导读:本文包含了外源性绵羊肺腺瘤病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:绵羊肺腺瘤,绵羊肺腺瘤病毒,MAPK,Akt,mTOR
外源性绵羊肺腺瘤病毒论文文献综述
孙晓林[1]（2017）在《外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析》一文中研究指出绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)为β逆转录病毒,属于Retroviridae家族和Othoretrovirinae亚家族。JSRV是绵羊肺腺瘤病(OPA)的病原,OPA是一种传染性的绵羊肺癌。JSRV囊膜蛋白(Envelope,Env)主要激活细胞中的PI3K/Akt和MAPK信号通路。研究表明,细胞自噬在很多种类型的癌症中均受到抑制。细胞的自噬活性往往和肿瘤的恶性发展程度相反。但是仍没有关于自噬形成过程与OPA肿瘤的发展过程,以及JSRV Env诱导细胞转化的过程之间关联的研究。自噬在JSRV Env转化的细胞中是怎样受到信号通路调控的,以及激活的信号通路是否调控细胞自噬,均值得我们深入探讨。本研究检测了 Akt/mTOR信号通路和MAPK信号通路在自然感染OPA病肺组织、JSRV Env转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的激活情况。接着检测了自噬因子Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ在自然感染OPA肺组织、JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达水平,并进一步研究了 Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ是如何受到信号通路调控的,为探索JSRV-Env诱导转化细胞的致病机理奠定了研究基础。1.采集自然感染OPA绵羊病肺组织和作为阴性对照的健康绵羊肺组织,4%多聚甲醛固定的肺组织采用免疫组化法检测EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在OPA肺组织中阳性表达的定位情况,结果表明,OPA病肺组织中EGFR、p-Akt、p-mTOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK蛋白在腺瘤灶中大量表达,均定位于肿瘤细胞的细胞质和细胞核。-80 ℃保存的肺组织,提取总蛋白后采用Western blot法检测EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在OPA病肺组织中的激活情况,结果表明,EGFR、p-Akt、p-mTOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK 在 OPA 病肺组织中的磷酸化水平极显着高于健康肺组织。2.应用荧光定量qPCR的方法从采集的自然感染OPA病肺组织和作为阴性对照的健康肺组织的总RNA中扩增自噬因子Beclin-1和LC3的编码序列,分析Beclin-1和LC3在OPA病肺组织和健康绵羊肺组织中基因表达的差异,结果表明,Beclin-1和LC3在OPA病肺组织中的基因表达极显着低于健康肺组织中的表达。采用免疫组化法检测Beclin-1和LC3在OPA病肺组织中的阳性表达定位,结果表明,Beclin-1和LC3主要表达定位于OPA病肺组织的肿瘤细胞以及健康肺组织的肺泡上皮细胞和间质细胞中。采用Western blot法检测Beclin-1和LC3在OPA病肺组织和健康肺组织中蛋白表达的差异,结果表明,Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ在OPA肺组织中的蛋白表达均极显着低于健康肺组织中的表达。3.将本实验室保存的真核表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞,分组实验为500 ng的重组表达质粒分别添加浓度梯度一为2μL、3μL、4μL、5μL,浓度梯度二为4μL、6μL、8μL、10μL的LTX,转染48 h后通过RT-PCR法和Western blot法检测最佳转染效率,结果表明,500ng的真核表达质粒中加入4 μL LTX为最佳转染浓度。4.应用Western blot法检测EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在JSRV Env转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的激活情况,结果表明,EGFR、Akt/mTOR和MAPK信号通路在JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中均有不同程度的激活。5.应用qPCR法和Western blot法检测Beclin-1和LC3在JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达情况,结果表明,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ在JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞中的表达均极显着低于对照组细胞,Beclin-1在JSRVEnv诱导转化的绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达极显着低于对照组细胞,而LC3 Ⅱ/Ⅰ在JSRV Env诱导转化的绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达与对照组相比差异不显着。6.