛素蛋白及其中文命名》一文中研究指出泛素家族包括泛素及类泛素蛋白,约20种成员蛋白.近年来,泛素家族领域取得了迅猛发展,并已与生物学及医学研究的各个领域相互交叉.泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬机制的发现分别于2004和2016年获得诺贝尔奖.但是,类泛素蛋白并没有统一规范的中文译名. 2018年4月9日在苏州召开的《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》专着的编委会上,部分作者讨论了类泛素蛋白的中文命名问题,并在随后的"泛素家族、自噬与疾病"(Ubiquitinfamily,autophagy anddiseases)苏州会议上提出了类泛素蛋白中文翻译草案,此草案在参加该会议的国内学者及海外华人学者间取得了高度共识.冷泉港亚洲"泛素家族、自噬与疾病"苏州会议是由美国冷泉港实验室主办、两年一度、面向全球的英文会议.该会议在海内外华人学者中具有广泛影响,因此,参会华人学者的意见具有一定的代表性.本文介绍了10个类别的类泛素蛋白的中文命名,系统总结了它们的结构特点,并比较了参与各种类泛素化修饰的酶和它们的生物学功能.文章由45名从事该领域研究的专家合作撰写,其中包括中国工程院院士1名,国家"千人计划"学者4名,长江学者3名,国家杰出青年科学基金获得者18名和美国知名高校华人教授4名.他们绝大多数是参加编写即将由科学出版社出版的专着《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》的专家.(本文来源于《科学通报》期刊2018年25期）
周琼琼[5]（2018）在《类泛素蛋白FAT10通过稳定小窝蛋白3抑制缺血/缺氧诱导的心肌凋亡》一文中研究指出研究背景:Caveolins(Cavs)是小窝的基本成分,在许多细胞类型中起信号转导调节作用。Caveolin-3(Cav-3)是Cavs家族成员之一,主要表达于心肌细胞的小窝蛋白。越来越多的研究表明,Cav-3在心血管疾病中扮演重要角色,且具有抗心肌细胞凋亡作用。但是,在缺血缺氧损伤心肌细胞中Cav-3的调控机制仍不清楚。大量研究报道,泛素-蛋白酶体系统(UPS)与缺血性心脏病的心功能障碍相关。FAT10(F-Adjacent Transcript-10,FAT10)是最近新发现的一个类泛素蛋白,它包含两个串联的泛素样结构域,参与体内众多蛋白质的翻译后修饰。我们团队首次报道了FAT10具有心肌保护作用。最近,我们团队证实FAT10通过拮抗特异性底物泛素化水平进而稳定底物的表达。然而,在缺血缺氧损伤心肌细胞中FAT10和Cav-3之间的调控关系尚不明确。研究目的:本研究将明确FAT10通过调控Cav-3表达进而抑制缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡,并进一步阐明FAT10调控Cav-3的表达的具体分子机制。这些结果将揭示FAT10通过稳定Cav-3抑制缺血缺氧诱导心肌细胞损伤,并提供实验证据说明FAT10/Cav-3通路可能是缺血性心脏病患者的潜在治疗靶标。研究方法:1.本研究采用CRISPR-Cas9技术构建FAT10敲除(FAT10-KO)大鼠,利用冠状动脉左前降支结扎术(LAD)构建心梗(MI)模型。实验分为四组:野生型大鼠假手术组(WT-Sham)、FAT10-KO大鼠假手术组(FAT10-KO-Sham)、野生型大鼠心梗组(WT-MI)和FAT10-KO大鼠心梗组(FAT10-KO-MI)。2.采用无创血压测定、心电图(ECG)分析心梗术后各组大鼠心功能变化。