吴晓燕1陆晓媛2(通讯作者)
（1徐州医学院附属连云港市第一人民医院妇产科江苏连云港222000）
（2徐州医学院附属医院江苏徐州221002）
【摘要】本研究通过检测血清中期因子(sMK)在正常子宫内膜组(NE)、子宫内膜上皮内瘤变组(EIN)、子宫内膜腺癌组(EC)中的表达，探讨中期因子与子宫内膜腺癌临床病理特征、生物学行为方面的关系和意义。
【关键词】子宫内膜癌中期因子酶联免疫吸附试验
【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）27-0084-02
1.研究目的
子宫内膜癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一，是危害女性健康的第三位恶性肿瘤，近年来其发病率在世界各地均有增高的趋势，目前其发生机制尚未完全阐明，预防措施相对滞后。有学者研究表明其发生是一个多因素参与、多基因改变的复杂过程。中期因子(midkine,MK)是一种新的肝素结合性生长分化因子。MK在多种人类恶性肿瘤中过度表达,并与肿瘤的发生、发展密切相关[1]。MK在子宫内膜癌表达情况的研究国内鲜有报道,国外报道也不多。
我们通过测定MK在子宫内膜癌患者血清中的表达，来探讨子宫内膜腺癌的发病机制。同时结合其术前、术后不同时期外周血MK水平的变化，为MK作为一种新型的肿瘤标记物应用于子宫内膜肿瘤的早期诊断，疗效判断，术后随访等提供理论基础。
2.研究材料
子宫内膜癌患者平均年龄54.20±7.91岁(41～78岁)，其中≤50岁的患者9例，＞50岁的患者21例；Ⅰ期和Ⅱ期共19例(Ⅰ期14例，Ⅱ期5例)，Ⅲ期11例；子宫内膜癌按组织学分级：高分化11例，中低分化19例；组织学分型均为腺癌；淋巴结转移11例，无淋巴结转移者19例；肌层浸润程度无或≤1/2肌层的标本12例，＞1/2肌层的标本18例。根据妇产科学第7版诊断标准，取同期对照组：正常子宫内膜组织15例(因阴道出血诊刮病检示增生期样子宫内膜)，平均年龄53.10±4.38岁（35-55岁）。20例子宫内膜上皮内瘤变(EIN)平均年龄54.00±8.68岁（34-66岁），各组年龄相比差异无统计学意义(P＞0.05)。
子宫内膜癌组30例，EIN组20例，正常对照组15例（其中子宫内膜癌组需手术前一天和术后第七天两次采集标本）分别空腹抽取外周静脉血5ml。所有标本静置半小时后以2000转/分离心10分钟，取上层血清标本于-80℃保存，待成批测定，避免反复冻溶。
本研究的实验试剂为人MKELISA试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）。试剂盒组成（2-8℃干燥保存）：（1）酶标板96孔；（2）10×标本稀释液1瓶12.0ml；（3）标准品2瓶各8.0ng；（4）第一抗体工作液12ml；（5）酶标抗体工作液12ml；（6）20×浓缩洗涤液50ml；（7）底物工作液12ml；（8）终止液12ml。
3.研究方法
3.1ELISA步骤
从冰箱中取出试剂盒，血清标本，以平衡至室温；加样；洗板；加入第一抗体工作液；洗板；加入酶标抗体工作液；洗板；加入底物工作液；加入终止液，终止反应；在30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
3.2统计学分析
采用SPSS13.统计软件进行统计处理。各组sMK浓度的比较用Games-Howell法分析，手术前后的sMK浓度的比较用t′检验；子宫内膜癌患者sMK的表达与其病理特征的关系用t′检验。所有检验结果p＜0.05为有统计学意义。
4.研究结果
4.1各组血清sMK的测定结果，见表1。
sMK血清测定＞1.5ng/ml为阳性结果（ELISA试剂盒说明书）如下表所示，15例正常子宫内膜组织病例的平均值为0.31±0.09ng/ml，20例EIN的平均值为1.54±0.14ng/ml，30例子宫内膜癌（术前）的平均值为2.14±0.89ng/ml，各组间相比较有统计学意义（P＜0.05)，其间两两比较均有统计学意义（P＜0.05)。
表1各组血清sMK的测定结果
sMK（术前）的表达与子宫内膜癌的临床分期、肿瘤肌层浸润程度、淋巴结有无转移密切相关（P＜0.05），而与子宫内膜癌组织学分级、患者的年龄大小无关（P＞0.05）。
