导读:本文包含了缺陷株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:幽门螺杆菌,非编码RNA,6S,RNA,转录调控
缺陷株论文文献综述
刘芳[1]（2019）在《幽门螺杆菌6S RNA基因缺陷株的构建及生物学功能初步研究》一文中研究指出目的:了解不同培养条件对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)6S RNA基因表达的影响;通过基因工程构建6S RNA突变株,初步探讨6S RNA在Hp致病过程中的生物学功能。方法:1、不同培养条件对Hp ATCC 26695 6S RNA基因表达的影响:通过RT-qPCR分析Hp ATCC 26695在不同生长时间(24h、26h、48h、60h),不同pH(5.0、5.5、6.0、7.5),不同温度(25℃、30℃、37℃、42℃)时Hp-6S RNA的转录表达差异。2、Hp-6S RNA基因缺陷株的构建及其表型分析:(1)利用同源重组技术构建质粒pSD-6S,电转化Hp ATCC 26695,通过菌落PCR和RT-qPCR筛选和鉴定Hp-6S RNA缺陷菌株,菌株命名为:Δ6S RNA。(2)比较野生株Hp ATCC 26695与突变株Δ6S RNA的表型差异:(1)微需氧条件下,每隔12h测定Hp ATCC 26695与Δ6S RNA在BHI液体培养基中的OD_(600)值,制作生长曲线;(2)扫描电子显微镜观察两菌株在培养24h、36h、48h、60h的形态变化;(3)提取Hp ATCC 26695与Δ6S RNA细菌总蛋白,经Western-Blot鉴定两菌株在培养24h、36h、48h、60h的CagA蛋白表达差异;同时使用尿素酶酶联免疫分析试剂盒检测尿素酶含量和活性差异;(4)收集Hp ATCC 26695与Δ6S RNA在24h、36h、48h、60h的培养上清液与菌体破碎液作用于GES-1细胞,以Hp培养基和RPMI1640培养基分别作为阴性对照和空白对照,于12h,24h,36h,48h观察细胞形态的变化以及CCK-8法检测细胞的活力。结果:1、(1)Hp ATCC 26695生长曲线测定:Hp ATCC 26695在37℃微需氧环境下随着培养时间的延长,均呈现迟缓期、对数期、稳定期,在48h达到对数期高峰值,培养60h后进入稳定期。(2)RT-qPCR检测不同培养条件对Hp ATCC26695 6S RNA基因表达的影响:(1)单因素方差分析,Hp ATCC 26695 6S RNA基因表达量在24h,36h,48h和60h均有统计学差异(P<0.05),在24h表达量最高,随着培养时间延长,表达量逐渐降低;(2)不同pH值(5.0、5.5、6.0、7.5)条件下,以pH7.5为对照,pH=6.0且培养36h时6S RNA基因表达量最高(45.026±22.014,t=﹣12.454,P=0.000<0.05);(3)单因素方差分析,Hp ATCC26695 6S RNA基因表达量在25℃,30℃,37℃,42℃培养24h无统计学差异(F=0.475,P=0.708>0.05)。2、(1)Hp-6S RNA缺陷菌株的构建:经菌落PCR、RT-qPCR以及测序分析,Hp-6S RNA缺陷菌株构建成功,得到Hp-6S RNA缺陷菌株:Δ6S RNA。(2)Δ6S RNA与Hp ATCC 26695生长曲线的测定:Hp ATCC 26695与Δ6S RNA在37℃微需氧环境下随着培养时间的延长,均呈现迟缓期、对数期、稳定期。单因素方差分析,在培养12h以后,Hp ATCC 26695与Δ6S RNA的生长出现统计学差异(P<0.05),Δ6S RNA比Hp ATCC 26695生长滞后12h,Hp ATCC 26695在48h达到对数期高峰值,Δ6S RNA在60h达到对数期高峰值。(3)不同时间点(24h,36h,48h,60h)的Hp ATCC 26695与Δ6S RNA在扫描电子显微镜下菌体形态相似,未见明显差异。(4)Δ6S RNA与Hp ATCC 26695 CagA蛋白表达量在不同时间点(24h,36h,48h,60h)无统计学差异(P>0.05);单因素方差分析,Δ6S RNA CagA蛋白表达量在24h与60h有统计学差异(F=2.201,P=0.043<0.05)。(5)Δ6S RNA与Hp ATCC 26695尿素酶含量OD_(450)在培养48h存在统计学差异(t=5.164;P=0.026<0.05);尿素酶活性OD_(450)分别在24h(t=22.486;P<0.05)、36h(t=6.995;P<0.05)、60h(t=3.497;P<0.05)存在统计学差异。(6)Hp ATCC 26695与Δ6S RNA不同时间点的上清液与破碎液对GES-1细胞的毒性作用在不同作用时间存在差异,Δ6S RNA上清液与破碎液对GES-1细胞的毒性作用比Hp ATCC 26695弱。结论:1、Hp-6S RNA能够对不同培养条件做出反应,是一种重要的转录调控因子。2、Hp-6S RNA基因对Hp的生长、毒力因子的表达等具有一定的调控作用。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-31）
