导读:本文包含了人视网膜血管内皮细胞株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小檗碱,人视网膜血管内皮细胞,高糖,血管内皮生长因子
人视网膜血管内皮细胞株论文文献综述
陈晓怡[1]（2019）在《小檗碱在高糖环境下对人视网膜血管内皮细胞的增殖及VEGF表达的影响》一文中研究指出目的:研究不同浓度小檗碱(Berberine,BBR)在高糖环境下对体外培养的人视网膜血管内皮细胞(Human retina vascμLar endothelial cells,HRCECs)增殖及血管内皮生长因子(VascμLar endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:以人眼球提取的视网膜血管内皮细胞用作研究对象,在高糖培养基内模拟糖尿病环境建立人视网膜血管内皮细胞模型,运用免疫荧光法进行视网膜血管内皮细胞鉴定。实验分为低糖组、高糖组、高糖+5μmol/L小檗碱组、高糖+10μmol/L小檗碱组、高糖+20μmol/L小檗碱组、高糖+40μmol/L小檗碱组。HRCECs经不同浓度药物处理后,分别于加药后12小时、24小时、36小时采用MTT法检测药物在高糖环境下对HRCECs增殖的影响,采用免疫印记法检测不同浓度药物对HRCECs中VEGF的表达量的影响。结果:1.MTT结果显示:(1)HRCECs在体外培养12小时、24小时、36小时后低糖组细胞数量明显少于高糖组细胞数量,具有统计学差异(P<0.05);(2)当小檗碱在高糖环境下对HRCECs作用时间相同时,对比高糖组不同浓度小檗碱(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)加药组,对细胞增殖均具有抑制(P<005),且浓度越高抑制作用越明显;(3)当小檗碱浓度相同时,同一浓度药物对体外HRCECs分别作用12小时、24小时、36小时,对比高糖组不同时间段加药组对HRCECs均有抑制作用,且药物作用时间越长,抑制作用越明显,具有统计学差异(P<0.05);(4)对比高糖组HRCECs,在实验范围内,小檗碱浓度越高、作用时间越长对细胞抑制作用越明显。2.Western blot结果显示:(1)当HRCECs在体外培养时间为12小时、24小时、36小时时,高糖组细胞中VEGF的量明显高于低糖组VEGF量(P<0.05);(2)当HRCECs中加入不同浓度小檗碱(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)作用时间分别为12小时、24小时、36小时时,细胞中VEGF的表达较高糖组中的表达明显减少(P<0.05),在实验范围内呈浓度及时间依赖性;(3)不同浓度小檗碱加药间两两比较,组间细胞中VEGF的表达具有显着差异性(P<0.05)。结论:(1)相较于低糖环境,高糖环境有利于视网膜血管内皮细胞增殖,并能够促进HRCECs中VEGF的表达;(2)小檗碱能抑制高糖环境下培育的HRCECs增殖,且在实验范围内随浓度、时间增加抑制作用增强;(3)小檗碱能下调高糖环境下生长的HRCECs中VEGF的表达,且与浓度及时间呈正相关。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）
郎海波[2]（2019）在《TRPC1、3、6对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞的作用及机制研究》一文中研究指出目的TRPCs广泛分布于各种内皮细胞膜上,而且被明确证实参与许多组织血管内膜损伤后新生血管发生,但在人糖尿病视网膜血管病变发生发展过程是否起到调节作用目前鲜有报道。我们前期实验证实TRPC1、TRPC6在基因水平参与人视网膜血管内皮细胞株的增殖迁移及管腔形成,机制与调节VEGF表达相关,本实验将从蛋白水平验证TRPC1、TRPC3、TRPC6在人视网膜血管内皮细胞株中的作用及与VEGF表达的关系。材料与方法1.将HREC分为叁组,分别加入含5.5mM葡萄糖、30mM葡萄糖以及24.5mM甘露醇+5.5mM葡萄糖培养基,干预24、48小时后提取细胞总蛋白,检测高糖对TRPC不同亚型(TRPC1、TRPC3、TRPC6)的蛋白表达影响;2.将HREC分为5组(30mM葡萄糖、30mM葡萄糖+2mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+4mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+8mg/L SKF96365、30mM葡萄糖+16mg/L SKF96365,注:SKF96365是TRPC通道阻滞剂),干预24、48小时后提取细胞总蛋白,检测TRPC通道抑制剂对高糖诱导的细胞VEGF的蛋白表达影响;3.将HREC分为叁组,饥饿处理24小时,后分别加入含5.5mM葡萄糖、30mM葡萄糖以及24.5mM甘露醇的正常培养基,将细胞转移到放置载玻片的12孔板内,设置4个复孔,培养24小时待细胞贴壁,取出载玻片进行细胞爬片免疫组化,观察在高糖影响下TRPC1、TRPC3、TRPC6的定量和定位表达,通过倒置相差显微镜拍摄记录;4.