导读:本文包含了蛋白酶纯化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:α1-抗胰蛋白酶,基因克隆,基因表达,抗原性鉴定
蛋白酶纯化论文文献综述
宋帅[1]（2019）在《α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定》一文中研究指出α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)是人体内重要的蛋白酶抑制剂,主要是由肝细胞合成的一种糖蛋白,也能在肠上皮细胞肾实质等肝外组织和某些肿瘤细胞中产生,它能抑制多种蛋白酶与丝氨酸内切肽酶。在电泳中,其迁移位点位于α1蛋白带,因而又被称为α1蛋白酶抑制剂。在多种肺部炎性疾病中,胰蛋白酶-抗胰蛋白酶系统起到关键作用。某些有关α1-抗胰蛋白酶疾病的诊治,尤其α1-抗胰蛋白酶与肝脏疾病,有待进一步研究。在胃癌患者胃液中存在大量的α1-抗胰蛋白酶,其具体原因尚不明确,有待进一步研究。目的:克隆人α1-抗胰蛋白酶基因使其在细胞中表达,进行其抗原性鉴定。方法:(1)表达质粒的构建:以人胚肾细胞系293T的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人α1-AT cDNA序列(1200bp),克隆至载体后酶切鉴定,进行序列分析。(2)融合蛋白的表达与纯化:提取序列正确的重组质粒转入大肠杆菌M_(15)中表达,GST亲和纯化方法纯化上清(过柱法),还原型谷氨酸溶液洗杂蛋白,用PBS(pH7.4)缓冲液洗目的蛋白,分别取10μl过柱前上清、过柱后上清和所得目的蛋白进行SDS-PAGE分析。(3)重组蛋白的抗原性鉴定:免疫印迹(Western blot)法验证目的蛋白是否符合α1-AT的抗原性。结果:基因克隆方法得到人α1-AT基因cDNA,获得的人α1-AT序列与Gene bank文献报道的核苷酸序列一致,Western blot法验证目的蛋白符合α1-AT的免疫学特性。结论:(1)以人胚肾细胞系293T细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR法获得α1-AT基因cDNA,构建人α1-AT的表达载体PQE_(30)-α1-AT,可在大肠杆菌M_(15)中获得高效表达的α1-AT蛋白。(2)采用基因工程技术获得并纯化的人α1-AT蛋白具有同天然α1-AT相同抗原性。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
羊希,李霞,姜河,廖学品,石碧[2]（2019）在《K.paraultunense角蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究》一文中研究指出将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense(K.paraultunense)所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,回收率为7.24%。SDS-PAGE分析结果表明该酶的相对分子质量约为29 KDa。酶学性质研究表明,该酶最适作用温度为80℃;最适pH为7.5,在pH 6.0～9.0范围内酶活力较为稳定;当以酪蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为4.37 mg·mL~(-1),Vm为14 556 U·(mg·min)~(-1),而当以羊毛角蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为15.66 mg·mL~(-1),Vm为2610 U·(mg·min)~(-1);Ca~(2+)对酶活有明显的促进作用,但苯基甲基磺酰氟(PMSF)对酶活有较强的抑制作用。(本文来源于《皮革科学与工程》期刊2019年03期）