4.3子宫内膜癌患者术前与术后sMK的比较，见表3。
表3子宫内膜癌患者术前与术后sMK的比较(x-±s)
组别例数血清MK浓度（ng/ml）t′P值
术前302.14±0.898.5660.000
术后300.69±0.07
子宫内膜癌患者术前血清MK值为2.14±0.89ng/ml，术后血清MK值为0.69±0.07ng/ml，t′为8.566，术前sMK明显高于术后sMK，两组间比较有统计学意义（P＜0.05）。
5.研究讨论及展望
当前，探索与子宫内膜癌有关的特异性肿瘤标志物非常必要，也成为子宫内膜癌研究的热点和难点。MK是一个新的肝素结合生长/分化因子。它首先作为一个维甲酸诱导基因的产物被鉴别出来(维甲酸诱导基因在维甲酸诱导胚胎癌干细胞分化的早期表达增加)。为了阐明MK表达与子宫内膜癌的关系，我们采用ELISA方法检测了30例子宫内膜癌组、20例子宫内膜上皮内瘤变组、15例正常子宫内膜组中患者血清MK表达及子宫内膜癌患者手术前后血清中MK含量测定，并结合了患者年龄、肿瘤临床分期、组织学分级、淋巴转移、肌层浸润等临床资料进行分析。
本研究中，正常子宫内膜，子宫内膜上皮内瘤变，子宫内膜癌病程发展过程中，sMK含量呈明显的递增趋势；而术前外周血清中MK表达水平与患者年龄大小、分级无明显相关性，而与肿瘤分期、肌层浸润、淋巴结转移具有相关性，I、Ⅱ期子宫内膜癌中的血清MK浓度明显低于Ⅲ期子宫内膜癌，这与Tanabe等[2]的研究结果相一致。这些结果表明血清MK的水平随着肿瘤的进展而升高，由此可见，比起作为子宫内膜癌早期诊断的其它指标，血清MK可能是更有用作为临床随访的指标。另有国外学者[3-4]检测了食道癌、胃癌患者血清MK水平，并把术前和术后第七天血清MK浓度做了比较，发现术后血清MK浓度明显小于术前血清MK浓度，发现血清MK可用于肿瘤疾病的诊断，且敏感性高于其他常规指标，是一个较好的肿瘤血清标志物。国内专家崔树勋等[5]报道，高水平的血清MK与喉癌不良预后相关，血清MK水平可以作为预测喉癌病人的生存期的一个临床指标，且在他的研究中，术后血清MK水平明显下降。这表明血清MK可能在监测疗效与癌症复发转移上有很大意义。
在本实验研究中，我们通过检测子宫内膜癌病人术前和术后第七天血清MK值，发现患者术后血清MK值明显下降。因此，我们可以通过检测患者血清MK值以发现早期患者，同时用于诊断、疗效、复发的检测。综上，MK的血清学检测具有较高临床应用价值。在子宫内膜上皮内瘤变、子宫内膜癌早期，患者血清中均可检测到较高水平MK蛋白表达，而且手术后患者血清MK明显下降，这为子宫内膜癌的早期诊断，治疗疗效、预后判断及术后随访等提供了广阔前景。但MK基因具体的致瘤机理、MK信号转导的分子机制、MK受体精确结构，以及针对子宫内膜癌的MK基因诊断与治疗有待进一步尝试。
参考文献
[1]IkematsuS,YanoA,AridomeK,etal.Serummidkinelevelsareincreasedinpatientswithvarioustypesofcarcinomas[J].BrJCancer,2000,83(6):701-706.
[2]TanabeK,MatsumotoM,IkematsuS,etal.Midkineanditsclinicalsignificanceinendometrialcarcinoma[J].CancerSci,June2008,99(6):1125–1130.
[3]HideakiS,YoshihiroN,MasatoshiT,etal.Preoperativeserummidkineconcentrationisaprognosticmarkerforesophagealsquamouscellcancinoma.CancerSci,2003July,94(7):628-632.
[4]YulciObata,ShogoKikuchi,YingsongLin,etal.Serummidkineconcentrationandgastriccancer.CancerSci,2005,96:54-57.
[5]崔树勋,滕博,金春顺,等.喉癌病人外周血中期因子水平与喉癌临床特征及预后的关系.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2005,Feb.11(1):14-16.