导读:本文包含了心肌细胞增殖论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:心脏再生,心肌细胞增殖,细胞周期,信号通路
心肌细胞增殖论文文献综述
庞美俊,朱小君,熊敬维[1]（2019）在《心肌细胞增殖与再生的研究进展》一文中研究指出由心肌梗死引起的缺血性心肌病已成为威胁人类健康的重大疾病。与成年哺乳动物不同,一些鱼类、两栖类和新生的哺乳动物的心肌细胞在心脏损伤后具有增殖能力,可以实现心脏的完美再生,为基于心肌细胞增殖的心脏再生与修复提供了新技术和新思路。该文简单概述心脏再生动物模型的建立、心肌再生修复的细胞生物学过程以及近年来发现的调控心肌细胞增殖的关键因子,并且总结了未来心肌细胞增殖及心脏再生领域的研究方向,为心脏再生医学的基础理论和临床转化研究提供创新的思路。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年09期）
张杰,刘亮,周辉,郭桂喜,于强[2]（2019）在《上调抗增殖蛋白表达对TNF-α诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响》一文中研究指出目的:研究抗增殖蛋白(PHB)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的心肌细胞损伤中的作用。方法:将心肌H9c2细胞分为4组,以不感染病毒且不用TNF-α处理的H9c2细胞作为对照组,以不感染病毒、仅用20μg/L的TNF-α细胞培养液培养的细胞作为TNF-α组,以行Lv-PHB或Lv-NC感染、并用含有20μg/L的TNF-α细胞培养液培养24 h的细胞作为Lv-PHB+TNF-α组和Lv-NC+TNF-α组。采用MTT法测定4组细胞的增殖活性,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Cleaved Caspase-3、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Cleaved Caspase-12蛋白表达水平。结果:Lv-PHB+TNF-α组细胞中PHB蛋白和mRNA表达水平高于TNF-α组(P <0. 05)。与对照组比较,TNF-α组细胞增殖活性降低,LDH漏出率升高,凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、CHOP、Cleaved Caspase-12蛋白水平也升高(P <0. 05)。与TNF-α组比较,Lv-PHB+TNF-α组细胞增殖活性升高,LDH漏出率降低,凋亡率降低,细胞中Cleaved Caspase-3、CHOP、Cleaved Caspase-12蛋白水平降低(P <0. 05)。结论:上调PHB表达可以减轻TNF-α诱导的心肌细胞损伤,提高心肌细胞活性、降低细胞凋亡水平。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2019年05期）
刘秀秀,周斌[3]（2019）在《成体哺乳动物心肌细胞增殖及其调控》一文中研究指出心肌细胞作为一种终末分化的细胞最初被认为不具备增殖的能力,然而越来越多的证据表明,成体的哺乳动物心脏中心肌细胞是以一定的比例进行更新换代的.相关研究使用了不同的巧妙的方法,包括同位素的掺入以及遗传工具小鼠的使用.心肌细胞的增殖受到复杂的分子网络的调控,同时也受到外界环境及内部微环境的调控.心肌细胞自身具有的特性也是影响心肌细胞增殖的关键.(本文来源于《上海大学学报(自然科学版)》期刊2019年03期）
林中民,陈国荣,张泉波,王芳,项兰婷[4]（2019）在《髓样分化蛋白2基因沉默对高糖诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响》一文中研究指出目的:研究髓样分化蛋白2(MD2)基因沉默对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响及其机制。方法:体外大鼠心肌细胞系H9C2细胞随机分为4组(n=3):LG组、HG组、HG+NC组、HG+si-MD2组,分别转染MD2基因小干扰RNA(si-MD2)或阴性对照24 h后进行低糖或高糖处理48 h。RT-qPCR检测MD2及细胞内炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平,MTS法、流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡率,Western blot法检测细胞内相关蛋白的表达水平及磷酸化水平。结果:转染si-MD2后,H9C2细胞中MD2的表达水平明显下降(P<0.01)。与低糖(LG)组比较,高糖处理后的H9C2细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平显着升高,细胞增殖能力下降并发生G1期阻滞,细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3蛋白水平升高(P <0.01)。而MD2基因沉默可拮抗高糖对H9C2细胞增殖、细胞周期、凋亡及细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平的影响(P<0.05)。Western blot测定结果表明高糖处理后的H9C2细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)和C-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的磷酸化水平明显升高,而MD2基因沉默可抑制高糖诱导下的ERK1/2、P38 MAPK和JNK蛋白激活(P<0.01)。结论:MD2基因沉默可能通过抑制ERK、P38MAPK和JNK信号通路的激活来减少高糖诱导的大鼠心肌细胞炎症细胞因子表达,减少心肌细胞凋亡,促进细胞增殖。(本文来源于《中国应用生理学杂志》期刊2019年03期）