殷怡云[3]（2019）在《米曲霉耐盐蛋白酶的分离、纯化及其耐盐机制初步研究》一文中研究指出米曲霉蛋白酶的耐盐性与酱油蛋白质利用率和氨基酸含量密切相关,目前对米曲霉3.042(Aspergillus oryzae 3.042)蛋白酶的耐盐性及其耐盐机理研究较少且不够深入。因此,选育高产蛋白酶米曲霉并研究其所产蛋白酶的耐盐机制具有重要意义。本文以米曲霉3.042(Aspergillus oryzae 3.042)为原始菌株,利用常压室温等离子体诱变(ARTP)技术得到一株高产蛋白酶诱变菌株,从诱变菌株中分离、纯化和鉴定出两种耐盐蛋白酶—天冬氨酰氨肽酶(AAP)与碱性蛋白酶(AP),并在分子水平上初步阐明了两种蛋白酶的耐盐机制。(1)利用ARTP技术选育出一株高产蛋白酶米曲霉诱变菌株H8。采用ARTP诱变技术选育到一株高产蛋白酶、遗传稳定(传代15次)、孢子颜色发生变化的诱变菌株H8,其中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和天冬氨酰氨肽酶酶活比原始菌株分别提高了31.82%、19.36%、20.76%和24.77%。诱变菌株H8生物量比原始菌株提高2.9%。应用RT-qPCR方法进一步证实,高产蛋白酶菌株H8中AAP和AP基因转录水平分别高于原始菌株米曲霉27%和30%,说明AAP基因与AP基因转录水平提高是引起种曲发酵酶活提高的因素之一。ARTP处理可能加强了米曲霉AAP和AP基因的转录表达,进而提高了两种酶的酶活。(2)从诱变菌株H8中分离纯化出耐盐天冬氨酰氨肽酶(AAP)并阐明了其初步耐盐分子机制。利用磷酸盐缓冲液提取、现代色谱和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)等技术从诱变菌株H8中分离纯化和鉴定出耐盐蛋白酶—AAP。结合理化特性分析可知该酶分子量约57 kDa含有Zn~(2+),其最佳和最稳定的pH值和温度分别为7和50°C。蛋白质同源建模、分子动力学模拟、二级结构、酸性残基和内部残基疏水性分析表明,与对照蛋白酶相比,该酶在高盐环境下有序二级结构含量较高、水合表面酸性残基与特定碱性残基之间形成的盐桥较多、内部残基疏水性较强,这是该酶可能的耐盐机制。(3)从诱变菌株H8中分离纯化出耐盐碱性蛋白酶(AP)并阐明了其初步耐盐分子机制。利用磷酸盐缓冲液提取、现代色谱和MALDI-TOF-MS等技术从诱变菌株H8中分离纯化和鉴定出耐盐蛋白酶—AP。结合理化特性分析可知,该酶分子量约29 kDa、是一种不依赖金属离子的丝氨酸蛋白酶,其最佳和最稳定的pH值和温度分别为9和40°C。蛋白质同源建模、分子动力学模拟及蛋白质二级结构、酸性残基和内部残基疏水性分析表明,与对照相比,该酶在高盐环境下有序二级结构含量较高、水合表面酸性残基与特定碱性残基之间形成的盐桥较多、内部残基疏水性较强,这是该酶可能的耐盐机制。本研究结果将对酱油发酵工艺优化和调控及新菌种选育提供方法参考和依据。(本文来源于《江苏大学》期刊2019-05-01）
邓东灵,孔庆涛,胡青原,刘海波,魏天彪[4]（2019）在《胱天蛋白酶募集域蛋白9?麦芽糖结合蛋白融合蛋白的原核表达及纯化》一文中研究指出目的胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)可激活核因子?κB(NF?κB)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)等通路参与免疫,但其作用机制至今尚未阐明。为进行相关体外实验,构建CARD9?麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白的原核表达载体,并对融合蛋白进行表达鉴定及纯化。方法利用PCR技术分别扩增CARD9和MBP基因的编码序列,将两者正确插入pET?30a(+)载体中得到重组质粒,后转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞中,并进行PCR和酶切鉴定以及基因测序。将正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,筛选不同条件进行IPTG诱导表达,通过SDS?PAGE电泳检测目的蛋白质的相对分子质量。通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱对CARD9?MBP融合蛋白进行纯化,用HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后进行MALDI?TOF质谱鉴定。结果成功构建CARD9?MBP融合蛋白的原核表达载体,PCR和酶切鉴定为阳性且基因测序结果与目的序列一致。SDS?PAGE电泳显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功诱导表达出相对分子质量约为105 000的目的蛋白。通过MBP麦芽糖层析柱的初步纯化后,可得到相对较纯的融合目的蛋白,经HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后行MALDI?TOF质谱鉴定其确为CARD9蛋白。后期通过分子筛层析柱进一步纯化得到了更纯的CARD9?MBP融合蛋白。结论成功构建了重组CARD9?MBP融合蛋白的原核表达载体,并进行了大量可溶性表达。通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱的纯化,可得到较纯的目的蛋白。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2019年03期）
