导读:本文包含了羊膜上皮细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人羊膜上皮细胞,异基因造血干细胞移植,膜性肾病
羊膜上皮细胞论文文献综述
曾胡广,孙菊,刘文宾,吴迪炯,胡慧瑾[1]（2019）在《人羊膜上皮细胞治疗异基因造血干细胞移植后膜性肾病一例》一文中研究指出目前,异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo- HSCT)仍是许多血液系统疾病的主要治疗手段。随着移植技术和支持治疗的进步,allo- HSCT受者预后明显改善,但肾损伤仍是影响其死亡和生存质量的主要因素之一~([1])。浙江中医药大学附属第一医院血液科应用人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,(本文来源于《中华移植杂志(电子版)》期刊2019年03期）
张臣臣,尹熙惠,杨智昉,何希彪,方成虎[2]（2019）在《人羊膜上皮细胞治疗心肌梗死的研究进展》一文中研究指出心肌梗死(myocardial infarction,MI)是心力衰竭的主要原因,就目前来看无特效方法治疗MI导致的心肌细胞死亡和挽救受损的心功能。细胞替代治疗作为一种全新的治疗方式成为当下研究的热点。近10年来,包括本研究组在内的国内外较多研究都着眼于运用人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)治疗MI,并取得了一定成效。本文就hAECs在MI中改善心功能的作用及具体机制展开综述。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年15期）
谢雪锋,陈刚,吴复跃,侯剑刚[3]（2019）在《兔包皮来源的上皮细胞与人来源脱细胞羊膜基质(HAAM)组织工程共同培养细胞层片的体外研究》一文中研究指出目的探讨兔包皮来源的上皮细胞与人来源脱细胞羊膜基质(human acellular amniotic membrane matrix,HAAM)组织工程共同培养细胞层片的效果。方法将兔包皮来源的上皮细胞接种于实验组(脱细胞羊膜基质)和对照组(未脱细胞的羊膜上基质)上,待细胞在两种羊膜基质上生长至铺满表面,用活细胞示踪剂标记细胞,然后通过组织学观察上皮细胞在两种羊膜基质上的黏附及生长情况。结果包皮来源的上皮细胞在两组羊膜基质上均能增殖生长,细胞呈单层生长,活细胞示踪剂显示细胞生长良好,并具有活细胞功能。结论包皮来源的上皮细胞是良好的实验室组织工程化的种子细胞,脱细胞羊膜基质是良好的组织工程化尿道支架材料,该方法可成功培养上皮细胞层片,有望用于尿道重建。(本文来源于《复旦学报(医学版)》期刊2019年03期）
刘钰[4]（2019）在《1、雌激素通过激活CD38/SIRT1信号途径促进低氧诱导小鼠气道平滑肌细胞凋亡的机制研究 2、人羊膜上皮干细胞对小鼠急性肺损伤的治疗作用及其机制研究》一文中研究指出研究背景及研究目的:支气管哮喘是临床上常见的呼吸道疾病,是一种由气道炎性细胞及结构细胞等多种细胞及细胞组分参与,以气道炎症、气道重塑和气道高反应性为特征的异质性疾病。缺氧被认为是肺部疾病进展的关键因素,例如支气管哮喘、气道阻塞和肺动脉高压等都存在不同程度的缺氧。缺氧会刺激气道炎症和气道重塑,并在气道重塑期间诱导气道平滑肌细胞(ASMC)凋亡。CD38是体内NAD+降解的关键酶,在调节细胞内的NAD+水平以及NAD+依赖的SIRT1活性中发挥重要作用。另有证据表明肺部疾病的发病率和进展存在性别差异,雌激素在这些病理过程中发挥着至关重要的作用;雌激素可通过CD38影响平滑肌收缩,但其调控的具体分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨CD38缺失对于低氧状态下小鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响,以及雌激素对CD38/SIRT1信号轴的调控作用,并在整体动物模型中验证平滑肌CD38缺失对小鼠哮喘的保护作用,为哮喘等呼吸系统疾病的治疗提供重要靶点和实验依据。实验方法:1.雌激素(E2)对气道平滑肌细胞CD38/SIRT1表达调控分析:分离和体外培养原代气道平滑肌细胞(ASMCs),采用不同浓度E2及不同时间处理ASMCs,利用荧光定量PCR检测CD38和SIRT1的m RNA水平;Western blot检测CD38和SIRT1的蛋白表达水平,明确E2调控CD38表达的量效和时效变化;比较野生型(WT)及CD38敲除(CD38 KO)的ASMCs中CD38、SIRT1、乙酰化p53(Ac-p53)和总p53表达水平,以及E2对其表达的干预作用。