导读:本文包含了拒食蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:根癌农杆菌,愈伤组织,拒食蛋白XnAFP2,嗜线虫致病杆菌
拒食蛋白论文文献综述
盛德鹏,玉山江·麦麦提,郭立华,曾洪梅,杨秀芬[1]（2011）在《农杆菌介导拒食蛋白XnAFP2转化恢复系多系一号的研究》一文中研究指出拒食蛋白是从嗜线虫致病杆菌北京变种CB6菌株分离得到的对多种昆虫具有拒食、抑制生长发育作用的毒性蛋白,通过根癌农杆菌介导转化法将极拒食蛋白基因导入XnAFP2多系一号基因组,获得了转基因水稻植株。通过PCR、RT-PCR和Southern blot验证目的基因的整合和表达。(本文来源于《生物技术通报》期刊2011年11期）
盛德鹏[2]（2011）在《蛋白激发子基因peaT1和拒食蛋白基因xnAFP2转化水稻的研究》一文中研究指出PeaT1是来源于极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)的蛋白激发子,具有促进植物生长、提高植物的抗旱能力和诱导植物广谱抗病性等功能;XnAFP2是从嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)北京变种CB6菌株中分离得到的对多种昆虫具有拒食活性的蛋白。为了实现拒食蛋白XnAFP2和蛋白激发子PeaT1在水稻中的表达并进一步研究其功能,本研究建立了水稻品种多系一号的组织培养体系,通过农杆菌介导的方法获得了xnAFP2和peaT1的转基因植株,PCR、RT-PCR、Southern blot和Western blot分别证实了目的基因的整合、转录和表达,分析了peaT1转化株的抗旱能力。本研究获得的主要结果如下:1.构建了植物表达载体pCAMBIA2300-35S-xnaFP2-OCS和pCAMBIA2300-35S-peaT1-OCS,该载体多个表达调控元件,可以增强目的基因在水稻中的表达水平,载体的正确性通过酶切和测序验证,热激法将载体成功转化根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)菌株LBA4404。2.通过比较N6、MS、NB培养基对于水稻恢复系多系一号成熟胚愈伤组织的诱导效果,证实N6培养基较适合多系一号成熟胚的组织培养。在此基础上,通过根癌农杆菌(Agrobacterium mmefaciens)介导转化法将拒食蛋白基因xnAFP2导入多系一号(Duoxi 1)基因组、极细链格孢菌蛋白激发子基因peaT1导入多系一号和日本晴(Nipponbare)基因组,并将转基因植株繁殖到T2代。3.通过PCR筛选阳性水稻转化株, Southern杂交进一步证实了目的基因整合到水稻基因组中,RT-PCR验证了目的基因在水稻细胞内的转录,Western杂交验证了peaT1基因可以在水稻细胞中得以表达。4.通过对单拷贝株系后代遗传分析表明,xnAFP2和peaT1基因在转基因后代中的分离符合3∶1的理论比例。5.鉴定了T2代转peaT1基因水稻植株对干旱胁迫的抗性。结果表明,和非转基因对照相比,转基因水稻植株对干旱的抗性明显提高。转xnAFP2水稻植株和非转基因水稻植株相比,初步表现抗二化螟活性。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2011-06-01）
尹富仕,曾洪梅,张雨良,杨秀芬,邱德文[3]（2010）在《拒食蛋白XnAFP2叁个结构域片段的表达及其生物活性分析》一文中研究指出嗜线虫致病杆菌北京变种Xenorhabdus nematophila var. pekingensis CB6菌株产生的蛋白XnAFP2对多种昆虫有拒食活性。生物信息学分析表明,XnAFP2包含DomainⅠ、DomainⅡ和DomainⅢ3个功能结构域。为确定其主效活性区域,分别对3个结构域进行了克隆、表达和生物活性测定。结果表明,3个蛋白片段对棉铃虫Helicoverpa armigera3龄幼虫的生长抑制率分别为17.4%、39.8%和20.2%,对玉米螟Ostrinia furnacalis3龄幼虫的生长抑制率分别为20.2%3、8.6%和21.7%,对小菜蛾Plutella xylostella3龄幼虫的非选择性拒食率分别为25.7%、44.1%和26.8%。研究结果表明,DomainⅡ是拒食蛋白XnAFP2的主效活性区域。(本文来源于《中国生物防治》期刊2010年04期）