黄洁[5]（2019）在《4株乳杆菌胞壁蛋白酶的分离纯化及鉴定》一文中研究指出乳酸杆菌的蛋白水解系统包括细胞胞壁蛋白酶(cell-envelope proteinase,CEP),寡肽转运系统和内肽酶。其中,CEP作为该系统的关键酶发挥着重要作用,不仅参与酪蛋白降解,助发酵产品风味和质地的形成,还可酶解食物蛋白释放出生物活性肽,有益于消费者健康。目前关于乳杆菌CEP分离纯化的报道不多,对其结构鉴定更是鲜有报道,本课题采用不同提取方法研究4种乳杆菌CEP的提取效果;探讨双水相系统对CEP分离的影响,单因素及响应面法优化确定双水相分离CEP最佳条件;采用超滤、葡聚糖凝胶色谱对其分离纯化;电泳测酶分子量,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)鉴定CEP,比较不同乳杆菌的产酶差异。研究结论如下:1.选取的10种方法提取4株乳杆菌CEP存在显着差异。Ca~(2+)-free法为植物乳杆菌LP69和鼠李糖乳杆菌LR22 CEPs的最适提取方法;保加利亚乳杆菌LB6和干酪乳杆菌L61 CEPs的最适提取剂分别是盐酸胍和十二烷基硫酸钠(SDS)。综合考虑提取方法对四株菌的通用性及效果,选用Ca~(2+)-free法处理4种乳杆菌细胞,其粗酶液酶活分别为6.28 U/mL、8.98 U/mL、6.08U/mL、47.59U/mL,其比活力分别为70 U/mg、90 U/mL、200 U/mL、210 U/mL。2.单因素及响应面法优化确定了4株乳杆菌CEP的双水相萃取条件。植物乳杆菌LP69 CEP的最佳萃取条件为:30%(w/v)(NH_4)_2SO_4,30%(w/v)PEG-1000,pH 7.0,在此条件下,CEP回收率和纯化倍数分别为90.83%和2.57;鼠李糖乳杆菌LR22 CEP的最适萃取条件为:30%(w/v)(NH_4)_2SO_4,25%(w/v)PEG-1000,pH 6.7,CEP回收率和纯化倍数各为91.05%和1.11;保加利亚乳杆菌LB6 CEP的最佳萃取条件为30%(w/v)(NH_4)_2SO_4,30%(w/v)PEG-4000,pH 7.0,CEP回收率和纯化倍数各为86.67%和1.25;干酪乳杆菌L61 CEP的最佳萃取条件为40%(w/v)NaH_2PO_4,15%(w/v)PEG-1000,pH6.8,CEP回收率和纯化倍数各为92.94%和1.95,表明双水相萃取法提取乳杆菌粗酶液CEP是可行的。3.超滤、Sephadex G-100凝胶层析进一步纯化了4株菌的CEP,电泳测定了纯度和分子量;叁种截断分子量(100K Da、50K Da、10K Da)超滤膜分离双水相萃取的4株乳杆菌CEP,发现LB6酶活最高的组分的分子量在50K Da~100K Da超滤液中,其它叁株菌CEP酶活最高的组分的分子量在10K Da~50K Da超滤液中。凝胶色谱纯化后LP69 CEP的比活力、CEP回收率和纯化倍数分别为976 U/mg、45.32%和13.94;LR22 CEP的比活力、回收率和纯化倍数分别为410 U/mg、23.43%和4.56;;LB6 CEP的比活力、回收率和纯化倍数分别为1180 U/mg、33.58%和5.90;L61 CEP的比活力、回收率和纯化倍数分别为5310 U/mg、21.12%和25.29。4株菌CEP的电泳结果均为单一条带,分子量分别约为45K Da、80K Da、30K Da和38K Da。采用LC-MS/MS对4株乳杆菌CEP进行分析,得到多肽的分子量在600-1800Da范围内。4株乳杆菌CEP均存在6种相同肽段SIEDTK、RMISVAR、TIDDLK、QSELKAATK、YISTK、FLEQQNK。本课题研究乳杆菌CEP最适提取方法及双水相体系萃取CEP,为后续开发具有生物活性的功能性产品提供技术依据;研究获得了不同乳杆菌CEP的氨基酸组成,这可为后续基因工程表达制备CEP提供参考。(本文来源于《陕西科技大学》期刊2019-03-01）
