导读:本文包含了何首乌饮论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:何首乌饮,衰老,生精细胞,p53
何首乌饮论文文献综述
单博颖,薛亚然,梁思,张研,齐峰[1]（2019）在《何首乌饮对衰老生精细胞p53、Bcl-2和Bax mRNA表达的影响》一文中研究指出目的:探讨何首乌饮对衰老生精细胞p53、Bcl-2、BaxmRNA表达的影响。方法:采用自由基氧化损伤法建立生精细胞衰老模型,采用实时荧光定量PCR法检测各组生精细胞p53、Bcl-2和Baxm RNA的表达情况。结果:衰老组生精细胞p53、Baxm RNA的表达水平及Bax/Bcl-2比值明显高于正常组(P<0.05),Bcl-2m RNA的表达水平明显低于正常组(P<0.05);何首乌饮干预组p53、Baxm RNA的表达水平及Bax/Bcl-2比值明显低于衰老组(P<0.05),Bcl-2 mRNA的表达水平明显高于衰老组(P<0.05)。结论:何首乌饮可通过上调衰老生精细胞Bcl-2的表达、下调p53和Bax的表达抑制生精细胞凋亡,发挥延缓生精细胞衰老的作用。(本文来源于《承德医学院学报》期刊2019年03期）
单博颖[2]（2019）在《何首乌饮抑制生精细胞凋亡的Cytc/Apaf-1/Caspase9/Caspase3通路作用机制》一文中研究指出目的:探讨何首乌饮抑制生精细胞凋亡的Cytc/Apaf-1/Caspase9/Caspase3通路作用机制。方法:1.运用组合酶法以及差异贴壁法分离、纯化培养细胞,采用苏丹IV染色法鉴定支持细胞,通过检测α6-integrin和β1-integrin鉴定精原干细胞,运用HE染色法和碱性磷酸酶染色法对生精细胞进行鉴定。2.运用自由基氧化损伤方法建立生精细胞衰老模型,检测SA-β-gal活性来鉴定生精细胞衰老模型是否成功建立,采用流式技术检测各组生精细胞的凋亡情况。3.运用免疫荧光技术检测Cy3表达,筛选si RNA最佳转染时间。运用Western blot技术和RT-q PCR技术检测3段不同序列si RNA干扰后生精细胞中Apaf-1表达水平,从中筛选最佳干扰序列。依据实验目的分为正常对照组、衰老组、NC-si RNA转染组、何首乌饮组、Apaf-1-si RNA干扰组、共孵育组(何首乌饮+Apaf-1-si RNA)。4.运用Western blot技术、免疫荧光技术、RT-q PCR技术分别检测线粒体信号传导通路关键基因Cytc、Caspase9、Caspase3的表达。5.检测各实验组生精细胞的线粒体膜电位。结果:1.苏丹IV染色结果显示支持细胞纯度达到90%。2.衰老组SA-β-gal活性高于正常组,何首乌饮干预后现象逆转,表明生精细胞衰老模型成功建立。生精细胞凋亡检测趋势与其一致。3.Apaf-1-si RNA筛选Western blot技术和RT-q PCR检测结果显示si RNA3干扰组Apaf-1 m RNA和蛋白表达量低于其余干扰组(P<0.05),因此确认si RNA3为最佳干扰序列。4.何首乌饮对Cytc、Caspase9、Caspase3调控作用各组细胞Cyt-c表达水平:Western blot检测蛋白表达水平:衰老组蛋白表达高于正常对照组(P<0.05),何首乌饮组和共孵育组蛋白表达低于衰老组(P<0.05)。NC-si RNA转染组、Apaf-1-si RNA干扰组与衰老组比较均没有统计学意义(P>0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,何首乌饮组和共孵育组蛋白表达降低(P<0.05)。何首乌饮组与共孵育组相比较无统计学意义(P>0.05),其表达趋势与免疫荧光技术检测趋势一致。RT-q PCR技术检测m RNA表达水平:衰老组m RNA表达高于正常对照组(P<0.05)。何首乌饮组和共孵育组m RNA表达低于衰老组(P<0.05)。NC-si RNA转染组、Apaf-1-si RNA干扰组与衰老组相比较均无统计学意义(P>0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,何首乌饮组和共孵育组表达降低(P<0.05)。何首乌饮组与共孵育组比较无统计学意义(P>0.05)。各组细胞Caspase9、Caspase3表达水平Western blot检测蛋白表达水平:衰老组Caspase9、Caspase3蛋白表达高于正常对照组(P<0.05)。NC-si RNA转染组与衰老组Caspase9、Caspase3蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。何首乌饮组,Apaf-1-si RNA干扰组及共孵育组Caspase9、Caspase3表达低于衰老组(P<0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,共孵育组Caspase9、Caspase3蛋白表达降低(P<0.05),何首乌饮组与Apaf-1-si RNA干扰组Caspase9、Caspase3蛋白表达无统计学意义(P>0.05),免疫荧光技术检测所得结果与其一致。RT-q PCR检测m RNA表达水平:衰老组Caspase9、Caspase3 m RNA表达高于正常对照组(P<0.05)。NC-si RNA转染组与衰老组Caspase9、Caspase3表达水平比较无统计学意义(P>0.05)。何首乌饮组,Apaf-1-si RNA干扰组和共孵育组Caspase9、Caspase3 m RNA表达低于衰老组(P<0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,共孵育组Caspase9、Caspase3 m RNA表达水平降低(P<0.05)。何首乌饮组与Apaf-1-si RNA干扰组Caspase9、Caspase3 m RNA表达量无统计学意义(P>0.05)。5.线粒体膜电位检测结果与正常对照组比较,衰老组线粒体膜电位降低(P<0.05)。与衰老组比较,何首乌饮组和共孵育组膜电位升高(P<0.05)。NC-si RNA转染组、Apaf-1-si RNA干扰组与衰老组比较均无统计学意义(P>0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,共孵育组和何首乌饮组线粒体膜电位上调(P<0.05)。结论:何首乌饮可通过Cytc/Apaf-1/Caspase9/Caspase3途径抑制生精细胞凋亡。(本文来源于《河北大学》期刊2019-06-01）
