导读:本文包含了牛睾丸论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:新生牛,支持细胞,诱导多能干细胞,转录组
牛睾丸论文文献综述
姜禹[1]（2019）在《新生牛睾丸支持细胞向多能干细胞的诱导研究》一文中研究指出睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)是生精上皮中唯一的体细胞,主要为生精细胞提供支持和营养,同时还具有调控精子发生的功能。SCs的分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。目前,人和小鼠SCs的相关研究已取得显着进展,有关猪、牛SCs的分离培养、紧密连接形成及发育、分化相关功能基因克隆及分析等研究已有报道。但因牛新鲜睾丸取材不便、价格昂贵及取材时间不确定等因素,使牛SCs相关研究进展缓慢。为解决以上问题,本研究在前期基础上进一步探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs的分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3 d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记(Gdnf、Abp)而不表达精原细胞分子标记PLZF。免疫荧光染色显示,贴壁细胞表达SCs的蛋白标记GDNF和ABP。流式细胞术检测显示,所获细胞纯度可达90%以上。上述结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是一类与ESCs(embryonic stem cells,ESCs)的形态、生长方式以及生物学特性极其相似的多能性细胞。目前,小鼠、大鼠和人iPSCs诱导、培养体系的建立、鉴定及重编程机制的相关研究已有报道。但在大家畜牛中,iPSCs的建立仍存在诸多问题,如供体细胞获取不便、诱导效率低、体外培养过程中易分化、干细胞特性难以维持、特异性标记存在争论等。这些问题说明牛iPSCs的生物学特性及体外培养条件与啮齿类和人iPSCs的差异较大。有研究表明,利用经典四因子法(Oct4、Sox2、Klf4、C-myc,OSKM),可将小鼠的SCs重编程为iPSCs。根据SCs增殖迅速、形态均一、免疫原性低而且幼稚SCs表现出一定干细胞特征等生物学特性,本研究摸索了新生牛SCs重编程为iPSCs的诱导体系及其冻存条件。碱性磷酸酶(AP)染色显示,所获牛iPSCs表达高水平的AP活性;免疫荧光染色显示,牛iPSCs表达多种多能性标记;畸胎瘤及拟胚体形成结果表明,所获牛iPSCs在体内外均可分化为叁胚层来源的组织;RNA-seq分析表明,牛iPSCs的多能性(Oct4、Sox2、Nanog、Tet1/3、Klf4)和抗凋亡相关基因(Bcl2)上调而周期相关基因(P21、Casp3)下调,同时涉及有干细胞干性维持、细胞代谢、蛋白结合以及细胞膜和细胞核等相关通路共同调控牛iPSCs的生长发育及凋亡过程。荧光定量PCR结果显示,血清替代物(knockout serum replacer,KSR)冻存组iPSCs的多能性(Oct4、Sox2)和促凋亡相关(Bax)基因显着上调而抗凋亡基因(Bcl2)下调;AP染色显示,胚胎干细胞-胎牛血清(embryonic stem cells-fetal bovine serum,ES-FBS)冻存组的AP的表达较强;体内畸胎瘤形成实验进一步表明,复苏冷冻保存的iPSCs,在体内仍可发育形成畸胎瘤并具有叁胚层的结构。综上所述,本研究获得了纯度较高的新生牛睾丸SCs,利用经典四因子法将其诱导为iPSCs,进而通过转录组分析在SCs向iPSCs重编程过程中所涉及到的相关通路,最后研究了牛iPSCs的冷冻保存条件及其复苏后的干细胞潜能。本研究建立了SCs来源的牛iPSCs,探讨了其重编程机制,为其应用奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
姜禹,赵欣欣,安星兰,蔡宁宁,张胜[2]（2019）在《冷冻保存新生牛睾丸组织中支持细胞的分离纯化》一文中研究指出睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)是生精上皮中的多功能体细胞,其分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。因牛新鲜睾丸组织取材不便,本试验在前期基础上探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和雄性激素结合蛋白(ABP)而不表达精原细胞分子标记PLZF。流式细胞术检测显示,所获细胞中ABP和GDNF阳性细胞数分别为99.7%和99.8%。以上结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。本试验结果为后续相关试验奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年01期）
