本文主要研究内容
作者高恩怡（2019）在《手足口病毒鸡卵黄抗体的制备及抗病毒作用研究》一文中研究指出：目的:本实验通过制备抗肠道病毒71型鸡卵黄抗体(anti-EV71 IgY),开展其在体内及体外抗肠道病毒71型(EV71),体外抗柯萨奇病毒A16型(CVA16)的相关检测,并对其抗EV71和CVA16的作用机制进行探讨。以期探索出一种新的能交叉被动免疫治疗由EV71和CVA16引发的手足口病(HFMD)方案。方法:以EV71毒株作为抗原,与弗氏不完全佐剂1:1混合并吹打使其乳化均匀,通过多次注射来免疫SPF级母鸡,收集并提取纯化IgY;蛋白定量法检测IgY的总蛋白浓度;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测试IgY纯度;采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)来评价特异性IgY的浓度变化规律;蛋白质印记法和免疫双向琼脂扩散法检测纯化IgY的特异性;采用观测人横纹肌肉瘤细胞(RD)的细胞病变效应(CPE)检测特异性IgY体外对EV71与CVA16中和能力的量效关系,抗EV71稳定性和时效性;通过免疫荧光法检测特异性IgY在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的抗EV71作用;灌胃给药检测特异性IgY对被EV71病毒感染的新生BALB/c鼠的保护作用。结果:IgY总蛋白浓度在免疫后整体呈上升趋势;SDS-PAGE电泳图显示纯化的IgY纯度良好,可被分裂为分子量约为70 kDa的IgY重链(H)及30 kDa的IgY轻链(L);通过ELISA我们发现特异性IgY浓度在免疫后的第7天出现增加,在第7周达到最高,并在较高水平维持4周左右;免疫双向琼脂扩散实验与Western blot测得特异性IgY具有与EV71、CVA16毒株良好的免疫结合性,能特异性识别EV71和CVA16的包膜蛋白VP1及VP3;IgY体外中和病毒实验结果显示,特异性IgY能抑制EV71病毒和CVA16病毒的感染病变能力,并呈剂量-效应相关关系,差异具有统计学意义;特异性IgY在感染早期对EV71病毒有很强的抑制作用,感染后期抑制效果不明显;特异性IgY在4℃、室温、37℃条件下48 h后抗病毒活性依然稳定,60℃条件下1.6μg/mL仍能对病毒达到100%的抑制率。反复冻融5次后对IgY的抗病毒活性没有影响。特异性IgY对肠道病毒EV71、CVA16有很强的抑制活性,对其他肠道病毒抑制效果不明显;免疫荧光法显示特异性IgY在3.72μg/mL对Vero细胞中的毒株能达到近乎100%的抑制作用;特异性IgY实验组新生鼠生存率达到100%,相比于对照组无消瘦,精神萎靡,毛发生长异常等症状。结论:(1)免疫后提取的特异性IgY纯度与抗病毒特异性良好。(2)特异性IgY能识别EV71、CVA16病毒的包膜蛋白VP1与VP3,在体外抗病毒实验中能有效地抑制EV71病毒和CVA16病毒活性并呈剂量-效应相关关系。(3)特异性IgY作用于EV71感染早期处理明显优于后期,并且特异性IgY的稳定性较好。(4)特异性IgY灌胃给药后可以对被EV71攻击的乳鼠提供保护。
Abstract
mu de :ben shi yan tong guo zhi bei kang chang dao bing du 71xing ji luan huang kang ti (anti-EV71 IgY),kai zhan ji zai ti nei ji ti wai kang chang dao bing du 71xing (EV71),ti wai kang ke sa ji bing du A16xing (CVA16)de xiang guan jian ce ,bing dui ji kang EV71he CVA16de zuo yong ji zhi jin hang tan tao 。yi ji tan suo chu yi chong xin de neng jiao cha bei dong mian yi zhi liao you EV71he CVA16yin fa de shou zu kou bing (HFMD)fang an 。fang fa :yi EV71du zhu zuo wei kang yuan ,yu fu shi bu wan quan zuo ji 1:1hun ge bing chui da shi ji ru hua jun yun ,tong guo duo ci zhu she lai mian yi SPFji mu ji ,shou ji bing di qu chun hua IgY;dan bai ding liang fa jian ce IgYde zong dan bai nong du ;tong guo ju bing xi xian an ning jiao dian yong (SDS-PAGE)ce shi IgYchun du ;cai yong jian jie mei lian mian yi xi fu fa (ELISA)lai ping jia te yi xing IgYde nong du bian hua gui lv ;dan bai zhi yin ji fa he mian yi shuang xiang qiong zhi kuo san fa jian ce chun hua IgYde te yi xing ;cai yong guan ce ren heng wen ji rou liu xi bao (RD)de xi bao bing bian xiao ying (CPE)jian ce te yi xing IgYti wai dui EV71yu CVA16zhong he neng li de liang xiao guan ji ,kang EV71wen ding xing he shi xiao xing ;tong guo mian yi ying guang fa jian ce te yi xing IgYzai fei zhou lu hou shen xi bao (Vero)zhong de kang EV71zuo yong ;guan wei gei yao jian ce te yi xing IgYdui bei EV71bing du gan ran de xin sheng BALB/cshu de bao hu zuo yong 。