导读:本文包含了局部转染论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:CTLA4Ig,CD40Ig,肾移植,免疫耐受
局部转染论文文献综述
李建军,蔡曼波,谭书波,龙建华,陈选才[1]（2016）在《CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部共转染对异种大鼠移植肾Bcl-2/Bax的影响》一文中研究指出目的:探讨CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部转染对异种移植肾Bcl-2/Bax的影响,探讨其诱导免疫耐受的机制。方法:以PcDNA3.1(+)-CTLA4Ig和PcDNA3.1(+)-CD40Ig为载体,通过脂质体lipo2000将CTLA4Ig与CD40Ig双基因转入豚鼠肾脏,以豚鼠为供者,SD大鼠为受者,行异种肾移植手术。将豚鼠到SD大鼠的异种肾移植模型分为pcDNA3.1空载体组(第1组)、CD40Ig基因局部转染组(第2组)、CTLA4Ig基因局部转染组(第3组)和CD40Ig、CTLA4Ig双基因局部转染组(第4组)。Western blot检测移植肾HA-CTLA4Ig、HACD40Ig蛋白表达和移植肾Bcl-2、Bax的表达情况,观察移植肾病理改变。结果:术后第5天,第4组移植肾淋巴细胞浸润明显少于第2组和第3组,第4组移植肾Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05),而Bax蛋白表达则显着降低(P<0.05)。结论:CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部转染供肾可降低Bax表达,上调Bcl-2表达,诱导移植肾免疫耐受。(本文来源于《临床泌尿外科杂志》期刊2016年06期）
接惠群[2]（2016）在《腺相关病毒介导XIAP基因内耳局部转染拮抗铂类药物的耳毒性》一文中研究指出目的:经不同径路实现重组腺相关病毒在常用实验动物内耳的局部基因转染,得到较佳手术径路后,利用重组腺相关病毒作为载体实现X连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)在内耳的过表达,观察其能否拮抗顺铂和卡铂的耳毒性。方法:1.不同径路实现重组腺相关病毒在实验动物内耳的局部基因转染:采用不同径路完成病毒的内耳注射后,各部分实验动物均在术后两周检测闭合声场ABR阈值,处死观察听泡内有无感染,取基底膜免疫组化染色后铺片观察转染效率。2.耳蜗局部转染XIAP基因拮抗顺铂耳毒性:豚鼠行耳后入路使用Ⅱ型胶原蛋白酶处理圆窗后经圆窗渗透径路,一侧显微注射r AAV8-XIAP-6myc,另一侧给予生理盐水。术后分为顺铂给药组和对照组,1周后进行外源性和内源性XIAP的western-blot实验,检测双侧闭合声场ABR,计数外毛细胞和螺旋神经节神经细胞。3.耳蜗局部转染XIAP基因拮抗卡铂耳毒性:确定适用卡铂剂量之后,行耳后入路鼓阶切开径路,一侧显微注射r AAV8-XIAP-6myc,另一侧给予生理盐水,腹腔注射卡铂1周后检测双侧闭合声场ABR和CAP,计数内毛细胞。结果:1.豚鼠的圆窗膜渗透径路没有造成听力损伤且实现了底回外毛细胞40%以上的转染;灰鼠内耳解剖结构特殊,鼓阶切开径路可以实现内毛细胞底回和中间回80%以上的转染。2.1)western-blot结果提示r AAV成功实现了外源性XIAP在内耳的过表达;2)r AAV侧的ABR阈值、毛细胞计数和螺旋神经节神经细胞计数对比生理盐水侧均有统计学差异。3.对比r AAV侧和生理盐水侧,仅在4k HZ存在CAP幅值和内毛细胞计数的统计学差异。结论:1.胶原酶处理圆窗后渗透径路和鼓阶切开径路分别是豚鼠和灰鼠内耳基因转染的较佳径路。2.r AAV-XIAP的内耳局部转染成功提高了XIAP的表达,可以在一定程度上拮抗顺铂介导的外毛细胞和螺旋神经节神经细胞损伤。3.腺相关病毒介导的局部XIAP基因转染对灰鼠内毛细胞有一定地保护作用,但不能完全拮抗卡铂造成的听力损失。(本文来源于《上海交通大学》期刊2016-05-01）
