导读:本文包含了人精氨酸酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人精氨酸酶Ⅰ,基因表达,融合蛋白,多克隆抗体
人精氨酸酶论文文献综述
叶尔那扎尔·努尔吐热[1]（2019）在《人精氨酸酶Ⅰ基因的表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出精氨酸酶I(Arginase I,ARGI)作为肝脏中尿素循环的关键酶,具有多种重要的生物学功能,其与肿瘤、高血压、衰老、缺血再灌注损伤和糖尿病等许多疾病的发生发展密切关联,因此已成为人类代谢功能研究的热点。精氨酸酶I能够将L-精氨酸水解为L-鸟氨酸和尿素,而L-鸟氨酸能被进一步产生多胺和脯氨酸等代谢产物,从而影响细胞的生长和结构蛋白的合成。此外,在脉管系统中也存在有精氨酸酶,脉管系统中的精氨酸酶与一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)竞争底物L-精氨酸,从而抑制一氧化氮(Nitric oxide,NO)的合成,进而导致血管内皮细胞或平滑肌细胞功能的障碍。近年来的研究表明精氨酸酶在多种恶性肿瘤组织中高表达,尤其是精氨酸酶作为肝癌的特异性标志物在肝癌的诊断和治疗中也具有重要作用。因此精氨酸酶I有望成为新型的肿瘤治疗靶点,也能够逆转血管内皮细胞和平滑肌细胞功能的障碍,具有预防血管性疾病的作用。深入探讨精氨酸酶I的结构与功能,有助于确认精氨酸酶Ⅰ与相关疾病发生和发展中的作用关系,制备能够有效识别生理及病理状态下的ARG Ⅰ的抗体,可帮助进行相关疾病的诊断和治疗。本研究开展人精氨酸酶Ⅰ基因的表达及其多克隆抗体的制备,并比较分析蛋白质免疫、DNA免疫及DNA初免-蛋白质加强免疫等多种途径在抗体制备方面的异同,获得一种有效制备人精氨酸酶Ⅰ多克隆抗体的技术体系。为制备抗人精氨酸酶Ⅰ(Human-ARGI)的抗体,首先要克隆获得人精氨酸酶I基因及构建重组表达质粒,制备免疫动物的质粒抗原和蛋白质抗原。根据NCBI数据库提供的人精氨酸酶Ⅰ基因序列分别设计叁对特异性引物,以pCDNA3.0 Flag-Arginase Ⅰ为模板PCR扩增目的基因,并将人精氨酸酶I基因分别连接到pCMV-MYC,pEGX-4T-1和pED-1叁种质粒载体上,构建获得真核表达载体pCMV-MYC-ARGI 和原核表达载体 pEGX-4T-1-ARGI 及 pED1-ARG I,并通过酶切鉴定和测序验证其构建的正确性。为获得人精氨酸酶I蛋白抗原,将原核表达载体pEGX-4T-1-ARG I和pED1-ARG I分别在大肠杆菌进行原核诱导表达,纯化获得带有不同标签的精氨酸酶I融合蛋白GST-ARGI和His-ARG Ⅰ,对融合蛋白的特异性进行分析,并选择GST-ARGI作为免疫动物的蛋白质抗原。结果表明利用原核表达载体pEGX-4T-1-ARG Ⅰ和 pED1-ARG Ⅰ诱导获得融合蛋白 GST-ARGI(约 64kDa)和 His-ARG I(约36kDa),确定优化诱导条件,结果表明以25℃,0.6mmol ·L-1,异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)和16h为最佳诱导表达条件。融合蛋白通过亲和纯化之后纯度能够达到90%以上,His-ARG I融合蛋白能够与GST-ARG Ⅰ抗血清特异性结合,并在36kDa处出现了特异性结合条带。纯化获得的人精氨酸酶Ⅰ融合蛋白可以作为抗原用于免疫接种小鼠。为得到能有效识别人精氨酸酶Ⅰ的多克隆抗体,并对不同免疫策略在产生抗体方面的的异同进行比较。