导读:本文包含了荧光假单胞菌蛋白酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:原料乳,荧光假单胞菌,胞外蛋白酶,热稳定性
荧光假单胞菌蛋白酶论文文献综述
吕高婧[1]（2014）在《荧光假单胞菌胞外蛋白酶对高钙奶品质的影响》一文中研究指出影响高钙奶的因素有很多,而嗜冷菌,尤其是荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)分泌的耐热胞外蛋白酶常常是影响其品质的重要因素之一。本文对荧光假单胞菌耐热胞外蛋白酶酶学特性及其对高钙奶品质的影响进行了研究,主要结果如下：1荧光假单胞菌的分离鉴定对安徽一牛场的原料乳进行嗜冷菌的分离纯化,得到一株嗜冷菌。基于形态学观察、生理生化试验、16S rDNA分子生物学试验进行菌株鉴定,发现该菌为革兰氏阴性短杆菌、自体可产荧光、与GenBank中登录的荧光假单胞菌的同源性在92.5%～97.6%之间、具有与荧光假单胞菌相符的生理生化特征,确定为荧光假单胞菌。该荧光假单胞菌的最适生长温度为30℃。2荧光假单胞菌胞外蛋白酶酶学特性采用粗分离、硫酸铵沉淀、DEAE-SepharoseFF离子交换层析、Sephadex G-100葡聚糖凝胶过滤层析对荧光假单胞菌胞外蛋白酶进行纯化,纯化后的胞外蛋白酶的分子量约为45kD。采用福林-酚试剂法测定胞外蛋白酶的活性,发现该酶的最适温度为30℃,最适pH为8.0。该蛋白酶为耐热碱性蛋白酶,随着温度的升高,酶的活性出现了一定程度的下降,但并没有完全消失,酶液经80℃、20min和130℃、1min热处理后,残留酶活分别为原酶活的77.64%和39.28%.采用差示扫描量热法(DSC)测定胞外蛋白酶的热滞活性,发现该胞外蛋白酶不具有热滞活性(抗冻性),与荧光假单胞菌的嗜冷机制无直接关系。3胞外蛋白酶对高钙奶品质的影响胞外蛋白酶对酪蛋白的水解顺序为κ-casein> β-casein> αs-casein,对高钙奶中酪蛋白存在优先水解现象。胞外蛋白酶可引起高钙奶和纯牛奶酸度、黏度和蛋白水解度的增加。对高钙奶黏度和蛋白水解度的影响大于纯牛奶。PEN3电子鼻10个传感器对不同时间取样的高钙奶风味物质都有一定的响应,在65-67s时信号较稳定。主成分分析(Principal Component Analysis, PCA)和线性判别式分析(LDA)分析贡献率分别为88.029%和87.54%。高钙奶在贮存过程中,乳中有些物质被降解,产生一些新的风味物质(如氮氧化物、硫化物、芳香成分等),使得高钙奶中风味物质的组成和比重发生了变化。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2014-05-01）
吕高婧,刘艳玲,徐洪军,薛秀恒,王志耕[2]（2013）在《冷藏原料乳中荧光假单胞菌的分离鉴定及其产蛋白酶特性研究》一文中研究指出【目的】对冷藏原料乳中易污染的嗜冷菌进行分离筛选,为提高乳品品质、控制乳品质量提供参考。【方法】从冷藏原料乳中筛选出1株嗜冷菌,通过形态学观察、生理生化试验、16SrDNA分子生物学分析,对该株嗜冷菌进行鉴定;并采用福林-酚试剂法、蛋白酶定性检测试验、耐热性试验以及牛奶酸度、黏度影响等试验,对其产酶特性进行研究。【结果】从冷藏原料乳中分离出的该株嗜冷菌为革兰氏阴性短杆菌,与GenBank中登录的荧光假单胞菌的生理生化特征相符,二者同源性为92.5%~97.6%。对该菌产胞外酶能力的研究发现,该菌所产胞外酶为一种耐热碱性蛋白酶,最适温度为30℃,最适pH为8.0,可引起牛乳黏度增大、凝集和乳清析出。【结论】从冷藏原料乳中分离出了嗜冷荧光假单胞菌,该菌所产胞外碱性蛋白酶会引起牛乳黏度增加、凝集和乳清析出,明显缩短乳品的保质期。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2013年11期）
张书文,刘鹭,李红娟,孙洁,崔文明[3]（2012）在《荧光假单胞菌胞外蛋白酶的纯化及特性研究》一文中研究指出采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析方法对从原料乳中分离出一株荧光假单胞菌胞外耐热蛋白酶进行纯化及特性研究。将纯化后的单一蛋白酶进行SDS-PAGE分子质量测定,并考察最适温度、最适pH值、热稳定性、金属离子对其酶活性的影响及对该蛋白酶的氨基酸种类分析。纯化后蛋白酶的分子质量为47kD,经纯化后蛋白酶比活力提高了近61.38倍;最适温度和pH值分别为30℃和7.0;二硫苏糖醇对蛋白酶活性具有一定的抑制作用,Fe2+可以促进蛋白酶活性的提高;该酶具有较强耐热性,原酶液经130℃热处理3min后,残留酶活仍超过原酶液的47.67%;该蛋白酶氨基酸组成中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和谷氨酸(Glu)的含量占明显优势,其中Gly含量最高,物质的量分数高达42%。(本文来源于《食品科学》期刊2012年09期）