唐远姣,向茜,冷钱英,张凌燕,邱逦[3]（2014）在《超声联合微泡促进大鼠损伤跟腱及肉芽组织局部基因转染的实验研究》一文中研究指出目的探讨超声联合微泡促进基因局部转染大鼠损伤跟腱及肉芽组织的最适超声转染条件。方法建立双侧大鼠跟腱损伤模型,在大鼠双侧损伤跟腱内局部注射微泡与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒混合溶液,应用不同输出功率、占空比及超声辐照时间的超声辐照双侧损伤处跟腱,根据荧光染色及免疫组化染色下EGFP表达结果判断转染效果。根据基因转染效果最高,同时正常组织损伤坏死最小筛选出最合适的照射条件。将大鼠分为4组:1质粒+微泡+超声辐照组,2质粒+微泡组,3质粒+超声辐照组,4单纯质粒组。根据前几步所选取的条件辐照损伤跟腱,观察跟腱及肉芽组织内的EGFP表达情况及正常组织损伤情况。结果在超声输出功率2 W/cm2、占空比20%、超声辐照10min条件下,跟腱及肉芽组织内EGFP表达明显,且无明显正常组织损伤。超声辐照+微泡+质粒组跟腱及肉芽组织内EGFP表达高于其余3组(P<0.05),其余各组间差异无统计学意义。结论在适合的超声辐照条件下,超声联合微泡能明显增强损伤肌腱及肉芽组织的基因转染效果,且不损伤正常组织,这为肌腱损伤的基因治疗的可行性提供了实验基础。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2014年06期）
张剑[4]（2014）在《局部转染C型利钠肽基因防治血管成形术后再狭窄的实验研究》一文中研究指出第一部分家兔C型利钠肽基因真核表达载体的构建及鉴定目的为开展血管成形术后C型利钠肽基因的基因治疗,构建家兔C型利钠肽基因重组真核表达载体。方法通过RT-PCR的方法从家兔腹主动脉组织中克隆C型利钠肽基因,将CNP基因片段通过亚克隆至克隆载体pMD 18-T中,使用Pst Ⅰ单酶酶切后筛选出负向插入片段,再用Hind Ⅲ和Kpn I双酶切法将目的CNP片段定向克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,用双酶切法、序列测定等方法对重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP进行鉴定。结果酶切及测序法鉴定都证实,家兔CNP基因被准确插入到pEGFP-N1酶切位点Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ中。结论含家兔CNP基因的真核表达载体的成功构建和鉴定,为C型利钠肽基因治疗的研究奠定了基础。第二部分重组pEGFP-N1/rCNP质粒在人脐静脉内皮细胞中的表达目的真核表达载体pEGFP-N1/rCNP转染体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察CNP基因在其中的表达。方法利用Lipofectamin TM 2000脂质体将重组质粒pEGFP-N1/rCNP转染人脐静脉内皮细胞。结果将重组质粒pEGFP-N1/rCNP转染人脐静脉内皮细胞,观察到目的基因CNP表达。结论家兔腹主动脉CNP基因的真核表达载体pEGFP-N1/rCNP可转染人脐静脉内皮细胞。第叁部分局部转染C型利钠肽基因防治血管成形术后再狭窄的实验研究目的检测家兔CNP基因重组真核质粒pEGFP-N1/rCNP在家兔髂动脉成形术再狭窄模型中的表达及其对血管成形术后再狭窄的防治作用。