2.CD38对低氧条件下ASMCs凋亡的影响及E2的干预作用分析:建立体外低氧模型,荧光定量PCR检测低氧条件下E2对WT和CD38 KO的ASMCs中CD38和SIRT1 m RNA水平的影响,Western blot检测E2对于低氧刺激后CD38/SIRT1/p53通路的影响;通过Hoechst33258染色、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达分析和Caspase-3活性检测,明确CD38缺失对低氧诱导ASMCs凋亡的保护作用以及E2的干预作用。3.E2调控ASMCs凋亡的分子机制分析:观察在SIRT1特异性活性激动剂白藜芦醇(RSV)存在情况下E2对ASMCs凋亡的影响;检测在雌激素受体特异性抑制剂(ICI 182,780)存在时E2对CD38 m RNA和蛋白表达的影响,明确E2是否通过雌激素受体调控CD38表达。通过上述实验,以期阐明E2通过调控CD38/SIRT1信号影响ASMCs凋亡的分子机制。4.卵清蛋白(OVA)诱导小鼠哮喘模型的构建:比较野生型和平滑肌CD38敲除小鼠的哮喘程度;检测两组小鼠肺泡灌洗液中的白细胞数;HE染色观察炎症细胞浸润和肺部损伤,在整体动物水平上验证平滑肌CD38缺失对于小鼠哮喘的保护作用。实验结果:1.量效实验显示,ASMCs的CD38 m RNA和蛋白表达随着E2浓度的增加而升高,而SIRT1的m RNA和蛋白表达则下降;时效实验显示,CD38 m RNA和蛋白表达在48 h内持续增加,SIRT1 m RNA和蛋白表达水平在24 h时间点降低,在48 h时部分恢复,二者的表达呈现显着的负相关。因此,选用10 n M E2,且预处理48 h后用于随后的细胞实验。2.E2处理可使野生型ASMCs的CD38蛋白表达增加,SIRT1蛋白表达降低,同时促进乙酰化p53(Ac-p53)的表达;CD38 KO导致ASMCs的SIRT1蛋白水平显着增加,Ac-p53蛋白水平降低,E2处理后,ASMCs的SIRT1和Ac-p53表达水平不变。3.低氧处理可使野生型ASMCs的CD38和SIRT1 m RNA表达明显下调,CD38蛋白水平增加,SIRT1表达减少,Ac-p53表达增加。E2可抑制低氧导致的CD38 m RNA表达下调,进而促进SIRT1的m RNA表达下调;低氧情况下E2可以进一步促进CD38蛋白表达、下调SIRT1蛋白水平和促进p53乙酰化。敲除CD38基因可使E2在ASMCs的上述作用消失。4.E2处理可显着增加低氧诱导的野生型ASMCs凋亡,Caspase-3活性增加,Bax/Bcl-2比值显着增高;敲除CD38基因可显着抑制低氧导致的ASMCs凋亡;SIRT1激动剂RSV则可显着抑制E2诱导的ASMCs凋亡。5.雌激素受体抑制剂(ICI 182,780)可显着降低ASMCs的CD38 m RNA和蛋白表达,在ICI 182,780存在的情况下,可抵消E2促进CD38表达的作用。6.在整体动物模型中,与对照小鼠相比较,平滑肌特异性敲除CD38小鼠对哮喘敏感性下降,气道高反应性降低,支气管肺泡灌洗液中白细胞减少;肺部组织病理学和肺部炎症显着改善。结论:E2通过雌激素受体上调CD38基因表达,导致SIRT1表达减少,p53乙酰化增加,促进低氧诱导的ASMCs凋亡,而CD38缺失可抵消E2的这一作用。平滑肌特异性敲除CD38小鼠可减轻小鼠哮喘症状和肺部损伤。上述结果表明平滑肌细胞CD38是哮喘发病过程中的关键靶点,通过对其的调控可能为哮喘等呼吸系统疾病的治疗提供新的策略。研究背景及研究目的:急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS),是由于重症肺炎、吸入性肺炎、重度脓毒血症、严重创伤、休克等非心源性疾病引起的肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤造成弥漫性肺间质水肿及肺泡水肿,导致急性低氧性呼吸功能不全或呼吸衰竭,伴随失控性全身炎症反应(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)以及机体代偿性抗炎反应(CARS,Compensatory antiinflammatory response syndrome)。ARDS由于其复杂的发病机制导致病死率高,临床上对于该病尚无有效的治疗方法。近年来,许多研究发现干细胞拥有多向分化潜能,在应用于常规治疗难以解决的疑难复杂病症中获得了甚为满意的疗效。