将HREC分为5组,饥饿处理24小时后加入30mM葡萄糖、30mM葡萄糖+2mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+4mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+8mg/L SKF96365、30mM葡萄糖+16mg/L SKF96365,将细胞加入放置载玻片的24孔板内,设置4个复孔,待细胞贴壁,加入不同浓度的TRPC干预剂SKF96365高糖培养基干预24 h后,取出载玻片进行细胞爬片免疫组化,观察在TRPC通道抑制剂作用下细胞VEGF的定量和定位表达,通过倒置相差显微镜拍摄记录;结果1.Western blot结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮细胞株24、48小时后TRPC1在蛋白水平表达增高(P<0.05),时间依赖性不明确,高渗组TRPC1蛋白表达差异无统计学意义,TRPC3、TRPC6蛋白水平表达差异无统计学意义(P>0.05);2.Western blot结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮在不同浓度TRPC通道抑制剂SKF96365干预24、48小时后,4、8、16mg/L SKF96365干预组抑制细胞VEGF表达降低,呈浓度和时间依赖性(P<0.05);3.细胞爬片免疫组化(IHC)结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮细胞株24小时后TRPC1在蛋白水平表达增高(P<0.05),高渗组TRPC1蛋白表达差异无统计学意义;可以看到TRPC1在细胞的定位主要是在细胞膜与细胞质。TRPC3、TRPC6蛋白水平表达差异无统计学意义(P>0.05);4.细胞爬片免疫组化(IHC)结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮在不同浓度TRPC通道抑制剂SKF96365干预24小时后,2 mg/L、4 mg/L、8mg/L、16mg/L SKF96365干预组细胞VEGF表达显着下调(P<0.05),呈浓度依赖性。可以看到VEGF在细胞的定位主要是在细胞膜与核周。结论1.高糖可诱导人视网膜血管内皮细胞株的TRPC1蛋白表达增高;2.阻断TRPC通路抑制高糖诱导人视网膜血管内皮细胞株上调VEGF的表达量。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
蔡晖,石华宗,杨豫湘[3]（2019）在《过表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞增殖、炎症反应及血管生成的影响》一文中研究指出目的检测过表达低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HREC)增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法将体外培养HREC转染人工合成的pEGFP-HIF-1α重组载体,并采用荧光定量PCR检测转染前后HREC中HIF-1α的表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot分别检测过表达HIF-1α对HREC增殖、炎症反应及血管生成的影响。结果体外转染pEGFP-HIF-1α可显著增加HREC中HIF-1αmRNA和蛋白表达。过表达HIF-1α可显著促进HREC增殖,HREC转染p EGFP-HIF-1α后24 h、48 h及72 h A值分别为:0. 34±0. 04、0. 57±0. 04、0. 83±0. 05,而HREC转染pEGFP-C1后24 h、48 h及72 h A值分别为:0. 26±0. 03、0. 44±0. 04、0. 61±0. 04,两者相比差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β及IL-6的蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(2. 63±0. 57) ng·L~(-1)、(1. 94±0. 41) ng·L~(-1)、(5. 32±0. 83) ng·L~(-1),而转染p EGFP-C1后HREC中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(1. 20±0. 34) ng·L~(-1)、(0. 66±0. 27) ng·L~(-1)、(1. 89±0. 60) ng·L~(-1),两者相比差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达,转染p EGFP-HIF-1α后细胞VEGF蛋白的表达为6. 72±0. 96,而转染p EGFP-C1后细胞VEGF蛋白的表达为2. 31±0. 47,两者相比差异有统计学意义(P <0. 05)。结论过表达HIF-1α可促进体外培养HREC增殖、炎症反应及血管的生成。(本文来源于《眼科新进展》期刊2019年01期）