方法将重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP用腔内加压转染法在脂质体介导下转染家兔髂动脉成形术后再狭窄模型的髂动脉,以空白pEGFP-N1为阳性对照检测转染效率,分别用RT-PCR、病理学检测、蛋白质免疫印迹、荧光定量RT-PCR等方法检测重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP在血管中的表达,观察各种病理学指标。结果重组真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP在家兔髂动脉中可以高效表达,C型利钠肽基因mRNA及其蛋白的表达均明显增加,而空白pEGFP-N1组CNP表达明显降低。可观察到转染后血管内皮的修复增加,同时内膜增生的程度明显减轻,血管成形术后再狭窄率明显降低。结论重组CNP真核表达质粒pEGFP-N1/rCNP在家兔髂动脉血管成形术后再狭窄的模型中能够高效表达,CNP表达产物具有抑制血管成形术后局部血管再狭窄的作用,C型利钠肽的生理作用机制可能涉及抑制内膜增生,促进血管内皮修复等。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2014-11-01）
邹方正[5]（2014）在《CTLA4Ig与CD40Ig逆转录病毒局部转染供肾对异种鼠肾移植排斥反应的影响》一文中研究指出【目的】通过阻断CD28-B7和CD40-CD40L共刺激通路，经PLNCX2-FLAG-CTLA4Ig和PLNCX2-HA-CD40Ig双基因包装成逆转录病毒后局部转染入豚鼠肾脏，观察CTLA4Ig和CD40Ig局部转染对豚鼠到SD大鼠异种肾移植免疫耐受的诱导作用，为防治异种肾移植免疫排斥反应寻找新的途径。【方法】选用雄性SD大鼠（12-14周龄）、雄性豚鼠（12-14周龄）各40只，随机分为4组（每组SD大鼠、豚鼠各十只）。手术方式为将CTLA4Ig和CD40Ig逆转录病毒基因局部转染豚鼠肾脏，左侧肾脏异位移植到SD大鼠颈部，右侧肾脏冰块保存。第1组为空载体逆转录病毒对照组（A组）；第2组为CD40Ig基因逆转录病毒转染组（B组）；第3组为CTLA4Ig基因逆转录病毒转染组（C组）；第4组为CTLA4Ig和CD40Ig双基因逆转录病毒转染组（D组）。采用Westen bloting检测豚鼠右侧肾脏逆转录病毒转染效率。观察各组受鼠术后移植肾存活时间、受鼠存活时间。采用HE染色观察术后各组大鼠移植肾排斥反应级别，免疫组化技术检测Bax蛋白的表达，RT-PCR检测bcl-2/Bax mRNA的表达，并用流式细胞仪检测移植肾细胞凋亡率。【结果】1、Western blotting供肾局部转染CD40Ig或CTLA4Ig后，其组织中可见CD40Ig和（或）CTLA4Ig表达。A组无CD40Ig和CTLA4Ig表达，B组可见CD40Ig表达，C组可见CTLA4Ig表达，D组可见CD40Ig和CTLA4Ig都表达。2.移植肾及受鼠存活时间A组大鼠移植肾存活时间为（8.1±2.1）d，SD大鼠的存活时间为(9.5±2.3)d； B组、C组和D组移植肾的存活时间分别为(13.1±2.2)d、（12.4±2.6)d和（16.6±3.0)d,受鼠存活时间为(14.4±3.1)d、（14.5±3.3)d和（18.8±2.7)d，均明显长于A组（P<0.05)，其中D组移植肾及SD大鼠存活时间最长，与其他3组比较，差异均有统计学意义（P<0.05)。而B、C两组之间比较无明显统计学差异（P>0.05）。3. HE染色A组术后移植肾组织HE染色可见大量淋巴细胞浸润，Banff07移植肾病理分级为IIB-III级，提示移植肾排斥反应强烈。B组、C组也可见淋巴细胞浸润，但表达强度低于A组，Banff07移植肾病理分级为IIA-III级。而D组淋巴细胞浸润最少，Banff07移植肾病理分级为IA-IIB级,明显低于其他叁组。4.免疫组织化学检测A组移植肾组织Bax表达都呈棕褐色，为强阳性表达，强阳性率100％，B组、C组移植肾组织强阳性率分别为60％和80％，D组有1例成强阳性反应，4例成弱阳性反应，强阳性率20％（P <0.05)。