高一[3]（2017）在《PDGFRA基因对未成熟牛睾丸支持细胞体外增殖的影响》一文中研究指出血小板衍生生长因子受体α(Platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)作为一种跨膜受体与血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factors,PDGFs)结合,参与胚胎发育、组织生成及调节细胞增殖、存活和趋化活动。睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)作为生精小管内唯一的体细胞,是精子发生正常有序活动的保障。未成熟的SCs的数量决定最终SCs的数量,而SCs的数量决定着精子生成的数量,因此SCs的增殖对哺乳动物繁殖性状具有重要的调控作用。目前还没有关于牛睾丸SCs PDGFRA基因的报道,其在睾丸SCs中表达功能也不清楚。有研究表明从处于青春期前的猪睾丸中所分离的SCs是未成熟的SCs,于是本试验选用初生牛(1d)的睾丸,以保证从中分离得到的为未成熟的SCs。利用两步酶消化法和差速培养法分离和纯化睾丸SCs,选择Feulgen染色法、免疫荧光检测抑制素和标志基因叁种检测的方法对SCs进行鉴定。利用PCR法检测PDGFRA基因在SCs中的表达情况,并构建PDGFRA的shRNA载体,转染SCs,利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测该基因干扰后的mRNA和蛋白的表达量,采用流式检测细胞周期、MTS法检测细胞增殖情况及ELISA法检测雄激素结合蛋白(androgen-binding protein,ABP)含量变化。结果显示,本实验成功分离纯化了SCs,检测到PDGFRA基因在初生牛的SCs中表达,转染shRNA载体后,该基因的mRNA和蛋白的表达量降低。数据分析显示细胞周期和增殖速度减慢,细胞分泌的的ABP含量也随之降低。实验结果表明PDGFRA基因对未成熟的SCs的增殖有促进作用,并可能通过调节ABP影响早期睾丸发育和精子发生,为研究雄性动物精子发生和生殖器官发育过程中作用的机制提供理论参考。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2017-06-01）
朱超杰[4]（2016）在《miR-122和miR-449a在草原红牛睾丸组织不同发育阶段的表达规律及其功能》一文中研究指出本研究以中国草原红牛为研究对象,采用实时荧光定量PCR方法检测了miR-122、miR-185、miR-146b、miR-140、miR-449a、miR-204、miR-375、miR-221在草原红牛不同发育时期睾丸组织和以及其他组织中的表达差异,筛选出在睾丸中特异表达或倾向表达的miRNA,并通过预测软件对选择对miRNA进行靶基因预测,构建双荧光素酶报告载体。初步阐明这8个miRNAs调控睾丸发育的分子机制,为中国草原红牛公牛发育的遗传机理和在肉牛生产中进行分子育种提供了理论基础。本研究主要结果如下:通过对miR-122、miR-185、miR-146b、miR-140、miR-449a、miR-204、miR-375、miR-221草原红牛不同组织中相对表达量水平分析,它们在各组织中有不同程度的表达,其中mir-122和mir-449a在草原红牛睾丸中相对表达量较高,miR-122、miR-449a在睾丸中具有倾向性表达的特点,而且miR-122在睾丸中的表达量与其它组织相比差异极其显着。这8个miRNA在在不同发育阶段牛睾丸组织中的相对表达量差异显着,miR-221和miR-204在初生牛中相对表达量最高,miR-140和miR-185在12月龄睾丸中表达量最高,miR-449a、miR-375、miR-146b和miR-122在24月龄睾丸中相对表达量最高。这8个miRNA的荧光定量结果与课题组前期出生公牛和24月龄公牛solexa高通量测序结果一致,miR-146b、miR-449a、miR-375和miR-122表达上调,miR-185、miR—140、miR-204和miR-221表达下调。通过软件预测miR-122可能的靶基因有MAF1、PDK4、DUSP4、FUT8、PRKRA,miR-449a可能的靶基因FKBP1B,3'UTR区进行扩增,插入到PGL3-control载体构建构建双荧光素酶报告载体,与pre-mir共同转入牛脂肪细胞中,通过多功能酶标仪检测荧光素酶活性。结果验证,DUSP4和FKBP1B可能分别是是miR-122和miR-449a的靶基因。本研究分析了miRNAs在不同发育阶段睾丸组织及其他组织中的表达差异,预测了睾丸组织中高表达mir-122和mir-449a的靶基因,并进行了体外验证,为以后研究miRNA对肉牛生殖器官的发育及生殖活动的调控机理具有重要作用。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2016-05-01）
秦立红,张国梁,吴健,李旭,刘基伟[5]（2016）在《BMP2和BMP4基因在草原红牛睾丸组织中的表达量分析》一文中研究指出采用实时荧光定量PCR技术检测BMP2和BMP4基因在草原红牛1,12,18,30月龄4个发育阶段睾丸组织中的mRNA表达水平。旨在探讨该基因在草原红牛睾丸不同发育阶段的表达情况。结果表明:BMP2和BMP4基因在所检测的肉牛4个发育阶段睾丸组织中均有表达。BMP4基因1月龄表达量显着低于12,18,30月龄(P<0.05),12月龄表达量最高,随着月龄增加,表达量减少。而BMP2基因在出生阶段表达量最低,但是与其他3个阶段差异不显着(P>0.05),基因表达趋势也是12月龄表达量最高,然后随着月龄增加,表达量减少。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2016年04期）