王帅[5]（2019）在《心肌细胞增殖能力分析》一文中研究指出心脏是哺乳动物的动力器官,心脏疾病会导致大量心肌细胞死亡,所以研究心肌细胞在不同物种的不同生长阶段的增殖能力的变化是很重要的。通过查阅文献研究心肌细胞在不同物种的不同生长阶段的增殖能力的变化,为哺乳动物心脏疾病治疗提供帮助。(本文来源于《现代商贸工业》期刊2019年18期）
靳国青[6]（2019）在《MicroRNALet-7i-5p对心肌细胞增殖的影响及其机制研究》一文中研究指出背景与目的目前,心肌梗死是一个全球性疾病,心力衰竭是心肌梗死最常见的并发症。心力衰竭的本质是心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)的丢失与有效再生不足。目前,临床治疗心力衰竭的手段只能延缓病情,而不能从根本上解决CMs丢失的问题。促进CM再生是心脏损伤后修复的关键步骤,而促进内源性心肌增殖被认为是最有应用前景的心脏再生途径。众所周知,细胞增殖受细胞周期的调控,而CMs在出生后不久便退出细胞周期,CM增殖迅速停止,取而代之的生长方式是仅发生DNA合成和核有丝分裂而没有胞质分裂(无细胞分裂动力学有丝分裂)的内复制和肥大,这使得大多数心肌细胞处于双核状态。过去许多研究对哺乳动物心肌细胞增殖的观察主要是描述有限的DNA的合成及有丝分裂情况,对于胞质分裂的研究极少。而是否发生胞质分裂是判断CM增殖的重要依据之一。微小RNA(MicroRNAs,miRNAs)可通过调控CMs的细胞周期影响CM增殖。致命性-7(Lethal-7,let-7)家族是在体细胞中广泛表达且高度保守的miRNAs家族。体外实验显示过表达let-7家族可降低CMs中胸腺嘧啶核苷类似物(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)结合率(新合成DNA标记物)和ki-67(增殖抗原标记物)阳性率,提示let-7i-5p可能是一个较强的CM增殖抑制剂[1]。本实验室前期研究显示抑制let-7i-5p可促进CMs的DNA合成与有丝分裂,促进心肌梗死后心功能的恢复。然而,let-7i-5p对于CM胞质分裂的影响还不清楚,尚不知道他是如何发挥作用的。本研究将通过胞质分裂、DNA复制、有丝分裂叁个方面更全面的观察let-7i-5p对心肌细胞生长方式的影响,并进一步对机制进行探讨。方法1.观察小鼠不同鼠龄CMs的增殖活性。A.取胚胎16.5天(E16.5)、出生后1天(P1)、出生后56天(P56)小鼠心脏组织。B.免疫荧光方法观察心脏组织中pH3阳性CMs比例。2.Let-7i-5p在小鼠心脏不同发育时期的表达水平分析。A.分别取E16.5、E18.5、P1、P3、P7、P56小鼠的心脏组织,分离P1、P7、P10小鼠的原代CMs。B.Real-time PCR(qPCR)检测小鼠不同年龄段心脏组织和CMs中let-7i-5p的表达水平。3.体外干预let-7i-5p表达水平对小鼠乳鼠原代CM增殖的影响。A.分离并培养P1小鼠乳鼠原代CMs。B.过表达或者抑制let-7i-5p表达水平,通过免疫荧光染色方法观察CMs数量及EdU-/pH3-/Auroa B阳性CMs比例。4.探索let-7i-5p调控CM增殖的机制A.观察let-7i-5p与E2F2/CCND2结合序列的保守性。B.观察let-7i-5p对mRNA E2F2/CCND2蛋白水平的影响。C.使用8周龄雄性小鼠建立心肌梗死模型,建立模型后立即转染不同腺相关病毒9(adeno-associated virus 9,AAV9),实验分为四组,分别为AAV9-NC、AAV9-anti-let-7i-5p、AAV9-anti-let-7i-5p+AAV9-si-E2F2、AAV9-anti-let-7i-5p+AAV9-si-CCND2,注射后28天收集心肌组织。D.超声评估各组小鼠的心脏功能,通过动态观察LVEDd、LVSDd、LVFS、LVEF的变化;通过免疫荧光观察EdU阳性CMs在心肌组织中的比例。结果1.小鼠心肌细胞增殖活性随着鼠龄的增加而降低。2.Let-7i-5p的表达量随着鼠龄的增加而升高,成年鼠中let-7i-5p的表达量最高。3.抑制let-7i-5p的表达可促进CM的胞质分裂、DNA复制及有丝分裂,从而促进CM增殖,过表达let-7i-5p可抑制CM增殖。4.Let-7i-5p与E2F2/CCND2的结合序列高度保守,let-7i-5p可抑制E2F2和CCND2蛋白水平的表达。5.沉默E2F2或CCND2均可逆转let-7i-5p抑制介导的促梗死后心脏功能恢复以及促CMs增殖作用。结论抑制Let-7i-5p通过同时依赖E2F2和CCND2发挥促进CM增殖(以CMs胞质分裂、DNA复制及有丝分裂为特征)以及促进心肌梗死后心脏功能的恢复的作用。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-17）