胡戌琛,王玉霞,江文欣,牛晨光,林文珍[2]（2018）在《sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内表达对胞外多糖合成的影响》一文中研究指出目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为研究模型。实时荧光定量PCR观察胞外多糖合成相关基因的转录水平,蒽酮法观察生物膜胞外多糖合成情况。结果·与SmUA159和PIB169+LuxS-SmUA159菌株相比,sahH基因转入株sahH+LuxS-SmUA159的4种被检测基因(gtfA、gtfB、gtfC、gtfD)中,gtfA和gtfD转录水平有显着差异(均P<0.05),而gtfB和gtfC无明显差异。SmUA159、PIB169+LuxS-SmUA159和sahH+LuxS-SmUA159胞外多糖合成量无明显差异。结论·sahH基因转入可影响变异链球菌胞外多糖合成相关基因的表达,但不影响细菌总体胞外多糖合成量。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2018年03期）
张加勤,黄珊珊,洪国粦[3]（2016）在《变异链球菌clpP基因缺陷株的构建与鉴定》一文中研究指出目的变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)是人类口腔的主要致龋菌之一。除了可引起龋齿之外,还可引起牙髓病、牙周病、感染性心内膜炎等,严重影响人们的健康和生活质量。ClpP蛋白酶参与调节生物体蛋白质代谢过程,在清除不可逆损伤蛋白质、对外应激耐受及维持内环境稳态等生物过程中发挥重要作用。然而,变异链球菌clpP基因功能及其表达调控机制尚未阐明。为研究变异链球菌clpP基因的功能,本文利用CreloxP同源重组的方法构建变异链球菌ClpP基因缺陷株的构建并进行初步鉴定。方法(1)设计引物两端加入loxP位点,以质粒pIB107为模版,PCR扩增KamR基因片段,利用Qiagen PCR production Kit进行纯化,回收lox71-KamR-lox66基因片段;(2)以S.mutans UA159为模版,PCR扩增clpP基因片段,插入pMD-20T载体,得到pMD-clpP克隆质粒;(3)EcoRI/BamHI酶切pMD-clpP克隆质粒,Qiagen Gel Extration Kit回收大片段,与lox71-KamR-lox66基因片段建立连接体系,转化E.coli DH5,使用KAN抗性LB平板筛选,限制性内切酶EcoRI/BamHI酶切和PCR扩增鉴定,得到同源重组组质粒pDclpP;(4)XhoL线性化pDclpP质粒,借助感受刺激多肽(competence-stimulating peptide,CSP),将线性化的pDclpP质粒转化S.mutans UA159,KAN抗性THY Agar平板30℃过夜筛选,挑取阳性克隆PCR鉴定,得到clpXP::kan株;(5)CSP转化热度敏感质粒pCrePA,30℃培养删除抗性基因,再转37℃培养剔除pCrePA质粒,获得变异链球菌clpP突变株,PCR鉴定;(6)提取变异链球菌及其clpP突变株总RNA,42℃逆转录为cDNA,RT PCR鉴定变异链球菌clpP的表达情况。结果(1)同源性比对结果证实,与同属基因组低G+C含量的枯草杆菌相似,变异链球菌亦存在ClpP蛋白酶,其编码基因clpP(SMU_1672)591bp,位于S.mutans UA159基因组第1587236 bp~1587826 bp,与枯草芽孢杆菌clpP基因同源性高达93.9%,其编码产物为21.5kDa的多肽分子,与枯草芽孢杆菌ClpP蛋白具有83.8%的同源性;(2)经PCR、酶切及DNA测序验证,成功构建同源重组质粒pDclpP;(3)PCR结果证实成功在变异链球菌中敲除clpP基因;(4)RT PCR结果证实变异链球菌clpP突变株中无clpP基因表达产物。结论成功构建变异链球菌中clpP基因缺失突变株。(本文来源于《第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编》期刊2016-09-09）
汪伟伟,夏歆,王静瑜,张桂红,陈龙[4]（2015）在《伤寒沙门菌外膜孔道蛋白ompC、ompF缺陷株的制备及其耐药性》一文中研究指出目的:制备伤寒沙门菌omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,研究外膜孔道蛋白Omp C、Omp F在伤寒沙门菌耐药中的作用。方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,比较伤寒沙门菌omp C缺陷株、omp F缺陷株及omp C-omp F双缺陷株与野生株在多黏菌素B、卡那霉素以及氨苄青霉素处理下的生存能力。结果:成功制备伤寒沙门菌omp C单缺陷以及omp C-omp F双缺陷株。各菌株在普通培养条件下生长情况无差异;多黏菌素B及氨青苄霉素处理条件下omp C缺陷株、omp C-omp F双缺陷株生存能力明显强于野生株,而omp F缺陷株生存能力则低于野生株;卡那霉素处理条件下,各缺陷株生存能力均明显低于野生株。结论:外膜孔道蛋白Omp C、Omp F参与伤寒沙门菌耐药,但对不同药物的耐药机制不尽相同,具体机制有待进一步研究。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2015年06期）