张倩,齐晓楠,杨文浩,丛霞,李华涛[6]（2015）在《犊牛睾丸生殖干细胞与支持细胞体外共培养体系的建立》一文中研究指出旨在建立牛雄性生殖干细胞(mGSCs)-支持细胞(SCs)体外共培养体系,并比较不同密度SCs共培养mGSCs的效果。分离、培养mGSCs和SCs并鉴定,然后在密度不同的SCs上共培养mGSCs,观察细胞形态、统计mGSCs集落数、测定两种细胞特异基因的相对表达量。结果表明,培养的mGSCs具有与小鼠mGSCs相同的形态特征,AKP染色细胞克隆阳性,各培养体系均表达SCs和mGSCs特异基因SCF、OCT-4;低密度SCs(225个/cm2)培养mGSCs比中密度(1 300个/cm2)和高密度(5 600个/cm2)培养mGSCs效果好:mGSCs集落纯度、体积较大;mGSCs集落比例显着(P<0.05)和极显着增高(P<0.01);mGSCs特异基因表达量均极显着增高(P<0.01)。说明建立睾丸干细胞体外共培养体系时,采用较低密度的支持细胞共培养可获得理想的睾丸生殖干细胞。(本文来源于《动物医学进展》期刊2015年11期）
姚晓磊,宋瑞高,吕丽华,李鹏飞,刘强[7]（2015）在《不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34~(cdc2)表达的差异》一文中研究指出旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其睾丸备用;通过qRT-PCR技术检测不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸CyclinB1和p34cdc2进行定位分析。结果表明:90d时CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达量显着高于30与60d(P<0.05),但30与60d两种基因mRNA表达量均差异不显着(P>0.05);p34cdc2蛋白在不同日龄犊牛表达差异显着(P<0.05);CyclinB1蛋白在60、90d的表达量显着高于30d(P<0.05),但60和90d差异不显着(P>0.05)。综上表明,CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白在睾丸的表达量随着犊牛日龄的增加而增加,且不同的日龄CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白表达量存在一定的差异。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2015年02期）
袁莉刚,曲亚玲,朱俊峰,谷来凤,田旦增[8]（2015）在《牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布》一文中研究指出目的观察9头健康牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布特点。方法采用组织化学染色和透射电镜技术,观察睾丸显微及超微结构特点,免疫组织化学SP法及IPP图像分析技术,研究层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)的分布特征。结果睾丸生精上皮由Sertoli细胞和生殖母细胞构成1~2层,未形成空腔。电镜下,Sertoli细胞异染色质丰富,相邻Sertoli细胞胞膜下分布有典型外质特化与肌动蛋白丝形成的胞膜下纤维束;生殖母细胞较大,胞质丰富。免疫组织化学显示,LN、ColⅣ和HSPG在生精小管基膜和肌样细胞表达较弱,LN在生殖母细胞内的表达量显着低于ColⅣ和HSPG(P<0.05),而在Sertoli细胞及Leydig细胞均无表达;ColⅣ和HSPG在Sertoli细胞均为强阳性表达;HSPG在Leydig细胞的表达量显着高于ColⅣ(P<0.05)。结论牦牛犊牛生精上皮以幼稚型Sertoli细胞为主,Leydig细胞处于胚胎型向成熟型过渡时期;细胞外基质(ECM)相关Ⅰ及Ⅳ型Col、LN及HSPG的分布适应于其在高原低氧环境中的发育。(本文来源于《解剖学报》期刊2015年01期）
国晓瞳,张倩,于枫,李华涛,丛霞[9]（2015）在《黄芩苷对热应激犊牛睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)表达的影响》一文中研究指出黄芩苷(baicalin)具有清热镇静、抑菌抗炎等作用,通过不同浓度黄芩苷对热应激下睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)表达胶质细胞源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和干细胞因子(stem cell factor,SCF)的影响,探讨黄芩苷是否可以通过提高SCs的耐热性保护细胞,提高SCF与GDNF的表达。采用二步酶消化法分离犊牛(Bos taurus)睾丸组织获得SCs,4 h差速贴壁纯化,分别采用RT-PCR鉴定标志性基因GDNF和SCF的表达,福尔根染色鉴定细胞形态。选用第3代对数生长期的SCs,通过噻唑蓝(methyl thiazoletetrazolium,MTT)筛选黄芩苷安全使用浓度;设对照组(37℃)、42℃单纯热应激组和42℃热应激加黄芩苷(0.1,1,10和20μg/m L)组;用MTT检测细胞存活率,提取各组细胞总RNA和总蛋白,分别用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测GDNF和SCF m RNA及其蛋白的表达。结果显示,第3代原代细胞生长良好,RT-PCR检测可见GDNF和SCF m RNA表达,福尔根染色显示有卫星核小体存在,表明分离培养的细胞为SCs。对第3代SCs进行热应激处理,与对照组(37℃)比较,42℃单纯热应激组细胞存活率极显着(P<0.01)下降,GDNF和SCF m RNA(P<0.01)与蛋白(P<0.05)的表达也降低。