人羊膜上皮干细胞(hAESCs)是源自孕妇所娩出胎盘上的羊膜组织,具有广泛的分化潜能,研究表明hAESCs对急性肺损伤的修复作用是通过免疫调节功能实现的,但具体的作用机制尚不清楚。本课题拟通过构建急性肺损伤模型,通过体内外实验证实hAESCs对于肺损伤的修复作用,并尝试寻找到其相关的作用机制,为hAESCs应用于该疾病的治疗提供科学参考和实验依据。实验方法:1.hAESCs的分离、鉴定及安全性评价:分离和体外培养hAESCs,获取hAESCs来源的条件培养液(CM);利用RT-PCR、免疫荧光和流式细胞技术对hAESCs进行鉴定,并对其分化潜能和免疫原性进行评价;对hAESCs体内外致瘤性进行分析;采用小动物活体成像仪观察hAESCs的组织分布。2.hAESCs对小鼠急性肺损伤的保护作用研究:分离与体外培养人羊膜上皮干细胞(hAESCs),制备细胞悬液及hAESCs来源的CM。建立经气道给予LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型,设立正常对照组、LPS组、LPS+Cell组(尾静脉注射hAESCs)和LPS+CM组(尾静脉注射CM),于造模后3天和7天分别检测各组小鼠肺泡灌洗液中的炎症细胞数;ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10水平;HE染色观察组织病理学改变和炎症细胞浸润;天狼星红染色检测肺部纤维化程度,评价hAESCs或CM对小鼠急性肺损伤的保护作用。3.hAESCs或CM体外抗炎作用分析:体外培养人肺上皮细胞(BEAS-2B),建立hAESCs或CM与BEAS-2B共培养体系,LPS诱导体外炎症反应模型,荧光定量PCR检测LPS刺激后BEAS-2B中IL-6、TNF-α、IL-1β及IL-10m RNA水平的改变,体外验证hAESCs或CM的抗炎作用。实验结果:1.hAESCs具有多分化潜能及较低的免疫原性,hAESCs在体内外均无致瘤性,主要在肺内聚集。2.与模型组比较,尾静脉注射hAESCs及CM可显着降低肺泡灌洗液中白细胞数量,减少促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β释放,同时增加抗炎因子IL-10水平;hAESCs或CM注射可显着改善LPS诱导的肺部炎症和肺部损伤,肺损伤评分显着下降,同时可有效减轻小鼠肺部纤维化。3.在体外炎症反应模型中,hAESCs或CM可显着抑制BEAS-2B中促炎基因IL-6、TNF-α及IL-1β的表达。实验结论:人羊膜上皮干细胞(hAESCs)对LPS诱导的小鼠急性肺损伤具有保护作用,这一保护作用可能与hAESCs调节肺部炎症反应相关。hAESCs具有多分化潜能和低免疫原性,安全性高,易于靶向于肺部,显示出在急性肺损伤治疗中应用的良好潜力。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
程亚伟[5]（2019）在《透明质酸联合人羊膜上皮细胞对人外周血单个核细胞及移植治疗1型糖尿病大鼠的免疫调节作用》一文中研究指出目的:探讨透明质酸(hyaluronic acid,HA)联合人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)对异基因T淋巴细胞的调节作用,进而通过胰腺包膜原位移植,研究HA联合hAECs移植治疗1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)大鼠的疗效及免疫调节作用。方法:采用酶消化法分离hAECs,然后用免疫组织化学染色法和流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行表型鉴定。运用Ficoll-hypaque密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)。共培养细胞比例筛选实验,依据PBMCs与hAECs细胞数的比例,分为2:1、10:1和50:1共3组,对照组为PBMCs,各组用10μg/mL植物凝集素(PHA-P)刺激后,培养72 h,RT-qPCR检测Foxp3的转录水平;96 h后MTT法检测各组OD值,筛选hAECs与PBMCs的最优细胞数比例。HA作用浓度筛选实验,分为PBMCs、不同浓度HA+PBMCs、hAECs+PBMCs(hAECs:PBMCs=1:2)、不同浓度HA+hAECs+PBMCs,共10组,其中HA的相对分子质量为300 KD,浓度分别为0.001,0.01,0.1和1 mg/mL。