张加勤,饶慧华,徐巧丽,黄朝阳,房丽丽[5]（2015）在《铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株的构建》一文中研究指出目的构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株。方法分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3′、5′侧翼序列,将clpP基因及其3′、5′侧翼序列克隆至pMD19T载体,EcoRV切除clpP基因37bp~453bp片段后,引入庆大霉素抗性基因,构建重组质粒pCKR2;EcoRⅠ/HindⅢ双酶切重组质粒pCKR2,回收FclpP-GM-clpPR片段,与自杀质粒pEX18Tc连接,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pCKR3;将pCKR3质粒转化大肠埃希菌SM10,与铜绿假单胞菌PAO1双亲杂交,庆大霉素筛选得到铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株。结果经酶切鉴定同源重组载体pCKR3构建正确;PCR和DNA测序鉴定铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株构建成功。结论本研究成功敲除了铜绿假单胞菌clpP基因,为进一步研究clpP基因的生物学功能奠定了基础。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2015年07期）
赵忠胜,朱德强,王永远,郑志永,詹晓北[6]（2015）在《土壤杆菌exoR基因缺陷株生长及其热凝胶合成特性》一文中研究指出为考察exoR基因对土壤杆菌ATCC 31749生长和热凝胶合成的影响,采用叁亲本结合方法将含有exoR基因两端同源序列的自杀质粒p JQ-exoR-kan导入土壤杆菌野生菌中,获得了exoR基因缺失突变株。摇瓶发酵验证实验表明,ΔexoR突变株的生长受到一定程度的抑制,exoR的缺失导致了胞外多糖热凝胶的合成量和底物转化率明显增加,分别提高16.8%和19%。研究结果表明,exoR基因参与并强化土壤杆菌合成胞外多糖热凝胶的过程,有助于进一步完善土壤杆菌合成热凝胶的代谢调控网络。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2015年08期）
蒙俊,杨堃,黄洁,叶联华,陈华梅[7]（2015）在《大肠杆菌qseC基因敲除及其缺陷株运动能力研究》一文中研究指出目的通过Red同源重组法构建qseC基因缺失的大肠杆菌突变株,探讨qseC基因对大肠杆菌运动能力的影响.方法 PCR扩增两翼与目的基因上下游同源、含有氯霉素抗性基因片段,电击转化入大肠杆菌MC1000,在Red同源重组酶作用下,用含同源臂的氯霉素抗性片段置换目的基因qseC,并利用FLP位点专一性重组将氯霉素抗性基因删除.测定qseC基因缺失株运动能力的变化.结果 qseC基因已被成功敲除.在LB培养基中,qseC基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异.MC1000与MC1000qseC基因缺失株运动圆环的直径分别为(6.10±0.36)mm和(3.20±0.53)mm(P<0.01).结论成功构建大肠杆菌qseC基因缺失突变株,且qseC基因对细菌运动能力具有重要调控作用.(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2015年04期）
张宏柱,黄萍,刘兴容[8]（2015）在《乳牙高毒力变异链球菌HtrA缺陷株的构建及转化力的研究》一文中研究指出目的:构建乳牙高毒力变异链球菌HtrA基因缺陷株(简称HtrA缺陷株),比较HtrA缺陷株和高毒力株的转化力。方法:将乳牙变异链球菌HtrA高毒力菌株复苏,厌氧培养,应用基因同源重组技术进行HtrA基因缺陷株的构建。以含有HtrA基因的变异链球菌标准株DNA作为参照进行PCR鉴定。将乳牙变异链球菌HtrA高毒力株与HtrA缺陷菌株分别在TPY液体培养基中增菌,厌氧培养,以菌落计数来比较二者的转化力。结果:凝胶自动成像分析结果显示,HtrA缺陷株在500 bp未出现HtrA基因片段的特异性电泳条带,而在710、1 200、1 100 bp处分别出现了红霉素抗性基因片段、HtrA基因上游引物序列合并红霉素抗性基因引物HtrAUF/P1以及HtrA基因下游引物序列合并红霉素抗性基因引物HtrAUR/P2的特异性条带。而HtrA高毒力株的表现则相反。转化力检测结果显示:6、9、12、24、48 h,高毒力株的菌落数量均明显多于HtrA基因缺陷株(P<0.05)。结论:通过基因重组等方法可以将变异链球菌高毒力株中的Htr A基因敲除,构建高毒力变异链球菌Htr A基因缺陷株;变异链球菌高毒力株的转化力高于HtrA基因缺陷株,提示HtrA与变异链球菌的致龋性有关。(本文来源于《牙体牙髓牙周病学杂志》期刊2015年03期）