按照DNA单独免疫、蛋白质单独免疫和DNA初免-蛋白质加强免疫等策略免疫动物,并在第3次加强免疫后收集各组血清及检测其效价,从中挑选出蛋白质单独免疫组和DNA初免-蛋白质加强组小鼠的血清进行纯化,进一步鉴定抗体的效价和特异性。此外,将真核表达质粒pCMV-MYC-ARGI转染至哺乳动物细胞293T里面,并检测该基因在哺乳动物细胞里面的表达情况。实验结果表明纯化后的抗体纯度达到了 98%以上,抗体效价也有了明显的提高,达到了 1:100000,并且所得到的抗体具有较高的抗原特异性。磷酸钙细胞转染实验结果证实了重组质粒pCMV-MYC-ARGI能够在哺乳动物细胞里面高效表达,产生具有生物活性的人精氨酸酶工蛋白。通过制备抗原特异性的高滴度抗人精氨酸酶Ⅰ多克隆抗体,不仅建立了高效制备抗体的免疫策略,也为精氨酸酶Ⅰ结构与功能的深入研究以及相关疾病的诊断提供了有效的检测工具。(本文来源于《新疆大学》期刊2019-06-01）
叶尔那扎尔·努尔吐热,邱丽芬,海那尔·乌拉孜巴依,李陶,张富春[2]（2018）在《人精氨酸酶Ⅰ基因克隆及生物信息学分析》一文中研究指出[目的]克隆人精氨酸酶Ⅰ(human-ARGⅠ)基因并分析其生物学特性。[方法]根据NCBI数据库提供的人精氨酸酶Ⅰ基因序列设计其特异性引物,利用PCR扩增目的基因,并将其连接到p CMV-MYC载体上并利用生物信息学工具分析人精氨酸酶Ⅰ蛋白的生物学特性。[结果]酶切鉴定与DNA测序结果显示人精氨酸酶Ⅰ基因全长969bp,编码322个氨基酸残基;人精氨酸酶Ⅰ蛋白属于精氨酸酶——组蛋白去乙酰化酶超家族,是位于细胞质中的稳定亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构域,其二级结构由无规则卷曲,α-螺旋和延伸链构成,并且叁级结构与二级结构预测结果高度一致,建模结果准确可靠。[结论]人精氨酸酶Ⅰ基因全长969 bp,编码322个氨基酸残基,分子量为34 734. 94,p I 6. 72,其氨基酸序列中无信号肽,无跨膜结构域,是非分泌型及亲水性蛋白,是属于精氨酸酶-组蛋白去乙酰化酶超家族,无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件,并且叁级结构与二级结构预测结果高度一致,建模结果准确可靠。(本文来源于《生物技术》期刊2018年06期）
沈伟涛[3]（2017）在《重组人精氨酸酶对非小细胞肺癌和脑胶质瘤的杀伤作用及机制探究》一文中研究指出本论文的工作主要分为以下两个部分:第一部分重组人精氨酸酶对人非小细胞肺癌的抗肿瘤活性及机制研究肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,而非小细胞肺癌占85%以上,具有发病率高、预后差、致死率高的特点,因此亟需探索非小细胞肺癌治疗的新策略,开发出更有效的治疗药物。重组人精氨酸酶能分解精氨酸,降低血清精氨酸水平,直接抑制细胞蛋白质合成及相关生长代谢,已成为研究的热门,是一种潜在的抗肿瘤治疗新药物,但其在非小细胞肺癌治疗中的作用仍未见任何报道。细胞自噬是真核生物中一种进化保守的代谢机制,广泛地参与了细胞的生长、分化、衰老、死亡等重要生理过程。研究表明许多抗肿瘤药物如天冬酰胺酶、顺铂,能诱导细胞发生显着的自噬,然而重组人精氨酸酶能否诱导非小细胞肺癌细胞发生自噬尚未见报道。本课题在体外研究中首先发现重组人精氨酸酶能显着杀伤非小细胞肺癌细胞,而补充L-精氨酸能显着减弱其对细胞的杀伤作用,证明了重组人精氨酸酶的抗肿瘤机制与耗竭环境中的精氨酸致使肿瘤细胞营养物质的缺乏有关。