导读:本文包含了表达型质粒载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨形态发生蛋白-2,基因调控,多西环素,脂肪基质干细胞
表达型质粒载体论文文献综述
王鹏,苗军,方成,胡永成,陈晓鹏[1]（2016）在《可调控BMP-2表达的单质粒载体构建及其在ADSCs中的表达研究》一文中研究指出目的:拟构建可调控骨形态发生蛋白(BMP-2)表达的单质粒慢病毒表达载体,为研究骨修复过程中的成骨性能打下基础。方法:通过基因重组技术获取含BMP-2的慢病毒表达载体,通过菌落PCR和基因测序鉴定;将慢病毒表达载体与包装载体p MD2.G和p SPAX在293T细胞中包装,收集病毒液,转染大鼠脂肪基质干细胞(ADSCs)。首先,从细胞形态学和MTT来初步分析诱导剂多西环素(Dox)不同浓度对ADSCs活性的影响;其次,缩小Dox浓度范围,在荧光显微镜下通过荧光表达强度判断Dox对ADSCs中基因表达的诱导效率,相同条件下,q RT-PCR分析BMP-2的m RNA的相对表达量,进一步优化Dox的诱导浓度;最后,通过Western blot检测不同Dox浓度下,转染目的基因的ADSCs中BMP-2表达,Image J软件进行灰度值分析判断二者之间的剂量依赖关系。结果:1%琼脂糖凝胶电泳证实p UC57-BMP-2经双酶切后可获得大小约1 100 bp的目的基因片段,菌落PCR和基因测序证实含目的基因的慢病毒表达载体p LVCT-BMP-2构建成功。ADSCs对Dox最大耐受浓度为6μg/m L,Dox对ADSCs中目的基因表达的最大诱导浓度为5μg/m L,Western blot证实ADSCs中BMP-2表达与Dox浓度(0~5μg/m L)存在剂量依赖关系。结论:成功构建可调控BMP-2表达的单质粒慢病毒表达载体,转染ADSCs后,BMP-2的表达与Dox浓度存在剂量依赖关系。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2016年03期）
李卓,康炜,辛娜,田宇,李建华[2]（2015）在《人AQP1-shRNA表达质粒载体的构建与筛选》一文中研究指出目的构建针对人水通道蛋白1(AQP1)基因的shRNA表达质粒载体,并验证其干扰效果,为进一步探讨AQP1基因对人乳腺癌细胞的作用及机制建立基础。方法设计合成4对针对人AQP1基因不同位点的shRNA片段,通过DNA重组技术将其插入载体GV115中,构建AQP1-shRNA重组质粒,转染人乳腺癌MCF-7细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果 RT-PCR法证实AQP1在乳腺癌MCF-7细胞中有表达。测序验证表明4对靶向AQP1-shRNA表达载体均构建成功。4组干扰载体能够从基因和蛋白表达水平不同程度抑制AQP1表达,其中以AQP1-shRNA 4对AQP1的干扰效率最强。结论成功有效地构建了针对人AQP1基因的shRNA重组质粒,能够有效抑制人乳腺癌细胞MCF-7中AQP1的表达。(本文来源于《重庆医学》期刊2015年30期）
张姝,张伟,姜树原,张颜波,吴松泉[3]（2013）在《过表达DNMT3B7质粒载体的构建及对293A细胞增殖的影响》一文中研究指出目的构建DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的一种异构体3B7的真核质粒表达载体,在体外评价其对人胚肾细胞株293A增殖影响。方法据GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物,以DNMT3B1为模板,利用高保真Taq酶,进行PCR技术扩增DNMT3B7,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中。将携带DNMT3B7基因的质粒pCMV-DNMT3B7及空质粒pCMV-2B转染293A细胞,通过G418筛选出稳定表达的细胞系,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布。同时检测p21蛋白表达情况。结果成功构建DNMT3B7的真核表达载体并筛选出稳定表达株,与转染空质粒组相比,稳定过表达DNMT3B7组293A细胞株增殖减慢(P<0.01);过表达DNMT3B7的293A细胞S期细胞比例显着增多(P<0.05)。p21 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论 DNMT3B7基因过表达可抑制293A细胞增殖,p21可能参与了这一过程的调节。(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2013年12期）
刘红霞,罗卓章,杜静,郭晓华,黄巧冰[4]（2014）在《人真核表达质粒载体pcDNA3/HA-moesin的构建及其在内皮细胞中的表达》一文中研究指出目的:构建人膜突蛋白(moesin)的真核表达质粒pcDNA3/HA-moesin,并检测其在内皮细胞中的表达。方法:采用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)中克隆得到moesin cDNA全长序列,经双酶切后连接到真核表达载体pcDNA/HA中,挑选出的阳性克隆经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入HUVECs中,采用Realtime PCR及Western blot等方法检测目的基因mRNA及蛋白的表达。结果:pcDNA3/HA-moesin质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因moesin的序列完全正确,真核表达质粒构建成功。Realtime PCR检测显示,转染pcDNA3/HA-moesin组的moesin mRNA表达水平明显高于未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组,后2组间无明显差异。Western blot结果显示转染pcDNA3/HA-moesin组有HA-moesin蛋白表达,而未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组未检测到HA-moesin表达。结论:成功构建pcDNA3/HA-moesin真核表达载体,在体外转染HUVECs后可使moesin mRNA表达增加,并成功表达HA-moesin,为进一步鉴定内皮细胞中晚期糖基化终产物(AGEs)引起的moesin的磷酸化位点奠定了实验基础。(本文来源于《海南医学院学报》期刊2014年01期）