3.本研究所用细胞包括原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)、H9C2细胞以及HEK-293T。构建FAT10基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体(Lv-FAT10和Lv-shFAT10),调节细胞中FAT10的表达。同时,构建Cav-3基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体(Lv-Cav-3和Lv-sh Cav-3),调节细胞中Cav-3的表达。4.FAT10、Cav-3及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的检测:采用qRT-PCR法和Western Blot法检测缺血/缺氧损伤后心肌组织或心肌细胞中FAT10、Cav-3及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。5.心肌细胞凋亡检测检测:采用流式细胞术及Tunel染色法检测缺血/缺氧损伤后心肌细胞凋亡变化。6.心脏纤维化检测:采用Masson叁色染色法检测心肌组织缺血损伤后纤维化形成情况。7.GST(谷胱苷肽巯基转移酶)pulldown实验:检测FAT10与Ub竞争结合Cav-3。8.体外泛素化实验:检测FAT10对心肌细胞中Cav-3泛素化水平的影响。9.统计学分析:所有实验重复至少3次,所有结果均用GraphPad Prism处理,数据以平均值±标准差表示。组间均数比较采用one-way ANOVA和t检验;P<0.05认为差异有统计学意义。研究结果:1.缺血缺氧损伤心肌细胞中FAT10和Cav-3表达均升高。心梗后,心肌组织中的FAT10和Cav-3蛋白水平显着升高。同时,体外将原代乳鼠心肌细胞进行缺氧处理,发现在与含氧量正常的条件下培养的心肌细胞相比,FAT10和Cav-3的mRNA和蛋白质水平在受到低氧应激的心肌细胞中显着上调。2.FAT10通过调节Cav-3蛋白表达抑制心肌细胞凋亡。为探讨Cav-3对缺氧应激后心肌细胞凋亡的影响,Western Blot和Tunel结果分析显示,与sh-NC组相比,Sh-Cav-3可显着增加缺氧应激反应后心肌细胞凋亡,并且FAT10与Cav-3蛋白表达呈现正相关。为进一步证明上述结果,本研究于沉默心肌细胞中过表达Cav-3,结果显示与阴性对照组相比,Lv-Cav-3组心肌细胞低氧应激后,Caspase3表达显着下降。3.Cav-3是FAT10拮抗心肌细胞凋亡的关键分子。为进一步明确FAT10对缺血心脏中Cav-3表达和心肌细胞凋亡的影响。在NRCMs内转染Lv-FAT10的同时转染Lv-shCav-3,Western Blot结果显示Cleaved-caspase3表达升高,Tunel染色则显示细胞凋亡增加;在转染Lv-shFAT10的同时,转染Lv-Cav-3,Western Blot结果显示Cleaved-caspase3表达降低,Tunel染色则显示细胞凋亡减少。这些证据表明FAT10通过增加Cav-3表达来保护心肌细胞免受缺血性损伤,并提示FAT10参与心梗诱导的心肌细胞凋亡。4.FAT10敲除加重心梗后心脏功能障碍并增加心肌细胞凋亡。研究发现FAT10-KO大鼠心梗术后组织切片Tunel染色发现FAT10-KO-MI组心肌细胞凋亡增加,纤维染色分析同时发现FAT10-KO组心梗术后心肌纤维化更明显(*p<0.05 vs WT-MI)。5.心肌细胞中Cav-3经泛素修饰。