庞云瑞[3]（2019）在《何首乌饮调控大鼠间质细胞衰老的甲基化机制》一文中研究指出目的:通过观察何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞DNMTs活性的影响,探讨何首乌饮调控大鼠睾丸间质细胞衰老的甲基化机制。方法:1.差异贴壁法分离培养睾丸间质细胞,采用3β-HSD特异性染色,鉴定睾丸间质细胞纯度。2.采用氧化损伤方法建立细胞衰老模型,通过检测β-半乳糖苷酶表达水平,细胞周期和P16蛋白表达情况,判断衰老模型是否构建成功。3.采用构建的慢病毒转染睾丸间质细胞,将间质细胞中DNMT1基因敲低。4.通过MTT法检测细胞活力,荧光定量PCR检测DNMT1 mRNA的表达水平,筛选出DNA甲基转移酶抑制剂最适浓度和最佳作用时间。5.依据实验目的细胞分组为:正常组、衰老组、何首乌饮组、DNA甲基转移酶抑制剂组、DNA甲基转移酶抑制剂与何首乌饮共孵育组、DNMT1敲低组、DNMT1敲低与何首乌饮共孵育组、阴性质粒转染组。6.采用免疫荧光技术,检测P16蛋白的表达情况。7.采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测各组表观遗传基因wnt2b和C-myb的启动子甲基化水平。结果:1.间质细胞衰老模型鉴定及细胞衰老对DNMT1表达影响:300μM H_2O_2与100μM FeSO_4连续刺激四天后,β-半乳糖苷酶表达水平明显上升;细胞G1期比例增加,S期所占比重明显减少;P16蛋白表达明显增加,与正常组比较有统计学差异(P<0.05)。表明衰老模型建立成功。细胞衰老后,DNMT1 mRNA表达明显下降,与正常组相比较有统计学差异(P<0.05)。~12.何首乌饮延缓间质细胞衰老作用:何首乌饮可以使衰老细胞β-半乳糖苷酶阳性率显着降低,并且使DNMT1 mRNA表达水平明显升高,细胞G1期比例减少,S期所占比重明显增加,P16蛋白表达明显降低,与衰老组比较有显着性差异(P<0.05)。3.DNMT1敲低诱导间质细胞衰老:将间质细胞DNMT1敲低后,发现β-半乳糖苷酶表达水平明显上升,细胞G1期比例增加,S期所占比重明显减少,P16蛋白表达明显增加,与正常组、阴性对照组比较有统计学差异(P<0.05)。表明DNMT1敲低可诱导间质细胞老化。4.何首乌饮对P16蛋白表达的影响:衰老组、DNMT1敲低组和DNA甲基化转移酶抑制剂(5-Aza)组P16蛋白表达高于正常组,具有统计学意义(P<0.05),何首乌饮可以部分逆转这一现象(P<0.05)。5.何首乌饮对wnt2b和C-myb甲基化水平的影响:5.1 wnt2b:与正常组比较,衰老组、DNMT1敲低组甲基化水平明显升高,(P<0.05)。何首乌饮组和DNMT1敲低与何首乌饮共孵育组与衰老组比较甲基化水平降低(P>0.05)。DNMT1敲低与何首乌饮共孵育组和DNMT1敲低组相比甲基化水平明显降低(P<0.05)。甲基转移酶抑制剂组和正常组相比甲基化水平降低(P>0.05)。甲基转移酶抑制剂与何首乌饮共孵育组和甲基转移酶抑制剂组相比甲基化水平明显升高(P<0.05)。5.2 C-myb:与正常组比较,衰老组、甲基转移酶抑制剂组、DNMT1敲低组甲基化水平明显降低(P<0.05)。何首乌饮组、甲基转移酶抑制剂与何首乌饮共孵育组和DNMT1敲低与何首乌饮共孵育组与衰老组比较甲基化水平升高,其中甲基转移酶抑制剂与何首乌饮共孵育组与衰老组有统计学差异(P<0.05),其余两组无统计学差异(P>0.05)。DNMT1敲低与何首乌饮共孵育组和DNMT1敲低组相比甲基化水平明显升高(P<0.05)。DNMT1敲低组和甲基转移酶抑制剂组相比甲基化水平明显降低(P<0.05)。结论:1.敲低DNMT1可以诱导睾丸间质细胞衰老。2.何首乌饮通过上调DNMT1活性抑制p16的表达。3.何首乌饮通过提高DNMTs活性,调控基因的甲基化水平,延缓睾丸间质细胞衰老。(本文来源于《河北大学》期刊2019-06-01）
甄晓兰,崔晓燕,刘雪莉,施麟,牛嗣云[4]（2019）在《何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞p53、Bcl2和BAX mRNA表达的影响》一文中研究指出目的:探讨何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞p53、 Bcl2、BAX mRNA表达的影响。方法:用自由基氧化损伤方法建立睾丸间质细胞衰老模型,通过β-半乳糖苷酶染色观察何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞衰老情况的影响;应用实时荧光定量PCR检测p53、Bcl2和BAX mRNA在间质细胞中表达水平。结果:间质细胞模型组β-半乳糖甘酶含量明显高于正常组,何首乌饮能明显降低间质细胞衰老标志物β-半乳糖甘酶的含量。模型组间质细胞p53、BAX的mRNA水平明显高于正常组,Bcl2的mRNA表达水平低于正常组;何首乌饮干预组的p53、BAX的mRNA表达低于模型组,Bcl2的mRNA表达水平高于模型组。结论:何首乌饮可以上调间质细胞Bcl2mRNA表达水平,下调p53和BAX的mRNA表达。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2019年02期）
孙静[5]（2018）在《何首乌饮及其单体化合物对大鼠Leydig细胞衰老关键基因甲基化调控机制研究》一文中研究指出目的:探讨何首乌饮及其单体化合物对大鼠睾丸间质细胞衰老关键基因甲基化调控机制研究方法:1.差异贴壁法分离、培养睾丸间质细胞(Leydig cell,LC),采用3β-HSD细胞化学染色进行鉴定,结果显示Leydig细胞的纯度可达90%以上。2.采用自由基氧化损伤方法建立Leydig细胞衰老模型,检测β-半乳糖苷酶的表达水平,判断衰老模型是否成功。根据H_2O_2和FeSO_4不同的用量和作用时间,β-半乳糖苷酶的阳性表达水平,确定建立细胞衰老模型的最适条件。3.依据实验目的分为正常组、衰老组、何首乌饮组、淫羊藿苷组、松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组。并采用MTT法筛选淫羊藿苷、松果菊苷、齐墩果酸和二苯乙烯苷作用于Leydig细胞的最适浓度。4.运用实时荧光定量PCR技术检测各组表观遗传关键基因Ttc29、AXL、wnt2b、MAPK10和C-myb的mRNA表达水平。5.运用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测各组表观遗传关键基因Ttc29、AXL、wnt2b、MAPK10和C-myb的甲基化水平。6.采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术检测各组表观遗传基因Ttc29、AXL、wnt2b、MAPK10和C-myb启动子区域H3K27me3、H3K9me3和H3K9me2的富集。