赵子畅[4]（2018）在《膜联蛋白A2在人视网膜血管内皮细胞中的作用与机制研究》一文中研究指出研究目的探讨膜联蛋白A2(ANXA2)在人视网膜血管内皮细胞(HRECs)中的作用及机制,为视网膜新生血管相关疾病的预防和治疗寻找新靶点。研究方法选取64只健康C57BL/6J小鼠,随机分为对照组和实验组各32只,实验组利用高氧诱导法构建经典的氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型,对照组无处理,利用凝集素GS-IB4荧光染色技术观察小鼠视网膜新生血管(RNV)情况,利用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,验证OIR小鼠模型构建是否成功;利用Western Blot,RT-PCR,检测小鼠视网膜中ANXA2的表达情况,以验证ANXA2在体内视网膜新生血管病变中的作用。利用干扰ANXA2组质粒(对照组:shNC,实验组:shA2)和过表达ANXA2组质粒(对照组:lenti-EGFP,实验组:lenti-A2)包装为慢病毒感染人视网膜血管内皮细胞(HRECs),利用Western Blot和RT-PCR检测在HRECs中是否成功干扰和过表达ANXA2。通过EdU细胞增殖实验、Transwell细胞迁移实验和Matrigel基质胶管样形成实验检测ANXA2对HRECs形成新生血管功能的影响。采用流式细胞仪检测ANXA2对HRECs细胞周期的影响,并用Western Blot检测一系列细胞周期相关蛋白的表达水平。利用基因芯片技术分析ANXA2在基因水平调控HRECs的分子表达谱差异,用RT-PCR验证基因芯片中表达较为稳定分子,利用Western Blot和核蛋白提取技术检测头帕肿瘤综合征蛋白(CYLD)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκBα)、核因子κB(NFκB)亚基p65蛋白的表达水平,探讨ANXA2对CYLD和NFκB信号通路的影响。研究结果本实验构建的OIR小鼠模型视网膜与正常小鼠视网膜相比,新生血管迂曲扩张分布杂乱,血管分层不清且HIF-1α的基因和蛋白表达水平明显升高(mRNA t=25.57,P<0.0001),成模率达81%。同时我们发现OIR组中ANXA2的基因和蛋白表达水平明显提高(mRNA t=26.58,P<0.0001)。同阴性对照组相比,干扰ANXA2后ANXA2的基因和蛋白表达水平均降低(mRNA t=5.248,P=0.0063),过表达ANXA2后ANXA2的表达水平均升高(mRNA t=28.95,P<0.0001)。干扰ANXA2后HRECs细胞增殖量、细胞迁移量和细胞管状结构明显减少(t=10.23,P=0.0005;t=11.27,P=0.0004;t=15.37,P=0.0001),而过表达ANXA2后其叁者量均增加(t=3.21,P=0.0326;t=20.19,P<0.0001;t=7.155,P=0.0020)。流式细胞仪检测结果采用ModFit software软件分析,与阴性对照组相比,干扰ANXA2后处于G1期的细胞数量增加,S期细胞数量减少(t=5.01,P=0.0074;t=4.51,P=0.0107),而过表达ANXA2后处于G1期的细胞数量减少,S期细胞数量增加(t=4.275,P=0.0129;t=4.915,P=0.0080);细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4和CDK6的蛋白在干扰ANXA2后表达水平减少(t=2.835,P=0.0471;t=3.434,P=0.0264;t=7.317,P=0.0019),过表达ANXA2后表达水平增加(t=4.147,P=0.0143;t=4.009,P=0.016;t=6.710,P=0.0026),而CyclinA1、CyclinB1、CyclinE1和CDK2的表达水平没有明显变化。同阴性对照组相比,干扰ANXA2后CYLD的基因和蛋白表达水平均升高(t=8.44,P=0.0011;t=9.848,P=0.0006),过表达ANXA2后CYLD的表达水平均降低(t=12.11,P=0.0003,t=6.054,P=0.003)。由于CYLD为NFκB信号通路的主要负向调节因子,我们检测了与NFκB信号通路有关的蛋白表达,发现同对照组相比,干扰ANXA2后IκBα磷酸化和核内p65的蛋白表达量均减少(t=7.29,P=0.0019;t=4.901,P=0.008),过表达ANXA2后两者表达量均增多(t=3.474,P=0.0255;t=6.069,P=0.0037)。研究结论膜联蛋白A2能够促进人视网膜血管内皮细胞的增殖、迁移和管样形成,可能是通过调节HRECs细胞周期中G1-S期的转化和抑制去泛素化酶CYLD的活性,激活NFκB信号通路来发挥作用。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2018-11-01）
