导读:本文包含了同源序列法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:同源序列法,细胞质雄性不育,细胞核雄性不育,甘蓝型油菜
同源序列法论文文献综述
刘振林[1]（2010）在《同源序列法克隆甘蓝型油菜核不育基因BnMS1及其功能研究》一文中研究指出雄性不育是指植物在有性繁殖过程中不能产生正常的花药、花粉或雄配子而雌蕊功能正常的现象。雄性不育广泛应用于杂交育种中,图位克隆核不育基因费时费力。目前为止,虽已对许多与细胞核雄性不育相关基因进行分子标记与定位,但尚未有图位克隆到甘蓝型油菜不育基因的报道。油菜与拟南芥同属十字花科芸薹属植物,比较基因组学研究证明油菜与拟南芥基因组同源性很高,这意味着可以利用拟南芥育性相关基因克隆油菜的雄性不育基因以及开展育性相关性的研究。目前已分离的拟南芥育性相关基因有：MS2基因、MS5基因、Coll基因、spl基因、MS1基因、eMS1基因、dde2-2基因和mmd1基因等。其中拟南芥MS1只在小孢子释放时期的绒毡层组织中低丰度表达,拟南芥MS1突变体能导致花粉败育而对其它花器官的生长发育没有影响,这在生产上有较大的应用价值。因此本研究围绕拟南芥核不育基因MS1开展了以下工作：1.克隆甘蓝型油菜核不育基因BnMs1及生物信息学分析：根据拟南芥MS1基因保守区域序列设计特异性引物,PCR扩增甘蓝型油菜超油二号基因组,将PCR产物克隆测序,并将所得序列拼接。根据所得序列两端设计引物,利用PCRWalking技术克隆该基因全长。将克隆的基因序列全长与拟南芥MS1基因全长序列进行同源性比对及生物信息学分析。结果：BnMs1基因全长3424bp,BnMS1与MS1全长序列同源性60.3%；BnMs1与MS1编码序列同源性89.5%；BnMS1基因外显子分别位于521bp-+821bp、1189bp-+1471bp、1876bp-+3296bp；内含子分别位于822bp-+1188bp、1472bp-+1875bp；开放阅读框长2004bp,编码667个氨基酸,蛋白分子量为76.5KD,等电点为8.01；根据BnMS1基因序列推测的蛋白质氨基酸序列与已知拟南芥MS1基因蛋白质氨基酸序列同源性达到93%。2.构建BnMS1基因反义表达载体转化拟南芥。克隆BnMS1基因第叁个外显子2402-2919bp序列命名为antiMS,反向插入pFGC5941植物表达载体中,并转化入农杆菌中。T1代种子播种,种子萌发3-5d后喷施除草剂筛选抗性植株,后期提取DNA进行PCR鉴定,提取花RNA进行RT-PCR,并观察植株生长情况,对花粉进行取样,碘、碘化钾染色,在显微镜下观察。结果：转anti-MS拟南芥共筛选到14株,PCR阳性植株11株,植株表型、花粉粒数目活性与野生型无区别,RT-PCR均扩出条带且与野生型无明差异。3.构建拟南芥MS1基因人工小RNA表达载体转化拟南芥。根据Schwab的方法构建拟南芥MS1基因amiRNA载体,并与pFGC5941表达载体连接,并转入农杆菌中。利用花絮浸润法转化拟南芥,转化种子播种,种子萌发3-5d后喷施除草剂筛选抗性植株,后期提取DNA进行PCR鉴定,提取花RNA进行RT-PCR,并观察植株生长情况,对花粉进行取样,碘、碘化钾染色,在显微镜下观察。结果：转amiRNA载体拟南芥共筛选到27株转化株,PCR阳性植株25株,其中8株转基因植株表现出中间型雄性不育的性状：植株部分荚短小不育,在早期花中观察到花粉囊中含有数目极少的花粉粒,后期与野生型并无明显区别,其余转基因植株与野生型无区别。4.构建BnMS1启动子序列与pGUS-eGFP双标记连接的植物表达载体。PCR克隆BnMS1启动子序列,将启动子序列与pGUS-eGFP双标记连接的植物表达载体连接,并转化入农杆菌中,以待转化拟南芥,验证启动子是否具有功能。对重组农杆菌的PCR结果表明,启动子序列已转入农杆菌中,载体构建成功。(本文来源于《浙江师范大学》期刊2010-04-01）