培养72 h后,RT-qPCR检测Foxp3的转录水平;96 h后通过MTT法检测各组OD值,筛选最佳HA浓度。联合治疗对PBMCs中T细胞亚群的影响实验,分为PBMCs、HA+PBMCs、hAECs+PBMCs、HA+hAECs+PBMCs等4组,其中HA浓度为0.1 mg/L。培养72 h后,FCM检测T细胞中Th1、Th2、Tc1、Tc2、Th17和Treg等亚群的比例。体内实验,通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,30 mg/Kg,连续4天)构建T1DM模型大鼠,造模成功后随机分为5组(n=6):模型组、胰岛素治疗组(腹腔注射3 U精蛋白锌胰岛素,biw)、HA组(0.1 mg/L)、hAECs组(2×10~6细胞/只)、HA+hAECs组,采用胰腺包膜下原位移植治疗,并设置正常对照组(n=6)。每周尾静脉取血测血糖。治疗30 d后,腹主静脉取血,FCM检测静脉血T淋巴细胞亚群比例。病理组织采用HE染色、免疫组织化学染色评价胰岛组织结构和功能。ELISA检测血清C肽,以及IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17和TGF-β1等细胞因子的含量。结果:分离培养的P2 hAECs高表达CD29、CD166、CD73,低表达CD44,不表达造血干细胞标志物CD45、CD34和MHC-II类分子HLA-DR,高表达上皮细胞标志物CK19,不表达间充质细胞标志物波形蛋白。MTT检测结果提示,hAECs呈剂量依赖性抑制PHA-P刺激的异基因PBMCs增殖,当PBMCs:hAECs为2:1时,增殖抑制率达到最大(32.67±3.918)%。在共培养体系中,加入0.001,0.01和0.1 mg/mL剂量的HA能明显促进hAECs抑制PBMCs增殖(P<0.05),抑制率分别为(40.91±4.387)%、(46.58±2.785)%、(40.24±5.671)%,但1 mg/mL HA无明显的促进效应,另单独使用HA对PBMCs的增殖无影响。进一步研究提示,hAECs能促进PHA-P刺激的异基因PBMCs表达Foxp3。而且,在HA浓度为0.01,0.1 mg/mL时,能协同hAECs促进PBMCs表达Foxp3(P<0.01)。在0.001和1 mg/mL剂量时,HA无明显协同效应,单用HA对PBMCs的Foxp3基因表达亦无明显影响。FCM检测T淋巴细胞亚群结果提示,与PBMCs组相比,hAECs能降低T淋巴细胞中Tc1亚群(P<0.05),对Treg,Th17,Th1,Th2,Tc2亚群无明显影响;单用HA对PBMCs的亚群无明显影响。与PBMCs组和HA+PBMCs组相比,HA联合hAECs能降低Th1,Tc1亚群比例,但对Treg,Th17,Th2,Tc2亚群比例无明显影响。体内实验结果提示:治疗30 d后,与模型组相比,胰岛素治疗组大鼠血糖水平无明显变化,hAECs治疗组和HA+hAECs治疗组T1DM大鼠血糖水平均明显降低(P<0.01),HA组无明显治疗效果。与胰岛素治疗组相比,hAECs治疗组和HA+hAECs治疗组T1DM大鼠血糖水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。进一步检测大鼠血清中C肽含量,结果与大鼠血糖水平对应。胰腺病理切片HE染色和荧光染色显示,与模型组相比,hAECs和HA+hAECs治疗组的镜下胰岛数量较多,体积较大,胰岛中胰岛素阳性细胞数量明显较多,可观察到有少数hAECs归巢至胰岛部位并部分分化为胰岛素阳性细胞。T细胞亚群及免疫相关细胞因子分析结果进一步提示,hAECs治疗能明显改善Th17/Treg比值,而且HA与hAECs联合治疗能更显着增强hAECs对Th17/Treg的调节能力。结论:HA能增强hAECs对PHA-P刺激的异基因人PBMCs增殖的抑制效果,以及对T淋巴细胞亚群的调节能力;在体内,HA能增强hAECs对STZ诱导的T1DM大鼠疗效,其机制可能和逆转T1DM大鼠Th17/Treg比值,恢复机体免疫平衡,减少对胰岛β细胞损伤有关。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-05-01）