司晓云[7]（2019）在《CircRNA Hipk3通过蛋白乙酰化及内源性竞争机制促进梗死后心肌细胞增殖及血管新生》一文中研究指出研究背景心肌梗死(myocardial infarction,MI)是一类严重危害人类健康的急危重症疾病。关于其治疗虽然已有药物、溶栓及冠脉介入等多种方法,但其只能挽救濒临坏死、冬眠或心肌钝抑的心肌细胞及心功能,对于已经坏死后心肌所致心功能的丧失无法恢复。如何挽救这部分坏死心肌的心功能,目前世界上有多方面研究如:细胞重编程,组织工程修复,内源性心肌组织再生等。尽管已有多方面研究,由于多种条件的制约,前两者效果欠佳。内源性心肌再生由于无免疫排斥、更能顺应生理发展模式等独特的生物学效应,赢得了越来越多研究者的关注。而在这一方面既往研究已显示非编码RNA起到了非常重要的作用。研究发现非编码RNA(ncRNA)广泛参与了表观遗传调控、细胞周期调控和细胞增殖与分化等多种生物学过程,并在调控生物发育过程中起到关键作用,已成为研究的热点。目前越来越多的LncRNA被发现和证实参与心血管系过程。尽管如此,由于LncRNA由于为线性结构,在机体内稳定性差,易被核酸酶降解,生物活性周期短,故其作用在一定程度上受到限制。同属非编码RNA的环状RNA(CirRNA)由于为环状闭合结构,不易被核酸内切酶降解,体内稳定性强,生物活性时间长,避免了上述缺陷,故可能是一类非常有研究前景的非编码RNA。血管是心脏组织的重要组成部分,可促进心肌的氧与营养物质的供应,带走相应的代谢产物,参与心肌的物质代谢输送。大量的研究已经明确新生血管与心肌再生及心功能的恢复有着密切关系。促进新生血管可以促进心梗的恢复,抑制心梗边缘区的扩展。因此,结合上述分析寻找与血管增殖相关的环状RNA理论上可以取得较好的预期效果。经过CircRNA表达谱分析,结果提示CircHipk3新是一类新生乳鼠心脏高表达、成年鼠心脏低表达,且人鼠高同源性的环状RNA。结合既往大量研究提示,其具有调控与促进内皮及血管增生、细胞增殖的作用,为此我们推测其可能在心肌再生中发挥重要作用。在此基础上进行预实验,提示其为理想的靶基因。为此我们进行了体内、体外两方面功能验证,并且探讨了具体的分子机制。研究方法一、CircHipk3功能实验我们通过胶原纤维消化法进行乳鼠及成年鼠心肌细胞的分离。通过前降支结扎办法进行心梗模型的创建,并通过心电图ST段抬高及后期的心脏超声验证心梗模型的成功。通过心脏超声进行心功能评估;通过马松染色进行心梗后纤维化检测;通过PETCT检测心梗后心肌灌注。二、CircHipk3机制研究应用定量PCR和原位杂交来确定乳鼠心脏和成年鼠心脏中CircHipk3的差异表达。应用westerm进行蛋白检测。RNA pulldown和荧光素酶实验分别用于研究CircHipk3与蛋白质和miRNA的相互作用。叁、结果研究发现,(1)体外小鼠心肌细胞中,敲低与过表达CircHipk3分别抑制与促进了心肌细胞的增殖,体内成年小鼠心梗模型中过表达CircHipk3改善了心梗后心脏的心功能;体内乳鼠心梗模型中敲低CircHipk3减弱了心梗后心脏功能的恢复。(2)在体外人冠脉内皮细胞中敲低与过表达CircHipk3分别抑制与促进了内皮细胞的迁移与成管;体内成年小鼠心梗模型中过表达CircHipk3促进了新生血管的增殖。研究提示CircHipk3通过增加Notch1乙酰化,增加Notch1的稳定性并防止其降解从而促进心肌细胞增殖。同时,CircHipk3充当miR-133a的海绵,促进CTGF的表达,激活内皮细胞促进了新生血管。结论:本研究证明了 CircHipk3通过诱导Notch1乙酰化从而增强了其稳定性,促进了心肌细胞增殖;通过海绵吸附miR-133a促进了新生血管的增殖,二者协同促进了心梗恢复,改善了心功能。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-17）
刘围围[8]（2019）在《缺氧预处理心肌细胞源外泌体circHIPK3调控氧化应激状态下心肌微血管内皮细胞凋亡与增殖的实验研究》一文中研究指出研究背景:心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)通过循环相互连接,在心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)之间形成连续的内皮,对调节和维持心脏功能起着不可或缺的作用。心肌梗死后局部氧化应激环境下,心肌微血管内皮细胞凋亡、坏死,增殖和迁移受限,严重破坏微血管的完整性,使得冠脉再通后心肌细胞水平灌注不充分,促使原本存活的心肌细胞凋亡或坏死,在多种病理生理作用下出现心脏结构和功能的改变,最终导致患者出现心功能不全和心源性死亡。近年来,细胞旁分泌效应在改善心肌梗死局部微环境、修复梗死心肌中发挥着举足轻重的作用,其中外泌体(exosomes)是旁分泌途径发挥作用的主要物质,已经成为血管再生和心脏修复的关键调节剂。Exosomes富含非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)、蛋白质、细胞因子等生物活性物质,能够介导细胞与细胞之间的信息交流,其中外泌体源circRANs因具有更好的保守性及稳定性而备受关注。研究表明心肌细胞可通过释放exosomes(CMs-exosomes)至周围接触细胞(成纤维细胞,内皮细胞等),通过细胞间交互作用调控靶细胞的生物学活性,但具体机制不明。本课题前期研究发现,缺氧预处理(Hypoxic preconditioning,HPC)心肌细胞exosomes可通过传递高表达的circHIPK3减少小鼠心梗面积,增加梗死边界区新生血管密度。而目前,关于缺氧预处理心肌细胞源exosomal circHIPK3调控氧化应激状态下CMECs凋亡、增殖及迁移的机制研究尚未见报道。因此本研究拟在前期研究的基础上,进一步在体外建立急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)氧化应激微环境,探讨缺氧预处理心肌细胞源exosomal circHIPK3对氧化应激环境下CMECs凋亡、增殖及迁移的调控作用及其相关机制。第一部分缺氧预处理CMs-exosomes对氧化损伤CMECs的功能研究目的:观察常氧及缺氧预处理CMs-exosomes对氧化损伤CMECs的作用。