为探索FAT10在心肌细胞中对Cav-3表达的调节机制。由于FAT10与Ub结构及功能的相似性,我们需要明确Cav-3是否经泛素化降解。研究发现NRCMs经放线菌酮(CHX)处理后,Western Blot结果显示Cav-3表达下降,而经CHX与蛋白酶体抑制剂(MG132)同时处理后,Western Blot结果显示Cav-3变化不明显,说明Cav-3蛋白表达与UPS相关。6.Cav-3在心肌细胞中经UPS降解。为进一步证实Cav-3经UPS系统降解,我们于H9C2细胞中检测Ub下调后Cav-3泛素化水平变化。Co-IP和体内泛素化检测结果均显示Cav-3在心肌细胞中经UPS降解。7.FAT10通过减少Cav-3泛素化水平进而稳定其表达。上述实验显示Cav-3在心肌细胞中经UPS降解,并且我们先前研究报道FAT10通过拮抗蛋白泛素化来调节底物表达。因此,我们推测FAT10通过影响Cav-3泛素化从而调节其表达。Co-IP结果显示过表达FAT10后,Ub-Cav-3结合物表达减少,而Cav-3表达升高。8.Cav-3蛋白中,FAT10与Ub作用位点相同。我们推测FAT10通过与Ub竞争结合心肌细胞中Cav-3的相同结合位点而影响Cav-3泛素化水平。实验根据Cav-3功能域不同将Cav-3切割为叁个片段质粒,Co-IP结果显示FAT10和Ub仅与片段I(D1)存在相互结合,我们将D1中四个赖氨酸位点进行突变,Co-IP结果发现突变后D1与FAT10和Ub结合作用消失。9.FAT10与Ub竞争结合Cav-3并影响其表达。本研究通过使用GST pulldown实验在竞争过程中分析Cav-3与FAT10或Ub的结合情况。研究数据表明FAT10稳定Cav-3是由于FAT10与Ub竞争结合Cav-3并随后减少心肌细胞中Cav-3泛素化降解。结论:1.在缺血心肌组织和缺氧心肌细胞中,FAT10和Cav-3表达均上调。2.过表达FAT10增加Cav-3的表达并抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡。3.Cav-3是FAT10缺氧诱导的心肌细胞凋亡中蛋白调节关键效应物。4.FAT10敲除通过减少缺血大鼠心脏中Cav-3表达,加重了心脏损伤并增加心肌细胞凋亡。5.Cav-3在心肌细胞中经泛素—蛋白酶体系统(UPS)降解。6.心肌细胞中,FAT10通过拮抗底物泛素化稳定Cav-3的表达。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-05-01）
徐璐[6]（2018）在《类泛素蛋白UFM1对细胞衰老作用的研究》一文中研究指出UFM1(the ubiquitin-fold modifier 1)是在十多年前被发现的一种类泛素蛋白,结构与泛素相似。与泛素化相似,UFM1修饰通过叁步酶促反应共价修饰靶蛋白,其中包括UFM1激活酶(UBA5,E1-like),UFM1结合酶(UFC1,E2-like)和UFM1连接酶(UFL1,E3-like)。细胞衰老是指细胞感应内外环境包括端粒功能障碍、DNA损伤、癌基因激活以及丝分裂刺激等因素的核心机制。进入衰老状态后,细胞将不再分裂,其形态和代谢也会随之发生巨大的改变。细胞衰老对肿瘤抑制以及机体衰老都具有至关重要的作用。据文献报道,UFM1级联反应异常与多种人类疾病有关,尤其是衰老相关疾病。因此我们推测类泛素蛋白UFM1与细胞衰老有着密切的关系。我们建立了叁种细胞衰老模型,在实验过程中,我们发现UFM1在复制性衰老细胞中具有一定的上调现象。同时,在用H_2O_2和X射线处理的诱导型衰老细胞中也得到了验证。