7.采用双因素和单因素方差分析法对MTT结果统计分析,相关性分析采用Person法,其余均采用单因素方差分析。结果:1.根据不同条件下β-半乳糖苷酶的阳性表达水平,最终确定细胞衰老模型的条件为:H_2O_2和FeSO_4的终浓度分别为50μmoL·L~(-1)和100μmoL·L~(-1),体积各为2μL,作用时间为8 h。2.MTT法确定药物作用于Leydig细胞作用72 h的浓度为:淫羊藿苷40μM,松果菊苷20μM,齐墩果酸20μM,二苯乙烯苷50μM。3.何首乌饮及其单体化合物对Ttc29的甲基化调控作用3.1 mRNA表达水平:与正常组比较,衰老组表达水平明显升高(P<0.05);何首乌饮组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组表达水平明显低于衰老组(P<0.05),淫羊藿苷组和松果菊苷组与衰老组无显着性差异(P>0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。3.2甲基化水平:与正常组比较,衰老组甲基化水平明显升高(P<0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组、松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组的甲基化百分比明显低于衰老组(P<0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。3.3组蛋白甲基化:Ttc29启动子区域未检测到H3K27me3,H3K9me3和H3K9me2的富集。4.何首乌饮及其单体化合物对AXL的甲基化调控作用4.1 mRNA表达水平:与正常组比较,衰老组表达水平明显升高(P<0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组和松果菊苷组表达水平明显低于衰老组(P<0.05);齐墩果酸与衰老组无显着性差异(P>0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。4.2甲基化水平:与正常组比较,衰老组甲基化水平明显降低(P<0.05);何首乌饮组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组的甲基化百分比显着高于衰老组(P<0.05);淫羊藿苷组、松果菊苷组与衰老组无显着性差异(P>0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。4.3组蛋白甲基化:AXL启动子区域H3K27me3富集极低,几乎检测不到H3K9me3和H3K9me2。5.何首乌饮及其单体化合物对wnt2b的甲基化调控作用5.1 mRNA表达水平:与正常组比较,衰老组表达水平明显升高(P<0.05);何首乌饮组和二苯乙烯苷组表达水平明显低于衰老组(P<0.05);淫羊藿苷、松果菊苷和齐墩果酸与衰老组无显着性差异(P>0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。5.2甲基化水平:与正常组比较,衰老组甲基化水平明显降低(P<0.05);与衰老组比较,何首乌饮组、淫羊藿苷组、松果菊苷组和二苯乙烯苷组的甲基化百分比明显升高(P<0.05);齐墩果酸组与衰老组无显着性差异(P>0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。5.3组蛋白甲基化:与正常组相比较,衰老组wnt2b启动子区域H3K27me3富集显着降低(P<0.05),而H3K9me3和H3K9me2的富集差异没有统计学意义(P>0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组wnt2b启动子区域H3K27me3富集明显高于衰老组(P<0.05),而松果菊苷组与衰老组之间无显着性差异(P>0.05)。何首乌饮组及各单体化合物组与衰老组比较,H3K9me3和H3K9me2的富集差异无统计学意义(P>0.05)。6.何首乌饮及其单体化合物对C-myb的甲基化调控作用6.1 mRNA表达水平:与正常组比较,衰老组表达水平明显降低(P<0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组、松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组表达水平明显高于衰老组(P<0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。6.2甲基化水平:与正常组比较,衰老组甲基化水平明显降低(P<0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组、松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组的甲基化百分比明显高于衰老组(P<0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。6.3组蛋白甲基化:与正常组相比较,衰老组C-myb启动子区域H3K9me3富集明显增加(P<0.05),而H3K27me3和H3K9me2富集差异不大(P>0.05)。与衰老组比较,何首乌饮组、松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组C-myb启动子区域H3K9me3富集显着降低(P<0.05),淫羊藿苷组与衰老组无显着性差异(P>0.05)。齐墩果酸组H3K27me3富集明显高于衰老组(P<0.05),其余各组与衰老组之间差异不大(P>0.05)。何首乌饮及单体化合物组与衰老组比较,H3K9me2富集无显着性差异(P>0.05)。7.何首乌饮及其单体化合物对MAPK10的甲基化调控作用7.1 mRNA表达水平:与正常组比较,衰老组表达水平明显升高(P<0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组,松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组表达水平明显低于衰老组(P<0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。7.2甲基化水平:与正常组比较,衰老组甲基化水平明显降低(P<0.05);何首乌饮组、淫羊藿苷组,松果菊苷组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组的甲基化百分比明显高于衰老组(P<0.05);其中,何首乌饮组效果最好(P<0.05)。