5.RT-PCR结果RT-PCR结果显示,B、C、D组移植肾组织Bax mRNA的表达明显低于A组，其中以D组移植肾组织Bax mRNA的表达最低，bcl-2mRNA表达则相反，D组表达最高，A组表达最低（P<0.05）。而B、C两组之间比较无明显统计学差异（P>0.05）。6.移植肾细胞凋亡情况B、C两组细胞凋亡率为（24.34±2.78）%、（26.21±2.69）%，明显低于A组（54.69±6.25）%（P<0.05），而D组细胞凋亡率最低，为（15.03±1.21）%，与A、B、C组相比有显着差异（P<0.05）。而B、C两组之间比较无明显统计学差异（P>0.05）。【结论】1、CTLA4Ig和CD40Ig基因逆转录病毒局部转染肾脏均具有延长移植肾存活时间的作用，但两者本身并没有明显差异。2、同时转染CTLA4Ig和CD40Ig双基因逆转录病毒，能显着减轻异种移植肾的排斥反应，延长移植肾的存活时间。(本文来源于《南华大学》期刊2014-05-01）
白登彦,张海军,袁治国[6]（2013）在《局部转染Ngn2基因对大鼠实验性急性脊髓损伤运动功能影响的研究》一文中研究指出目的:研究局部转染Ngn2基因对急性脊髓损伤大鼠运动功能的影响。方法:将36只4月龄SPF级SD大鼠,随机分成3组,分别为A组(假手术组)、B组(实验组)、C组(对照组),每组12只。假手术组只咬除T8~T10棘突及椎板、不损伤脊髓,实验组和对照组采用改良Allen's打击法制造T8急性脊髓损伤模型,术后分别向B、C 2组损伤脊髓节段持续注射Ngn2质粒和空载体质粒各5μg。于术后1、2、3、4周采用BBB运动功能评分系统检测大鼠运动功能,术后1周应用RT-PCR检测损伤节段脊髓组织Ngn2基因表达,术后4周HE染色脊髓病理学检测及SP染色检测Nestin+细胞数。结果:术后各时间点实验组BBB评分明显优于对照组,有统计学意义(P<0.05);实验组大鼠脊髓组织中Ngn2mRNA有表达,而对照组无表达;实验组单个视野Nestin+细胞为(14.25±2.37)个,对照组单个视野Nestin+细胞为(2.54±1.14)个,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ngn2基因能够促进急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复,可能与诱导脊髓内源性神经干细胞的增殖有关。(本文来源于《中国伤残医学》期刊2013年09期）
刘妍,赵宁宁,林久祥[7]（2012）在《OPG基因局部转染抑制牙齿正畸移动后复发的研究》一文中研究指出目的:评价OPG基因局部转染对抑制正畸后牙齿复发的作用。材料和方法:18只雄性Wistar大鼠分为叁组。右上第一磨牙采用正畸镍钛拉簧近中移动。叁周后停止加力并不加任何保持装置,观察两周牙齿复发情况。在停止加力后分别对叁组进行不同的干预措施:实验组局部OPG基因转染;空白对照组进行空质粒注射;对照组不进行任何干预。采用叁维数字化模型(本文来源于《第十四次国际颅面生长发育与功能研讨会、第十一次全国口腔正畸学术会议论文汇编》期刊2012-09-19）
陈群,马守治,郭建斌,江俊,赵欣[8]（2012）在《局部转染人白细胞介素-10基因对去卵巢大鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响研究》一文中研究指出目的观察局部注射人白细胞介素-10(hIL-10)质粒对去卵巢大鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响及其机制。方法本研究于2009年1月至2011年3月在福建医科大学口腔医学院完成。将24只3月龄雌性SD大鼠随机分成4组,分别为假手术+hIL-10(SHAM+hIL-10)组、假手术+空载体(SHAM+VECTOR)组、去卵巢+hIL-10(OVX+hIL-10)组和去卵巢+空载体(OVX+VECTOR)组,每组6只。