范可顺[5]（2018）在《丹参酮ⅡA对高糖环境中人视网膜血管内皮细胞体外生物学作用的研究》一文中研究指出目的:糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)作为糖尿病最常见和最严重的并发症,危害较大。本研究以人视网膜血管内皮细胞(Human retinal endothelial cells,HRECs)作为研究对象,通过体外实验,在细胞水平研究高葡萄糖环境对HRECs的增殖、迁移和血管成形能力等生物学作用的影响;比较丹参酮IIA(Tanshinone IIA,TSA)对正常葡萄糖环境和高糖环境中HRECs增殖的影响;以及TSA在高糖环境中对HRECs迁移和血管成形能力等生物学作用的影响;进一步检测TSA对高糖环境中HRECs中的VEGF和ICAM-1二个重要分子的转录与表达的影响,以探讨TSA防治糖尿病视网膜病变的可能及相关机制。方法:1、利用CCK8法,分别检测在正常葡萄糖(Normal glucose,NG)和高葡萄糖(High glucose,HG)环境下,不同药物浓度、不同作用时间下,丹参酮IIA(TSA)药物对HRECs的增殖能力的影响。所设立的TSA药物浓度梯度为10、20、30μg/ml,CCK8检测的时间点分别为24 h、48 h、72 h;2、利用细胞划痕实验和transwell实验检测在高糖环境中,不同浓度TSA药物对HRECs的迁移能力的影响。划痕实验中应用倒置荧光显微镜记录0 h、24 h、48 h的伤口愈合情况;transwell实验记录药物作用24 h后迁移的细胞数量;3、利用体外血管成形实验,比较在高糖环境中不同浓度TSA药物作用下,各组细胞成管化情况,以此获知TSA对HRECs血管成形的影响;4、采用q RT-PCR、Western blot和Immunofluorescence技术,分析在高糖环境中,不同浓度TSA药物作用下,HRECs中的VEGF和ICAM-1的m RNA及蛋白水平表达的变化;5、所有数据均用SPSS 13.0软件行统计分析。定量数据以均数±标准差(x±s)表示,主要采用两组数据的独立样本t检验和多组数据的单因素方差分析(One-way ANOVA),对于连续测量数据,采用了重复测量数据的方差分析方法。组间两两比较采用LSD方法比较。P<0.05认为差异有显着性意义。结果:1、CCK8法实验中,高糖环境的刺激促进HRECs的增殖;在正常葡萄糖浓度下,HRECs的增殖能力不受TSA药物的影响;在高糖环境中,HRECs的增殖能力受到TSA的抑制,并呈现时间剂量浓度依赖性,随着TSA浓度的增加、作用时间的延长,TSA抑制细胞增殖的能力逐渐加强。在作用72 h,TSA高浓度组(HG-30组)细胞增殖受到抑制最明显;2、划痕实验和transwell实验结果一致:相对于正常葡萄糖环境,高糖环境促进HRECs的迁移;在高糖环境中,TSA抑制HRECs的迁移,并呈现剂量浓度依赖性,TSA高浓度组(HG-30组)抑制迁移的能力最明显;3、体外成管实验显示,与正常葡萄糖环境相比,高糖环境中HRECs的成管能力数量和大小均较强;但在高糖环境中,TSA对HRECs的成管能力有抑制作用,并呈现剂量浓度依赖性,TSA高浓度组(HG-30组)抑制血管成形的能力最明显;4、q RT-PCR、Western blot和Immunofluorescence实验结果显示:与正常葡萄糖浓度环境相比,在高糖环境中HRECs的VEGF及ICAM-1的转录与表达增强;但在高糖环境中,TSA会明显下调VEGF的m RNA及蛋白水平的表达,并呈现剂量浓度依赖性;TSA会明显降低ICAM-1的蛋白水平的表达,并呈现剂量浓度依赖性。TSA高浓度组(HG-30组)抑制VEGF及ICAM-1的转录及表达的效果最显着。结论:1、在高糖环境中,与正常葡萄糖环境相比,HRECs的增殖、迁移和成管能力均有一定的促进作用;2、TSA对高糖环境中培养的HRECs的增殖能力有一定的抑制作用,并呈现时间剂量浓度依赖性;对HRECs的迁移和成管能力有一定的抑制作用,并呈现剂量浓度依赖关系;而TSA对正常葡萄糖环境中培养的HRECs的增殖能力无明显抑制作用;3、在高糖环境中,HRECs的VEGF和ICAM-1的m RNA及蛋白表达增多;而TSA能显着抑制高糖环境中HRECs的VEGF和ICAM-1的m RNA及蛋白表达,且呈现剂量浓度依赖关系。(本文来源于《苏州大学》期刊2018-05-01）
