导读:本文包含了纯化因子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人凝血因子Ⅸ,中国仓鼠卵巢细胞,阴离子交换层析
纯化因子论文文献综述
李德款,张航,聂艳桃,李成,梁洪[1]（2019）在《重组人凝血因子Ⅸ在CHO细胞中的表达和纯化》一文中研究指出目的在CHO细胞中表达并纯化人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)。方法将高表达hFⅨ的CHO细胞株在摇瓶中用无血清培养基进行批次培养和补料批次培养,收获补料批次培养上清,通过阴离子交换层析进行纯化,测定纯化产物的蛋白浓度及hFⅨ活性,并进行SDS-PAGE分析。结果批次和补料批次培养表达的hFⅨ活性分别高达0. 62和14. 45 IU/mL。纯化后的h FⅨ比活性高达157. 19 IU/mg。SDS-PAGE分析表明重组CHO工程细胞株能正确表达hFⅨ。结论成功在CHO细胞中表达并纯化了高比活性的重组hFⅨ蛋白,为进一步研制重组FⅨ药物奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年11期）
刘子矜,于孟斌,徐志卿,杨予涛[2]（2019）在《转录因子LRF蛋白POZ结构域的表达与纯化》一文中研究指出[目的]旨在原核表达转录因子LRF的POZ结构域,纯化获得GST-POZ融合蛋白。[方法]以SD大鼠海马组织c DNA为模板,利用PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的LRF基因的POZ结构域,并将其插入到原核表达载体p GEX-4T-1中,将构建成功的p GEX-4T-1-POZ原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,再利用MagneGST particles亲和纯化GST-POZ融合蛋白,最后通过Western Blot鉴定融合蛋白。[结果]p GEX-4T-1-POZ原核表达质粒构建成功;在37℃条件下,浓度为0. 2 mmol/L的IPTG诱导7 h能够使重组蛋白大量表达,经MagneGST particles纯化后的GST-POZ重组蛋白能够被识别LRF的抗体特异性识别。[结论]纯化后的GST–POZ重组蛋白能够用于后续的生物学研究。(本文来源于《生物技术》期刊2019年05期）
熊振宇,李晓瑾,李志鹏[3]（2019）在《重组人表皮生长因子在毕赤酵母中的表达与纯化及其复合可溶性微针的制备》一文中研究指出目的:利用毕赤酵母X33表达重组人表皮生长因子(rhEGF),纯化后以透明质酸(HA)为基质制备rhEGF-可溶性微针贴片,以期增强rhEGF的透皮能力。方法:合成EGF-His编码基因,PCR扩增后连入pPICZαA质粒构建重组表达载体,线性化pPICZαA-hEGF-His载体后电转化毕赤酵母X33感受态,涂布高浓度博来霉素YPD平板,筛选高表达单克隆菌株;甲醇诱导表达,以硫酸铵沉淀及镍填料亲和层析方法纯化获得rhEGF;利用微模板浇铸法以HA为基质制备rhEGF-可溶性微针贴片,通过猪皮穿刺实验验证此贴片的穿透性及可溶性。结果:构建了pPICZαA-hEGFHis表达载体,通过筛选获得高表达X33菌株,经两步纯化后的EGF-His蛋白纯度约为90%;制备了rhEGF-可溶性微针贴片,此贴片能够穿透猪皮。结论:利用毕赤酵母表达并纯化获得高纯度的EGF-His蛋白;将EGF-His蛋白与微针技术相结合制备的rhEGF-可溶性微针贴片具有较好的穿刺性和溶解性。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年04期）
杨旭颖,安丽君[4]（2019）在《拟南芥细胞周期调控因子KRP2的原核表达及蛋白纯化》一文中研究指出表皮毛是由高等植物地上部组织表皮细胞发育而来的一种特殊结构,细胞周期调控因子在植物表皮毛细胞形态的建成过程中发挥着重要作用。利用原核表达系统,构建pET-28a-KRP2-FLAG融合表达载体,在大肠杆菌中对拟南芥细胞周期依赖激酶抑制因子KRP2进行了体外表达,并利用蛋白标签FLAG和His对目的蛋白进行纯化。结果表明,在大肠杆菌系统中成功对KRP2-FLAG进行了体外表达并得到了纯化的蛋白,蛋白量为0.87 mg。这为进一步研究KRP2在表皮毛细胞发育过程中的作用奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年12期）