李盛楠[4]（2010）在《荧光假单胞菌GcM5-1A鞭毛蛋白对黑松的作用机理及蛋白酶抑制剂防治松褐天牛的应用研究》一文中研究指出采用细胞免疫荧光分析、细胞染色观察、电导率测定以及基因组DNA电泳分析技术,对松材线虫携带的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens GcM5-1A)分泌的鞭毛蛋白对黑松愈伤组织细胞的作用及其致死方式进行研究。结果表明,鞭毛蛋白与黑松(Pinus thunbergii)细胞之间存在直接的相互作用；鞭毛蛋白处理的细胞,细胞膜皱缩变形、细胞质浓缩、细胞核解体,形成若干小核,细胞质中的RNA降解；处理细胞的着色力增强,细胞培养液的电导率增加,说明鞭毛蛋白可增加处理细胞的细胞膜透性；基因组DNA的电泳分析证实,处理细胞的DNA发生了断裂,但无明显的梯子形成,推测鞭毛蛋白对黑松细胞的致死方式为非典型的细胞凋亡。为进一步验证鞭毛蛋白的毒性,本实验构建了组成分泌表达载体pUC18ompA,将荧光假单胞菌Pf-5鞭毛蛋白的编码基因fliC克隆到pUC18ompA构建pUC18ompA-fliC,重组质粒转化E.coli BL21(DE3)构建了工程菌。工程菌与无菌松材线虫混合接种黑松无菌苗,研究其对无菌苗的致病能力。接种试验结果表明,工程菌与无菌松材线虫混合接种同样可以引起黑松无菌苗的萎蔫。进一步验证了体内荧光假单胞菌鞭毛蛋白在松萎蔫病致病过程中的作用。本研究还对松萎蔫病的防治做了初步探讨。从沙蚕(Perinereis aibuhitensis Grube)的cDNA文库中筛选并鉴定了一半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPI)基因。氨基酸序列分析结果显示,该基因编码蛋白与斑马鱼(Danio rerio) Zgc:153129,水蛭cystatin B以及人ChainA, stefin B四聚体的同源性分别为51%,48%和48%。CPI基因克隆到胞内表达载体pET-15b,并在大肠杆菌中表达。经Ni+亲和层析和DEAE-Sepharose FF离子交换层析纯化重组CPI (PA-CPI).聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析推测,PA-CPI相对分子量为16 KDa。活性分析显示,重组蛋白能够抑制木瓜蛋白酶的蛋白水解活性。将CPI编码基因亚克隆到组成分泌表达载体并进行胞外表达。Western-blotting分析结果显示,PA-CPI能够分泌到培养基中。生测结果表明,携带pUC18ompAcat-CPI质粒的E. coli DH5a对松褐天牛(Monochamus alternatus)和光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)的致死率与未转化的E. coliDH5a和培养基对照相比均具有显着性差异。(本文来源于《青岛大学》期刊2010-05-05）
孙妍,母智深,邱承光[5]（2008）在《荧光假单胞菌蛋白酶水解牛乳的免疫活性研究》一文中研究指出受试小鼠分别灌喂生理盐水、低剂量(100mg/kg·bw,组I)及高剂量(250mg/kg·bw,组II)荧光假单胞菌蛋白酶水解脱脂奶粉形成的水解液,30d后测定其免疫活性指标,就其水解液对小鼠免疫功能的影响进行了试验研究。结果显示:低剂量可明显增强脾脏指数(P<0.05),而对胸腺指数影响不明显;高、低剂量对小鼠脾淋巴细胞增殖能力也无显着影响;但高剂量可显着增强单核巨噬细胞吞噬功能(P<0.05);24h及48h高、低剂量对小鼠迟发型变态反应和抗体细胞生成能力均有显着的增强作用(P<0.05);表明脱脂奶粉的荧光假单胞菌蛋白酶水解液可以提高小鼠免疫功能。(本文来源于《现代食品科技》期刊2008年08期）