7.3组蛋白甲基化:MAPK10启动子区域未检测到H3K27me3,H3K9me3和H3K9me2的富集。8.相关性分析AXL、wnt2b、MAPK10的表达水平和甲基化水平呈高度的负相关(P<0.05);C-myb的表达水平和甲基化水平呈高度正相关(P<0.05);Ttc29的表达水平和甲基化水平的相关系数没有显着性差异(P>0.05)。结论:1.何首乌饮通过下调AXL、wnt2b、MAPK10和Ttc29基因mRNA水平,上调C-myb基因mRNA水平,延缓Leydig细胞衰老,且效果明显优于其他单体化合物组。2.何首乌饮通过上调AXL、wnt2b、MAPK10和C-myb的甲基化水平,下调Ttc29的甲基化水平,延缓Leydig细胞衰老,且效果明显优于其他单体化合物组。3.AXL、wnt2b、MAPK10的甲基化水平和mRNA表达水平呈负相关;C-myb的甲基化水平和mRNA表达水平呈正相关,Ttc29的甲基化水平和mRNA表达水平无相关性。何首乌饮通过调控基因的甲基化水平和mRNA表达水平抑制Leydig细胞衰老。4.何首乌饮通过上调H3K27me3的表达,抑制wnt2b基因转录;同时可能通过下调H3K9me3的表达,促进C-myb基因转录,抑制Leydig细胞衰老过程,且效果明显优于其他单体化合物组。(本文来源于《河北大学》期刊2018-05-01）
张丽娜[6]（2018）在《何首乌饮及其有效成分延缓大鼠大脑皮层自然衰老的作用及机制研究》一文中研究指出脑衰老是机体各系统衰老的先驱表现,在机体衰老中占主导地位,影响各系统的衰老进程。延缓中枢神经系统衰老一定程度上就会减少老年人神经系统退行性疾病(如Alzheimer’s disease、Parkinson’s Disease、Huntington's disease)的发生。由于中枢神经系统的老化和神经退行性疾病病变的不可逆性,尚缺乏有效缓解疾病进展的药物,因此探讨脑老化机理及研发有效延缓脑衰老、保护脑组织的药物,对减少神经系统退行性疾病的发生率,提高老年人生活质量,实现健康老龄化有着重要的科学、经济和社会意义。中医理论延缓脑衰老预防老年疾病的基础治法是补肾健脑法,中药复方基于辨证施治理论,发挥多靶点、多环节的特点,在延缓衰老,预防和治疗中枢神经系统退行性疾病具有良好的前景。近年来衰老机制学和药效学研究已经深入到单味植物药的有效成分,以期较好的避免植物药复杂成分引发的不良反应、研发出有效抗衰老靶点单体药物。补肾健脑方何首乌饮(Heshouwuyin,何首乌15 g,肉苁蓉10 g,淫羊藿10 g,怀牛膝15 g,丹参25 g,茯苓15 g)是近年研究较多的复方,二苯乙烯苷(Stilbene Glucoside,TSG)、苯乙醇苷(Phenylethanoid Glycosides,PhGs)、淫羊藿苷(Epimedium Glycoside,Icraiin)分别是何首乌、肉苁蓉、淫羊藿的主要抗衰老成分,在生殖系统衰老的研究已经初具成效,然其中枢神经系统抗衰老方面有待进一步研究。鉴于何首乌饮与性腺轴相关报道,而下丘脑-垂体-睾丸(卵巢)轴与大脑皮层衰老及功能异常密切相关,本课题对何首乌饮及其有效成分延缓自然衰老大鼠大脑皮层衰老作用及机制进行了研究,为中药延缓中枢神经系统衰老,研发有效抗衰老靶点单体药物、减少老年退行性疾病提供理论参考。第一部分何首乌饮及其有效成分延缓自然衰老大鼠大脑皮层的衰老及机制研究目的:探讨何首乌饮及其有效成分对自然衰老大鼠学习记忆能力、大脑皮层组织衰老,神经细胞凋亡的改善作用,以及其对大鼠大脑皮层氧化应激相关指标、凋亡相关因子表达的影响。方法:将16个月SPF级SD大鼠(雌雄各半)随机分为:自然衰老组(old),二苯乙烯苷组(TSG),苯乙醇苷组(PhGs),淫羊藿苷组(Icraiin),何首乌饮组(Heshouwuyin),每组30只,分别灌胃等量生理盐水、TSG 100 mg/kg、PhGs 100 mg/kg、Icraiin 100 mg/kg和何首乌饮48 g/kg,连续60d,于18月龄进入实验。选取相同来源和相同遗传背景的3月龄SD大鼠30只作为年轻组(young),给予等量生理盐水灌胃1个月,于4月龄进入实验。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力。处死大鼠取脑组织,切片,行HE、SA-β-gal、TUNEL染色。提取大脑皮层组织蛋白,DCFH-DA法检测ROS含量,XOD法检测SOD活性,DNTB法检测GSH-Px活性,TBA法检测MDA含量。RT-PCR法和Western-blot法检测大脑皮层Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白表达变化。结果:1.Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力:在实验第1-5天,与young相比,old组逃避潜伏期明显延长(P<0.01)。实验第5天,TSG、PhGs和Heshouwuyin组逃避潜伏期明显少于old组(P<0.05);Icraiin组逃避潜伏期缩短,但差异没有统计学意义(P>0.05)。old组穿越平台次数比young组显着减少(P<0.01);与old组相比,TSG、PhGs组和Heshouwuyin组穿越平台次数明显增加(P<0.05);而Icraiin组穿越平台次数无明显差异(P>0.05)。2.HE染色:young组大脑皮层神经细胞形态结构清晰,数目较多,突起明显,胞浆染色浅,染色质分布均匀,核形规则。old组神经细胞体积缩小,突起减小,胞浆深染,核形欠规则,染色质有凝集现象。与old相比,四个用药组可见部分神经细胞体积有所增大,突起数量有增加,胞质染色较浅,核形较规则,染色质凝集不明显,分布较均匀,Heshouwuyin组变化明显。3.大脑皮层SA-β-gal染色结果:old组SA-β-gal阳性率比young组明显升高(P<0.01);PhGs、Heshouwuyin组SA-β-gal阳性率较old组明显减少(P<0.05或0.01)。4.大脑皮层TUNEL染色结果:与young组相比,old组凋亡率明显升高(P<0.01);PhGs、Icraiin和Heshouwuyin组凋亡率与old组相比均有明显降低(P<0.05)。5.DCFH-DA法检测ROS含量:old组大鼠大脑皮层ROS相对含量比young组明显升高(P<0.01);PhGs和Heshouwuyin组ROS相对含量较old组明显降低(P<0.05)。6.XOD法检测SOD活性:old组大鼠大脑皮层SOD活性比young组明显降低(P<0.01);Icraiin和Heshouwuyin组SOD活性较old组明显升高(P<0.05)。