梁小珍,余艳红[5]（2019）在《大肠杆菌整合宿主因子的表达与纯化》一文中研究指出[目的]构建大肠杆菌整合宿主因子两亚基的共表达载体并对其表达纯化条件进行探索。[方法]PCR扩增himA和hip基因,重迭PCR连接起来后利用重组酶连接到表达载体p ET-duet1中,筛选阳性重组子,转化Rosetta(DE3)表达菌,调整诱导时IPTG的浓度及诱导时间,确定最佳诱导条件,最后通过himA基因C端的6×His标签与镍的结合,进行蛋白纯化。[结果]成功扩增himA和hip基因;重组表达载体p ET-duet-himAhip经PCR和DNA测序鉴定构建成功; SDS-PAGE检测到大小约为11. 1 k Da和10. 7 k Da的目的蛋白,IHF的表达成功; 37℃,A_(600)=0. 6～0. 8时,在IPTG终浓度分别为0. 2 mmol/L、0. 5 mmol/L条件下诱导2 h、4 h,目的蛋白的表达量没有明显区别。[结论]成功构建IHF两个亚基的共表达载体,在37℃诱导条件下简单快速得到等比例的可溶性IHF-α和IHF-β,为后续研究奠定基础。(本文来源于《生物技术》期刊2019年03期）
徐鹏鑫,徐瑞媛,杜军,郝秀静[6]（2019）在《布鲁氏菌OMP22蛋白的原核表达、纯化及其对巨噬细胞炎性反应因子mRNA表达的影响观察》一文中研究指出目的原核表达布氏杆菌OMP22蛋白并观察其对巨噬细胞炎性因子mRNA表达的影响。方法在GenBank中查找牛型布鲁氏菌Omp22基因序列并进行引物设计,以其疫苗的全基因组DNA为模板PCR扩增Omp22基因,扩增产物克隆入PEASY-T3载体后测序,测序正确的基因片段与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Omp22,转化感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白OMP22。用胶回收纯化的目的蛋白作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7并检测其相关炎性因子mRNA水平。结果结果表明成功构建了布鲁氏菌Omp22蛋白的表达载体,转化DE3后经IPTG诱导表达约35×10~3的目的蛋白,与预期大小相符。Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的OMP22刺激小鼠巨噬细胞,其IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎性因子表达水平显著降低。结论 OMP22蛋白能降低巨噬细胞的炎性反应表达,为布病的进一步研究提供了理论依据。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年03期）
申一凡,黄凯悦,任亚哲,陈婷,陆昌瑞[7]（2019）在《人肿瘤抑制因子Folliculin(FLCN)蛋白的原核表达纯化》一文中研究指出肿瘤抑制因子Folliculin(FLCN)的突变或缺失会引起常染色体显性遗传病——BHD综合征,但其诱发机制不清,因而认知FLCN的结构和功能非常必要。本文利用优化pGEX-6p-1-GST-FLCN重组质粒构建了大肠杆菌原核表达系统,诱导表达GST-FLCN融合蛋白,再通过GST介质亲和层析和分子筛纯化,最后通过Xa因子蛋白酶切除GST标签,收集获取了高纯度(90%左右)的FLCN蛋白,为FLCN的结构与功能分子奠定了基础。(本文来源于《生物化工》期刊2019年01期）
夏爽飞,陈鑫鑫,乔松林,柴书军,罗雪刚[8]（2019）在《猪细胞因子信号传导抑制因子1蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备》一文中研究指出为制备猪细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)的多克隆抗体,采用RT-PCR扩增猪SOCS1基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET28a-pSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件,并对重组蛋白pSOCS1进行纯化。以表达的重组蛋白pSOCS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经4次免疫,间接ELISA测得抗体效价达到1∶51 200。Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体可与pSOCS1重组蛋白和经HEK293T细胞过表达的pSOCS1蛋白发生特异性反应,证明pSOCS1重组蛋白免疫原性良好。本研究为后续制备单克隆抗体、研究猪SOCS1相关作用机制奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年06期）