随后,我们选取了非小细胞肺癌H1975细胞作为代表进一步研究,重组人精氨酸酶能诱导H1975细胞发生凋亡且为Caspase依赖的细胞凋亡。接着,我们对重组人精氨酸酶作用非小细胞肺癌H1975细胞过程中自噬的角色进行了探讨,通过透射电镜、激光共聚焦显微镜、Western blot法充分说明了重组人精氨酸酶能诱导非小细胞肺癌细胞发生自噬,而表示自噬的整个动态过程—自噬流也在随后的实验中被发现。在对重组人精氨酸酶诱导的自噬的分子信号通路研究中,我们证实了 Akt/mTOR和Erk1/2分子信号通路与重组人精氨酸酶诱导的细胞自噬存在密切联系。我们研究了细胞自噬在重组人精氨酸酶杀伤非小细胞肺癌细胞H1975中所扮演的角色,结果表明细胞自噬在重组人精氨酸酶对非小细胞肺癌的抗肿瘤活性中起着细胞保护的作用,因此抑制自噬阻断该保护机制能有效地增强重组人精氨酸酶对非小细胞肺癌细胞的抗肿瘤作用。此外,本实验还证明ROS与重组人精氨酸酶诱导的非小细胞肺癌细胞的细胞毒性与细胞自噬密切相关。同时,我们在体内条件下对重组人精氨酸酶的抗肿瘤作用进行了研究,实验结果表明重组人精氨酸酶对非小细胞肺癌移植瘤小鼠存在抗肿瘤作用,而联合自噬抑制剂能显着增强重组精氨酸酶的抗肿瘤疗效。综上所述,重组人精氨酸酶能显着杀伤非小细胞肺癌细胞,能诱导非小细胞肺癌发生凋亡和细胞自噬,使用自噬抑制剂抑制重组人精氨酸酶诱导的细胞自噬能显着增强重组人精氨酸酶对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用。总之,我们为临床上治疗非小细胞肺癌提供了一种新的研究思路和治疗方法:单用重组人精氨酸酶或联合使用自噬抑制剂治疗非小细胞肺癌。第二部分重组人精氨酸酶对人脑胶质瘤的抗肿瘤活性及机制研究人脑胶质瘤是最常见的神经系统原发性肿瘤,多数为恶性,而恶性胶质瘤呈浸润性生长,手术切除容易复发,而且存在一些类型的胶质瘤对放疗不敏感,对化疗容易产生耐药现象,是当今医学界的一个难题,因此,我们亟需找到新型的、有效的治疗人脑胶质瘤的方法。本研究发现,人脑胶质瘤U87细胞经过不同浓度的重组人精氨酸酶作用后,可以发现重组人精氨酸酶能显着杀伤人脑胶质瘤U87细胞,通过光学显微镜观察还发现U87细胞的形态发生明显的变形,皱缩,坏死;随后我们将重组人精氨酸酶与L-精氨酸联合作用于人脑胶质瘤U87细胞,实验结果发现重组人精氨酸酶对U87细胞的杀伤作用明显被削弱。根据以上研究结果可知,重组人精氨酸酶通过耗竭精氨酸,对人脑胶质瘤U87细胞进行氨基酸剥夺,使其缺乏生长代谢必需的精氨酸而导致死亡。本课题发现了重组人精氨酸酶对人脑胶质瘤存在潜在的抗肿瘤活性,而且深入研究发现,该药的抗肿瘤机制可能是重组人精氨酸酶对人脑胶质瘤细胞外周环境中精氨酸的剥夺相关,为后续更深入的研究与探索奠定了基础。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-05-20）
李益鹏,丁滪[4]（2015）在《重组人精氨酸酶1的表达、纯化及性质鉴定》一文中研究指出精氨酸酶催化精氨酸水解生成鸟氨酸和尿素,是哺乳动物尿素循环的关键步骤之一,在机体代谢方面起着重要的作用。在分类上精氨酸属于半必需氨基酸,但在快速增长的组织,特别是肿瘤组织里却属于必需氨基酸。精氨酸酶可以通过分解精氨酸对肿瘤细胞进行营养剥夺,进而起到抑制肿瘤细胞生长的作用,与此同时却较少影响正常组织代谢,因此可能具有良好的应用前景。精氨酸酶包括精氨酸酶1和精氨酸酶2两种,精氨酸酶1主要表达于肝脏,参与肝脏尿素循环。