李洋,张舟[5]（2012）在《pBK-CMV ⊿-EGFP-SNAT2质粒载体构建及其表达鉴定(英文)》一文中研究指出SNAT2是SLC38基因家族编码的Na+偶联中性氨基酸转运蛋白中属于system A的成员之一.它在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.增强型绿色荧光蛋白EGFP的连接对于SNAT2在细胞表达中的定位以及检测都有很大的帮助.采用PCR扩增和酶切技术将EGFP连接到质粒pBK-CMV⊿-SNAT2中SNAT2的N端.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和测序验证得到pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体,将构建好的质粒瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293 cells)用Western blot和激光共聚焦电子显微镜检测EGFP-SNAT2的表达与亚细胞定位.结果表明:EGFP-SNAT2在细胞中正确表达并定位于细胞膜上.pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体的构建对于进一步研究SNAT2的结构和功能具有重要意义.(本文来源于《上海师范大学学报(自然科学版)》期刊2012年05期）
狄元冉,卢敏,袁林,常娟,尹清强[6]（2012）在《猪hepcidin基因质粒载体的构建及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出为构建猪hepcidin毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型表达载体,实现其真核表达,本文采用RT-PCR方法获得猪肝脏中的铁代谢调节基因hepcidin,通过连接酶使其与真核表达载体pGAPZaA相连构建重组表达质粒pGAPZaA-hepcidin。利用高压电击处理,使质粒载体转入到毕赤酵母中,用含Zeocin抗生素的YPD平板筛选阳性转化子,并做PCR鉴定。结果表明:hepcidin基因准确地插入表达载体pGAPZaA,并已整合到酵母基因组中,并成功构建了酵母重组表达质粒。(本文来源于《江西农业学报》期刊2012年04期）
夏章权,张从纪,王涛[7]（2012）在《HBD3基因真核表达质粒载体的构建及其体外表达和活性鉴定》一文中研究指出目的构建人β防御素3(HBD3)基因真核表达质粒载体,观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达,并检测其活性。方法利用RT-PCR方法从牙龈组织中扩增出HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段重组于pVIVO1-mcs真核表达质粒载体上,构建成pVIVO1-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定。运用jetPEI转染试剂将重组质粒转染BMSCs后,RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测目的基因的表达。取转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验。结果 (1)酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-HBD3。(2)RT-PCR和免疫荧光、蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实转染的BMSCs高表达HBD3。(3)转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液对白色念珠菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的抗菌活性。结论构建了pVIVO1-HBD3基因真核表达质粒载体,证实其转染BMSCs后基因的表达和活性。(本文来源于《重庆医学》期刊2012年01期）
赵倩,解金辉,刘运德[8]（2011）在《B区缺失型人凝血因子Ⅷ的PcDNA3.1(+)表达质粒载体的构建及其在BHK细胞中的表达》一文中研究指出目的:本研究利用基因克隆技术构建含有B区缺失型人凝血因子Ⅷ(BDDhFⅧ)基因的PcDNA3.1(+)表达质粒载体,转染幼仓鼠肾细胞(BHK)并诱导其表达人凝血因子Ⅷ。方法:采用PCR、基因克隆技术,将BDDhFⅧ基因插入PcDNA3.1(+)空载体中,构建了(本文来源于《2011中国（威海）干细胞与组织工程治疗前沿论坛论文集》期刊2011-07-16）