任贺田,方宁,陈代雄[6]（2019）在《人羊膜上皮细胞的神经生物学特性及其对中枢神经系统疾病的治疗作用》一文中研究指出人羊膜上皮细胞(hAECs)形成于受精后第8天,从足月分娩的胎盘羊膜提取的hAECs具有干细胞多向分化潜能和独特的神经生物学特性,其神经生物学特性表现为向神经元分化、合成神经递质、分泌神经营养因子等。实验动物模型的研究表明,hAECs移植对阿尔兹海默病、帕金森氏病、多发性硬化、脊髓损伤等均具有治疗效果,hAECs移植可望成为治疗中枢神经系统疾病新的途径。现就近年来hAECs神经生物学特性及其对中枢神经系统疾病的治疗作用研究进展进行综述,以期为相关领域的研究提供参考。(本文来源于《遵义医学院学报》期刊2019年02期）
白立恒,张钰堃,刘默凝,李岩,曹贵方[7]（2019）在《人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化》一文中研究指出人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向叁胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及叁胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和叁胚层叁个胚层组织与细胞.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2019年02期）
杨瑜[8]（2019）在《宽频电磁脉冲对人羊膜上皮细胞凋亡及胞内钙离子的影响》一文中研究指出前期研究发现,宽频电磁脉冲(Wide-band electromagnetic pulse,WEMP)会对大鼠的心脏、肝脏、睾丸等组织造成细胞凋亡损伤。为了进一步探索WEMP辐照参数对于细胞凋亡的损伤规律和凋亡机制,本文以人羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cells,AECs,或FL细胞)为实验对象,研究了WEMP的两个主要的辐照参数(场强和脉冲个数)与离体细胞凋亡之间的关系以及与凋亡相关的细胞钙内流作用关系,拟为WEMP导致细胞损伤的生物物理模型的建立奠定前期基础。本实验首先利用XFdtd 7.3.2对细胞辐照体系模型在WEMP辐照情况下的电磁暴露剂量理论计算;采用流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI染色确定受照后细胞凋亡情况;采用Fluo-4 AM等荧光染色检测了受照后细胞内钙离子分布及浓度变化;采用DPH荧光偏振法检测了细胞膜流动性变化;采用蛋白质印迹法(western blotting)检测了细胞中相关蛋白的含量变化;利用SPSS 23.0软件对实验数据进行了统计分析,获得了WEMP不同参数与细胞凋亡之间的关系。实验结果表明:1.在实验所采用的WEMP辐照条件下,作用于培养皿中的场强约为外场强的7%,经计算可得本实验条件下细胞层的最大温升约为7.04×10~(-3)℃,以非热效应为主。2.WEMP辐照后,AECs的凋亡与场强(E)之间为Logistic函数关系,与脉冲个数(N)呈指数关系,N与E之间存在交互作用,E为引起细胞凋亡的主因。3.WEMP辐照能够改变细胞内钙离子浓度,当细胞外钙浓度较高时,WEMP能够使胞浆中钙浓度上升,且场强越大,脉冲个数越多,造成短时间内胞内钙离子浓度上升越明显,与细胞凋亡之间存在显着的相关性;当细胞外钙低于正常浓度时,WEMP能够使胞浆中的钙浓度下降,且场强越大,脉冲个数越多,造成短时间内胞内钙离子浓度下降越明显。4.WEMP辐照对AECs膜流动性无显着影响,胞浆内钙离子浓度上升可能由于WEMP影响了细胞膜上离子通道的开放。5.WEMP辐照引起了胞浆内钙离子的升高,钙离子在复杂的细胞凋亡中扮演重要角色,本实验中caspase 9被剪切活化提示钙离子有可能参与激活了细胞凋亡的内源性通路。(本文来源于《华东师范大学》期刊2019-03-02）
任贺田[9]（2018）在《上皮-间质转化的人羊膜上皮细胞对阿尔茨海默病模型大鼠的治疗效应》一文中研究指出目的:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种常见的神经退行性疾病,脑中β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)积聚,神经元内Tau蛋白异常磷酸化形成神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)是其主要病理特点,突触功能丧失等,记忆丧失、认知障碍、运动能力丧失等为主要临床症状表现,目前临床治疗方法尚不能有效根治。人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)具有良好神经生物学特性和免疫调节作用,为AD的细胞治疗提高了可能性。