本文主要研究内容
作者乔树叶,黄时海,邓彦飞,邓海莹,罗婵,石德顺,李湘萍（2019）在《水牛miR-302s真核表达载体的构建及生物信息学分析》一文中研究指出：试验旨在克隆并构建水牛miR-302s慢病毒真核表达载体(bbu-miR-302s),对其进行生物信息学分析,并尝试将该载体应用于水牛体细胞重编程中。以水牛基因组DNA为模板扩增得到bbu-miR-302s前体序列,测序正确后将其连入pLVX-IRES-ZsGreen1构建重组慢病毒真核表达载体。重组的慢病毒真核表达载体经过酶切鉴定正确后,采用脂质体转染方法包装慢病毒颗粒,通过感染HEK-293T细胞及猪和水牛体细胞,检测重组慢病毒载体的有效性。bbu-miR-302s有效感染水牛胎儿成纤维细胞(BFF)后,经诱导培养,检测能否产生水牛诱导多能干细胞(iPSC)。采用CoGeMiR数据库查询法和SnapGene Viewer软件进行miR-302s家族在基因组中的定位分析;利用ClustalX 1.83软件分析miR-302s序列保守性;利用TargetScan和miRWalk软件预测bbu-miR-302s主要的靶基因,并运用DAVID程序对靶基因进行信号通路富集。测序结果显示,扩增获得的序列是水牛miR-302s家族,包装的重组慢病毒滴度为7.2×10~6TU/mL,并可以有效感染3个物种的体细胞。bbu-miR-302s病毒感染BFF后,细胞经历形态变化并发生聚集形成克隆样,碱性磷酸酶检测阳性,但多能基因及表面抗原检测结果均为阴性,说明单因子miR-302s不足以完全重编程BFF为水牛iPSC,但促进了重编程进程。CoGeMiR数据库检索发现,miR-302s家族主要位于LARP7基因的内含子区;SnapGene Viewer软件进一步分析发现,bbu-miR-302s位于水牛7号染色体LARP7基因的内含子区。序列同源性分析表明,miR-302s家族成员间及miR-302s簇成员在不同物种间均高度保守。水牛miR-302s主要靶基因共255个,这些靶基因主要集中在33个信号通路中,其中PGK信号通路与胰高血糖素信号转导及调控干细胞信号通路最为显著。本研究结果为后续开展miR-302s簇在体细胞重编程中的作用奠定基础。
Abstract
shi yan zhi zai ke long bing gou jian shui niu miR-302sman bing du zhen he biao da zai ti (bbu-miR-302s),dui ji jin hang sheng wu xin xi xue fen xi ,bing chang shi jiang gai zai ti ying yong yu shui niu ti xi bao chong bian cheng zhong 。yi shui niu ji yin zu DNAwei mo ban kuo zeng de dao bbu-miR-302sqian ti xu lie ,ce xu zheng que hou jiang ji lian ru pLVX-IRES-ZsGreen1gou jian chong zu man bing du zhen he biao da zai ti 。chong zu de man bing du zhen he biao da zai ti jing guo mei qie jian ding zheng que hou ,cai yong zhi zhi ti zhuai ran fang fa bao zhuang man bing du ke li ,tong guo gan ran HEK-293Txi bao ji zhu he shui niu ti xi bao ,jian ce chong zu man bing du zai ti de you xiao xing 。bbu-miR-302syou xiao gan ran shui niu tai er cheng qian wei xi bao (BFF)hou ,jing you dao pei yang ,jian ce neng fou chan sheng shui niu you dao duo neng gan xi bao (iPSC)。cai yong CoGeMiRshu ju ku cha xun fa he SnapGene Viewerruan jian jin hang miR-302sjia zu zai ji yin zu zhong de ding wei fen xi ;li yong ClustalX 1.83ruan jian fen xi miR-302sxu lie bao shou xing ;li yong TargetScanhe miRWalkruan jian yu ce bbu-miR-302szhu yao de ba ji yin ,bing yun yong DAVIDcheng xu dui ba ji yin jin hang xin hao tong lu fu ji 。ce xu jie guo xian shi ,kuo zeng huo de de xu lie shi shui niu miR-302sjia zu ,bao zhuang de chong zu man bing du di du wei 7.2×10~6TU/mL,bing ke yi you xiao gan ran 3ge wu chong de ti xi bao 。bbu-miR-302sbing du gan ran BFFhou ,xi bao jing li xing tai bian hua bing fa sheng ju ji xing cheng ke long yang ,jian xing lin suan mei jian ce yang xing ,dan duo neng ji yin ji biao mian kang yuan jian ce jie guo jun wei yin xing ,shui ming chan yin zi miR-302sbu zu yi wan quan chong bian cheng BFFwei shui niu iPSC,dan cu jin le chong bian cheng jin cheng 。CoGeMiRshu ju ku jian suo fa xian ,miR-302sjia zu zhu yao wei yu LARP7ji yin de nei han zi ou ;SnapGene Viewerruan jian jin yi bu fen xi fa xian ,bbu-miR-302swei yu shui niu 7hao ran se ti LARP7ji yin de nei han zi ou 。xu lie tong yuan xing fen xi biao ming ,miR-302sjia zu cheng yuan jian ji miR-302scu cheng yuan zai bu tong wu chong jian jun gao du bao shou 。shui niu miR-302szhu yao ba ji yin gong 255ge ,zhe xie ba ji yin zhu yao ji zhong zai 33ge xin hao tong lu zhong ,ji zhong PGKxin hao tong lu yu yi gao xie tang su xin hao zhuai dao ji diao kong gan xi bao xin hao tong lu zui wei xian zhe 。ben yan jiu jie guo wei hou xu kai zhan miR-302scu zai ti xi bao chong bian cheng zhong de zuo yong dian ding ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国畜牧兽医的乔树叶,黄时海,邓彦飞,邓海莹,罗婵,石德顺,李湘萍，发表于刊物中国畜牧兽医2019年09期论文，是一篇关于慢病毒真核载体论文,生物信息学分析论文,中国畜牧兽医2019年09期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国畜牧兽医2019年09期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。