本研究在获得人精氨酸酶1全长c DNA的基础上,将其克隆至原核高表达载体,通过自动诱导系统进行了人肝脏精氨酸酶1重组蛋白(His10-arginase1)的表达。通过Ni-NTA亲和层析和Mono Q阴离子交换层析纯化,重组人精氨酸酶1的产量为每升菌液48.5 mg,其纯度超过95%。通过酶活检测,重组人精氨酸酶1活性可达到128 U/mg。与已报道的精氨酸酶相比较,我们得到的重组人精氨酸酶1具有与之相当的酶活性。本研究为将来进一步深入了解精氨酸酶的生化功能及与相关疾病的关系奠定了基础。(本文来源于《云南农业大学学报(自然科学)》期刊2015年04期）
岳瑛[5]（2010）在《人精氨酸酶与人的血清蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达及活性测定》一文中研究指出人精氨酸酶(Arginase, ARG)与人血清蛋白(humanalbumin,HSA)的融合基因Hsa-Arg在毕赤酵母高效分泌表达,建立相应纯化工艺路线,并初步研究人精氨酸酶对黑色素瘤、喉癌和肝癌等肿瘤细胞的抑制效果,探讨人精氨酸酶作为抗癌药在生物制药领域的应用前景。方法:以pET-30a(+)为克隆载体,将人血清蛋白基因Hsa与人精氨酸酶基因Arg以HindIII酶切位点进行基因融合,并且在两基因之间添加了由Gly与Ser组成的十个氨基酸的连接肽。再将融合基因以正确的阅读框架插入到毕赤酵母表达载体pPIC9α信号肽基因后,构建得到重组毕赤酵母表达质粒。转化毕赤酵母GS115,筛选高表达菌株后进行摇瓶水平的发酵。采用MTT法,测定人精氨酸酶对肿瘤细胞生长的抑制效果。结果:人血清蛋白基因Hsa与人精氨酸酶基因的融合基因成功地构建到了酵母表达载体pPIC-Hsa-Arg,转化毕赤酵母GS115后筛选到高水平分泌表达目的蛋白Arg的菌株,目标蛋白可以分泌到培养基中,表达蛋白在上清中占90%以上。经过膜过滤和凝胶过滤层析对培养基上清进行纯化,即可获得纯度达到92%的活性产物。活性测定表明,纯化的Arg比活性为310 IU/mg。肿瘤抑制实验发现,所有被测细胞的活力随着重组长效人精氨酸酶浓度的增加而降低。结论:实验结果说明,人精氨酸酶与人血清蛋白的融合蛋白成功在毕赤酵母中得到了高效表达,并建立了目标物质的分离纯化工艺。人精氨酸酶对体外培养的黑色素瘤、喉癌和肝癌细胞具有抑制作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2010-04-01）
岳瑛,岳冀,邓红燕,付峰,漆家学[6]（2010）在《重组长效人精氨酸酶抑制肿瘤细胞生长的研究》一文中研究指出目的研究重组长效人精氨酸酶对黑色素瘤、喉癌和肝癌等肿瘤细胞的抑制效果,探讨该酶作为抗癌药的应用前景。方法以离体培养的6株肿瘤细胞(人黑色素瘤细胞MV3、M14、A875、A375,喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2)为实验对象,培养至90%汇片时收获细胞,转种到96孔板,加入不同浓度的重组长效人精氨酸酶共同培养72h。采用MTT法,测定重组长效人精氨酸酶对肿瘤细胞生长的抑制情况。结果所有被测细胞的活力随着该酶浓度的增加而降低,且该酶对两株黑色素瘤细胞的IC_(50)小于0.1U/ml。被测药物对人肝癌细胞HepG2的IC_(50)是0.835U/ml,对人喉癌细胞Hep2的IC_(50)是2.269U/ml。结论重组长效人精氨酸酶对体外培养的黑色素瘤、喉癌和肝癌细胞具有细胞毒性,是有潜力的抗癌药物候选物。(本文来源于《武警医学》期刊2010年03期）