刘高勤,陆培荣[6]（2017）在《重组人血小板源性生长因子对人视网膜血管内皮细胞作用和机制的研究》一文中研究指出背景:视网膜新生血管形成是多种视网膜血管性疾病的主要病理机制。研究表明重组人血小板源性生长因子-BB(rhPDGF-BB)在视网膜新生血管形成的过程中发挥作用,了解其对人视网膜血管内皮细胞(HRECs)的作用及其机制有助于临床上对视网膜血管性疾病的靶向治疗研究。目的:探讨PDGF-BB对人视网膜血管内皮细胞增殖、迁移的影响及作用机制。方法:分别以0、10、50和200 ng/ml浓度的人重组PDGF-BB蛋白干预对数生长期的HRECs,CCK8法检测细胞增殖的情况,划痕法检测细胞的迁移能力,RT-PCR法检测HRECs中PDGF-BB受体的表达情况,Realtime-PCR法检测HRECs中VEGF、Integrin基因表达水平的变化。结果:HRECs在基因水平表达PDGF-BB的受体PDGF-BBR。0、10、50和200 ng/ml PDGF-BB蛋白干预HRECs 24h后,对应的OD值分别为1.01±0.05、1.09±0.04、1.10±0.02和1.13±0.05,差异有统计学意义;划痕后24h,0、10、50和200 ng/ml PDGF-BB蛋白干预组迁移面积与最初裸区面积之比分别为0.42±0.10、0.38±0.09、0.55±0.06和0.61±0.05。划痕后48 h,0、10、50和200 ng/ml PDGF-BB蛋白干预组迁移面积与最初裸区面积之比分别为0.75±0.06、0.81±0.02、0.97±0.02和0.98±0.02,差异具有统计学意义;Realtime-PCR结果显示PDGFBB蛋白能明显提高HRECs中VEGF、Integin基因的表达水平。0、10、50和200 ng/ml PDGF-BB蛋白干预组Integrin基因相对表达量分别为1.06±0.02、1.30±0.10、1.20±0.16、1.27±0.08,VEGF基因相对表达量分别为0.97±0.05、1.06±0.16、1.58±0.18、1.66±0.21,差别有统计学意义。结论:本研究结果显示PDGF-BB蛋白与HRECs细胞表面的受体结合后,能促进HRECs的增殖、迁移,并存在一定的浓度依赖性。其机制可能是通过上调VEGF和Integrin等的表达而发挥促进HRECs增殖与迁移的作用。(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2017-10-26）
晏妮,李振龙[7]（2017）在《川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖的影响》一文中研究指出目的观察川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖的影响。方法将HRCECs细胞分为对照(生理盐水)组、模型(25 mmol/L葡萄糖)组和川芎嗪低、中、高浓度(50、100、200μmol/L)组,培养48 h后,MTT细胞毒实验检测细胞增殖变化,流式细胞技术检测细胞周期,ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果与对照组比较,高糖对HRCECs细胞增殖、分裂(M)期比例、上清VEGF浓度均具有显着促进作用(P<0.05、0.01);与模型组比较,低、中、高浓度川芎嗪对高糖诱导的HRCECs细胞增殖、分裂(M)期比例、上清VEGF浓度均发挥显着抑制作用(P<0.05、0.01),且呈浓度相关性。结论川芎嗪可能通过抑制高糖诱导的HRCECs细胞VEGF高表达,阻滞细胞周期,发挥抑制HRCECs细胞增殖的作用。(本文来源于《药物评价研究》期刊2017年10期）
谢汝欣[8]（2017）在《TRPC对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、迁移以及管腔形成的作用及机制研究》一文中研究指出目的探讨TRPC对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的作用及VEGF表达的影响材料与方法1.将HREC分为叁组,分别加入含5.5、30mM葡萄糖以及30mM甘露醇的培养基,干预24、48小时后提取细胞RNA,检测高糖对TRPC不同亚型(TRPC1、TRPC3、TRPC6)的mRNA表达影响2.将HREC分为六组(5.5mM、30mM、30mM+2mg/LSKF96365、30mM+4mg/L SKF96365、30uM+8mg/L SKF96365、30uM+16mg/L SKF96365),将细胞加入96孔板内,每孔约4000个细胞,待细胞贴壁,饥饿处理24小时后,加入不同浓度糖及TRPC干预剂SKF96365药物干预24 h后,每孔加入CCK-8试剂10μl,37℃培养箱放置2到4 h,酶联仪检测每孔内450nm波长的吸光度(OD值),记录并分析。3.将HREC分为上述六组,将细胞均匀加入到6孔板内,待细胞铺满板底后,无菌黄枪尖垂直板底进行划痕,去除漂浮的细胞后,加入含不同浓度D-葡萄糖和SKF96365的无血清培养基,于含5%CO_2的37℃培养箱中培养,并于0 h、12 h、24 h拍照,Photoshop CS2软件计算迁移距离。4.