7.DNTB法检测GSH-Px活性:old组大鼠大脑皮层GSH-Px活性比young组明显降低(P<0.01);Ph Gs、Icraiin和Heshouwuyin组GSH-Px活性较old组明显升高(P<0.05)。8.TBA法检测MDA含量:old组大鼠大脑皮层MDA含量比young组明显升高(P<0.01);TSG、Ph Gs和Heshouwuyin组MDA含量较old组明显降低(P<0.05)。9.RT-PCR、Western-blot法检测结果:与young组相比,old组大鼠大脑皮层中Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01);与old组相比,Icraiin和Heshouwuyin组大鼠大脑皮层中Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。小结:TSG、Ph Gs和Heshouwuyin有助于改善自然衰老大鼠学习记忆能力。四种药物尤其是Heshouwuyin有使大鼠大脑皮层保持年轻形态的趋势。PhGs和Heshouwuyin减少大鼠大脑皮层SA-β-gal的阳性表达。PhGs、Icraiin和Heshouwuyin降低自然衰老大鼠大脑皮层细胞的凋亡。PhGs提高GSH-Px活性,降低ROS和MDA含量;Icraiin提高SOD、GSH-Px活性;Heshouwuyin同时影响以上四个指标,提高自然衰老大鼠大脑皮层的抗氧化能力,以Heshouwuyin作用最佳。Icraiin和Heshouwuyin上调Bcl-2的表达,下调Bax和Caspase-3的表达,抑制细胞凋亡,延缓大鼠大脑皮层自然衰老。第二部分神经元体外自然衰老模型的建立与鉴定目的:摸索体外培养大鼠原代神经元自然衰老的时间规律,确定延长培养至神经元衰老的时间点,建立自然衰老神经元模型。方法:使用Neurolbasal+B27无血清培养基进行SD新生大鼠皮层原代神经元培养,NSE细胞免疫化学染色进行神经元纯度鉴定。在皮层神经元体外培养不同时间点(细胞培养第7、9、11、13、15、17、19、21天),进行活体神经元计数和形态学观察;细胞化学染色法检测神经元SA-β-gal阳性率;TUNEL法检测神经元早期凋亡率;Western-blot法检测神经元Caspase-3蛋白表达;分光光度法检测神经元Caspase-3活性。结果:光学显微镜形态学分析,原代培养神经元第7天,神经元胞体呈锥体形,叁角形,梭形,椭圆形,形态饱满,具有典型的轴突与树突。细胞轮廓清晰,结构立体,胞浆均匀一致、胞质透亮,核大而明显。第10天时,构建良好的神经网络。第15天时,神经元数目没有明显变化,形态规整,但出现神经纤维交联,神经细胞聚合的现象。17天以后,活细胞数目锐减,固缩神经元逐渐增多,神经元突起变细、缩短、断裂、模糊,部分呈现串珠样改变。培养基中分泌物及细胞碎片逐渐增加。神经元延长培养第15天时,SA-β-gal的阳性率达到60.56±9.20%,显着高于7-13天;早期凋亡率达到31.48±6.05%,显着高于第7-13天;神经元Caspase-3蛋白表达水平1.27±0.015,为第7天的2倍以上,与第7-13天相比差异显着;神经元Caspase-3活性2.21±0.24,为第7-13天的1.5-2倍以上,差异显着。提示在体外培养的神经元,延长培养时间至第15天时,60%神经元处于衰老状态,30%以上神经元早期凋亡,整个细胞培养体系进入自然衰老阶段。小结:不使用药物诱导与损伤,在Neurolbasal+B27无血清培养体系下,皮层神经元原代培养第15天是神经元培养体系进入自然衰老阶段的时间点,为后继体外神经元药物抗衰老研究提供依据。第叁部分何首乌饮有效成分及其配伍体外延缓大鼠皮层神经元衰老的作用及机制研究目的:探讨何首乌饮单味药有效成分(TSG、PhGs、Icraiin)及其配伍(TSG+Ph Gs+Icraiin)对自然衰老神经元形态学、SA-β-gal和TUNEL阳性细胞率、氧化应激相关指标、凋亡相关因子、β-catenin、REST表达的影响,初步比较药物对自然衰老神经元网络构建状况、抗氧化应激能力、衰老与凋亡的作用,分析其延缓神经元自然衰老的作用及机制。方法:Neurolbasal+B27无血清培养基进行SD新生大鼠原代皮层神经元培养。实验分组为(1)短时培养组ST;(2)长时培养组LT;(3)二苯乙烯苷组TSG(50μmol/l);(4)苯乙醇苷组PhGs(50μmol/l);(5)淫羊藿苷组Icraiin(50μmol/l);(6)配伍组TSG+Ph Gs+Icariin(50μmol/l)。ST组为皮层神经元培养第7天,LT组为皮层神经元培养第15天。药物处理组,为皮层神经元培养第12-14天,分别给于TSG、PhGs、Icariin(50μmol/l)和TSG+PhGs+Icariin(50μmol/l)作用72 h后,于第15天固定或收集各组神经元。实验前ST组和LT组同时给于等量加DMSO和PBS的培养基处理72 h。倒置显微镜下观察神经元的形态学变化及生长状况并拍照,做SA-β-gal衰老细胞染色和TUNEL免疫细胞化学染色。提取细胞蛋白,DCFH-DA法检测ROS含量,XOD法检测SOD活性,DNTB法检测GSH-Px活性,TBA法检测MDA含量。使用免疫细胞化学、分光光度法、RT-PCR、Western-blot的方法,检测各组神经元Bcl-2、Bax、Caspase-3和β-catenin、REST表达情况。结果:1.形态学观察:神经元培养第15天,TSG和PhGs组神经元聚合现象明显少于LT组。Icraiin和配伍组神经元未发现聚合现象。培养17-19天,四个用药组固缩神经元均有所减少,可以见到局部存有完整的神经网络结构,尤以Icraiin组变化明显。培养第21天,Icraiin组几乎见不到神经元,细胞碎片满视野;配伍组可以见到结构清晰的神经元。2.神经元SA-β-gal染色结果:与ST组相比,LT组SA-β-gal阳性率显着升高(P<0.01);与LT组相比,四个用药组SA-β-gal阳性率明显减少(P<0.01)。PhGs组和配伍组神经元蓝染程度明显减轻,提示SA-β-gal表达量减弱。3.神经元TUNEL染色结果:与ST组相比,LT组神经元凋亡率显着升高(P<0.01);与LT组相比,TSG组凋亡率无明显降低(P>0.05);PhGs组、Icraiin组和配伍组凋亡率明显减少(P<0.01),神经元核TUNEL染色明显变浅,提示其表达量减弱。4.DCFH-DA法检测ROS含量:LT组神经元ROS相对含量比ST组显着增加(P<0.05)。PhGs、配伍组神经元ROS相对含量比LT组均明显降低(P<0.01)。5.XOD法检测SOD活性:LT组神经元SOD酶的活性比ST组显着降低(P<0.01)。