前两组大鼠实施卵巢切除假手术后12周,丝线结扎左侧上颌第二磨牙,制造实验性牙周炎模型(即形成SHAM+hIL-10+EP和SHAM+VECTOR+EP亚组),右侧不结扎作为对照牙(即形成SHAM+hIL-10+C和SHAM+VECTOR+C亚组)。后两组大鼠实施切除双侧卵巢手术后12周,丝线结扎左侧上颌第二磨牙,制造实验性牙周炎模型(即形成OVX+hIL-10+EP和OVX+VECTOR+EP亚组)。同时,在SHAM+hIL-10组大鼠的双侧上颌第二磨牙腭侧牙龈黏膜下和OVX+hIL-10组大鼠左侧上颌第二磨牙腭侧牙龈黏膜下注射hIL-10质粒(5μg)-脂质体(5μL)复合物;在SHAM+VECTOR组大鼠的双侧上颌第二磨牙腭侧牙龈黏膜下和OVX+VECTOR组大鼠的左侧上颌第二磨牙腭侧牙龈黏膜下注射空载体质粒(5μg)-脂质体(5μL)复合物。隔天注射1次,第7次注射后的48h,处死大鼠。观察各组大鼠骨密度、血清生化指标、牙槽骨吸收和牙周组织细胞因子的变化。结果转染hIL-10质粒后,SHAM+hIL-10+C组、SHAM+hIL-10+EP组和OVX+hIL-10+EP组根分叉区牙周膜IL-10阳性细胞数目分别显着高于SHAM+VECTOR+C组、SHAM+VECTOR+EP组和OVX+VECTOR+EP组(均P<0.05)。同SHAM+VECTOR+C组比较,SHAM+hIL-10+C组牙周膜IL-1β阳性细胞数目显著减少(P<0.05),RANKL阳性细胞数目显着增加(P<0.05)。同SHAM+VECTOR+EP组比较,SHAM+hIL-10+EP组牙周膜的IL-1β、IL-6、TNF-α和RANKL阳性细胞数目均显着减少(P<0.05)。同OVX+VECTOR+EP组比较,OVX+hIL-10+EP组牙周膜的IL-1β、IL-6、RANKL和MMP-8阳性细胞数目均显着减少(P<0.05)。结论局部注射hIL-10质粒可抑制去卵巢大鼠实验性牙周炎的牙槽骨吸收,可能与牙周组织促炎因子的表达下降有关。(本文来源于《中国实用口腔科杂志》期刊2012年09期）
赵然尊,龙仙萍,刘志江,王冬梅,石蓓[9]（2012）在《转染hRAMP1的间充质干细胞对心肌梗死后局部血管再生的作用》一文中研究指出目的探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制。方法密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2-EGFP后给予CGRP刺激,ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF和HGF水平。建立心肌梗死再灌注兔模型,采用随机数字表法分为MSChRAMP1组(pAd2-hRAMP1转染MSCs移植)、MSCnull组(pAd2-EGFP转染MSCs移植)组和对照组(等量生理盐水注射)(n=10)。2周时Western blot检测心肌梗死组织促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达;4周时TTC染色测定心肌梗死面积比;抗CD31免疫组化染色检测心肌梗死区及梗死周边区新生毛细血管密度。结果 CGRP诱导72 h后MSChRAMP1培养上清液中VEGF和HGF水平显着高于MSCnull组[VEGF:(1 859.4±267.4)vs(1 344.4±137.2);(1 052.2±239.3)vs(683.8±150.5)pg/ml,P<0.05]。