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摘要：目的：采用高效液相色谱法同时测定复方甘草片中的吗啡和甘草酸铵的含量。方法：采用WatersC18（5μm×4.6mm×250mm）色谱柱，流动相为乙腈-0.02%磷酸梯度洗脱，流速1.0mL·min，检测波长为吗啡220nm、甘草酸铵250nm。结果：吗啡、甘草酸铵的峰面积与质量的线性关系良好（r＞0.9996）；加样回收率为分别为98.73%，99.53%。结论：该方法可用于复方甘草片中吗啡、甘草酸铵2个成分快速检验。
关键词：复方甘草片；HPLC；吗啡；甘草酸铵
复方甘草片为保护性祛痰镇咳药，临床上用于一般性咳嗽及上呼吸道感染、急性气管炎初期等的咳嗽治疗，能有效缓解症状，疗效确切且经济实惠。其主要是由甘草浸膏粉、罂粟果提取物粉等组成的复方制剂，质量标准收载于《中国药典》2015年版二部［1］。现行标准分别对组方成分阿片粉或罂粟果提取物粉中吗啡及甘草浸膏粉中甘草酸铵采用不同的系统进行含量测定，其中吗啡含量测定需采用固相萃取小柱进行预处理，操作烦琐，易产生误差；甘草酸含量测定流动相系统含盐量高，色谱柱损耗快。二者所用色谱柱类型也不同，吗啡用C8柱，甘草酸铵用C18柱。本方法采用高效液相色谱法法同时测定甘草酸和吗啡的含量，实现一侧多评。方法简便、快捷、准确、环保、重复性好，对快检初筛该药品质量提供重要的依据。
1仪器与试药
Waterse2695高效液相色谱仪、XS105型电子天平对照品：吗啡（批号：171201-201123，含量97.1%）、甘草酸铵（批号：110731-201418，含量93.1%），均购自中国食品药品检定研究院；乙腈（色谱纯，FisherScientific，美国）；甲醇（分析纯，天津市康科德科技有限公司）；磷酸（分析纯，天津佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司）；水为娃哈哈纯净水。
2溶液的制备
2.1对照品溶液制备分别精密称取吗啡对照品0.01034g、甘草酸铵对照品0.01109g，置同一100ml量瓶中，加入50%甲醇溶液适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2供试品溶液制备取本品10片，精密称定，研细，精密称取0.5g，置50ml容量瓶中，用50%甲醇溶液30ml溶解，超声处理30分钟，放冷，稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液。
2.3阴性溶液制备按处方各成分的配比，分别除去目标成分（甘草浸膏、阿片粉，按2.2方法制成阴性溶液。
3.色谱条件与系统适用性采用C18色谱柱[2、3]，以乙腈为流动相A，以0.02%磷酸溶液为流动相B，按表1进行梯度洗脱（0～8min，5%A；8～10min，5%→37%A；10～25min，37%→32%A25～30min，32%→70%A30～33min，70%A33～40min，70%→5%A）。吗啡和甘草酸铵检测波长分别为220nm、250nm[4]；流速1ml/min；理论板数以吗啡计不低于3000（见图1、2，）
4.7耐用性试验
4.7.1色谱柱耐用性
采用三个厂家的C18色谱柱（Diamonsil：200mm、Warters：250mm、Thermo：150mm），测定同一批样品，理论板数因色谱柱不同存在一些差异，含量结果影响不明显。建议选用长度为250mm的品牌色谱柱。
4.7.2仪器耐用性
采用同一根色谱柱（Waters）分别用Waterse2695、Agilent1100高效液相色谱仪，测定同一批样品，结果表明不同仪器对实验结果的影响差异较小。
4.8样品测定
取4个厂家的样品9批，按2.2项下方法制备供试品溶液，按3.项下色谱条件测定，并与《中国药典》2015年版二部方法测定的含量进行对比，结果差异不明显。
5讨论
5.1检测波长的选择：分别取吗啡、甘草酸铵对照品溶液，利用二极管阵列检测器对全谱段进行扫描，吗啡最大吸收为210nm，甘草酸铵最大吸收为250nm。由于甲醇有末端吸收并参考《中国药典》2015版二部复方甘草片含量测定项下的检测波长，确定吗啡和甘草酸铵的检测波长分别为220nm、250nm。
5.2流动相的选择：经过一系列的流动相梯度配比实验，选定3.项下流动相梯度配比。吗啡和甘草酸铵的峰型较好，分离度满足要求。
5.3提取溶剂及体积的选择：分别用不同体积的水、50%甲醇、甲醇为溶剂进行提取。照3.0项下色谱条件测定含量，最终确定提取溶剂为50ml的50%甲醇。
5.4提取时间和方式的选择：采取不同提取方式（超声、回流）及不同时间制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，计算含量，经综合分析，最终确定最佳提取方式为超声提取0.5小时。
5.5本方法对原标准中的方法进行优化，方法中不仅统一了色谱柱为C18，同时使用双波长检测，还改变了提取溶剂、流动相组分、梯度洗脱等，方法简便、可靠、重复性好，可以用于复方甘草片的快速检验。
参考文献：
[1]中国药典2015年版二部：796～797
[2]中国药典2015年版一部：208～209
[3]中国药典2015年版四部通则：0512
[4]杨红娟，郭伟斌，郑淑凤，胡猛慎，黄剑英，RP-HPLC同时测定复方甘草片中四个成分的含量，药物分析杂志，2013，33（1）：141～145