PhGs、Icraiin、配伍组神经元SOD酶的活性比LT组均明显升高(P<0.05或0.01)。6.DNTB法检测GSH-Px活性:LT组神经元GSH-Px酶的活性比ST组显着降低(P<0.05或0.01)。PhGs、Icraiin、配伍组神经元GSH-Px酶的活性比LT组均明显升高(P<0.01)。TSG组神经元GSH-Px酶的活性比LT组也有增加(P<0.05),差异显着。7.TBA法检测MDA含量:LT组神经元MDA含量比ST组显着增加(P<0.01)。TSG、PhGs、配伍组神经元MDA含量比LT组均明显降低(P<0.01)。8.Western-blot检测Bax、Bcl-2结果:LT组神经元Bax/Bcl-2比值是ST组2倍以上(P<0.01)。PhGs组和Icraiin、配伍组神经元Bax、Bcl-2蛋白表达变化明显,Bax/Bcl-2比值明显低于LT组神经元(P<0.05或0.01)。9.RT-PCR检测Bax、Bcl-2结果:LT组神经元BaxmRNA相对水平比ST组升高2倍之多,而Bcl-2mRNA表达明显较少(P<0.01)。与LT组相比,四个用药组神经元BaxmRNA表达减少,而Bcl-2mRNA表达增加(P<0.05);PhGs、Icraiin、配伍组神经元Bax、Bcl-2mRNA数据变化显着(P<0.01)。10.免疫细胞化学Caspase-3染色结果:与ST组相比,LT组神经元Caspase-3的蛋白表达阳性率与过阳性率明显升高(P<0.01)。与LT组相比,四个用药组神经元Caspase-3过阳性率显着降低(P<0.05)。11.分光光度法检测Caspase-3活性结果:LT组神经元Caspase-3的活性为ST组2倍左右(P<0.01)。PhGs、Icraiin、配伍组Caspase-3的相对活性显着降低(P<0.01)。12.Western-blot检测β-catenin结果:与ST组相比,LT组神经元胞核胞质内β-catenin表达明显增加(P<0.01)。LT组神经元胞核β-catenin表达高于胞质,与LT组相比,PhGs和Icraiin、配伍组胞核内β-catenin表达增加,胞质内β-catenin表达显着减少(P<0.05)。13.Western-blot检测REST结果:与ST组相比,LT组神经元胞核胞质内REST表达明显增加(P<0.01)。LT组神经元胞核REST蛋白高于胞质,β-catenin与REST蛋白共同核内转移。与LT组相比,Icraiin、配伍组胞核内REST表达增加,胞质内REST表达显着减少(P<0.05)。小结:四种药物都可以维持神经元的正常形态,显示出抗衰老作用。配伍给药作用时间比较长久,Icariin于衰老早期抗衰老作用显着。四种药物都能减少自然衰老神经元SA-β-gal表达,PhGs、Icraiin、配伍给药都能减少自然衰老神经元的凋亡。自然衰老神经元氧化应激相关指标出现异常,TSG提高GSH-Px的活性,减少MDA含量;Icraiin提高SOD、GSH-Px活性;PhGs、有效成分配伍减少ROS含量,增加SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,增加自然衰老神经元抗氧化应激能力。四种药物通过影响自然衰老神经元Bax、Bcl-2蛋白表达或mRNA表达,减少Bax/Bcl-2比值;降低Caspase-3表达或活性,减少自然衰老神经元的凋亡。Ph Gs、Icraiin和有效成分配伍促进β-catenin和(或)REST的核内转移,通过Wnt/β-catenin信号通路影响自然衰老神经元自我修复和抗氧化应激、抗凋亡能力,延缓神经元的自然衰老进程。结论:在Neurolbasal+B27无血清培养体系下,皮层神经元原代培养第15天可以作为神经元培养体系自然衰老的时间节点。何首乌饮及其有效成分通过提高神经元的抗氧化能力,调节凋亡相关因子表达,改善自然衰老大鼠学习记忆能力,发挥延缓大鼠大脑皮层自然衰老的作用,以Heshouwuyin作用明显。单味药有效成分中Icraiin抗凋亡作用突出;PhGs兼顾抗氧化和抗凋亡作用。PhGs、Icariin和何首乌饮有效成分配伍促进神经元β-catenin和(或)REST的核内转移,通过Wnt/β-catenin通路,延缓神经元的自然衰老进程。(本文来源于《河北医科大学》期刊2018-04-01）
回陈红,刘昊坤,杜云帆,秦瑄希,徐天戎[7]（2017）在《衰老大鼠睾丸组织受何首乌饮调控差异表达基因的筛选》一文中研究指出目的筛选出衰老大鼠睾丸组织受何首乌饮调控的差异表达基因。方法根据实验要求将雄性大鼠分为4组,每组各10只:青年对照组(12月龄);自然衰老组(18月龄);何首乌饮1组(何首乌饮4.8g/100g,灌胃60d,18月龄);何首乌饮2组(何首乌饮4.8g/100g,灌胃30d,18月龄),采用基因芯片技术筛选睾丸组织受何首乌饮调控的差异表达基因,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行验证。结果基因芯片共筛选出差异表达基因21260个,自然衰老组和青年对照组大鼠睾丸组织差异表达基因有2100个,其中受何首乌饮直接调控的基因有912个,其中衰老后691个基因表达明显上调,221个基因表达下调,用何首乌饮干预60d后,上调的691个基因明显下调,下调的221个基因明显上调;通过GO分析睾丸组织受何首乌饮调控的基因参与的生物学过程有繁殖,免疫代谢,细胞生长发育死亡等;Pathway分析,这些基因主要分布在59条通路上;经qRT-PCR检测结果与芯片结果一致。结论何首乌饮延缓大鼠睾丸组织衰老是一个多途径、多靶点协同作用的过程,但其具体作用机制尚不明确,有待进一步研究。(本文来源于《时珍国医国药》期刊2017年07期）
安福丽,王玉娟,刘昊坤,杜云帆,秦瑄希[8]（2017）在《何首乌饮对衰老大鼠生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨何首乌饮对衰老大鼠睾丸生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响。方法选用12月龄Wistar雄鼠45只,随机分为3组:青年对照组、自然衰老组、何首乌饮组,每组15只,何首乌饮组和自然衰老组于16个月开始分别灌胃何首乌饮和等量蒸馏水,连续60d。青年对照组于12月龄,其余两组于18月龄分别进行实验,通过Real-time PCR、免疫荧光染色和免疫印迹法,观察各组大鼠睾丸组织线粒体凋亡通路关键基因DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C、14-3-3σ的表达变化。结果自然衰老大鼠线粒体凋亡通路关键基因14-3-3σ表达明显低于青年对照组,DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C表达明显高于青年对照组;而何首乌饮用药后能明显逆转上述现象。结论何首乌饮提高衰老大鼠精子质量与线粒体凋亡通路有关。(本文来源于《解剖学报》期刊2017年03期）