为了进一步研究UFM1在细胞衰老中的具体作用,我们制备了敲低UFM1的慢病毒。当通过慢病毒敲低细胞中UFM1的表达时发现,敲低UFM1可诱导WI38细胞衰老表型。另外,实验发现敲低UFM1引起的细胞衰老可能与内质网应激和氧化应激的发生有关,其具体的机制有待进一步研究。因此,阐明UFM1修饰在细胞衰老中作用的研究,将对肿瘤抑制以及各类衰老相关疾病的预防和治疗有十分重要的作用。目前ufmylation的底物已报道的只有ASC1和DDRGK1,我们相信还有更多的底物蛋白将会通过UFM1的修饰在生物体内起到必不可少的作用,通过对UFM1级联反应复杂的作用机制进一步研究,将会对生物体中的生命活动有一个新的认知。(本文来源于《杭州师范大学》期刊2018-03-01）
金鑫[7]（2017）在《原核类泛素蛋白—蛋白酶体系统基因在分枝杆菌中的功能探讨》一文中研究指出目的:Pup-蛋白酶体系统存在于耻垢分枝杆菌和结核分枝杆菌中,用于调控错误折迭蛋白、毒性蛋白、调节蛋白等多种蛋白质的降解过程,并与致病性、持留性和氨基酸循环有关。Pup-蛋白酶体系统中的重要组成成分原核类泛素蛋白Pup、去酰胺酶Dop、蛋白酶体在靶蛋白的识别标记以及降解作用的发挥方面起关键作用。本研究敲除编码Pup-蛋白酶体系统重要组成成分的关键基因,由于敲除多个关键基因,理论上会严重影响并阻断Pup-蛋白酶体系统正常运转,足以清晰的认识Pup-蛋白酶体系统这一整体在分枝杆菌的生理功能中的作用。通过模拟多种生存模式,观察其生长发生的动态变化,以探究Pup-蛋白酶体系统与分枝杆菌多种应激条件下生存的关系,为进一步探究该系统在结核分枝杆菌与机体免疫系统之间相互作用过程中的作用机理提供一定的实验依据。方法:在耻垢分枝杆菌中将编码Pup-蛋白酶体系统的基因pup、dop、prcA、prcB用同源重组的方法进行联合敲除,并在得到的敲除株中回补入这四个基因。检测得到的敲除株和野生株在正常条件、厌氧条件、厌氧加药条件以及营养缺乏条件下的生长情况。结果:在耻垢分枝杆菌中成功敲除和回补pup、dop、prcA、prcB这四个Pup-蛋白酶体系统重要基因。敲除株在正常培养条件下与野生株相比没有显着变化,只是在培养后期生长速度有所减慢。在正式进入厌氧阶段时敲除株的生长速度和活菌数相比野生株有一定程度的下降。厌氧加异烟肼的敲除株的生长速度显着落后于同样厌氧加异烟肼的野生株。在营养缺乏的条件下,敲除株生长速度快速下降。结论:Pup-蛋白酶体系统与耻垢分枝杆菌在应激条件下的生存有关,为Pup-蛋白酶体系统在结核分枝杆菌中与宿主内环境下持留的相互作用关系提供了更多的线索,以及为探索结核分枝杆菌持留致病新机制奠定了基础。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2017-06-01）
胡昌昌[8]（2017）在《类泛素蛋白ISG15对乙型肝炎病毒相关性肝癌细胞Hep3B的生物学行为的影响》一文中研究指出目的:研究乙型肝炎相关性肝癌细胞Hep3B在ISG15蛋白表达被干扰后,其增殖、迁移、侵袭、凋亡、周期的变化。方法:1、将表达shRNA的质粒转染入Hep3B细胞。2、干扰ISG15蛋白表达前后细胞增殖能力的改变情况利用CCK-8检测试剂及酶标仪进行检测。3、干扰ISG15蛋白表达前后细胞侵袭和迁移能力的变化利用Transwell小室及人造基底膜检验。4、干扰ISG15蛋白表达前后细胞凋亡特点和细胞周期的改变的检测通过流式细胞仪完成。结果:1、ISG15蛋白的表达被干扰后,Hep-3B细胞的增殖能力明显地受到抑制(P<0.01)。2、干扰ISG15蛋白的表达导致Hep-3B细胞的迁移能力、侵袭能力均显着减弱(P<0.01)。3、干扰ISG15蛋白的表达能促进肝癌细胞凋亡(P<0.01),而且以早期凋亡为主。4、ISG15蛋白的表达被干扰后,处于S期的Hep-3B细胞比例明显上升,G1期细胞比例降低(P<0.01);结合增殖实验的结果,表明细胞发生了S期阻滞。结论:ISG15蛋白与肝癌的发生发展关系密切,它能促进Hep3B细胞的增殖、迁移、侵袭,能抑制Hep3B细胞的凋亡。减少ISG15蛋白的表达可将细胞周期阻滞于S期。(本文来源于《南昌大学》期刊2017-06-01）