jie guo :IgYzong dan bai nong du zai mian yi hou zheng ti cheng shang sheng qu shi ;SDS-PAGEdian yong tu xian shi chun hua de IgYchun du liang hao ,ke bei fen lie wei fen zi liang yao wei 70 kDade IgYchong lian (H)ji 30 kDade IgYqing lian (L);tong guo ELISAwo men fa xian te yi xing IgYnong du zai mian yi hou de di 7tian chu xian zeng jia ,zai di 7zhou da dao zui gao ,bing zai jiao gao shui ping wei chi 4zhou zuo you ;mian yi shuang xiang qiong zhi kuo san shi yan yu Western blotce de te yi xing IgYju you yu EV71、CVA16du zhu liang hao de mian yi jie ge xing ,neng te yi xing shi bie EV71he CVA16de bao mo dan bai VP1ji VP3;IgYti wai zhong he bing du shi yan jie guo xian shi ,te yi xing IgYneng yi zhi EV71bing du he CVA16bing du de gan ran bing bian neng li ,bing cheng ji liang -xiao ying xiang guan guan ji ,cha yi ju you tong ji xue yi yi ;te yi xing IgYzai gan ran zao ji dui EV71bing du you hen jiang de yi zhi zuo yong ,gan ran hou ji yi zhi xiao guo bu ming xian ;te yi xing IgYzai 4℃、shi wen 、37℃tiao jian xia 48 hhou kang bing du huo xing yi ran wen ding ,60℃tiao jian xia 1.6μg/mLreng neng dui bing du da dao 100%de yi zhi lv 。fan fu dong rong 5ci hou dui IgYde kang bing du huo xing mei you ying xiang 。te yi xing IgYdui chang dao bing du EV71、CVA16you hen jiang de yi zhi huo xing ,dui ji ta chang dao bing du yi zhi xiao guo bu ming xian ;mian yi ying guang fa xian shi te yi xing IgYzai 3.72μg/mLdui Veroxi bao zhong de du zhu neng da dao jin hu 100%de yi zhi zuo yong ;te yi xing IgYshi yan zu xin sheng shu sheng cun lv da dao 100%,xiang bi yu dui zhao zu mo xiao shou ,jing shen wei mi ,mao fa sheng chang yi chang deng zheng zhuang 。jie lun :(1)mian yi hou di qu de te yi xing IgYchun du yu kang bing du te yi xing liang hao 。(2)te yi xing IgYneng shi bie EV71、CVA16bing du de bao mo dan bai VP1yu VP3,zai ti wai kang bing du shi yan zhong neng you xiao de yi zhi EV71bing du he CVA16bing du huo xing bing cheng ji liang -xiao ying xiang guan guan ji 。(3)te yi xing IgYzuo yong yu EV71gan ran zao ji chu li ming xian you yu hou ji ,bing ju te yi xing IgYde wen ding xing jiao hao 。(4)te yi xing IgYguan wei gei yao hou ke yi dui bei EV71gong ji de ru shu di gong bao hu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自桂林医学院的高恩怡，发表于刊物桂林医学院2019-08-12论文，是一篇关于肠道病毒型论文,柯萨奇病毒型论文,鸡卵黄抗体论文,细胞论文,乳鼠论文,桂林医学院2019-08-12论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自桂林医学院2019-08-12论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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