方法:1、CMs培养:双酶消化法联合差速贴壁法及添加溴脱氧尿苷(BrdU)纯化法体外分离培养小鼠CMs,免疫荧光(immunofluorescence,IF)鉴定CMs心肌肌钙蛋白T(cTnT)分子的表达;2、CMs缺氧预处理时间确立:Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测HPC不同时间(0 h、6 h、12 h、18 h、24 h)对CMs细胞活性的影响。3、CMECs培养:酶消化法联合差速贴壁法诱导培养实验所需的CMECs,IF鉴定CMECs细胞标志物vWF、CD31。4、Exosomes提取鉴定:超速离心法(ultracentrifugation,UC)提取常氧心肌细胞exosomes(Normal exosomes,Nor-exos)与缺氧预处理心肌细胞exosomes(Hypoxic exosomes,HPC-exos)。Western Blot检测exosomes表面标志蛋白CD9、HSP70及Alix的表达,透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察exosomes形态;纳米颗粒追踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)分析exosomes群体特征。5、建立CMECs的体外氧化应激模型:以不同浓度的H_2O_2(50μM、100μM、200μM、300μM)处理CMECs 3h探索H_2O_2模拟氧化应激微环境的最佳浓度,以200μM的H_2O_2处理CMECs不同时间(1 h、2 h、3 h、4 h),设常氧状态CMECs为对照组,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测不同浓度H_2O_2及处理不同时间对CMECs凋亡的影响,探讨体外建立氧化应激微环境的最佳浓度及时间。6、Exosomes内化验证:以红色荧光染料Dil标记exosomes并与CMECs共培养不同时间(4 h、8 h、12 h),IF观察CMECs摄取exosomes的情况。确定最佳的共培养时间作为后续exosomes处理CMECs的条件;FCM检测不同浓度exosomes(0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL及400μg/mL)与CMECs共培养8h后对氧化应激微环境CMECs增殖的影响。7、Exosomes抗氧化应激效应:为验证Nor-exos及HPC-exos对氧化应激状态下CMECs凋亡、增殖与迁移的影响,实验分为5组:(1)Normal(Nor)组;(2)H_2O_2组;(3)exos-depleted组;(4)Nor-exos组;(5)HPC-exos组。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞膜内侧磷脂酰丝氨酸(PS)外翻情况;2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞活性氧(reactive oxygen spieces,ROS)的释放;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3的表达量;Tunel染色检测细胞DNA片段化。采用FCM检测细胞周期,EdU染色检测细胞DNA复制活性与增殖能力;Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA、CyclinD1、P21的表达。采用Transwell细胞迁移实验检测CMECs的体外迁移能力。结果:1、原代CMs呈细小圆形,1天后镜下观察部分细胞已贴壁,2天后细胞呈叁角形、梭形、多边形和不规则形等,并且存在细胞的自发性搏动。IF鉴定cTnT呈阳性表达。2、CCK-8结果显示,缺氧预处理12 h CMs的细胞活性显着上调(P<0.05)。3、酶消化法联合差速贴壁法诱导培养的CMECs 2天已贴壁,3~4天后生长较快,胞质伸展,6天后细胞呈不规则、梭形生长,铺路石样排列。IF观察细胞表面分子vWF与CD31均呈阳性表达。4、UC法分别提取Nor-exos及HPC-exos,Western Blot结果显示exosomes表面标记蛋白CD9、Alix、HSP70均呈阳性表达;TEM观察见大小不一,呈圆形或双凹圆盘状有脂质膜包裹的囊泡状小体;NTA结果显示Nor-exos与HPC-exos的颗粒大小均为151 nm。5、FCM结果显示,200μM H_2O_2处理CMECs 3 h组的早期凋亡率显着上调(P<0.05),且坏死率无明显变化(P>0.05),因此选取200μM H_2O_2 3 h组作为诱导CMECs氧化应激微环境的最佳处理条件。6、Dil标记exosomes与CMECs共培养8 h后,荧光显微镜观察发现绝大部分exosomes被CMECs摄取。FCM结果显示与0μg/m L、100μg/m L、200μg/m L组相比,300μg/m L exosomes处理细胞8 h,可使CMECs增殖率达最高(P<0.05),与300μg/m L组相比,400μg/m L组细胞增殖率无显着差异(P>0.05)。最终选取300μg/m L exosomes与CMECs共培养8 h为后续实验处理条件。7、与Nor组相比,H_2O_2可显着诱导CMECs凋亡及抑制CMECs的增殖及迁移(P<0.05)。与H_2O_2组相比,Nor-exos组与HPC-exos组细胞凋亡减少,细胞增殖及迁移增加(P<0.05),且HPC-exos较Nor-exos具有更好抗凋亡、促增殖的保护作用(P<0.05)。