管超建[9]（2017）在《多聚泛素及类泛素蛋白的化学合成研究》一文中研究指出蛋白质的泛素化及类泛素化修饰在真核生物细胞内广泛存在并参与了大部分重要的细胞生命过程,包括信号传导、DNA损伤修复、蛋白降解等。不同底物的泛素及类泛素化修饰类型多种多样且具有不同的功能,保证了修饰功能的多样性和特异性。目前有相当一部分具有重要功能的泛素及类泛素蛋白由于缺乏特异性的酶促合成系统而不易获取。同时,获取纯净均一的泛素探针用于研究去泛素化酶的水解机制更为困难。蛋白质化学合成技术凭借其能够在原子尺度精准构筑蛋白质的优势,在传统生物酶法获取泛素、类泛素蛋白存在制约的情况下,提供了一种行之有效的策略。本文研究工作以蛋白质化学合成技术为工具,围绕泛素及类泛素蛋白的化学合成开展研究。首先通过使用本课题组发展的一锅法两片段连接-脱硫策略,我们高效地合成了类泛素化蛋白NEDD8以及泛素探针Ub-AMC,与前人方法相比合成步骤更少,效率更高。此后,作者又运用基于非天然氨基酸定点嵌入的蛋白质半合成方法对多聚泛素链的合成进行了探索。我们首先通过嵌入Alloc-Lys并使用Boc保护其他赖氨酸侧链氨基的方法成功制备了可用于连接的泛素片段;此后运用辅基介导的自然化学连接反应来实现泛素片段间异肽键的高效制备。本研究工作中成功制备的赖氨酸48位(K48)形成异肽键的二泛素验证了上述策略的可行性。本工作为进一步化学合成其他位点的多聚泛素、类泛素链提供了一种普适性方法,进而为阐明蛋白质泛素、类泛素化修饰的特异性识别、降解机制提供基础。(本文来源于《合肥工业大学》期刊2017-03-01）
白东[10]（2016）在《类泛素蛋白FAT10在肝癌中的表达及生物学作用》一文中研究指出目的探讨类泛素蛋白FAT10在肝癌细胞中的异常表达和功能活化及其分子机制。方法将38例肝癌大鼠随机分为空白组、pc DNA3.1-FAT10组、FAT10 si RNA组。采用RT-PCR法检测肝癌及癌旁组织中FAT10 m RNA的表达水平,电穿孔法分别将FAT10 si RNA和重组表达载体pc DNA3.1-FAT10转染人肝癌SMMC-7721后,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,RT-PCR检测PI3K/Akt通路的变化。结果 FAT10 m RNA在大鼠肝癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),沉默FAT10后,对细胞周期无明显影响,细胞凋亡率上升,PI3K/Akt信号通路表达下调;促进FAT10表达后,对细胞周期无明显影响,细胞凋亡率显着下降,PI3K/Akt通路表达上调。结论 FAT10可通过上调PI3K/Akt通路表达,减少细胞凋亡,增强肝癌细胞的侵袭能力,FAT10可能成为预防和治疗肝癌的靶点。(本文来源于《中国当代医药》期刊2016年25期）