樊艳平[6]（2018）在《绿豆胰蛋白酶抑制剂的提取纯化及抗豆象机理研究》一文中研究指出胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,TI)是一类对胰蛋白酶有抑制作用的多肽或蛋白质,在豆类作物种子中含量较高,不仅有抗虫作用,还有抗病毒、抗肿瘤的作用。因此寻找新型的、高活性的胰蛋白酶抑制剂具有重要的理论价值和应用价值,而目前有关胰蛋白酶抑制剂的研究主要集中在大豆、红豆等少数几种豆子中,关于抗虫绿豆胰蛋白酶抑制剂(Mung bean trypsin inhibitor,MBTI)的活性高低以及杀虫机理还未见报道,为此,本研究以不同绿豆为试验材料,进行了绿豆胰蛋白酶抑制剂的提取纯化和稳定性的研究,筛选出具有较强活性的绿豆胰蛋白酶抑制剂,并进行了抗虫绿豆胰蛋白酶抑制剂对绿豆象幼虫体内蛋白酶、代谢酶、保护酶活性以及生长发育的研究,旨在明确抗虫绿豆胰蛋白酶抑制剂的稳定性以及抗豆象的杀虫机理,以期为抗虫绿豆资源的开发利用提供理论依据。研究结果如下:1、绿豆胰蛋白酶抑制剂的稳定性试验表明:不同温度、不同pH、不同振幅超声波、不同高温高压、不同变性剂和不同还原剂对5个绿豆品种胰蛋白酶抑制剂残余活性均有一定影响,且处理时间越长,影响越大。其中抗虫绿豆B18、B20是绿豆胰蛋白酶抑制剂稳定性较高的2个品种,应用价值较大。2、绿豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化试验表明:绿豆胰蛋白酶抑制剂粗提的最适提取剂为氯化钠溶液,最适提取时间为12h,其中抗虫绿豆B18胰蛋白酶抑制剂粗提物中蛋白质含量、总活力和比活力均最高,分别为96.252 mg、553.738 U和5.753 U/mg。选取最适硫酸铵饱和度为60%时对其进行沉淀,得到的粗蛋白通过DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析后分离纯化出胰蛋白酶抑制剂纯品,得出抗虫绿豆胰蛋白酶抑制剂活性明显高于感虫品种,其中B18的胰蛋白酶抑制剂比活力和纯化倍数最高,分别为88.766 U/mg和14.641倍,B20次之,同时检测出5个绿豆品种中胰蛋白酶抑制剂的分子量约为8.8KDa。3、蛋白酶抑制剂对绿豆象幼虫体内蛋白酶活性的影响表明:在离体条件下,供试蛋白酶抑制剂(MBTI、PMSF、TLCK和OI)对绿豆象幼虫总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性均有一定的抑制作用,其中以20 ug/mL的MBTI对3种酶活性的抑制效果最强;绿豆象幼虫取食含不同抑制剂的人工绿豆后,体内3种酶活性也均受到一定的抑制作用,随龄期的延长,3种酶活性均有所升高但仍显着低于对照,且均以MBTI的抑制作用最强。4、不同龄期绿豆象幼虫体内酶活性测定表明:绿豆象幼虫取食MBTI含量为2.0%的人工绿豆后对各龄期幼虫总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的抑制作用最强,而对幼虫体内CarE和GSTs活性的诱导作用最强。取食MBTI含量为2.0%的人工绿豆后对各龄期绿豆象幼虫体内SOD和CAT活性的抑制作用最强,而对幼虫体内POD活性诱导作用最强。5、连续多代绿豆象生长发育及幼虫体内解毒酶、保护酶活性测定表明:绿豆象幼虫连续4代取食含MBTI的人工绿豆后,幼虫体重和成虫羽化率均有显着降低,而发育历期均明显延长,对幼虫体内CarE、GSTs和POD活性均有显着诱导作用,对幼虫体内SOD和CAT活性均有显着抑制作用。至第4代时MBTI对其幼虫体重、成虫羽化率和发育历期的影响均达最高;对幼虫体内CarE、GSTs和POD活性的诱导作用,分别于第2代、第4代和第3代达到最强;对SOD和CAT活性的抑制作用,分别于第1代和第3代达到最强。抗虫绿豆胰蛋白酶抑制剂活性明显高于感虫品种,其中B18、B20是绿豆胰蛋白酶抑制剂活性较高的2个品种,应用价值较大。绿豆胰蛋白酶抑制剂可通过抑制绿豆象幼虫体内蛋白酶、解毒酶和保护酶活性而影响绿豆象幼虫的正常生长发育,这将为绿豆胰蛋白酶抑制剂抗虫机制的研究提供理论基础,为抗虫绿豆资源的开发利用提供科学依据。(本文来源于《山西农业大学》期刊2018-12-01）