回陈红[9]（2017）在《何首乌饮对衰老大鼠生精细胞胰岛素通路IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达的影响》一文中研究指出目的:探讨何首乌饮对衰老大鼠生精细胞胰岛素信号通路IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达的影响。方法:一、体内实验1.实验分组及处理选用30只清洁级12月龄Wistar雄性大鼠随机分为:青年对照组(YCG),自然衰老组(NAG),何首乌饮组(SWYG),每组各10只。青年对照组适应性饲养一周后取材;自然衰老组在饲养到16月龄后灌胃等量蒸馏水60 d;何首乌饮组在饲养到16月龄后,灌胃何首乌饮(4.8 g/100 g)60 d;自然衰老组和何首乌饮组均于18月龄时取材,备用。2.观察睾丸组织IRS1、IGF-1、IGFBP3基因表达采用免疫荧光染色观察IRS1、IGF-1、IGFBP3在睾丸组织的表达位置,Western blot和实时荧光定量PCR检测睾丸组织IRS1、IGF-1、IGFBP3蛋白和mRNA表达的变化。二、体外实验1.细胞的分离、纯化、培养和鉴定组合酶法分离细胞,Percoll梯度密度离心和差异贴壁法纯化细胞,利用苏丹Ⅳ染液鉴定支持细胞并计算支持细胞的纯度;分别利用碱性磷酸酶染色、孚耳根染色、HE染色鉴定生精细胞。2.衰老模型的建立将培养至7 d的生精细胞,加入终浓度为50μmol/L的H2O2和100μmol/L FeSO4,连续干预8 h,换液,继续培养72 h;采用β-半乳糖甘酶特异性染色试剂盒检测实验各组中生精细胞β-半乳糖甘酶的表达情况,以判断衰老模型是否建立成功。3.实验分组及处理根据实验目的分为:正常对照组(NCG),将培养至7 d的生精细胞,继续培养80 h;衰老模型组(AMG),将培养至7 d的生精细胞,加入终浓度为50μmol/L的H2O2和100μmol/L的FeSO4,连续干预8 h,换液,继续培养72 h;何首乌饮组(SWYG),将培养至7 d的生精细胞,加入终浓度分别为50μmol/L的H2O2和100μmol/L FeSO4,连续干预8 h,换液,加入终浓度为10%的何首乌饮含药血清,继续培养72h。4.采用westernblot和实时荧光定量pcr检测基因irs1、igf-1、igfbp3在生精细胞的蛋白表达变化以及其mrna的相对表达水平。结果:一、体内实验结果1.免疫荧光检测结果irs1阳性产物发红色荧光,定位在细胞膜,细胞核采用dapi染色呈蓝色,irs1阳性产物主要表达在精母细胞、支持细胞和肌样细胞。与青年对照组相比,自然衰老组irs1阳性率明显降低(p<0.01),何首乌饮干预后,与自然衰老组相比,何首乌饮用药组irs1阳性率明显升高(p<0.01)。igf-1阳性产物发绿色荧光,定位在细胞质,细胞核采用dapi染色呈蓝色,igf-1阳性产物主要表达在精子细胞。与青年对照组相比,自然衰老组igf-1阳性率明显降低(p<0.01),何首乌饮干预后,与自然衰老组相比,何首乌饮用药组igf-1阳性率明显升高(p<0.01)。igfbp3阳性产物发绿色荧光,定位在细胞质,细胞核采用dapi染色呈蓝色,igfbp3阳性产物在精原细胞和少量间质细胞均有表达。经统计分析,与青年对照组相比,自然衰老组igfbp3阳性率明显升高(p<0.01),何首乌饮干预后,与自然衰老组相比,何首乌饮用药组阳性率明显降低(p<0.01)。2.westernblot检测结果结果显示,与青年对照组相比,自然衰老组igfbp3表达明显增加(p<0.01),irs1、igf-1表达明显减少(p<0.01);与自然衰老组相比,何首乌饮用药组igfbp3表达量明显减少(p<0.01),irs1、igf-1表达量明显增加(p<0.01)。3.qrt-pcr检测结果结果显示,与青年对照组相比,自然衰老组igfbp3mrna表达明显上调(p<0.01),irs1、igf-1的表达明显下调(p<0.01);与自然衰老组相比,何首乌饮用药组igfbp3表达明显下调(p<0.01),irs1、igf-1的表达明显上调(p<0.01)。以上结果表明,何首乌饮可以通过调节胰岛素信号通路关键基因irs1、igf-1、igfbp3的表达延缓大鼠睾丸组织的衰老,为了进一步分析何首乌饮对衰老大鼠生精功能的调控机制,我们采用支持细胞和生精细胞共培养的方法,检测基因irs1、igf-1、igfbp3在生精细胞的表达变化。二、体外实验结果:1.苏丹Ⅳ染色结果显示支持细胞纯度可达90%以上。2.β-半乳糖甘酶特异性染色结果β-半乳糖甘酶特异性染色结果显示,β-半乳糖苷酶阳性产物定位在生精细胞质中。衰老模型组β-半乳糖苷酶阳性率明显高于正常对照组(P<0.01);何首乌饮含药血清干预后,与衰老模型组相比,何首乌饮组阳性率明显降低(P<0.01)。3.Western blot检测结果Western blot检测生精细胞IRS1、IGF-1、IGFBP3蛋白表达结果显示,与正常对照组相比,衰老模型组IRS1、IGF-1表达下调,IGFBP3表达上调(P<0.01),何首乌饮含药血清干预后,与衰老模型组相比,何首乌饮组IRS1、IGF-1表达上调,IGFBP3表达下调(P<0.01)。4.qRT-PCR检测结果qRT-PCR检测生精细胞IRS1、IGF-1、IGFBP3在mRNA水平的改变,与正常对照组相比,衰老模型组IRS1、IGF-1的表达明显下调(P<0.01),IGFBP3的表达上调(P<0.01);何首乌饮含药血清干预以后,与衰老模型组相比较,IRS1、IGF-1的表达明显上调(P<0.01),IGFBP3的表达有所下调(P<0.01)。结论:1.何首乌饮可以通过提高衰老大鼠睾丸组织胰岛素通路关键基因IRS1、IGF-1的表达,抑制IGFBP3的表达,延缓大鼠睾丸组织的衰老。2.何首乌饮能够降低衰老标志物β-半乳糖苷酶在生精细胞的表达。3.何首乌饮可以通过促进生精细胞胰岛素通路关键基因IRS1、IGF-1的表达,抑制IGFBP3的表达,延缓大鼠生精细胞的衰老。综上所述,何首乌饮通过调节胰岛素信号通路关键基因IRS1、IGF-1、IGFBP3的表达延缓大鼠睾丸组织生精细胞的衰老。(本文来源于《河北大学》期刊2017-05-01）