李美玲,严成其,王栩鸣,杨勇,余初浪[2]（2010）在《同源序列法克隆植物抗病基因研究进展及其在野生稻中的应用》一文中研究指出随着各种测序计划的完成及生物信息学的发展,植物抗病基因的克隆取得了很大进展,至今有几十个基因已被克隆。研究发现,大多抗病基因都存在特异的保守序列,如富亮氨酸重复序列、核苷酸结合位点、丝氨酸-苏氨酸激酶等。抗病基因的结构特征不仅预示了植物抗病反应中可能的作用机制,而且为分离克隆植物抗病基因提供了一条可行的新途径,如基于同源序列的候选基因法,又称为同源序列法。我们简要综述了已克隆抗病基因的结构、同源序列法克隆抗病基因的研究进展,并对其在野生稻中的应用做了展望。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2010年01期）
谌谋华[3]（2003）在《利用同源序列法克隆柑橘抗病基因类似物及其初步分析》一文中研究指出柑橘是我国重要的经济作物，其产量位居世界第3位。病害一直是作物生产的主要问题。在现有的柑橘栽培品种中抗病资源有限，如何从近缘属中克隆到相应的抗病基因是未来进行转基因抗病育种的关键问题。 提高植物抗病性是植物育种的重要目标之一。随着现代生物技术的不断发展，利用植物基因工程进行植物抗病育种已经成为一种重要手段。到目前，人们已经通过图位克隆和转座子标签等方法分离克隆到一些植物抗病基因。 本研究是根据已克隆的植物抗病基因保守序列设计简并引物，用PCR及RT—PCR的方法从柑橘抗病材料中扩增出抗病基因类似物(resistance gene analog，RGA)，并对其中部分RGA的碱基序列及其编码的氨基酸序列进行了分析。同时随机挑选了一个RGA作为探针，进行基因组RFLP分析，所取得的主要结果如下： 1．建立了提取总RNA的体系。经凝胶电泳和紫外分光光度计检测，其总RNA的质量基本达到分子生物学实验技术要求，能够用于RT—PCR分析及Northern杂交分析。 2．根据已知抗病基因保守结构域设计了多对简并引物。采用PCR方法，分别从枳壳、九里香、黄皮、国庆1号基因组及枳壳、国庆1号的cDNA中扩增得到以500bp为主的电泳带(特征带)。分析全部的PCR结果发现，所有的引物对均能在感病材料或抗病材料基因组DNA及它们cDNA中扩增到以500bp为主带的电泳图。因此，用现有的简并引物无法直接对感病和抗病材料进行抗病基因的筛选，可能需要进一步设计特异性更高的引物来进行筛选。 3．分别对枳壳基因组DNA PCR产物及RT—PCR产物克隆成功的重组子进行测序。将得到的25个RGA采用美国国立生物技术信息中心BLAST程序及DNAsis软件进行分析发现：所有的RGA与已克隆的部分植物抗病基因(水稻Xa1、拟南芥RPS2、烟草N、亚麻L6)在碱基序列和氨基酸序列上均有一定程度的同源性(5.7％-25.3％)；RGAs之间也存在很高的同源性(27.2％-100％)。如何进一步对这些RGAs进行筛选还有待研究。 4．选取RGAn-17-2作为探针，进行柑橘基因组DNA的RFLP分析。从杂交结果可以看出：RGAn-17-2在不同的柑橘材料(枳壳、九里香、黄皮、国庆1号)中都有若干同源片段。(本文来源于《华中农业大学》期刊2003-06-01）
同源序列法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
随着各种测序计划的完成及生物信息学的发展,植物抗病基因的克隆取得了很大进展,至今有几十个基因已被克隆。研究发现,大多抗病基因都存在特异的保守序列,如富亮氨酸重复序列、核苷酸结合位点、丝氨酸-苏氨酸激酶等。抗病基因的结构特征不仅预示了植物抗病反应中可能的作用机制,而且为分离克隆植物抗病基因提供了一条可行的新途径,如基于同源序列的候选基因法,又称为同源序列法。我们简要综述了已克隆抗病基因的结构、同源序列法克隆抗病基因的研究进展,并对其在野生稻中的应用做了展望。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
同源序列法论文参考文献
[1].刘振林.同源序列法克隆甘蓝型油菜核不育基因BnMS1及其功能研究[D].浙江师范大学.2010
[2].李美玲,严成其,王栩鸣,杨勇,余初浪.同源序列法克隆植物抗病基因研究进展及其在野生稻中的应用[J].生物技术通讯.2010
[3].谌谋华.利用同源序列法克隆柑橘抗病基因类似物及其初步分析[D].华中农业大学.2003