细胞移植后4周TTC染色检测显示MSChRAMP1组心肌梗死面积显着降低对照组和MSCnull组[(10.1±2.9)%vs(30.6±2.7)%和(22.5±3.2)%,P<0.05];抗CD31免疫组化染色显示,MSChRAMP1组的梗死区和梗死交界区新生毛细血管计数明显高于对照组和MSCnull组(P<0.05);Western blot检测显示细胞移植后2周MSChRAMP1组心肌梗死区促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达显着高于对照组和MSCnull组(P<0.05)。结论MSChRAMP1能通过提高梗死区心肌组织中促血管生长因子VEGF和HGF的表达,促进心肌梗死区和梗死交界区新生毛细血管生成,降低心肌梗死面积。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2012年15期）
张金[10]（2012）在《局部转染lvOX40Ig和lvCTLA4Ig对同种异体复合组织移植的免疫调节作用及机制研究》一文中研究指出目的：探讨重组lvOX40Ig和lvCTLA4Ig局部转染同种异体复合组织移植阻断共刺激途径，观测目的基因在同种异体复合组织移植后对机体的免疫调节作用，以及局部表达OX40Ig和CTLA4Ig发挥免疫调节机制的研究。方法:构建了重组慢病毒载体OX40Ig和CTLA4Ig，体外同种异体复合组织局部目的基因转染，使移植物局部能够分泌OX40Ig和CTLA4Ig融合蛋白。检验慢病毒载体目的基因在293细胞的表达，验证其构建是否成功。采用近交系大鼠下腹壁浅动脉皮瓣移植模型，检验lvOX40Ig和lvCTLA4Ig介导的目的基因局部表达对阻断OX40/OX40L以及CD28/B7共刺激途径、延长移植物存活时间的作用。实验分为6组，组Ⅰ：未处理组；组Ⅱ：LvEGFP组；组Ⅲ：小剂量雷帕霉素治疗组；组Ⅳ：LvOX40Ig联合小剂量雷帕霉素组；组Ⅴ：LvCTLA4Ig联合小剂量雷帕霉素组；组Ⅵ：LvOX40Ig+LvCTLA4Ig联合小剂量雷帕霉素治疗组。比较各组移植物成活状况。检验其在移植物以及全身中的表达，混合淋巴细胞反应检验其免疫调节活性。检测移植后各组免疫细胞，细胞因子以及免疫相关趋化因子的变化。结果：体外转染LvOX40Ig和LvCTLA4Ig后，单一雷帕霉素治疗相比较空白对照组移植物存活时间差别有统计学意义，单一灌注LvOX40Ig或者LvCTLA4Ig联合小剂量雷帕霉素治疗与空载体病毒组比较能够显着延长移植物的存活时间，差别有统计学意义（P<0.05）。组织病理学检查术后7天，空载体病毒组与空白对照组符合Banff2007标准的Ⅲ级及以上免疫排斥反应，在各个单一基因联合小剂量雷帕霉素组及综合用药组的组织切片中可以观察到移植物存活状态显着提高，显微镜下无免疫排斥反应的表现。移植物术后28天观察显示，空白对照组，空载体病毒组以及雷帕霉素组同种异体皮瓣无一存活。剩余叁组LvOX40Ig组，LvCTLA4Ig组以及综合用药组的皮瓣表现出中等程度淋巴细胞浸润。Westernblot以及PCR免疫荧光组织化学显示移植物局部目的基因的高表达，但是内脏器官无目的基因表达，术后45天仍有目的基因的表达。流式细胞术检测CD4，CD8细胞含量以及比值的变化，提示各组与综合治疗组比较CD4+T细胞含量减低，CD4/CD8比值下降，免疫荧光组织化学显示移植物中FOXP3+T细胞含量显着上升。ELISA检测血中各细胞因子含量显示综合治疗组IL-2，INF-γ水平下降，IL-4，IL-10水平明显上升。免疫组织化学检测趋化因CCR5的变化，可见空白对照组中CCR5阳性细胞数高于综合治疗组的CCR5阳性细胞数。结论:实验表明，OX40Ig以及CTLA4Ig局部基因治疗联合小剂量的雷帕霉素协同作用可延长移植物的存活时间。该方法有效地减小了术后早期全身免疫抑制剂的用量，为异体复合组织移植免疫耐受的诱导提供了新方法。(本文来源于《第四军医大学》期刊2012-03-01）