与42℃单纯热应激组比较,用浓度为1μg/m L(P<0.05)和10μg/m L(P<0.01)黄芩苷作用细胞的存活率升高;浓度在0.1~20μg/m L黄芩苷作用的细胞,其GDNF和SCF m RNA的表达量均极显着(P<0.01)高于42℃单纯热应激组,而在黄芩苷浓度为1μg/m L时,SCF(P<0.01)和GDNF(P<0.05)蛋白表达量高于42℃单纯热应激组,并且基因和蛋白的表达量随着黄芩苷浓度的增加呈现先上升后下降的趋势。结果表明,黄芩苷能提高热应激下SCs的存活率以及GDNF和SCF的表达量。本实验从分子水平研究黄芩苷对SCs的抗热作用,为在实践中增强机体抗热休克能力提供了理论依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2015年04期）
洪洁赟,王春伟,尚华,扶晓波,吕妍[10]（2014）在《冷冻保护剂对犊牛睾丸组织标志性酶活性的保护作用》一文中研究指出为了探讨犊牛睾丸组织适宜的冷冻保存体系,设计以甘油、DMSO、乙二醇、海藻糖、BSA和睾丸液作为主要成分的6种冷冻保护液,以碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和β-D葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase)的酶活性作为测定指标,以新鲜犊牛睾丸组织的4种酶活性为空白对照,使用6种冷冻保护液将睾丸组织于液氮中冷冻保存7d,然后37℃水浴解冻并无菌培养24h,再制备成φ=10%的睾丸组织匀浆液并测定4种酶活性,最后分析6种冷冻保护液对犊牛睾丸组织标志性酶活性的冷冻保护效果。结果表明,含ρ=0.015g/mL牛血清白蛋白(BSA)的冷冻保护液冷冻7d后,睾丸组织AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶的活性分别为599.99、129.11、1 891.53和489.98U/g,均显着优于其他组(P<0.05);含ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液冷冻7d后,AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶活性分别为454.88、114.63、1 862.79和457.8U/g,其保护效果次于0.015g/mL BSA组,但均显着优于其他组(P<0.05);经DMSO、乙二醇和睾丸液冷冻7d后,4种标志性酶的活性均低于0.015g/mL BSA组和0.04g/mL海藻糖组,甘油组冷冻保护液的效果最差。因此,含ρ=0.015g/mL BSA和ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液能够较好地保护犊牛睾丸组织的酶活性,是犊牛睾丸组织适宜的冷冻保护剂。(本文来源于《西北农业学报》期刊2014年10期）
牛睾丸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)是生精上皮中的多功能体细胞,其分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。因牛新鲜睾丸组织取材不便,本试验在前期基础上探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和雄性激素结合蛋白(ABP)而不表达精原细胞分子标记PLZF。流式细胞术检测显示,所获细胞中ABP和GDNF阳性细胞数分别为99.7%和99.8%。以上结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。本试验结果为后续相关试验奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛睾丸论文参考文献
[1].姜禹.新生牛睾丸支持细胞向多能干细胞的诱导研究[D].吉林大学.2019
[2].姜禹,赵欣欣,安星兰,蔡宁宁,张胜.冷冻保存新生牛睾丸组织中支持细胞的分离纯化[J].中国兽医学报.2019
[3].高一.PDGFRA基因对未成熟牛睾丸支持细胞体外增殖的影响[D].吉林农业大学.2017
[4].朱超杰.miR-122和miR-449a在草原红牛睾丸组织不同发育阶段的表达规律及其功能[D].吉林农业大学.2016
[5].秦立红,张国梁,吴健,李旭,刘基伟.BMP2和BMP4基因在草原红牛睾丸组织中的表达量分析[J].中国兽医学报.2016
[6].张倩,齐晓楠,杨文浩,丛霞,李华涛.犊牛睾丸生殖干细胞与支持细胞体外共培养体系的建立[J].动物医学进展.2015
[7].姚晓磊,宋瑞高,吕丽华,李鹏飞,刘强.不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34~(cdc2)表达的差异[J].畜牧兽医学报.2015
[8].袁莉刚,曲亚玲,朱俊峰,谷来凤,田旦增.牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布[J].解剖学报.2015
[9].国晓瞳,张倩,于枫,李华涛,丛霞.黄芩苷对热应激犊牛睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)表达的影响[J].农业生物技术学报.2015
[10].洪洁赟,王春伟,尚华,扶晓波,吕妍.冷冻保护剂对犊牛睾丸组织标志性酶活性的保护作用[J].西北农业学报.2014