一份羊膜提取的hAECs数量相当有限,通常需要体外培养扩增用以满足治疗所需的细胞数量。然而,体外连续扩增必会导致hAECs的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。hAECs是否会因EMT而丧失其固有的生物学特性,从而影响其生物治疗效应,目前尚不清楚。本研究通过观察细胞表型、分化能力、神经细胞相关标志等变化,探讨EMT对hAECs分化潜能和神经生物学特性的影响,以及评价EMT的hAECs对AD模型大鼠治疗效应的影响,为hAECs移植的临床应用提供实验依据。方法:(1)采用胰酶消化法从新鲜人羊膜分离hAECs,经过TGF-β体外诱导EMT,用流式细胞仪(Flow cytometry,FCM)和免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)进行表型鉴定,划痕实验观察迁移能力。(2)AD大鼠模型用Wistar大鼠经双侧侧脑室注射Aβ25-35进行复制。正常大鼠组作为平行对照,模型大鼠随机分为4组:模型组、培养基对照组、hAECs移植组和EMT的hAECs(EMT-hAECs)移植组,每组12只。细胞移植组经双侧海马注射5×10~5个细胞(10 uLhAECs或EMT-hAECs细胞悬液),培养基组同样方式注射等体积无血清DMEM/F12培养基。细胞移植后2周和4周,各取6只动物大脑和外周血进行病理学和免疫学检查。(3)水迷宫试验观察大鼠空间辨别性学习记忆能力的改变。(4)HE染色和硫磺素S染色分别观察大脑海马区病理改变和病变组织淀粉样蛋白沉积。(5)免疫组化染色观察Aβ42、Tau蛋白、小胶质细胞CD68的表达,并用Image-ProPlus 6.0图像分析系统分析其阳性区积分光密度(IOD)值。(6)TUNEL法检测大脑移植区凋亡情况。(7)免疫荧光检测各实验组脑组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。(8)FCM检测外周血T淋巴细胞亚群的变化。(9)免疫荧光检测hAECs和EMT-hAECs在大脑移植区的存活及分化情况。结果:(1)hAECs经TGF-β诱导6天后,呈间质细胞样改变,上皮标志CD326、E-Cad表达明显下调(均P<0.05),间质标志N-cad上调,并且迁移能力增强。获得EMT表型的hAECs(EMT-hAECs)与hAECs一样,能分化为成骨、软骨和脂肪细胞,也都表达神经丝蛋白NFP、神经元标志物A2B5、GFAP、染色质结合蛋白CBX8。(2)Aβ25-35复制的AD模型大鼠与正常比较,从第3天开始大鼠逃避潜伏期明显增加(P<0.01),跨越平台次数减少(P<0.05),表明有明显的空间探索性学习记忆障碍。与模型组和培养基组比较,hAECs和EMT-hAECs治疗组从第1天起逃避潜伏期均明显缩短(均P<0.05),跨越平台次数明显增加(均P<0.05),接近于正常组(均P>0.05),而两个细胞治疗组间则无明显差异(P>0.05)。(3)与模型组和培养基组比较,hAECs和EMT-hAECs移植组大脑海马区病损显着减轻,神经元凋亡明显减少,Aβ42沉积和Tau蛋白均明显减少(P<0.05),促凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3表达上调,而Bcl-2凋亡抑制蛋白表达下调,淀粉样斑块明显减少,两细胞治疗组未见明显区别。(4)免疫组化染色显示,相较于所有对照组,两个细胞治疗组动物海马区CD68阳性细胞(小胶质细胞)明显增多。两个治疗组无明显差异(P>0.05)。(5)与模型组和培养基组比较,hAECs和EMT-hAECs治疗组外周血Th1和Th17细胞百分比下降(P<0.05),而Th2细胞和Treg细胞呈现上调趋势。(6)免疫荧光双染显示,至细胞移植后4周,动物大脑移植区仍可见hAECs和EMT-hAECs存活,并表达神经元特异性核蛋白(NeuN)。结论:hAECs经TGF-β诱导可发生EMT,EMT-hAECs仍具有原代hAECs的多向分化能力和神经元标志,表明hAECs并不因EMT而丧失其固有的生物学特性。EMT-hAECs与hAECs对AD模型大鼠具有程度相当的生物学治疗效应,本研究证明了EMT不会影响hAECs其生物学治疗作用,为通过体外连续扩增制备hAECs制剂提供了实验依据。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2018-10-01）