按上述六组处理细胞24小时,每孔约200μl细胞悬液接种于Transwell小室的上室,下室分别按照分组加入800μl含有不同成分的10%FBS的DMEM培养基,每组设3个复孔,于恒温培养箱中放置16小时固定、染色:取出小室,以棉签头小心刮除掉上室面的细胞,以4%多聚甲醛固定下室面的细胞30 min,然后在0.1%结晶紫下染色20min,PBS冲洗,室温干燥5分钟后置于显微镜下分别观察并统计各组迁移的细胞数目变化。5.按照上述细胞分组将1.5×10~4细胞以及糖和不同浓度药物SKF96365加入到含Matrigel基质胶的96孔板内,培养箱内培养8小时后拍照,管腔数目统计并分析。6.按上述方法将细胞分成六组,加入不同浓度糖和药物SKF96365处理细胞24小时后,抽提RNA,运用RT-PCR技术检测VEGF在mRNA的表达。结果1.PCR结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮细胞24、48小时后TRPC1、TRPC6在基因水平表达增高,呈时间依赖性(P<0.05);8、16mg/LSKF96365干预组人视网膜血管内皮细胞的VEGFmRNA表达下降,(P<0.05)。2.CCK-8结果显示,4、8、16mg/L SKF96365干预组抑制细胞增殖(P<0.05)。3.细胞划痕法检测结果显示,干预12、24 h时,4、8、16mg/L SKF96365干预组HREC迁移距离均明显减少(P<0.05)。4.Transwell结果显示,8mg/L、16mg/L SKF96365干预组,迁移细胞的数量较正常组明显较少(P<0.05)。5.体外成管实验显示,8、16mg/LSKF96365干预组管腔形成减少(P<0.05)。结论1.高糖可诱导人视网膜血管内皮细胞的TRPC1、TRPC6的mRNA表达增高;2.阻断TRPC通路可抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞的增殖、迁移、管腔形成,并且下调VEGF的mRNA表达量。(本文来源于《广西医科大学》期刊2017-05-01）
殷玲利[9]（2017）在《熊果酸在高糖环境下对人视网膜血管内皮细胞的作用及可能机制》一文中研究指出目的:采用高糖培养基培养人视网膜血管内皮细胞(Human retina vascular endothelial cells,HRCECs)建立人视网膜血管内皮细胞体外高糖模型,研究熊果酸(Ursolic acid,UA)在高糖环境下对人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF-A、NF-κB p65表达的影响。方法:以人眼球提取出来的HRCECs作为研究对象,采用高糖培养基培养建立人视网膜血管内皮细胞体外高糖模型,采用不同浓度的熊果酸处理(0umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L、80umol/L UA)。实验分组为:空白对照组、低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度的熊果酸组。运用MTT法检测不同浓度熊果酸对高糖环境下HRCECs增殖的影响,运用Western Blot法检测不同浓度熊果酸对高糖环境下HRCECs中VEGF-A、NF-κB p65的表达水平。结果:1.MTT示:(1)高糖组HRCECs较低糖组明显增加,具有统计学差异(P<0.05);(2)当UA作用时间为24小时、36小时时,不同浓度(10umol/L、20umol/L、40umol/L、80umol/L)UA加药组,较高糖组HRCECs增殖具有明显抑制作用(P<0.05),呈浓度依赖性,且不同浓度UA加药组间两两比较具有显着差异性(P<0.05);(3)当UA作用时间为48小时时,不同浓度(10umol/L、20umol/L、40umol/L、80umol/L)UA加药组,较高糖组HRCECs增殖具有明显抑制作用(P<0.05),呈浓度依赖性,除40umol/L、80umol/L UA加药组间的HRCECs增殖抑制作用无显着差异性,余不同浓度UA加药组间两两比较具有显着差异性(P<0.05);(4)UA对高糖环境下HRCECs增殖起抑制作用,呈浓度、时间正相关。2、Western blot结果:(1)当UA作用时间为24小时、36小时时,高糖组HRCECs中VEGF-A的表达较低糖组明显增加(P<0.05),HRCECs VEGF-A表达量在不同浓度(10umol/L、20umol/L、40umol/L)UA加药组较高糖组中的表达明显减少(P<0.05),呈浓度依赖性,且不同浓度UA加药组间两两比较具有显着差异性(P<0.05);(2)当UA作用时间为48小时时,高糖组HRCECs中VEGF-A的表达较低糖组明显增加(P<0.05),HRCECs VEGF-A表达量在不同浓度(10umol/L、20umol/L、40umol/L)UA加药组较高糖组中的表达明显减少(P<0.05),呈浓度依赖性,除10umol/L、20umol/L UA加药组间无显着差异性,余不同浓度UA加药组间两两比较具有显着差异性(P<0.05);(3)当UA作用时间为24小时、36小时、48小时时,高糖组HRCECs中NF-κB p65的表达较低糖组明显增加,HRCECs NF-κB p65表达量在不同浓度(10umol/L、20umol/L、40umol/L)UA加药组较高糖组中的表达明显减少(P<0.05),呈浓度依赖性,且不同浓度UA加药间两两比较具有显着差异性(P<0.05);(4)UA对高糖环境下HRCECs VEGF-A、NF-κB p65起下调作用,呈浓度正相关。