王建明,孙静,齐峰,宋庆亮,牛嗣云[10]（2017）在《何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响》一文中研究指出目的探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)蛋白表达的变化。方法选用10~20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集。采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型。实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组。结果衰老模型组Leydig细胞St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P<0.01)。另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P<0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组。结论何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞St AR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老。(本文来源于《解剖学报》期刊2017年01期）
何首乌饮论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨何首乌饮抑制生精细胞凋亡的Cytc/Apaf-1/Caspase9/Caspase3通路作用机制。方法:1.运用组合酶法以及差异贴壁法分离、纯化培养细胞,采用苏丹IV染色法鉴定支持细胞,通过检测α6-integrin和β1-integrin鉴定精原干细胞,运用HE染色法和碱性磷酸酶染色法对生精细胞进行鉴定。2.运用自由基氧化损伤方法建立生精细胞衰老模型,检测SA-β-gal活性来鉴定生精细胞衰老模型是否成功建立,采用流式技术检测各组生精细胞的凋亡情况。3.运用免疫荧光技术检测Cy3表达,筛选si RNA最佳转染时间。运用Western blot技术和RT-q PCR技术检测3段不同序列si RNA干扰后生精细胞中Apaf-1表达水平,从中筛选最佳干扰序列。依据实验目的分为正常对照组、衰老组、NC-si RNA转染组、何首乌饮组、Apaf-1-si RNA干扰组、共孵育组(何首乌饮+Apaf-1-si RNA)。4.运用Western blot技术、免疫荧光技术、RT-q PCR技术分别检测线粒体信号传导通路关键基因Cytc、Caspase9、Caspase3的表达。5.检测各实验组生精细胞的线粒体膜电位。结果:1.苏丹IV染色结果显示支持细胞纯度达到90%。2.衰老组SA-β-gal活性高于正常组,何首乌饮干预后现象逆转,表明生精细胞衰老模型成功建立。生精细胞凋亡检测趋势与其一致。3.Apaf-1-si RNA筛选Western blot技术和RT-q PCR检测结果显示si RNA3干扰组Apaf-1 m RNA和蛋白表达量低于其余干扰组(P<0.05),因此确认si RNA3为最佳干扰序列。4.何首乌饮对Cytc、Caspase9、Caspase3调控作用各组细胞Cyt-c表达水平:Western blot检测蛋白表达水平:衰老组蛋白表达高于正常对照组(P<0.05),何首乌饮组和共孵育组蛋白表达低于衰老组(P<0.05)。NC-si RNA转染组、Apaf-1-si RNA干扰组与衰老组比较均没有统计学意义(P>0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,何首乌饮组和共孵育组蛋白表达降低(P<0.05)。何首乌饮组与共孵育组相比较无统计学意义(P>0.05),其表达趋势与免疫荧光技术检测趋势一致。RT-q PCR技术检测m RNA表达水平:衰老组m RNA表达高于正常对照组(P<0.05)。何首乌饮组和共孵育组m RNA表达低于衰老组(P<0.05)。NC-si RNA转染组、Apaf-1-si RNA干扰组与衰老组相比较均无统计学意义(P>0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,何首乌饮组和共孵育组表达降低(P<0.05)。何首乌饮组与共孵育组比较无统计学意义(P>0.05)。各组细胞Caspase9、Caspase3表达水平Western blot检测蛋白表达水平:衰老组Caspase9、Caspase3蛋白表达高于正常对照组(P<0.05)。NC-si RNA转染组与衰老组Caspase9、Caspase3蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。何首乌饮组,Apaf-1-si RNA干扰组及共孵育组Caspase9、Caspase3表达低于衰老组(P<0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,共孵育组Caspase9、Caspase3蛋白表达降低(P<0.05),何首乌饮组与Apaf-1-si RNA干扰组Caspase9、Caspase3蛋白表达无统计学意义(P>0.05),免疫荧光技术检测所得结果与其一致。RT-q PCR检测m RNA表达水平:衰老组Caspase9、Caspase3 m RNA表达高于正常对照组(P<0.05)。NC-si RNA转染组与衰老组Caspase9、Caspase3表达水平比较无统计学意义(P>0.05)。何首乌饮组,Apaf-1-si RNA干扰组和共孵育组Caspase9、Caspase3 m RNA表达低于衰老组(P<0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,共孵育组Caspase9、Caspase3 m RNA表达水平降低(P<0.05)。何首乌饮组与Apaf-1-si RNA干扰组Caspase9、Caspase3 m RNA表达量无统计学意义(P>0.05)。5.线粒体膜电位检测结果与正常对照组比较,衰老组线粒体膜电位降低(P<0.05)。与衰老组比较,何首乌饮组和共孵育组膜电位升高(P<0.05)。NC-si RNA转染组、Apaf-1-si RNA干扰组与衰老组比较均无统计学意义(P>0.05)。与Apaf-1-si RNA干扰组比较,共孵育组和何首乌饮组线粒体膜电位上调(P<0.05)。结论:何首乌饮可通过Cytc/Apaf-1/Caspase9/Caspase3途径抑制生精细胞凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
何首乌饮论文参考文献
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