小结:在氧化应激条件下,Nor-exos及HPC-exos均可抑制CMECs的凋亡、促进CMVEC的增殖及迁移,发挥CMECs的保护作用,但HPC-exos的效果更加显着。第二部分HPC-exosomal circ HIPK3靶向抑制miR-29a调控氧化应激状态下CMECs的凋亡、增殖及迁移目的:探讨HPC-exosomal circ HIPK3调控氧化应激微环境下CMECs凋亡、增殖及迁移效应。方法:1、HPC-exos中circ HIPK3的相对表达情况:采用q RT-PCR检测Nor-exos与HPC-exos中circ HIPK3的表达量;Nor-exos和HPC-exos处理CMECs后细胞内circ HIPK3的表达是否有变化,实验分为4组:(1)Nor组;(2)H_2O_2组;(3)Nor-exos组;(4)HPC-exos组。采用q RT-PCR检测各组中circ HIPK3的表达量。2、circ HIPK3感染复数的确立:采用慢病毒转染的方法,过表达或沉默CMECs或CMs中circ HIPK3,实验分组:CMECs:MOI=10、MOI=50、MOI=100;CMs:MOI=50、MOI=100、MOI=200,采用q RT-PCR检测转染效率。3、验证HPC-exos主要通过传递circ HIPK3发挥抗细胞凋亡、促细胞增殖与迁移效应,实验分为8个组:(1)H_2O_2组;(2)Lentiviral vector(LV)组;(3)LV-circ HIPK3组;(4)LV-si-circ HIPK3组;(5)HPC-exos组;(6)LV-exos组;(7)LV-si-HIPK3 m RNA-exos组;(8)LV-si-circ HIPK3-exos组。采用q RT-PCR检测不同处理组CMECs中circ HIPK3的表达情况。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针检测ROS的释放,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3的表达量;Tunel染色检测细胞DNA片段化。采用FCM检测细胞周期,Ed U染色检测细胞DNA复制活性与增殖能力;Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、P21的表达量。采用Transwell细胞迁移实验检测CMECs的体外迁移能力。4、circ HIPK3与miR-29a相关性验证:采用q RT-PCR检测(1)H_2O_2组、(2)LV组、(3)LV-circ HIPK3组、(4)LV-si-circ HIPK3组中circ HIPK3、miR-29a的表达;采用荧光素酶报告实验、Ago2免疫共沉淀实验验证circ HIPK3与miR-29a的结合;采用RNA FISH实验检测circ HIPK3与miR-29a在细胞中的定位。5、氧化应激状态下CMECs中miR-29a相对表达量:实验分为2组,正常CMECs组(control组)与H_2O_2处理的CMECs组(H_2O_2组),采用q RT-PCR检测氧化应激状态下CMECs中miR-29a的表达量。6、miR-29a对氧化应激微环境CMECs的作用验证:以ribo FECT?CP转染试剂转染miR-29a及其阴性对照物至氧化应激状态下CMECs,观察miR-29a对氧化应激状态下CMECs凋亡、增殖与迁移的影响。实验分组:(1)H_2O_2组;(2)miR-29a mimics组;(3)MNC(mimics negative control)组;(4)miR-29a Inhibitors组;(5)INC(inhibitor negative control)组。通过Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针检测ROS的释放,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3的表达量;Tunel染色检测细胞DNA片段化。采用FCM检测细胞周期,Ed U染色检测细胞DNA复制活性与增殖能力;Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、P21的表达量。采用Transwell细胞迁移实验检测CMECs的体外迁移能力。7、HPC-exos介导miR-29a调控CMECs凋亡、增殖与迁移的作用:实验分组:(1)H_2O_2组;(2)HPC-exos组;(3)HPC-exos+miR-29a mimics组;(4)HPC-exos+MNC组;(5)HPC-exos+miR-29a Inhibitors组;(6)HPC-exos+INC组。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针检测ROS的释放;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3的表达量;Tunel染色检测细胞DNA片段化。采用FCM检测细胞周期,Ed U染色检测细胞DNA复制活性与增殖能力;Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、P21的表达量。采用Transwell小室细胞迁移实验检测细胞的体外迁移能力。结果:1、q RT-PCR结果显示缺氧预处理CMs-exosomes内cric HIPK3表达量明显高于常氧CMs-exosomes(P<0.05)。在氧化应激的基础上,Nor-exos与HPC-exos处理CMECs后细胞内的circ HIPK3的表达也明显上调(P<0.05),且HPC-exos的作用更加明显(P<0.05)。2、q RT-PCR结果显示,慢病毒转染CMECs时,MOI=50的转染效率最高,转染CMs时,MOI=100的转染效率最高。