类泛素蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目前对于蛋白适盐机制的研究多集中于定性方面,且比较笼统,存在一些自相矛盾的地方,而对于更细致的如氨基酸不同的位置及不同的氨基酸类型对蛋白质适盐性的定量影响还没有人研究过。前期研究发现嗜盐古菌类泛素蛋白Samp2在低盐下不如高盐下折迭的好,而单点突变体Samp2-D31G在低盐下就可达到完全折迭状态;根据序列分析发现真核类泛素蛋白在与Samp2第31位点相对应的结构位点上的氨基酸均为G(甘氨酸)。因此,我们把Samp2及其它类泛素蛋白作为研究对象,旨在通过对它们适盐性机制的研究,为根据特定应用环境的盐条件有针对性地对蛋白质进行改造或设计使其更好地适应应用环境提供理论基础。本研究运用定点突变结合远紫外圆二色谱、内源荧光、分子筛等方法研究不同位置及类型的氨基酸对Samp2和其它类泛素蛋白适盐性的影响。首先构建了Samp2第31位点不同氨基酸类型的突变体并表达纯化。内源荧光检测显示不同盐浓度下Samp2-D31位点各突变体的整体叁级结构基本不变;分子筛检测显示不同盐浓度下各突变体的四级结构也分别相同;但CD检测显示将31位点D(天冬氨酸)突变为带正点的氨基酸或不带电的氨基酸要比突变为带负电荷的氨基酸在低盐下折迭得好且热稳定性更高。这些结果说明Samp2的适盐性与氨基酸所带电荷相关。另外,本研究的结果还显示,Samp2上loop区的D/E突变为G的突变体在低盐条件下折迭情况比二级结构区域的相同类型突变体要好,说明Samp2的适盐性与负电氨基酸所在位置的柔性或溶液可及性相关。基于以上研究成果,将布氏椎体虫类泛素蛋白上与Samp2第31位点相对应的G突变为D,检测突变体的适盐性,以验证两种类型氨基酸在类泛素蛋白进化和适应不同盐环境中的角色。结果显示,虽然多数突变体在高盐环境中的二级结构和叁级结构与低盐下相同,且与野生型一致,但Tb-Nedd8-G36D在高盐下的折迭程度要高于低盐,支持负电氨基酸有助于蛋白质适应高盐环境的结论。不过,对蛋白质结构稳定性的检测结果显示,Tb-UB-G35D在低盐和高盐下的稳定性均低于Tb-UB,与以上结论相悖。这些结果提示氨基酸类型与蛋白质适盐性之间关系的复杂性,有待进一步深入研究来阐明。本研究对Samp2蛋白及其它类泛素蛋白适盐性的探索有助于我们加深对蛋白质适盐机制的理解,同时也为蛋白质进化和折迭机制的阐明提供了素材。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
类泛素蛋白论文参考文献
[1].豆芳芳,龚小庆,邹养军.苹果类泛素蛋白MdRAD23C2基因的分离及功能鉴定[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2019
[2].李权.氨基酸侧链基团与类泛素蛋白适盐性的关系研究[D].安徽大学.2019
[3].郝术安,王钧.类泛素蛋白FAT10在肺鳞癌中的表达及生物学作用[J].中国中西医结合外科杂志.2018
[4].魏文毅,孙毅,曹诚,常智杰,陈策实.类泛素蛋白及其中文命名[J].科学通报.2018
[5].周琼琼.类泛素蛋白FAT10通过稳定小窝蛋白3抑制缺血/缺氧诱导的心肌凋亡[D].南昌大学.2018
[6].徐璐.类泛素蛋白UFM1对细胞衰老作用的研究[D].杭州师范大学.2018
[7].金鑫.原核类泛素蛋白—蛋白酶体系统基因在分枝杆菌中的功能探讨[D].吉林农业大学.2017
[8].胡昌昌.类泛素蛋白ISG15对乙型肝炎病毒相关性肝癌细胞Hep3B的生物学行为的影响[D].南昌大学.2017
[9].管超建.多聚泛素及类泛素蛋白的化学合成研究[D].合肥工业大学.2017
[10].白东.类泛素蛋白FAT10在肝癌中的表达及生物学作用[J].中国当代医药.2016