导读:本文包含了海因氧化酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:地衣芽孢杆菌,克隆,鉴定,表达
海因氧化酶论文文献综述
佘雪莲[1]（2009）在《芽孢杆菌MV0658海因氧化酶基因B的克隆及表达研究》一文中研究指出以本实验室保存的一株地衣芽孢杆菌MV0658的染色体DNA为模板,设计一对引物,通过PCR方法,获得一段与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein B基因相同的特异性扩增主带。分离纯化后,与pUC19载体通过T4 DNA连接酶平端连接,CaCl2转化法转化大肠杆菌(E.coli)JM109。经α-互补实验筛选出阳性菌落,通过对重组菌株的质粒分离纯化,限制性酶酶切和测序等一系列鉴定实验,得到六个重组质粒,分别命名为pMV1000- pMV1005,均含有地衣芽孢杆菌Hydantoin utilization protein B的PCR扩增片段。其中,pMV1000与pMV1001为正向插入,pMV1002、pMV1003、pMV1004为反向插入。我们将重组子pMV1000进行测序,并把克隆到的基因片段命名为海因氧化酶(Hyu_Q)。用测序后的序列在NCBI的GenBank中搜索,采用Blast、ClustalW软件进行核苷酸序列、氨基酸序列分析及同源性比较。结果表明该基因全长1740bp,编码579个氨基酸,G+C含量为51.72%,理论分子量为63KD,理论等电点为5.49,其中疏水性氨基酸占35.8%。将目的片段从pMV1000中分离出来,与表达载体pET28a连接后转化大肠杆菌Rostta,经过菌落PCR验证和一系列酶切鉴定实验,表明重组质粒pMV1006中含有PCR扩增片段,且为正向插入。加入IPTG进行诱导表达,得到预期大小的Hyu_Q基因表达蛋白。将Hyu_Q核苷酸序列与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein B核苷酸序列进行同源性比对,发现在Hyu_Q核苷酸序列的1740bp中有8个核苷酸发生改变,其中5个核苷酸发生转换,3个核苷酸发生颠换,两个序列相同性达99%;又将Hyu_Q推测的氨基酸序列与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein B(YP_079153.1)氨基酸序列进行同源性比对,发现在Hyu_Q推测的氨基酸序列中有6个位置发生了改变,序列相同性达99%。利用生物信息学软件对Hyu_Q推测的氨基酸进行结构分析及功能预测,结果表明在64-72位, 293-299位, 339-343位,411-417位氨基酸处有4个较明显的疏水性区域;在第22、76、540和570个氨基酸处有较强的形成α螺旋的倾向,在第55、265、380和468个氨基酸处有较强的形成β折叠片的倾向,有较多随机螺旋结构;Hyu_Q推测的氨基酸序列无N端信号肽,不形成跨膜结构;并对其氨基酸进行了叁级结构的预测。(本文来源于《四川师范大学》期刊2009-04-01）
王金静[2]（2008）在《地衣芽孢杆菌海因氧化酶基因的克隆及表达研究》一文中研究指出以本实验室保存的一株地衣芽孢杆菌MR1229的染色体DNA为模板,设计一对引物,通过PCR方法,获得一段与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein A的特异性扩增主带。分离纯化后,与pGM-T载体通过T4 DNA连接酶平端连接,高频转化法转化大肠杆菌(E.coli)JM109。经α-互补实验筛选出阳性菌落,通过对重组菌株的质粒分离纯化,限制性酶PstⅠ单酶消化,测序等一系列鉴定实验,表明重组质粒pMH-2中含有地衣芽孢杆菌Hydantoin utilization protein A的PCR扩增片段。我们将克隆到的基因片段命名为海因氧化酶(Hyu_O)。将Hyu_O进行测序,测序后的序列在NCBI的GenBank中搜索,采用Blast、ClustalW软件进行核苷酸序列、氨基酸序列分析及同源性比较。结果表明Hyu_O全长2106bp,编码701个氨基酸,G+C含量为49.85%,理论分子量为76.7KD,理论等电点为5.24,其中疏水性氨基酸占46.6%。将Hyu_O核苷酸序列与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein A核苷酸序列比对,发现有7个核苷酸发生改变,其中5个核苷酸发生转换,2个核苷酸发生颠换,两个序列相似性达99%;将Hyu_O氨基酸序列与Bacillus lichenformis ATCC14580中hypothetical protein BLio1982氨基酸序列比对,有叁个氨基酸发生改变,一处由苯丙氨酸变为亮氨酸,一处由苏氨酸变为异亮氨酸,一处由丝氨酸变为苏氨酸,两序列同源性为99%。