因此选择MOI=50作为转染CMECs的最佳MOI,MOI=100作为转染CMs的最佳MOI。3、q RT-PCR结果显示,与H_2O_2组相比,LV-circ HIPK3组、HPC-exos组circ HIPK3表达明显上调(P<0.05),LV-si-circ HIPK3组circ HIPK3表达显着下调(P<0.05)。与HPC-exos组相比,LV-si-HIPK3 m RNA-exos组circ HIPK3表达无明显差异(P>0.05),LV-si-circ HIPK3-exos组circ HIPK3表达显着下调(P<0.05)。FCM、Western Blot与Tunel结果显示,与H_2O_2组相比,LV-circ HIPK3组、HPC-exos组细胞PS外翻减少(P<0.05),细胞内ROS的释放减少(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量降低、Bcl-2表达量升高(P<0.05),细胞DNA片段化减少(P<0.05),LV-si-circ HIPK3组细胞PS外翻增加(P<0.05),细胞内ROS的释放增加(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量增多、Bcl-2表达量减少(P<0.05),细胞DNA片段化增加(P<0.05)。与HPC-exos组相比,LV-si-HIPK3 m RNA-exos组细胞PS外翻,细胞内ROS的释放,Bcl-2、Bax及Cleaved caspase3表达量,细胞DNA片段化均无明显差异(P>0.05),LV-si-circ HIPK3-exos组细胞PS外翻减少(P<0.05),细胞内ROS的释放减少(P<0.05),Bax及Cleaved caspase3表达量减少、Bcl-2表达量增加(P<0.05),细胞DNA片段化减少(P<0.05)。与H_2O_2组相比,LV-circ HIPK3组、HPC-exos组细胞G0/G1期比例降低、S+G2/M期比例升高(P<0.05),细胞增殖能力明显增强(P<0.05),PCNA与Cyclin D1的表达量均明显增多、P21的表达量明显减少(P<0.05),细胞迁移数目均明显增多(P<0.05),LV-si-circ HIPK3组G0/G1期比例升高、S+G2/M期比例降低(P<0.05),细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),PCNA与Cyclin D1的表达量均明显减少、P21表达量明显增多(P<0.05),细胞迁移数目明显减少(P<0.05)。与HPC-exos组相比,LV-si-HIPK3 m RNA-exos组细胞G0/G1期比例与S+G2/M期比例,细胞增殖能力,P21、PCNA、Cyclin D1表达量,细胞迁移数目均无显着变化(P>0.05),LV-si-circ HIPK3-exos组细胞G0/G1期比例升高、S+G2/M期比例降低(P<0.05),细胞增殖能力显着减弱(P<0.05),PCNA与Cyclin D1的表达量显着减少、P21表达量显着增多(P<0.05),细胞迁移数目显着减少(P<0.05)。4、q RT-PCR结果显示,与H_2O_2组相比,LV-circ HIPK3组的circ HIPK3的相对表达量明显上调(P<0.05),LV-si-circ HIPK3的circ HIPK3相对表达量明显下调(P<0.05),但miR-29a的相对表达量均无明显变化(P>0.05)。荧光素酶报告实验结果显示,circ HIPK3与miR-29a可以结合。RNA FISH实验结果显示,circ HIPK3与miR-29a共定位于细胞胞质。Ago2共沉淀实验结果显示,circ HIPK3与miR-29a、Ago2可形成叁元复合物。5、q RT-PCR结果显示,与control组相比,H_2O_2组miR-29a的相对表达量明显增高(P<0.05)。6、与H_2O_2组相比,miR-29a mimics组细胞PS外翻增多(P<0.05),细胞内ROS的释放增多(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量增多、Bcl-2表达量减少(P<0.05),细胞DNA片段化增加(P<0.05)。miR-29a Inhibitors组细胞PS外翻减少(P<0.05),细胞内ROS的释放减少(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量减少、Bcl-2表达量增多(P<0.05),细胞DNA片段化减少(P<0.05)。与H_2O_2组相比,miR-29a mimics组细胞G0/G1期比例升高,S+G2/M期比例降低(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.05),PCNA与Cyclin D1的表达均明显降低、P21表达明显升高(P<0.05),细胞迁移数目明显减少(P<0.05),miR-29a Inhibitors组细胞G0/G1期比例降低,S+G2/M期比例降低升高(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05),PCNA与CyclinD1的表达均明显升高、P21表达明显降低(P<0.05),细胞迁移数目均明显增多(P<0.05)。7、与H_2O_2组相比,HPC-exos组细胞PS外翻减少(P<0.05),细胞内ROS的释放减少(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量减少、Bcl-2表达量增多(P<0.05),细胞DNA片段化减少(P<0.05)。