马晓莉,梁果义[7]（2009）在《人精氨酸酶在毕赤酵母的高效表达、纯化和活性研究》一文中研究指出目的:人精氨酸酶(Arginase,Arg)的基因arg在毕赤酵母高效分泌表达,建立相应纯化工艺路线,研究重组人精氨酸酶的活性。方法:将人精氨酸酶基因arg按正确的阅读框架插入到毕赤酵母表达载体pPIC9α信号肽基因后,构建得到重组毕赤酵母表达质粒。转化毕赤酵母GS115筛选高表达菌株。结果:成功构建了酵母表达载体pPIC-Arg,转化毕赤酵母GS115后筛选到分泌表达目的蛋白Arg的菌株,目标蛋白可以分泌到培养基中。经过膜过滤和凝胶过滤层析对培养基上清进行纯化,即可获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明,纯化的Arg比活性为310IU/mg。结论:成功构建了Arg的毕赤酵母高效表达菌种,建立了目标物质的分离纯化工艺。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2009年06期）
人精氨酸酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[目的]克隆人精氨酸酶Ⅰ(human-ARGⅠ)基因并分析其生物学特性。[方法]根据NCBI数据库提供的人精氨酸酶Ⅰ基因序列设计其特异性引物,利用PCR扩增目的基因,并将其连接到p CMV-MYC载体上并利用生物信息学工具分析人精氨酸酶Ⅰ蛋白的生物学特性。[结果]酶切鉴定与DNA测序结果显示人精氨酸酶Ⅰ基因全长969bp,编码322个氨基酸残基;人精氨酸酶Ⅰ蛋白属于精氨酸酶——组蛋白去乙酰化酶超家族,是位于细胞质中的稳定亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构域,其二级结构由无规则卷曲,α-螺旋和延伸链构成,并且叁级结构与二级结构预测结果高度一致,建模结果准确可靠。[结论]人精氨酸酶Ⅰ基因全长969 bp,编码322个氨基酸残基,分子量为34 734. 94,p I 6. 72,其氨基酸序列中无信号肽,无跨膜结构域,是非分泌型及亲水性蛋白,是属于精氨酸酶-组蛋白去乙酰化酶超家族,无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件,并且叁级结构与二级结构预测结果高度一致,建模结果准确可靠。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人精氨酸酶论文参考文献
[1].叶尔那扎尔·努尔吐热.人精氨酸酶Ⅰ基因的表达及其多克隆抗体的制备[D].新疆大学.2019
[2].叶尔那扎尔·努尔吐热,邱丽芬,海那尔·乌拉孜巴依,李陶,张富春.人精氨酸酶Ⅰ基因克隆及生物信息学分析[J].生物技术.2018
[3].沈伟涛.重组人精氨酸酶对非小细胞肺癌和脑胶质瘤的杀伤作用及机制探究[D].南方医科大学.2017
[4].李益鹏,丁滪.重组人精氨酸酶1的表达、纯化及性质鉴定[J].云南农业大学学报(自然科学).2015
[5].岳瑛.人精氨酸酶与人的血清蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达及活性测定[D].第四军医大学.2010
[6].岳瑛,岳冀,邓红燕,付峰,漆家学.重组长效人精氨酸酶抑制肿瘤细胞生长的研究[J].武警医学.2010
[7].马晓莉,梁果义.人精氨酸酶在毕赤酵母的高效表达、纯化和活性研究[J].中国生物工程杂志.2009