结论:1.熊果酸对体外高糖环境下生长的HRCECs增殖起抑制作用,呈浓度、时间正相关;2.熊果酸降低高糖环境下生长的HRCECs VEGF-A、NF-κB p65含量,呈浓度正相关;3.熊果酸对体外高糖环境下生长的HRCECs的增殖起抑制作用,或许是通过下调HRCECs VEGF-A、NF-κB p65含量而实现的。(本文来源于《南华大学》期刊2017-05-01）
李丹[10]（2017）在《重组人血小板源性生长因子对人视网膜血管内皮细胞作用和机制的研究》一文中研究指出背景:视网膜新生血管导致的视网膜的水肿、出血和脱离是多种视网膜疾病造成视力损伤的重要原因。新生血管的形成是由多种细胞因子介导的,机制并未明确。探索其可能的发病机制,寻找有效可行的治疗方法是目前眼科学领域研究的重点和热点。研究表明重组人血小板源性生长因子(recombinant humanplatelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB)在视网膜新生血管形成的过程中发挥作用,但其对视网膜血管内皮细胞(Human retinal microvascular endothelial cells,HRECs)的作用鲜有报道。目的:本研究通过体外培养HRECs,使用不同浓度的rhPDGF-BB进行干预,观察不同浓度rhPDGF-BB对HRECs增殖、迁移的影响,并进一步探讨其具体的作用机制,以期对视网膜新生血管的发病机制以及为临床探索新型治疗靶点提供有益的理论依据。方法:采用含体积分数10%FBS的DMEM培养液培养HRECs,分别将10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB加入对数生长期HRECs的培养液,未添加rhPDGF-BB者作为正常对照组。采用CCK8法检测各组细胞的增殖情况;采用划痕试验检测细胞相对迁移面积(迁移后无细胞区面积/划痕初期无细胞区面积);采用逆转录-PCR法检测HRECs中PDGF-BB受体mRNA的相对表达量;采用实时荧光定量-PCR法检测HRECs中VEGF mRNA和integrin mRNA相对表达量。结果:培养的HRECs生长良好,用PDGF-BBR引物能扩增出与引物设计长度相符的表达条带。正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组培养细胞后24 h细胞增殖值(A)分别为1.01±0.05、1.09±0.04、1.10±0.02和1.13±0.05,10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组A值明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=2.504、3.430、3.483,均P<0.05);划痕试验后24h,正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞相对迁移面积分别为(0.42±0.10)mm~2、(0.38±0.09)mm~2、(0.55±0.06)mm~2和(0.61±0.05)mm~2,划痕试验后48 h细胞相对迁移面积分别为(0.75±0.06)mm~2、(0.81±0.02)mm~2、(0.87±0.02)mm~2和(0.98±0.02)mm~2,总体比较差异均有统计学意义(F_(浓度)=16.283,P=0.000;F_(时间)=209.129,P=0.000),rhPDGF-BB作用后随着剂量增加和作用时间延长细胞相对迁移面积均明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);实时荧光定量PCR检测显示正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组HRECs中integrin mRNA相对表达量分别为1.06±0.02、1.30±0.10、1.20±0.16、1.27±0.08,VEGF mRNA相对表达量分别为0.97±0.05、1.06±0.16、1.58±0.18、1.66±0.21,其中50和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞中integrin mRNA及VEGF mRNA相对表达量均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(integrin mRNA:t=3.900、4.014,均P<0.05;VEGF mRNA:t=6.940、7.210,均P<0.05)。结论:rhPDGF-BBR促进HRECs的增殖和迁移,其作用呈剂量和时间依赖性,其作用可能与上调VEGF和integrin在细胞中的表达有关。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-05-01）