与HPC-exos组相比,HPC-exos+mimics组细胞PS外翻增多(P<0.05),细胞内ROS的释放增多(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量增多、Bcl-2表达量减少(P<0.05),细胞DNA片段化增加(P<0.05)。HPC-exos+Inhibitors组细胞PS外翻减少(P<0.05),细胞内ROS的释放减少(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量减少、Bcl-2表达量增多(P<0.05),细胞DNA片段化减少(P<0.05)。与H_2O_2组相比,HPC-exos组细胞G0/G1期降低、S+G2/M期比例升高(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05),PCNA、Cyclin D1的表达均明显升高、P21表达明显降低(P<0.05),细胞迁移数目均明显增多(P<0.05)。与HPC-exos组相比,HPC-exos+mimics组细胞G0/G1期比例升高,S+G2/M期比例降低(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.05),PCNA、Cyclin D1的表达均明显降低、P21表达明显升高(P<0.05),细胞迁移数目显着减少(P<0.05),HPC-exos+Inhibitors组细胞G0/G1期比例降低,S+G2/M期比例升高(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05),PCNA、Cyclin D1的表达均明显升高、P21表达明显降低(P<0.05),细胞迁移数目均明显增多(P<0.05)。小结:HPC-exosomal circ HIPK3通过调控miR-29a的作用从而抑制氧化损伤CMECs的凋亡,并促进其增殖、迁移。第叁部分HPC-exosomal circ HIPK3靶向抑制miR-29a调控IGF-1、VEGFA介导氧化应激状态下CMECs的凋亡、增殖及迁移目的:探讨HPC-exosomal circ HIPK3靶向抑制CMECs中miR-29a,促进下游IGF-1与VEGFA表达,调控氧化应激微环境下CMECs凋亡、增殖与迁移效应。方法:1、miR-29a与IGF-1相关性验证:采用荧光素酶报告实验验证miR-29a与IGF-1的结合;以ribo FECT?CP转染试剂转染miR-29a及其阴性对照物至氧化应激状态下CMECs,实验分组:(1)H_2O_2组;(2)miR-29a mimics组;(3)MNC组;(4)miR-29a Inhibitors组;(5)INC组。采用q RT-PCR检测各组miR-29a、IGF-1的相对表达情况;Western Blot检测IGF-1的蛋白表达量。2、miR-29a与VEGFA相关性验证:采用荧光素酶报告实验验证miR-29a与VEGFA的结合;以ribo FECT?CP转染试剂转染miR-29a及其阴性对照物至氧化应激状态下CMECs,实验分组:(1)H_2O_2组;(2)miR-29a mimics组;(3)MNC组;(4)miR-29a Inhibitors组;(5)INC组。采用q RT-PCR检测各组VEGFA的相对表达情况;Western Blot检测各组VEGFA的蛋白表达量。3、HPC-exos通过传递circ HIPK3调控miR-29a对氧化应激状态下CMECs凋亡、增殖与迁移的影响:实验分组:(1)HPC-exos组;(2)LV-si-circ HIPK3-exos(si-circ-exos)组;(3)si-circ-exos+mimics组;(4)si-circ-exos+MNC组;(5)si-circ-exos+Inhibitors组;(6)si-circ-exos+INC。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针检测ROS的释放;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3的表达量;Tunel染色检测细胞DNA片段化。采用FCM检测细胞周期,Ed U染色检测细胞DNA复制活性与增殖能力;Western Blot检测增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、P21、IGF-1及VEGFA的表达量。采用Transwell小室细胞迁移实验检测细胞的体外迁移能力。结果:1、荧光素酶报告实验结果显示,miR-29a与IGF-1具有结合位点。q RT-PCR结果显示,与H_2O_2组相比,miR-29a mimics组miR-29a的表达量明显增高,IGF-1的表达量明显降低(P<0.05),miR-29a Inhibitors组miR-29a的表达量明显降低,IGF-1的表达量明显升高(P<0.05)。Western Blot结果显示,与H_2O_2组相比,miR-29a mimics组IGF-1的表达量明显下调(P<0.05),miR-29a Inhibitors组IGF-1的表达量明显上调(P<0.05)。2、荧光素酶报告实验结果显示,miR-29a与VEGFA具有结合位点。q RT-PCR结果显示,与H_2O_2组相比,miR-29a mimics组VEGFA的表达量明显降低(P<0.05),miR-29a Inhibitors组VEGFA的表达量明显升高(P<0.05)。Western Blot结果显示,与H_2O_2组相比,miR-29a mimics组VEGFA的表达明显下调(P<0.05),miR-29a Inhibitors组VEGFA的表达量明显上调(P<0.05)。