曲瑞红,刘凤娟,毕春晓,宋瑶瑶,胡鑫[7]（2018）在《山黧豆种子萌发特异性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究》一文中研究指出蛋白酶在种子萌发过程中参与了储藏蛋白水解等多种生理过程,为植物的生长发育提供氮源并在种子萌发的生化机制中有重要作用。本研究采用明胶酶谱法检测了山黧豆种子在不同萌发时间的蛋白酶表达情况。利用盐析、离子交换层析等方法从萌发6d的山黧豆种子中分离纯化了蛋白酶并对其基本酶学性质进行了研究。结果表明,山黧豆种子萌发特异性蛋白酶造成了种子萌发过程中高分子质量蛋白质的水解和较低分子质量蛋白质的积累。对纯化蛋白酶进行总蛋白含量、酶活力、酶比活力等检测表明,山黧豆蛋白酶的纯化倍数为6.58,蛋白得率为7.97%。山黧豆蛋白酶对金属离子的耐受性较高,添加Fe3+可以引起蛋白酶活性的显着增加。此外,该蛋白酶对血红蛋白和明胶的反应活性最高,其最适反应pH和温度分别为pH7和60℃。本研究为进一步研究山黧豆种子萌发过程中蛋白质水解与其内源毒素β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸积累的相互关系奠定了基础。(本文来源于《草地学报》期刊2018年06期）
武丹露,宋春辉,张燕茹,张莉[8]（2018）在《叁疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)肝胰腺中丝氨酸蛋白酶的分离纯化及其酶学性质研究》一文中研究指出经过35%-70%硫酸铵沉淀、Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析,从叁疣梭子蟹的肝胰腺中得到两种纯化的丝氨酸蛋白酶,分别命名为Pt-sp1和Pt-sp2。SDS-PAGE电泳表明丝氨酸蛋白酶Pt-sp1为两条蛋白条带,分别命名为Pt-sp1a和Pt-sp1b,分子量分别约为43.1 kD和37.9 kD;Pt-sp2为单一蛋白,分子量约为37.2 kD。Pt-sp1和Pt-sp2的最适pH和温度均为9.0和50℃。这两种酶在50℃和6.0-12.0的pH范围内都是稳定的。Ca~(2+)可以激活丝氨酸蛋白酶Pt-sp1和Pt-sp2的酶活性。Al~(3+),Zn~(2+),Fe~(2+)和Cu~(2+)对其酶活性具有抑制作用。胰蛋白酶抑制剂SBTI和TLCK均完全抑制了Pt-sp1,Pt-sp2的酶活性。此外,它们的酶活性部分地被PMSF和EDTA抑制。然而,胃蛋白酶抑制剂PePstatinA和半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64对酶活几乎没有影响,这说明Pt-sp1和Pt-sp2很可能是类胰蛋白酶。动力学研究表明,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,Ptsp1、Pt-sp2和牛胰蛋白酶的米氏常数Km分别为0.35μmol/L、0.82μmol/L和0.28μmol/L,表明牛胰蛋白酶与底物的亲和力最大,丝氨酸蛋白酶Pt-sp1与底物亲和力次之,Pt-sp2与底物亲和力最小。质谱分析研究发现Pt-sp1a、Pt-sp1b和Pt-sp2叁者均是胰蛋白酶,且在NCBI数据库未发现100%相似性的蛋白,Pt-sp1b和Pt-sp2是同一种蛋白。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十五届年会论文摘要集》期刊2018-11-07）
苏子健,张凌晶,刘光明,曹敏杰[9]（2018）在《黑豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其在鱼糜加工中的应用》一文中研究指出天然豆类中富含胰蛋白酶抑制剂(Trypsin Inhibitor,TI),其作为一种植物蛋白,具有抑制多种丝氨酸蛋白酶的生物活性。而将其作为食品添加剂添加至鱼糜制品中来改善鱼糜在加工过程中因内源性蛋白酶所引起的凝胶劣化现象已成为当下研究的热门的话题。本研究通过等电点沉淀、硫酸铵盐析及柱层析等生化分离手段,从黑豆中分离得到一种高纯度的黑豆胰蛋白酶抑制剂(Black Soy Bean Trypsin Inhibitor,BSTI)。经SDS-PAGE分析,BSTI分子量约为20kDa。以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物测定黑豆胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶的抑制活性,结果显示BSTI能强烈抑制胰蛋白酶的活性。经质构仪测定,将BSTI添加至鱼糜中能够显着提高其弹性,改善鱼糜品质,而微观扫描电镜的结果也显示添加BSTI能够提高鱼糜制品的交联程度。综上,提示黑豆胰蛋白酶抑制剂在鱼糜加工工业中良好的应用潜力。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十五届年会论文摘要集》期刊2018-11-07）