筛选mTOR抑制剂Rapamycin、ERK1/2抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125、p38抑制剂SB203580的最佳抑制条件,结果表明Rapamycin、PD98059、SP600125、SB203580均分别在浓度为20μmol/L,添加48h后抑制效果最佳。阻断MAPK信号通路和Akt/mTOR信号通路后,qPCR法检测Beclin-1和LC3的基因表达水平,Western blot法检测Beclin-1和LC3的蛋白表达水平,结果表明,JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中,阻断MAPK信号通路和Akt/mTOR信号通路后,Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达水平与对照组相比显着上调。本研究表明JSRV Env激活了靶细胞的MAPK和Akt/mTOR信号通路,并通过MAPK和Akt/mTOR信号通路的调节,抑制Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2017-06-01）
孙晓林,杜方原,刘淑英[2]（2016）在《外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析》一文中研究指出旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机制,通过组织病理学观察和免疫组织化学染色,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p-Erk1/2和p-p38的阳性表达区,通过Western blot检测Erk1/2和p38在病肺中的磷酸化水平。转染重组表达质粒pcDNA 4/myc-His/exJSRV-env到A549细胞中,通过Western blot检测Erk1/2和p38的磷酸化水平。通过CCK-8法检测转染重组表达质粒的A549细胞的增殖活力。免疫组化结果显示:JSRV Env蛋白主要表达于病肺组织的肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR在病肺组织中过表达于肺泡上皮细胞,脱落的肿瘤细胞及间质细胞中,而在健康绵羊肺中只是少量表达于肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞中,p-Erk1/2和p-p38在病肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR、p-Erk1/2和p-p38的阳性表达区均与Env蛋白的阳性表达区一致。Western blot结果显示:病肺中p-Erk1/2和p-p38的磷酸化水平均极显着高于健康肺组织,转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞中p-Erk1/2和p-p38的表达量均极显着高于对照组细胞,说明exJSRV-env确实激活了A549细胞的MAPK通路。而CCK8结果显示:转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞增殖活力显着高于对照组细胞,说明exJSRV-env可能是通过激活的EGFR/MAPK通路促进A549细胞的恶性增殖,进而促使肿瘤的发生。本研究为进一步探索绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的致病机制奠定了基础。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2016年08期）
孙晓林,杜方原,刘淑英[3]（2016）在《外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析》一文中研究指出旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(ex JSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机理,通过组织病理学观察和免疫组织化学,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p-Erk1/2、p-MEK、p-p38和p-JNK的阳性表达区,通过Western blot检测Erk1/2、MEK、p38和JNK在病肺中的磷酸化水平。转染重组表达质粒pc DNA 4/myc–His/ex JSRV-env到A549和NIH3T3细胞中,通过Western blot检测Erk1/2、MEK、p38和JNK的磷酸化水平。通过CCK-8法检测转染重组表达质粒的A549细胞的增殖活力。免疫组化结果显示:JSRV Env蛋白主要表达于病肺组织的肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR在病肺组织中过表达于肺泡上皮细胞,脱落的肿瘤细胞及间质细胞中,而在健康绵羊肺中只是少量表达于肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞中,Erk1/2、MEK、p38和JNK在病肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR、p-Erk1/2、p-MEK、p-p38和p-JNK的阳性表达区均与Env蛋白的阳性表达区一致。Western blot结果显示:病肺中p-Erk1/2、p-MEK、p-p38和p-JNK的磷酸化水平均极显着高于健康肺组织,转染重组表达质粒pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env的A549细胞中p-Erk1/2、p-MEK、p-p38和p-JNK的表达量均极显着高于对照组细胞,说明ex JSRV-env确实激活了A549细胞的MAPK通路。而CCK8结果显示:转染重组表达质粒pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env的A549细胞增殖活力显着高于对照组细胞,说明ex JSRV-env可能是通过激活的EGFR/MAPK通路促进A549细胞的恶性增殖,进而促使肿瘤的发生。本研究为进一步探索绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的致病机理奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会论文集》期刊2016-07-01）