黄新凤,刘建军,蒋英芝,席仁荣,杨亮[9]（2011）在《人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达》一文中研究指出目的建立真核质粒载体介导的人SET基因RNA干扰表达体系,并检测其在肝细胞中对SET蛋白表达的影响,为研究SET蛋白在叁氯乙烯致肝细胞毒性的作用打下基础。方法设计并合成2对人SET基因特异性短发夹RNA(short hair-pin RNA,shRNA)寡核苷酸链,退火形成双链DNA后插入到真核表达质粒psiRNA-hH1 neo中产生shRNA重组质粒载体,经酶切和测序鉴定成功后,转染至L-02肝细胞中,48h后收集细胞提取总蛋白,Western blotting检测干扰后SET蛋白的表达。结果 shRNA重组质粒的酶切和测序鉴定均正确,Western blotting结果显示重组质粒psiRNA1组的干扰效果较好,对SET蛋白表达的抑制率达60%左右,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体,其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达,为深入研究SET蛋白在叁氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础。(本文来源于《热带医学杂志》期刊2011年03期）
王军,吴值荣,朱登纳,高峰,侯艳艳[10]（2011）在《人胰岛素样生长因子1基因质粒载体的构建及其在人脐血源性神经干细胞中的表达》一文中研究指出目的构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)质粒表达载体,并观察重组体pcDNA3.1-IGF-1转染后的脐血源性神经干细胞(NSCs)中IGF-1基因的表达情况。方法通过反转录-PCR(RT-PCR)方法从胎肝中提取IGF-1基因,胶回收方法分别纯化PCR产物(IGF-1基因)和质粒pcDNA3.1,二者分别由DNA限制性内切酶BamHⅠ与HindⅢ双酶切后,经T4 DNA Ligase连接的方法将IGF-1基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1中,采用测序方法及DNA限制性内切酶BamHⅠ与HindⅢ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1-IGF-1及空质粒pcDNA3.1分别转染至脐血源性NSCs内,经G418抗性筛选后,利用免疫细胞化学法和RT-PCR法检测IGF-1基因在基因转染脐血源性NSCs内的表达情况。结果 IGF-1基因从胎肝中成功提取。重组体pcD-NA3.1-IGF-1经基因测序及DNA限制性内切酶BamHⅠ与HindⅢ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1构建正确。重组体经脂质体法转染脐血源性NSCs24 h后,经G418筛选2周得到细胞抗性克隆,免疫细胞化学法检测到IGF-1基因在重组质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs中成功表达。RT-PCR方法检测到重组质粒pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs中IGF-1mRNA表达阳性,而空质粒pcDNA3.1转染的脐血源性NSCs中IGF-1 mRNA表达阴性。结论 IGF-1基因可在重组质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs内成功表达。(本文来源于《实用儿科临床杂志》期刊2011年06期）
表达型质粒载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建针对人水通道蛋白1(AQP1)基因的shRNA表达质粒载体,并验证其干扰效果,为进一步探讨AQP1基因对人乳腺癌细胞的作用及机制建立基础。方法设计合成4对针对人AQP1基因不同位点的shRNA片段,通过DNA重组技术将其插入载体GV115中,构建AQP1-shRNA重组质粒,转染人乳腺癌MCF-7细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果 RT-PCR法证实AQP1在乳腺癌MCF-7细胞中有表达。测序验证表明4对靶向AQP1-shRNA表达载体均构建成功。4组干扰载体能够从基因和蛋白表达水平不同程度抑制AQP1表达,其中以AQP1-shRNA 4对AQP1的干扰效率最强。结论成功有效地构建了针对人AQP1基因的shRNA重组质粒,能够有效抑制人乳腺癌细胞MCF-7中AQP1的表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达型质粒载体论文参考文献
[1].王鹏,苗军,方成,胡永成,陈晓鹏.可调控BMP-2表达的单质粒载体构建及其在ADSCs中的表达研究[J].天津医科大学学报.2016
[2].李卓,康炜,辛娜,田宇,李建华.人AQP1-shRNA表达质粒载体的构建与筛选[J].重庆医学.2015
[3].张姝,张伟,姜树原,张颜波,吴松泉.过表达DNMT3B7质粒载体的构建及对293A细胞增殖的影响[J].肿瘤防治研究.2013
[4].刘红霞,罗卓章,杜静,郭晓华,黄巧冰.人真核表达质粒载体pcDNA3/HA-moesin的构建及其在内皮细胞中的表达[J].海南医学院学报.2014
[5].李洋,张舟.pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体构建及其表达鉴定(英文)[J].上海师范大学学报(自然科学版).2012
[6].狄元冉,卢敏,袁林,常娟,尹清强.猪hepcidin基因质粒载体的构建及其在毕赤酵母中的表达[J].江西农业学报.2012
[7].夏章权,张从纪,王涛.HBD3基因真核表达质粒载体的构建及其体外表达和活性鉴定[J].重庆医学.2012
[8].赵倩,解金辉,刘运德.B区缺失型人凝血因子Ⅷ的PcDNA3.1(+)表达质粒载体的构建及其在BHK细胞中的表达[C].2011中国（威海）干细胞与组织工程治疗前沿论坛论文集.2011
[9].黄新凤,刘建军,蒋英芝,席仁荣,杨亮.人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达[J].热带医学杂志.2011
[10].王军,吴值荣,朱登纳,高峰,侯艳艳.人胰岛素样生长因子1基因质粒载体的构建及其在人脐血源性神经干细胞中的表达[J].实用儿科临床杂志.2011