龙琼,郝嘉茂,徐盟,毕研伟,肖红剑[9]（2019）在《树鼩干细胞生长因子的原核表达、纯化及免疫原性》一文中研究指出目的原核表达、纯化树鼩干细胞生长因子(stem cell factor,SCF),并检测其免疫原性。方法根据GenBank预测的树鼩SCF基因序列设计引物,PCR扩增SCF基因,克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-SCF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,免疫家兔,Western blot和ELISA法检测其免疫原性,并检测SCF在树鼩不同组织中的分布情况。结果重组表达质粒pET-30a(+)-SCF经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为34 500,表达量约占菌体总蛋白的35. 6%,以包涵体形式存在;纯化后的重组蛋白纯度达90%以上,可与兔抗人SCF多克隆抗体特异性结合,且免疫原性良好,抗血清效价为1∶256 000。在鼻、气管、肺、脾、肾、食管中能检测到SCF的分布。结论在大肠埃希菌中高效表达了重组SCF蛋白,纯化复性后具有良好的免疫原性。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年01期）
王强,段云飞,徐燕,张超,冷晓燕[10]（2018）在《重组人表皮生长因子包涵体的表达、纯化及复性》一文中研究指出目的:通过优化人表皮生长因子(hEGF)基因序列,利用大肠杆菌大量表达重组hEGF(rhEGF)包涵体,经过包涵体纯化复性获得高活性的rhEGF。方法:采用全基因合成优化后的序列,克隆至pET-30a表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,将rhEGF包涵体用尿素溶解后过Ni柱纯化并稀释复性,根据药典对得到的rhEGF进行纯度及活性测定。结果:构建了rhEGF的表达载体pET-30a-rhEGF,表达出的蛋白主要存在于包涵体中,相对分子质量为6.5×10~3,包涵体经过纯化复性后获得的rhEGF纯度可达92.8%,生物活性约4.94×10~7IU/mg。结论:得到了具有较高活性的rhEGF。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年06期）
纯化因子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[目的]旨在原核表达转录因子LRF的POZ结构域,纯化获得GST-POZ融合蛋白。[方法]以SD大鼠海马组织c DNA为模板,利用PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的LRF基因的POZ结构域,并将其插入到原核表达载体p GEX-4T-1中,将构建成功的p GEX-4T-1-POZ原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,再利用MagneGST particles亲和纯化GST-POZ融合蛋白,最后通过Western Blot鉴定融合蛋白。[结果]p GEX-4T-1-POZ原核表达质粒构建成功;在37℃条件下,浓度为0. 2 mmol/L的IPTG诱导7 h能够使重组蛋白大量表达,经MagneGST particles纯化后的GST-POZ重组蛋白能够被识别LRF的抗体特异性识别。[结论]纯化后的GST–POZ重组蛋白能够用于后续的生物学研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纯化因子论文参考文献
[1].李德款,张航,聂艳桃,李成,梁洪.重组人凝血因子Ⅸ在CHO细胞中的表达和纯化[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].刘子矜,于孟斌,徐志卿,杨予涛.转录因子LRF蛋白POZ结构域的表达与纯化[J].生物技术.2019
[3].熊振宇,李晓瑾,李志鹏.重组人表皮生长因子在毕赤酵母中的表达与纯化及其复合可溶性微针的制备[J].生物技术通讯.2019
[4].杨旭颖,安丽君.拟南芥细胞周期调控因子KRP2的原核表达及蛋白纯化[J].江苏农业科学.2019
[5].梁小珍,余艳红.大肠杆菌整合宿主因子的表达与纯化[J].生物技术.2019
[6].徐鹏鑫,徐瑞媛,杜军,郝秀静.布鲁氏菌OMP22蛋白的原核表达、纯化及其对巨噬细胞炎性反应因子mRNA表达的影响观察[J].中国病原生物学杂志.2019
[7].申一凡,黄凯悦,任亚哲,陈婷,陆昌瑞.人肿瘤抑制因子Folliculin(FLCN)蛋白的原核表达纯化[J].生物化工.2019
[8].夏爽飞,陈鑫鑫,乔松林,柴书军,罗雪刚.猪细胞因子信号传导抑制因子1蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备[J].中国兽医科学.2019
[9].龙琼,郝嘉茂,徐盟,毕研伟,肖红剑.树鼩干细胞生长因子的原核表达、纯化及免疫原性[J].中国生物制品学杂志.2019
[10].王强,段云飞,徐燕,张超,冷晓燕.重组人表皮生长因子包涵体的表达、纯化及复性[J].生物技术通讯.2018