局部转染论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:经不同径路实现重组腺相关病毒在常用实验动物内耳的局部基因转染,得到较佳手术径路后,利用重组腺相关病毒作为载体实现X连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)在内耳的过表达,观察其能否拮抗顺铂和卡铂的耳毒性。方法:1.不同径路实现重组腺相关病毒在实验动物内耳的局部基因转染:采用不同径路完成病毒的内耳注射后,各部分实验动物均在术后两周检测闭合声场ABR阈值,处死观察听泡内有无感染,取基底膜免疫组化染色后铺片观察转染效率。2.耳蜗局部转染XIAP基因拮抗顺铂耳毒性:豚鼠行耳后入路使用Ⅱ型胶原蛋白酶处理圆窗后经圆窗渗透径路,一侧显微注射r AAV8-XIAP-6myc,另一侧给予生理盐水。术后分为顺铂给药组和对照组,1周后进行外源性和内源性XIAP的western-blot实验,检测双侧闭合声场ABR,计数外毛细胞和螺旋神经节神经细胞。3.耳蜗局部转染XIAP基因拮抗卡铂耳毒性:确定适用卡铂剂量之后,行耳后入路鼓阶切开径路,一侧显微注射r AAV8-XIAP-6myc,另一侧给予生理盐水,腹腔注射卡铂1周后检测双侧闭合声场ABR和CAP,计数内毛细胞。结果:1.豚鼠的圆窗膜渗透径路没有造成听力损伤且实现了底回外毛细胞40%以上的转染;灰鼠内耳解剖结构特殊,鼓阶切开径路可以实现内毛细胞底回和中间回80%以上的转染。2.1)western-blot结果提示r AAV成功实现了外源性XIAP在内耳的过表达;2)r AAV侧的ABR阈值、毛细胞计数和螺旋神经节神经细胞计数对比生理盐水侧均有统计学差异。3.对比r AAV侧和生理盐水侧,仅在4k HZ存在CAP幅值和内毛细胞计数的统计学差异。结论:1.胶原酶处理圆窗后渗透径路和鼓阶切开径路分别是豚鼠和灰鼠内耳基因转染的较佳径路。2.r AAV-XIAP的内耳局部转染成功提高了XIAP的表达,可以在一定程度上拮抗顺铂介导的外毛细胞和螺旋神经节神经细胞损伤。3.腺相关病毒介导的局部XIAP基因转染对灰鼠内毛细胞有一定地保护作用,但不能完全拮抗卡铂造成的听力损失。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
局部转染论文参考文献
[1].李建军,蔡曼波,谭书波,龙建华,陈选才.CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部共转染对异种大鼠移植肾Bcl-2/Bax的影响[J].临床泌尿外科杂志.2016
[2].接惠群.腺相关病毒介导XIAP基因内耳局部转染拮抗铂类药物的耳毒性[D].上海交通大学.2016
[3].唐远姣,向茜,冷钱英,张凌燕,邱逦.超声联合微泡促进大鼠损伤跟腱及肉芽组织局部基因转染的实验研究[J].四川大学学报(医学版).2014
[4].张剑.局部转染C型利钠肽基因防治血管成形术后再狭窄的实验研究[D].昆明医科大学.2014
[5].邹方正.CTLA4Ig与CD40Ig逆转录病毒局部转染供肾对异种鼠肾移植排斥反应的影响[D].南华大学.2014
[6].白登彦,张海军,袁治国.局部转染Ngn2基因对大鼠实验性急性脊髓损伤运动功能影响的研究[J].中国伤残医学.2013
[7].刘妍,赵宁宁,林久祥.OPG基因局部转染抑制牙齿正畸移动后复发的研究[C].第十四次国际颅面生长发育与功能研讨会、第十一次全国口腔正畸学术会议论文汇编.2012
[8].陈群,马守治,郭建斌,江俊,赵欣.局部转染人白细胞介素-10基因对去卵巢大鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响研究[J].中国实用口腔科杂志.2012
[9].赵然尊,龙仙萍,刘志江,王冬梅,石蓓.转染hRAMP1的间充质干细胞对心肌梗死后局部血管再生的作用[J].第叁军医大学学报.2012
[10].张金.局部转染lvOX40Ig和lvCTLA4Ig对同种异体复合组织移植的免疫调节作用及机制研究[D].第四军医大学.2012