本文主要研究内容
作者庞丽静（2019）在《小麦条锈菌效应蛋白Hasp190调控寄主免疫的分子机理研究》一文中研究指出：由条形柄锈菌小麦专化型（Puccinia striiformis f.sp.tritici）引起的小麦条锈病是一种危害严重的小麦真菌病害。该病害发生范围广,传播速度快,且毒性变异频繁,导致生产上的主栽品种相继丧失抗锈性,使条锈病的防治一直处于被动状态,因此,深入解析小麦条锈菌的侵染及致病机理,对于小麦条锈菌的持久控制具有重要意义。研究表明,病原菌在侵染过程会分泌效应蛋白调控寄主的免疫防卫反应促进病菌的侵染。本实验在小麦条锈菌吸器转录组测序的基础上,筛选获得候选效应蛋白基因Hasp190,进一步通过多种分子生物学手段明确其互作靶标并解析其在小麦与条锈菌互作过程中的功能,研究结果为深入揭示小麦与条锈菌互作的分子机理奠定基础,同时也为开发新的病害防控策略提供理论依据。主要研究结果如下:1.Hasp190的鉴定及表达特征分析Hasp190基因的ORF全长834 bp,编码277个氨基酸,N端1-23个氨基酸为信号肽序列,无跨膜结构,无Pfam已知保守结构域,其等电点（pI）为5.74,分子量为27.98kDa。利用酵母蔗糖酶缺陷系统验证Hasp190信号肽具有分泌功能。通过qRT-PCR对条锈菌侵染小麦过程中Hasp190的表达量进行分析,Hasp190在病原菌侵染6-48 h显著上调表达,在48 h达到最高点,表达量提高约540倍,表明Hasp190可能在病原菌侵染过程中发挥重要作用。2.Hasp190的靶标筛选及互作验证通过酵母双杂交技术筛选得到Hasp190的候选互作靶标小麦转录因子TaASR2,并通过pull down,双分子荧光互补及免疫共沉淀进一步证实Hasp190与TaASR2之间存在物理互作。通过烟草瞬时表达系统显示,TaASR2与Hasp190均定位于细胞核和细胞质,但当两者同时在烟草中表达时,两种蛋白大部分都进入细胞核,只有少量留在胞质,表明Hasp190与TaASR2的相互作用可能主要发生在细胞核。3.TaASR2的功能解析ASR蛋白是一类植物体内广泛存在的家族蛋白,大多作为转录因子发挥功能,利用qRT-PCR对TaASR2进行表达特征分析,发现其在病原菌侵染24 h时表达量上调5倍左右,表明TaASR2可能参与小麦在病菌侵染前期的防御反应。通过转录激活功能验证,发现TaASR2具有转录激活功能且转录激活结构域位于N端。利用病毒介导的基因沉默技术（VIGS）沉默TaASR2基因,并在沉默区段接种CYR23条锈菌种后,小麦叶片的坏死斑明显减少,并通过组织统计分析发现在48 h和120 h,由条锈菌侵染导致的坏死面积和H2O2积累明显减小,由此表明TaASR2可能为抗病相关基因。
Abstract
you tiao xing bing xiu jun xiao mai zhuan hua xing （Puccinia striiformis f.sp.tritici）yin qi de xiao mai tiao xiu bing shi yi chong wei hai yan chong de xiao mai zhen jun bing hai 。gai bing hai fa sheng fan wei an ,chuan bo su du kuai ,ju du xing bian yi pin fan ,dao zhi sheng chan shang de zhu zai pin chong xiang ji sang shi kang xiu xing ,shi tiao xiu bing de fang zhi yi zhi chu yu bei dong zhuang tai ,yin ci ,shen ru jie xi xiao mai tiao xiu jun de qin ran ji zhi bing ji li ,dui yu xiao mai tiao xiu jun de chi jiu kong zhi ju you chong yao yi yi 。yan jiu biao ming ,bing yuan jun zai qin ran guo cheng hui fen bi xiao ying dan bai diao kong ji zhu de mian yi fang wei fan ying cu jin bing jun de qin ran 。ben shi yan zai xiao mai tiao xiu jun xi qi zhuai lu zu ce xu de ji chu shang ,shai shua huo de hou shua xiao ying dan bai ji yin Hasp190,jin yi bu tong guo duo chong fen zi sheng wu xue shou duan ming que ji hu zuo ba biao bing jie xi ji zai xiao mai yu tiao xiu jun hu zuo guo cheng zhong de gong neng ,yan jiu jie guo wei shen ru jie shi xiao mai yu tiao xiu jun hu zuo de fen zi ji li dian ding ji chu ,tong shi ye wei kai fa xin de bing hai fang kong ce lve di gong li lun yi ju 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :1.Hasp190de jian ding ji biao da te zheng fen xi Hasp190ji yin de ORFquan chang 834 bp,bian ma 277ge an ji suan ,Nduan 1-23ge an ji suan wei xin hao tai xu lie ,mo kua mo jie gou ,mo Pfamyi zhi bao shou jie gou yu ,ji deng dian dian （pI）wei 5.74,fen zi liang wei 27.98kDa。