Guang-yong,YE,Ke-yi,WANG,Qiao-di,GUI,Min,WANG[10]（2018）在《解脲脲原体脂质相关膜蛋白经Toll样受体2信号通路调控人羊膜上皮细胞诱导IL-6、IL-8和TNF-α的产生（英文）》一文中研究指出目的:探讨解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)作用于人羊膜上皮细胞(HAECs)过程中白介素6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化情况,阐明Toll样受体2(TLR2)的调控机制,明确解脲脲原体潜在的致病性。创新点:从解脲脲原体诱导炎症反应的分子机制入手,提出TLR2信号通路在其中的关键作用。方法:经TX-114处理萃取解脲脲原体获得LAMPs,将LAMPs和解脲脲原体分别感染HAECs,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定炎症细胞因子(IL-6、IL-8和TNF-α);采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)测定TLR2 mRNA水平,用蛋白质印迹(Western blot)检测TLR2的表达量;经TLR2阻断剂(anti-h TLR2-IgA)处理后,测定相应炎症细胞因子。结论:解脲脲原体LAMPs能诱导HAECs的TLR2表达上调和炎症因子增加,从而发生炎症反应;TLR2受阻断后,炎症因子表达减少,炎症水平下降。TLR2在解脲脲原体LAMPs感染HAECs过程起关键作用。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》期刊2018年08期）
羊膜上皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
心肌梗死(myocardial infarction,MI)是心力衰竭的主要原因,就目前来看无特效方法治疗MI导致的心肌细胞死亡和挽救受损的心功能。细胞替代治疗作为一种全新的治疗方式成为当下研究的热点。近10年来,包括本研究组在内的国内外较多研究都着眼于运用人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)治疗MI,并取得了一定成效。本文就hAECs在MI中改善心功能的作用及具体机制展开综述。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
羊膜上皮细胞论文参考文献
[1].曾胡广,孙菊,刘文宾,吴迪炯,胡慧瑾.人羊膜上皮细胞治疗异基因造血干细胞移植后膜性肾病一例[J].中华移植杂志(电子版).2019
[2].张臣臣,尹熙惠,杨智昉,何希彪,方成虎.人羊膜上皮细胞治疗心肌梗死的研究进展[J].实用医学杂志.2019
[3].谢雪锋,陈刚,吴复跃,侯剑刚.兔包皮来源的上皮细胞与人来源脱细胞羊膜基质(HAAM)组织工程共同培养细胞层片的体外研究[J].复旦学报(医学版).2019
[4].刘钰.1、雌激素通过激活CD38/SIRT1信号途径促进低氧诱导小鼠气道平滑肌细胞凋亡的机制研究2、人羊膜上皮干细胞对小鼠急性肺损伤的治疗作用及其机制研究[D].南昌大学.2019
[5].程亚伟.透明质酸联合人羊膜上皮细胞对人外周血单个核细胞及移植治疗1型糖尿病大鼠的免疫调节作用[D].遵义医科大学.2019
[6].任贺田,方宁,陈代雄.人羊膜上皮细胞的神经生物学特性及其对中枢神经系统疾病的治疗作用[J].遵义医学院学报.2019
[7].白立恒,张钰堃,刘默凝,李岩,曹贵方.人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化[J].内蒙古大学学报(自然科学版).2019
[8].杨瑜.宽频电磁脉冲对人羊膜上皮细胞凋亡及胞内钙离子的影响[D].华东师范大学.2019
[9].任贺田.上皮-间质转化的人羊膜上皮细胞对阿尔茨海默病模型大鼠的治疗效应[D].遵义医科大学.2018
[10].Guang-yong,YE,Ke-yi,WANG,Qiao-di,GUI,Min,WANG.解脲脲原体脂质相关膜蛋白经Toll样受体2信号通路调控人羊膜上皮细胞诱导IL-6、IL-8和TNF-α的产生（英文）[J].JournalofZhejiangUniversity-ScienceB(Biomedicine&Biotechnology).2018
标签：人羊膜上皮细胞; 异基因造血干细胞移植; 膜性肾病;