吴亮,薛兰兰,王晓,吴腊梅,姜旭淦[9]（2014）在《用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株》一文中研究指出目的构建基于四环素诱导调控表达系统的刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)缺陷株。方法从弓形虫基因组中扩增fabz基因并构建四环素调控诱导表达载体pTetO7-Sag1-FABZ-Ty-DHFR,电穿孔法导入弓形虫TATi株,通过乙胺嘧啶抗性和极限稀释法筛选FABZ缺陷株,蛋白质印迹(Western blotting)检测虫体内附加表位标签Ty的表达。在5×105个FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素(终浓度为1μg/ml),Western blotting检测带有Ty标签的FABZ表达情况。结果筛选获得的缺陷株可表达带有Ty标签的转运肽型FABZ和成熟型FABZ。FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素24 h和48 h后,转运肽型FABZ表达量均较对照组显着降低(P<0.05)。结论构建了由脱水四环素调控表达的弓形虫FABZ缺陷株。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2014年04期）
王玉霞,高丽,江文欣,马瑞,唐子圣[10]（2014）在《变异链球菌LuxS缺陷株甲基循环通路的恢复构建》一文中研究指出目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株。方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建。通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证目的蛋白的表达。采用SAS8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Western印迹检测2种蛋白在大肠杆菌中均得到正确表达,验证了克隆载体的正常表达能力;反转录PCR验证了变异链球菌LuxS缺陷株中luxS及sahH mRNA的存在;发光实验证实LuxS阳性表达对照株AI-2的分泌能力恢复。结论:成功构建变异链球菌LuxS缺陷的代谢恢复株,为探讨LuxS的调控机制提供了分子生物学工具及实验对照。(本文来源于《上海口腔医学》期刊2014年04期）
缺陷株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为研究模型。实时荧光定量PCR观察胞外多糖合成相关基因的转录水平,蒽酮法观察生物膜胞外多糖合成情况。结果·与SmUA159和PIB169+LuxS-SmUA159菌株相比,sahH基因转入株sahH+LuxS-SmUA159的4种被检测基因(gtfA、gtfB、gtfC、gtfD)中,gtfA和gtfD转录水平有显着差异(均P<0.05),而gtfB和gtfC无明显差异。SmUA159、PIB169+LuxS-SmUA159和sahH+LuxS-SmUA159胞外多糖合成量无明显差异。结论·sahH基因转入可影响变异链球菌胞外多糖合成相关基因的表达,但不影响细菌总体胞外多糖合成量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
缺陷株论文参考文献
[1].刘芳.幽门螺杆菌6SRNA基因缺陷株的构建及生物学功能初步研究[D].贵州医科大学.2019
[2].胡戌琛,王玉霞,江文欣,牛晨光,林文珍.sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内表达对胞外多糖合成的影响[J].上海交通大学学报(医学版).2018
[3].张加勤,黄珊珊,洪国粦.变异链球菌clpP基因缺陷株的构建与鉴定[C].第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编.2016
[4].汪伟伟,夏歆,王静瑜,张桂红,陈龙.伤寒沙门菌外膜孔道蛋白ompC、ompF缺陷株的制备及其耐药性[J].江苏大学学报(医学版).2015
[5].张加勤,饶慧华,徐巧丽,黄朝阳,房丽丽.铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株的构建[J].中国人兽共患病学报.2015
[6].赵忠胜,朱德强,王永远,郑志永,詹晓北.土壤杆菌exoR基因缺陷株生长及其热凝胶合成特性[J].食品与发酵工业.2015
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[8].张宏柱,黄萍,刘兴容.乳牙高毒力变异链球菌HtrA缺陷株的构建及转化力的研究[J].牙体牙髓牙周病学杂志.2015
[9].吴亮,薛兰兰,王晓,吴腊梅,姜旭淦.用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2014
[10].王玉霞,高丽,江文欣,马瑞,唐子圣.变异链球菌LuxS缺陷株甲基循环通路的恢复构建[J].上海口腔医学.2014