尹富仕[4]（2010）在《拒食蛋白XnAFP2功能结构域分析与作用机理初步研究》一文中研究指出拒食蛋白XnAFP2是一种从嗜线虫致病杆菌CB6菌株中分离纯化的毒性蛋白,对多种农业害虫具有拒食、抑制生长发育的作用。为了进一步研究拒食蛋白XnAFP2,本文克隆了拒食蛋白基因xnAFP2,对其进行了功能结构域分析,分别克隆、表达、纯化了各结构域片段,并进行了生物活性测定,得到了拒食蛋白XnAFP2的主效活性区域。同时,还对取食XnAFP2的玉米螟体内主要酶系活性变化进行了测定,为XnAFP2作用机理的研究奠定基础。全文主要研究结果如下:1.拒食蛋白XnAFP2的基因克隆、表达通过AKTA分离纯化得到拒食蛋白XnAFP2,利用质谱测序的方法,得到XnAFP2的部分肽段序列,然后进行NCBI数据库比对,根据保守序列设计引物,克隆得到拒食蛋白基因xnAFP2,并尝试对该基因进行表达。2.拒食蛋白XnAFP2功能结构域的划分与各结构域表达载体的构建拒食蛋白XnAFP2全长2524氨基酸,对该蛋白进行表达非常困难,为了研究其主效活性区域,对其进行结构域预测和划分,用PCR方法扩增了出3个结构域片段:DomainI,DomainII,DomainIII,并构建了各结构域片段的融合表达载体。3.拒食蛋白XnAFP2叁个结构域的表达与纯化将XnAFP2叁个结构域片段的表达载体转入E.coli BL21(DE3)细胞,经IPTG诱导表达,获得了拒食蛋白叁个结构域片段的表达蛋白。用蛋白纯化系统(AKTA Explorer10.0)对表达蛋白进行His?Tag亲和层析纯化和脱盐处理,得到纯化蛋白。4.拒食蛋白XnAFP2叁个结构域片段表达蛋白的功能比较与分析通过拒食蛋白各蛋白片段对棉铃虫、玉米螟、小菜蛾叁种幼虫的生长抑制作用的测定,比较分析其功能差异,以期得到拒食蛋白主效活性区域。结果表明,叁个蛋白片段对棉铃虫叁龄幼虫的生长抑制率分别为17.4%、39.8%和20.2%,对玉米螟叁龄幼虫的生长抑制率分别为20.2%、38.6%和21.7%,对小菜蛾叁龄幼虫的非选择性拒食率分别为25.7%、44.1%和26.8%。叁个结构域片段的表达蛋白对棉铃虫和玉米螟的叁龄幼虫均表现出不同程度的生长抑制活性,对小菜蛾的叁龄幼虫具有不同程度的拒食效果。其中以Domain II活性最高,无论是对棉铃虫和玉米螟叁龄幼虫的相对生长抑制率还是对小菜蛾叁龄幼虫的非选择性拒食率,均高于40%;而Domain I、Domain III生长抑制活性或拒食效果较低,均低于27%,与Domain II相比差异显着。因此,Domain II是拒食蛋白XnAFP2的主效活性区域。5.拒食蛋白XnAFP2对玉米螟体内主要酶系活性的影响用拒食蛋白XnAFP2饲喂玉米螟3龄幼虫,检测了拒食蛋白对玉米螟生长发育的影响,并通过生化分析研究其对玉米螟幼虫体内解毒酶、保护酶和中肠蛋白酶活性的影响,测定比较了取食XnAFP2后幼虫体内乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽S-转移酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和中肠总蛋白酶的活力。结果表明:取食拒食蛋白XnAFP2 (50μg/ml)72h后玉米螟幼虫相对生长抑制率达69.88%,体内谷胱甘肽S-转移酶活力明显低于对照;而乙酰胆碱酯酶活力显着高于对照(3.5倍),保护酶系、中肠总蛋白酶的活性在取食36h后都有一个诱导上升的过程,但随着时间的延长,昆虫生长发育受到明显抑制,体内主要酶系活性都大大降低。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2010-06-01）