3、与HPC-exos组相比,si-circ-exos组细胞PS外翻增多(P<0.05),细胞内ROS的释放增加(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量增多、Bcl-2、IGF-1表达量减少(P<0.05),细胞DNA片段化增多(P<0.05)。与si-circ-exos组相比,si-circ-exos+mimics组细胞PS外翻增多(P<0.05),细胞内ROS的释放增多(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量增多、Bcl-2与IGF-1表达量减少(P<0.05),细胞DNA片段化增多(P<0.05)。si-circ-exos+Inhibitors组细胞PS外翻减少(P<0.05),细胞内ROS的释放减少(P<0.05),Bax与Cleaved caspase3表达量减少、Bcl-2与IGF-1表达量增多(P<0.05),细胞DNA片段化减少(P<0.05)。与HPC-exos组相比,si-circ-exos组细胞G0/G1期升高、S+G2/M期比例降低(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.05),PCNA、Cyclin D1与VEGFA的表达量均明显降低、P21表达量明显升高(P<0.05),细胞迁移数目明显减少(P<0.05)。与si-circ-exos组相比,si-circ-exos+mimics组细胞G0/G1期比例升高、S+G2/M期比例降低(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.05),PCNA、Cyclin D1与VEGFA的表达量均明显降低、P21表达量明显升高(P<0.05),细胞迁移数目显着减少(P<0.05),si-circ-exos+Inhibitors组细胞G0/G1期比例降低、S+G2/M期比例升高(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05),PCNA、Cyclin D1与VEGFA的表达量均明显升高,P21表达量明显降低(P<0.05),细胞迁移数目均明显增多(P<0.05)。小结:在氧化应激微环境中,HPC-exosomal circ HIPK3靶向抑制miR-29a调节IGF-1、VEGFA的表达,从而抑制CMECs的凋亡、促进CMECs的增殖及迁移。结论:1、缺氧预处理心肌细胞可释放保护性的外泌体抑制氧化损伤心肌微血管内皮细胞的凋亡,并促进其增殖与迁移。2、缺氧预处理心肌细胞源外泌体发挥保护作用的潜在机制可能是通过传递circ HIPK3,竞争性结合miR-29a,调节IGF-1与VEGFA的表达,从而发挥作用。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-05-01）
郭金程[9]（2019）在《哺乳动物心肌细胞增殖能力影响因素分析》一文中研究指出心脏是哺乳动物重要的器官之一,承担着运输养料及氧气的作用。心脏病如心肌梗死等会导致大量心肌细胞死亡,研究心肌细胞增殖有利于解决此问题。通过查阅文献,研究心肌细胞增殖因素可为心脏病治疗提供意见。(本文来源于《现代商贸工业》期刊2019年10期）
叶依娜[10]（2019）在《微小RNA对哺乳动物心肌细胞增殖的影响》一文中研究指出通过查阅文献的方式,了解微小RNA对于哺乳动物心肌细胞增殖的影响,为心脏疾病治疗提供些许借鉴意见。(本文来源于《中国高新科技》期刊2019年07期）
心肌细胞增殖论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究抗增殖蛋白(PHB)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的心肌细胞损伤中的作用。方法:将心肌H9c2细胞分为4组,以不感染病毒且不用TNF-α处理的H9c2细胞作为对照组,以不感染病毒、仅用20μg/L的TNF-α细胞培养液培养的细胞作为TNF-α组,以行Lv-PHB或Lv-NC感染、并用含有20μg/L的TNF-α细胞培养液培养24 h的细胞作为Lv-PHB+TNF-α组和Lv-NC+TNF-α组。采用MTT法测定4组细胞的增殖活性,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Cleaved Caspase-3、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Cleaved Caspase-12蛋白表达水平。结果:Lv-PHB+TNF-α组细胞中PHB蛋白和mRNA表达水平高于TNF-α组(P <0. 05)。与对照组比较,TNF-α组细胞增殖活性降低,LDH漏出率升高,凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、CHOP、Cleaved Caspase-12蛋白水平也升高(P <0. 05)。与TNF-α组比较,Lv-PHB+TNF-α组细胞增殖活性升高,LDH漏出率降低,凋亡率降低,细胞中Cleaved Caspase-3、CHOP、Cleaved Caspase-12蛋白水平降低(P <0. 05)。结论:上调PHB表达可以减轻TNF-α诱导的心肌细胞损伤,提高心肌细胞活性、降低细胞凋亡水平。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
心肌细胞增殖论文参考文献
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