韩硕[4]（2010）在《外源性绵羊肺腺瘤病毒NM株的基因克隆及序列分析》一文中研究指出为了扩增外源性绵羊肺腺瘤病毒NM株基因序列,参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(AF105220)的基因序列,设计合成5对引物,从自然感染绵羊肺腺瘤病毒的肺脏组织中提取总RNA,以RNA为模板,应用RT-PCR技术分别对exJSRV-NM株基因进行扩增,产物分别为5个(442bp,1124bp,2796bp,2054bp,535bp)特异性基因片段,将其分别克隆入pMD19-T载体中进行双向测序并用DNAstar软件进行序列序列分析,获得各段exJSRV-NM株基因序列。结果表明,pro基因含有930个核苷酸,编码290个氨基酸；pol基因含有2628个核苷酸,编码873个氨基酸,env基因含有1848个核苷酸,编码615个氨基酸。其中在pol基因的3’末端还重迭一个额外的开放阅读框(orf-x)。基因两端分别存在一个长末端重复区(LTR),LTR-5长443bp,LTR-3长为537bp。exJSRV-NM株基因组在pol基因的3’末端重迭一个额外的开放阅读框(orf-x)。在env基因编码的TM区发现外源性exJSRV特异性的“YXXM”基序,位于env基因编码氨基酸序列的第590到593位上。这是具有致病性外源性exJSRV的特有序列,说明JSRV-NM是具有致病力的毒株。exJSRV-NM各段基因分别与国外已报道的外源性exJSRV进行同源性比较,并绘制进化树来估计它们的系统进化关系。通过遗传进化树发现我国分离株与外源性美国代表株(AF105220)具有比较近的亲源关系。应用生物信息学分析技术并对exJSRV-NM株pro、pol和env基因所编码的蛋白分别进行蛋白结构预测,均为亲水蛋白。这是我国首次应用RT-PCR技术扩增出外源性JSRV基因,并为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2010-06-01）
外源性绵羊肺腺瘤病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机制,通过组织病理学观察和免疫组织化学染色,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p-Erk1/2和p-p38的阳性表达区,通过Western blot检测Erk1/2和p38在病肺中的磷酸化水平。转染重组表达质粒pcDNA 4/myc-His/exJSRV-env到A549细胞中,通过Western blot检测Erk1/2和p38的磷酸化水平。通过CCK-8法检测转染重组表达质粒的A549细胞的增殖活力。免疫组化结果显示:JSRV Env蛋白主要表达于病肺组织的肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR在病肺组织中过表达于肺泡上皮细胞,脱落的肿瘤细胞及间质细胞中,而在健康绵羊肺中只是少量表达于肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞中,p-Erk1/2和p-p38在病肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR、p-Erk1/2和p-p38的阳性表达区均与Env蛋白的阳性表达区一致。Western blot结果显示:病肺中p-Erk1/2和p-p38的磷酸化水平均极显着高于健康肺组织,转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞中p-Erk1/2和p-p38的表达量均极显着高于对照组细胞,说明exJSRV-env确实激活了A549细胞的MAPK通路。而CCK8结果显示:转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞增殖活力显着高于对照组细胞,说明exJSRV-env可能是通过激活的EGFR/MAPK通路促进A549细胞的恶性增殖,进而促使肿瘤的发生。本研究为进一步探索绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的致病机制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外源性绵羊肺腺瘤病毒论文参考文献
[1].孙晓林.外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析[D].内蒙古农业大学.2017
[2].孙晓林,杜方原,刘淑英.外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析[J].畜牧兽医学报.2016
[3].孙晓林,杜方原,刘淑英.外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会论文集.2016
[4].韩硕.外源性绵羊肺腺瘤病毒NM株的基因克隆及序列分析[D].内蒙古农业大学.2010