根据NCBI上保守区预测,Hyu_O含有一个完整的海因氧化酶。其中含有叁个功能区域:第一个区域为第9-188个氨基酸(Hydan_A_N),该区域为海因酶/氧脯氨酸酶的N-末端区域;第二个区域为第209-494个氨基酸(Hydantoinase_A),海因酶/氧脯氨酸酶,这个家族包含海因酶和氧脯氨酸酶(EC 3.5.2.9),所有的反应是通过内部的酰亚胺水解而引起的5-元环的水解;第叁个区域为第6-687个氨基酸(HyuA),N-甲脲乙醇酸酐天门冬氨酰酶A/丙酮羧化酶,β-亚基,参与氨基酸转运和代谢、次级代谢产物的转运和分解。利用生物信息学对Hyu_O氨基酸进行结构分析及功能预测,结果表明在160-170位,470-480位氨基酸处有两个较明显的疏水性区域;在第55、510和第570个氨基酸处有较强的形成α螺旋的倾向,在第170、330和380个氨基酸处有较强的形成β折叠片的倾向,有随机螺旋结构;在第510-530个氨基酸处有卷曲螺旋出现;Hyu_O基因无N端信号肽,不形成跨膜结构。(本文来源于《四川师范大学》期刊2008-04-01）
海因氧化酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以本实验室保存的一株地衣芽孢杆菌MR1229的染色体DNA为模板,设计一对引物,通过PCR方法,获得一段与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein A的特异性扩增主带。分离纯化后,与pGM-T载体通过T4 DNA连接酶平端连接,高频转化法转化大肠杆菌(E.coli)JM109。经α-互补实验筛选出阳性菌落,通过对重组菌株的质粒分离纯化,限制性酶PstⅠ单酶消化,测序等一系列鉴定实验,表明重组质粒pMH-2中含有地衣芽孢杆菌Hydantoin utilization protein A的PCR扩增片段。我们将克隆到的基因片段命名为海因氧化酶(Hyu_O)。将Hyu_O进行测序,测序后的序列在NCBI的GenBank中搜索,采用Blast、ClustalW软件进行核苷酸序列、氨基酸序列分析及同源性比较。结果表明Hyu_O全长2106bp,编码701个氨基酸,G+C含量为49.85%,理论分子量为76.7KD,理论等电点为5.24,其中疏水性氨基酸占46.6%。将Hyu_O核苷酸序列与Bacillus lichenformis ATCC14580中Hydantoin utilization protein A核苷酸序列比对,发现有7个核苷酸发生改变,其中5个核苷酸发生转换,2个核苷酸发生颠换,两个序列相似性达99%;将Hyu_O氨基酸序列与Bacillus lichenformis ATCC14580中hypothetical protein BLio1982氨基酸序列比对,有叁个氨基酸发生改变,一处由苯丙氨酸变为亮氨酸,一处由苏氨酸变为异亮氨酸,一处由丝氨酸变为苏氨酸,两序列同源性为99%。根据NCBI上保守区预测,Hyu_O含有一个完整的海因氧化酶。其中含有叁个功能区域:第一个区域为第9-188个氨基酸(Hydan_A_N),该区域为海因酶/氧脯氨酸酶的N-末端区域;第二个区域为第209-494个氨基酸(Hydantoinase_A),海因酶/氧脯氨酸酶,这个家族包含海因酶和氧脯氨酸酶(EC 3.5.2.9),所有的反应是通过内部的酰亚胺水解而引起的5-元环的水解;第叁个区域为第6-687个氨基酸(HyuA),N-甲脲乙醇酸酐天门冬氨酰酶A/丙酮羧化酶,β-亚基,参与氨基酸转运和代谢、次级代谢产物的转运和分解。利用生物信息学对Hyu_O氨基酸进行结构分析及功能预测,结果表明在160-170位,470-480位氨基酸处有两个较明显的疏水性区域;在第55、510和第570个氨基酸处有较强的形成α螺旋的倾向,在第170、330和380个氨基酸处有较强的形成β折叠片的倾向,有随机螺旋结构;在第510-530个氨基酸处有卷曲螺旋出现;Hyu_O基因无N端信号肽,不形成跨膜结构。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
海因氧化酶论文参考文献
[1].佘雪莲.芽孢杆菌MV0658海因氧化酶基因B的克隆及表达研究[D].四川师范大学.2009
[2].王金静.地衣芽孢杆菌海因氧化酶基因的克隆及表达研究[D].四川师范大学.2008