毛丙永,刘艳凤,赵国忠,崔树茂,赵建新[10]（2018）在《一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析》一文中研究指出采用硫酸铵沉淀、Q-HP阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱等技术,从酱油大曲中纯化得到一种耐盐蛋白酶,经飞行时间质谱鉴定为钙蛋白酶RIM13,属于一种半胱氨酸蛋白酶。该蛋白酶的最适温度为50℃;最适pH值为6.5;稳定温度为40℃;稳定pH值为7.0;Mn~(2+)促进蛋白酶活力,Fe~(3+)、Fe~(2+)、Cu~(2+)、Ca~(2+)、K~+、Na~+抑制蛋白酶活力,以上金属离子对蛋白酶二级结构也产生不同程度的影响;米氏常数K_m为2.43 g/L,最大反应速率V_m为103.09 mg/(L·min)。在5、10 g/100 mL和15 g/100 mL的NaCl质量浓度条件下,蛋白酶保留的酶活力分别为77.22%、54.39%以及41.15%。该蛋白酶在高盐度环境下保持较高的酶活力,因此具有潜在的工业应用价值。(本文来源于《食品科学》期刊2018年24期）
蛋白酶纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense(K.paraultunense)所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,回收率为7.24%。SDS-PAGE分析结果表明该酶的相对分子质量约为29 KDa。酶学性质研究表明,该酶最适作用温度为80℃;最适pH为7.5,在pH 6.0～9.0范围内酶活力较为稳定;当以酪蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为4.37 mg·mL~(-1),Vm为14 556 U·(mg·min)~(-1),而当以羊毛角蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为15.66 mg·mL~(-1),Vm为2610 U·(mg·min)~(-1);Ca~(2+)对酶活有明显的促进作用,但苯基甲基磺酰氟(PMSF)对酶活有较强的抑制作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白酶纯化论文参考文献
[1].宋帅.α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定[D].吉林大学.2019
[2].羊希,李霞,姜河,廖学品,石碧.K.paraultunense角蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究[J].皮革科学与工程.2019
[3].殷怡云.米曲霉耐盐蛋白酶的分离、纯化及其耐盐机制初步研究[D].江苏大学.2019
[4].邓东灵,孔庆涛,胡青原,刘海波,魏天彪.胱天蛋白酶募集域蛋白9?麦芽糖结合蛋白融合蛋白的原核表达及纯化[J].医学研究生学报.2019
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[6].樊艳平.绿豆胰蛋白酶抑制剂的提取纯化及抗豆象机理研究[D].山西农业大学.2018
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[8].武丹露,宋春辉,张燕茹,张莉.叁疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)肝胰腺中丝氨酸蛋白酶的分离纯化及其酶学性质研究[C].中国食品科学技术学会第十五届年会论文摘要集.2018
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[10].毛丙永,刘艳凤,赵国忠,崔树茂,赵建新.一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析[J].食品科学.2018