曾洪梅,邱德文,杨秀芬,张雨良,尹富仕[5]（2008）在《嗜线虫致病杆菌昆虫拒食蛋白的研究》一文中研究指出致病杆菌属(Xenorhabdus)是存在于斯氏线虫属(Steinernema)的昆虫病原线虫肠道内的共生细菌,属革兰氏阴性菌。在自然条件下,共生菌与线虫共同作用,破坏寄主防御系统,最后杀死昆虫。在此过程中,共生菌能产生许多有应用潜力的代谢产物,如毒素蛋白、抗生素、胞外酶等,因此从该类特异生境细菌中寻找具有新活性、新功能的有效物质已成为国内外科学家关注的热点。(本文来源于《2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集》期刊2008-11-07）
拒食蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
PeaT1是来源于极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)的蛋白激发子,具有促进植物生长、提高植物的抗旱能力和诱导植物广谱抗病性等功能;XnAFP2是从嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)北京变种CB6菌株中分离得到的对多种昆虫具有拒食活性的蛋白。为了实现拒食蛋白XnAFP2和蛋白激发子PeaT1在水稻中的表达并进一步研究其功能,本研究建立了水稻品种多系一号的组织培养体系,通过农杆菌介导的方法获得了xnAFP2和peaT1的转基因植株,PCR、RT-PCR、Southern blot和Western blot分别证实了目的基因的整合、转录和表达,分析了peaT1转化株的抗旱能力。本研究获得的主要结果如下:1.构建了植物表达载体pCAMBIA2300-35S-xnaFP2-OCS和pCAMBIA2300-35S-peaT1-OCS,该载体多个表达调控元件,可以增强目的基因在水稻中的表达水平,载体的正确性通过酶切和测序验证,热激法将载体成功转化根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)菌株LBA4404。2.通过比较N6、MS、NB培养基对于水稻恢复系多系一号成熟胚愈伤组织的诱导效果,证实N6培养基较适合多系一号成熟胚的组织培养。在此基础上,通过根癌农杆菌(Agrobacterium mmefaciens)介导转化法将拒食蛋白基因xnAFP2导入多系一号(Duoxi 1)基因组、极细链格孢菌蛋白激发子基因peaT1导入多系一号和日本晴(Nipponbare)基因组,并将转基因植株繁殖到T2代。3.通过PCR筛选阳性水稻转化株, Southern杂交进一步证实了目的基因整合到水稻基因组中,RT-PCR验证了目的基因在水稻细胞内的转录,Western杂交验证了peaT1基因可以在水稻细胞中得以表达。4.通过对单拷贝株系后代遗传分析表明,xnAFP2和peaT1基因在转基因后代中的分离符合3∶1的理论比例。5.鉴定了T2代转peaT1基因水稻植株对干旱胁迫的抗性。结果表明,和非转基因对照相比,转基因水稻植株对干旱的抗性明显提高。转xnAFP2水稻植株和非转基因水稻植株相比,初步表现抗二化螟活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
拒食蛋白论文参考文献
[1].盛德鹏,玉山江·麦麦提,郭立华,曾洪梅,杨秀芬.农杆菌介导拒食蛋白XnAFP2转化恢复系多系一号的研究[J].生物技术通报.2011
[2].盛德鹏.蛋白激发子基因peaT1和拒食蛋白基因xnAFP2转化水稻的研究[D].中国农业科学院.2011
[3].尹富仕,曾洪梅,张雨良,杨秀芬,邱德文.拒食蛋白XnAFP2叁个结构域片段的表达及其生物活性分析[J].中国生物防治.2010
[4].尹富仕.拒食蛋白XnAFP2功能结构域分析与作用机理初步研究[D].中国农业科学院.2010
[5].曾洪梅,邱德文,杨秀芬,张雨良,尹富仕.嗜线虫致病杆菌昆虫拒食蛋白的研究[C].2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集.2008
标签：根癌农杆菌; 愈伤组织; 拒食蛋白XnAFP2; 嗜线虫致病杆菌;