li yong jiao mu zhe tang mei que xian ji tong yan zheng Hasp190xin hao tai ju you fen bi gong neng 。tong guo qRT-PCRdui tiao xiu jun qin ran xiao mai guo cheng zhong Hasp190de biao da liang jin hang fen xi ,Hasp190zai bing yuan jun qin ran 6-48 hxian zhe shang diao biao da ,zai 48 hda dao zui gao dian ,biao da liang di gao yao 540bei ,biao ming Hasp190ke neng zai bing yuan jun qin ran guo cheng zhong fa hui chong yao zuo yong 。2.Hasp190de ba biao shai shua ji hu zuo yan zheng tong guo jiao mu shuang za jiao ji shu shai shua de dao Hasp190de hou shua hu zuo ba biao xiao mai zhuai lu yin zi TaASR2,bing tong guo pull down,shuang fen zi ying guang hu bu ji mian yi gong chen dian jin yi bu zheng shi Hasp190yu TaASR2zhi jian cun zai wu li hu zuo 。tong guo yan cao shun shi biao da ji tong xian shi ,TaASR2yu Hasp190jun ding wei yu xi bao he he xi bao zhi ,dan dang liang zhe tong shi zai yan cao zhong biao da shi ,liang chong dan bai da bu fen dou jin ru xi bao he ,zhi you shao liang liu zai bao zhi ,biao ming Hasp190yu TaASR2de xiang hu zuo yong ke neng zhu yao fa sheng zai xi bao he 。3.TaASR2de gong neng jie xi ASRdan bai shi yi lei zhi wu ti nei an fan cun zai de jia zu dan bai ,da duo zuo wei zhuai lu yin zi fa hui gong neng ,li yong qRT-PCRdui TaASR2jin hang biao da te zheng fen xi ,fa xian ji zai bing yuan jun qin ran 24 hshi biao da liang shang diao 5bei zuo you ,biao ming TaASR2ke neng can yu xiao mai zai bing jun qin ran qian ji de fang yu fan ying 。tong guo zhuai lu ji huo gong neng yan zheng ,fa xian TaASR2ju you zhuai lu ji huo gong neng ju zhuai lu ji huo jie gou yu wei yu Nduan 。li yong bing du jie dao de ji yin chen mo ji shu （VIGS）chen mo TaASR2ji yin ,bing zai chen mo ou duan jie chong CYR23tiao xiu jun chong hou ,xiao mai xie pian de huai si ban ming xian jian shao ,bing tong guo zu zhi tong ji fen xi fa xian zai 48 hhe 120 h,you tiao xiu jun qin ran dao zhi de huai si mian ji he H2O2ji lei ming xian jian xiao ,you ci biao ming TaASR2ke neng wei kang bing xiang guan ji yin 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的庞丽静，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于小麦条锈菌论文,效应蛋白论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。