孙妍[6]（2008）在《荧光假单胞菌蛋白酶水解牛乳特性及免疫功能研究》一文中研究指出为了初步探索荧光假单胞菌蛋白酶(Pseudomonas Fluorescens Protease,PFP)水解牛乳的特性以及水解物的免疫活性,先就PFP对牛乳中主要蛋白质的水解特性进行了试验研究,确定了水解的最佳条件,并在此基础上,进一步研究了牛乳的PFP水解物对小鼠免疫功能的影响。本试验研究包括以下叁个部分:1.PFP酶学性质的初步研究:对PFP的含量、活性、酶的最适温度及pH值进行了研究。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)确定了经过盐析、超滤、离子交换层析、疏水层析和凝胶层析后的蛋白酶达到了电泳纯;通过考马斯亮蓝法测定酶的含量;通过偶氮酪蛋白法测定酶的活性及酶的最佳温度与pH值。结果表明:得到的PFP为电泳纯蛋白酶;酶的含量为62.37μg/mL;酶的活性为17333 U/mL;酶的最佳温度为40℃,最佳pH值为7.5。2.PFP水解牛乳蛋白特性的研究:就PFP对牛乳中主要六种蛋白质的水解特性进行了试验研究,确定了形成免疫活性肽的最佳条件。PFP水解牛乳中六种蛋白质后形成的水解物分别用SDS-PAGE和反相高效液相色谱(Reverse phase-highperformance liquid chromatograph,RP-HPLC)法检测,通过正交试验优化了水解工艺参数。结果表明:α_s-CN、β-CN、κ-CN均在PFP作用下得以水解,而BSA、α-la、β-lg叁种乳清蛋白均未被水解。以RP-HPLC方法对PFP水解酪蛋白形成的免疫活性肽的测定,在通过210 nm处检测最大吸收峰面积得出最佳水解工艺参数:水解时间为3 h、水解pH 6.5、水解温度40℃、蛋白酶与底物浓度比为1:200(v/v)。3.PFP水解脱脂乳粉产物免疫活性的研究:试验研究了脱脂乳粉的PFP水解物对小鼠免疫功能的影响。受试小鼠分别灌喂生理盐水、低剂量(100 mg/Kg.bw)及高剂量(250 mg/Kg.bw)PFP水解脱脂乳粉形成的水解产物,30 d后测定小鼠免疫活性指标,就水解物对小鼠免疫功能的影响进行了试验研究。结果显示:高、低剂量饲喂对小鼠生长均无显着影响;低剂量饲喂可增强脾脏指数(P＜0.05),而对胸腺指数影响不明显;高剂量饲喂可增强单核巨噬细胞吞噬功能(P＜0.05);低剂量饲喂24 h及高剂量饲喂48 h均显着提高小鼠迟发型变态反应(P＜0.05),而低剂量饲喂48 h及高剂量饲喂24 h小鼠迟发型变态反应及抗体细胞生成能力均有极显着的增强作用(P＜0.01);表明脱脂乳粉的PFP水解物可以提高小鼠免疫功能。通过完成叁个部分的试验研究,可以得出PFP是一种对热有一定的耐受性的蛋白酶,该蛋白酶可水解牛乳中的酪蛋白,但不水解乳清蛋白,且水解物均含有免疫活性肽。PFP对酪蛋白酶解形成免疫活性肽的水解时间为3 h、水解PH 6.5、水解温度40℃,酶与底物浓度比为1:200(v/v);PFP水解脱脂乳粉物可以促进小鼠免疫器官的发育、刺激吞噬细胞的吞噬功能、增强迟发性变态反应以及增加抗体的生成数,因此可以提高小鼠免疫功能。本研究对PFP的合理利用提供了一条新的思路,同时为免疫活性肽的形成提供一条可行的技术思路,并丰富了牛乳源免疫活性肽的内容。(本文来源于《华中农业大学》期刊2008-06-01）
荧光假单胞菌蛋白酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】对冷藏原料乳中易污染的嗜冷菌进行分离筛选,为提高乳品品质、控制乳品质量提供参考。【方法】从冷藏原料乳中筛选出1株嗜冷菌,通过形态学观察、生理生化试验、16SrDNA分子生物学分析,对该株嗜冷菌进行鉴定;并采用福林-酚试剂法、蛋白酶定性检测试验、耐热性试验以及牛奶酸度、黏度影响等试验,对其产酶特性进行研究。【结果】从冷藏原料乳中分离出的该株嗜冷菌为革兰氏阴性短杆菌,与GenBank中登录的荧光假单胞菌的生理生化特征相符,二者同源性为92.5%~97.6%。对该菌产胞外酶能力的研究发现,该菌所产胞外酶为一种耐热碱性蛋白酶,最适温度为30℃,最适pH为8.0,可引起牛乳黏度增大、凝集和乳清析出。【结论】从冷藏原料乳中分离出了嗜冷荧光假单胞菌,该菌所产胞外碱性蛋白酶会引起牛乳黏度增加、凝集和乳清析出,明显缩短乳品的保质期。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
荧光假单胞菌蛋白酶论文参考文献
[1].吕高婧.荧光假单胞菌胞外蛋白酶对高钙奶品质的影响[D].安徽农业大学.2014
[2].吕高婧,刘艳玲,徐洪军,薛秀恒,王志耕.冷藏原料乳中荧光假单胞菌的分离鉴定及其产蛋白酶特性研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2013
[3].张书文,刘鹭,李红娟,孙洁,崔文明.荧光假单胞菌胞外蛋白酶的纯化及特性研究[J].食品科学.2012
[4].李盛楠.荧光假单胞菌GcM5-1A鞭毛蛋白对黑松的作用机理及蛋白酶抑制剂防治松褐天牛的应用研究[D].青岛大学.2010
[5].孙妍,母智深,邱承光.荧光假单胞菌蛋白酶水解牛乳的免疫活性研究[J].现代食品科技.2008
[6].孙妍.荧光假单胞菌蛋白酶水解牛乳特性及免疫功能研究[D].华中农业大学.2008