人视网膜血管内皮细胞株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的TRPCs广泛分布于各种内皮细胞膜上,而且被明确证实参与许多组织血管内膜损伤后新生血管发生,但在人糖尿病视网膜血管病变发生发展过程是否起到调节作用目前鲜有报道。我们前期实验证实TRPC1、TRPC6在基因水平参与人视网膜血管内皮细胞株的增殖迁移及管腔形成,机制与调节VEGF表达相关,本实验将从蛋白水平验证TRPC1、TRPC3、TRPC6在人视网膜血管内皮细胞株中的作用及与VEGF表达的关系。材料与方法1.将HREC分为叁组,分别加入含5.5mM葡萄糖、30mM葡萄糖以及24.5mM甘露醇+5.5mM葡萄糖培养基,干预24、48小时后提取细胞总蛋白,检测高糖对TRPC不同亚型(TRPC1、TRPC3、TRPC6)的蛋白表达影响;2.将HREC分为5组(30mM葡萄糖、30mM葡萄糖+2mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+4mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+8mg/L SKF96365、30mM葡萄糖+16mg/L SKF96365,注:SKF96365是TRPC通道阻滞剂),干预24、48小时后提取细胞总蛋白,检测TRPC通道抑制剂对高糖诱导的细胞VEGF的蛋白表达影响;3.将HREC分为叁组,饥饿处理24小时,后分别加入含5.5mM葡萄糖、30mM葡萄糖以及24.5mM甘露醇的正常培养基,将细胞转移到放置载玻片的12孔板内,设置4个复孔,培养24小时待细胞贴壁,取出载玻片进行细胞爬片免疫组化,观察在高糖影响下TRPC1、TRPC3、TRPC6的定量和定位表达,通过倒置相差显微镜拍摄记录;4.将HREC分为5组,饥饿处理24小时后加入30mM葡萄糖、30mM葡萄糖+2mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+4mg/LSKF96365、30mM葡萄糖+8mg/L SKF96365、30mM葡萄糖+16mg/L SKF96365,将细胞加入放置载玻片的24孔板内,设置4个复孔,待细胞贴壁,加入不同浓度的TRPC干预剂SKF96365高糖培养基干预24 h后,取出载玻片进行细胞爬片免疫组化,观察在TRPC通道抑制剂作用下细胞VEGF的定量和定位表达,通过倒置相差显微镜拍摄记录;结果1.Western blot结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮细胞株24、48小时后TRPC1在蛋白水平表达增高(P<0.05),时间依赖性不明确,高渗组TRPC1蛋白表达差异无统计学意义,TRPC3、TRPC6蛋白水平表达差异无统计学意义(P>0.05);2.Western blot结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮在不同浓度TRPC通道抑制剂SKF96365干预24、48小时后,4、8、16mg/L SKF96365干预组抑制细胞VEGF表达降低,呈浓度和时间依赖性(P<0.05);3.细胞爬片免疫组化(IHC)结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮细胞株24小时后TRPC1在蛋白水平表达增高(P<0.05),高渗组TRPC1蛋白表达差异无统计学意义;可以看到TRPC1在细胞的定位主要是在细胞膜与细胞质。TRPC3、TRPC6蛋白水平表达差异无统计学意义(P>0.05);4.细胞爬片免疫组化(IHC)结果显示,高糖诱导人视网膜血管内皮在不同浓度TRPC通道抑制剂SKF96365干预24小时后,2 mg/L、4 mg/L、8mg/L、16mg/L SKF96365干预组细胞VEGF表达显着下调(P<0.05),呈浓度依赖性。可以看到VEGF在细胞的定位主要是在细胞膜与核周。结论1.高糖可诱导人视网膜血管内皮细胞株的TRPC1蛋白表达增高;2.阻断TRPC通路抑制高糖诱导人视网膜血管内皮细胞株上调VEGF的表达量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人视网膜血管内皮细胞株论文参考文献
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[10].李丹.重组人血小板源性生长因子对人视网膜血管内皮细胞作用和机制的研究[D].苏州大学.2017
标签：小檗碱; 人视网膜血管内皮细胞; 高糖; 血管内皮生长因子;