导读:本文包含了器官样培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:角质形成细胞,器官样培养,气-液交界面液培养,筏式培养
器官样培养论文文献综述
焦建丽[1]（2009）在《体外角质形成细胞（HaCaT）的器官样（气—液交界面）培养》一文中研究指出目的:角质形成细胞体外培养技术的建立至今已有30年的历史。从液体浸没培养到空气-液体交界面培养;从单层细胞培养到复层器官样培养及器官培养,形成了多种培养模型可供实验研究和临床应用。随着培养技术和皮片鉴定技术的进步,目前国外已将体外培养皮肤器官成功应用在构建病毒质粒转染角质形成细胞模型,某些特定皮肤病发病机制及治疗,病理性皮肤角质形成细胞等众多科研方面。部分组织工程皮肤产品已取得美国食品与药物管理局的许可而应用于临床,如:无活性的双层人工皮肤代表:Integra,有活性的双层皮肤替代物:Apligraf,另外还有Transcyte,Allodem等[1-3]。但在国内相关报道中,虽然也有学者连小华等也将小鼠皮肤皮块直接进行气-液交界面的培养,并对皮块分化和分层的微环境进行了一定的探讨和研究,角质形成细胞的器官样培养仍为少数。本实验将永生化的角质形成细胞(HaCaT)接种于铺有鼠尾胶原的TransWell培养板套皿,进行气-液交界面的培养,并用HE染色、免疫组化、流式细胞仪对所培养物进行鉴定,以明确其分化情况。进而为体外皮肤器官模型的培养提供一定的实验和理论基础。方法:人角质形成细胞的浸没培养:将冻存HaCaT细胞从液氮中取出,投入37℃的水浴中,并轻轻晃动冻存管,使细胞能尽快融化。将细胞重悬于DMEM完全培养基中,置于37℃、5%CO2温箱中培养,每1-2天更换培养基。当角质形成细胞达到75%融合时,加入0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA消化液,37℃孵箱中消化10分钟,按照1∶3的比例进行传代。人角质形成细胞的器官样培养:将I型鼠尾胶原蛋白制备成PH值为7,浓度为1mg/ml的叁维胶原。将其均匀涂至Transwell培养板套皿的各个膜上,并在使用前将培养板套皿在37℃孵箱中至少放置1小时。将浸没式培养的角质形成细胞接种于Transwell培养板套皿的膜上,培养数天至细胞生长至融合状态。当细胞生长至融合状态,弃掉DMEM培养基,使细胞处于气-液交界面上。从培养板套皿底部加DMEM/F12培养基,并将细胞培养不同的时间[4-5]。皮肤器官模型HE染色和免疫组化的鉴定:将Transwell培养板套皿中生长至2,3,4周(从细胞上升到气-液交界面诱导分化开始算起)的细胞分别取出,常规甲醛固定,石蜡包埋。所有标本均切为5μm厚的切片,并进行常规HE染色和免疫组化鉴定。器官样培养模型流式细胞仪的鉴定:将培养板套皿中生长至四周(从细胞上升到气-液交界面诱导分化开始算起)的细胞收集,PBS洗涤3次后制备成单个细胞,75%酒精固定,流式细胞仪检测。结果:1.角质形成细胞浸没式培养的形态学观察:角质形成细胞复苏后接种后到普通培养瓶中,光镜下观察,第1-2天为缓慢生长期,第3-4天细胞开始加速生长,第5-6天为对数生长期,细胞快速生长,第6天以后又转为缓慢生长,为细胞平台期。细胞约7天左右可融合成片,铺满整个瓶底。2.角质形成细胞器官样培养的形态学观察:使细胞处于气液交界面上并生长不同的时间,于光镜下观察。当细胞生长至接种后两周(从细胞上升到气-液交界面诱导分化开始算起),光镜下可见角质形成细胞铺满整个培养板套皿的膜,多数细胞为叁角形或多角形的结构,彼此衔接成铺路石样状态。部分区域角质形成细胞层结构变得复杂,表现为单层角质形成细胞层上面一些细胞相连成条索状结构,这便是所谓的复层细胞。细胞生长至第3周,光镜下部分区域的细胞出现更多的层次。细胞生长至第4周,光镜下部分细胞开始脱落。3.器官样培养的角质形成细胞HE染色观察:将在Transwell培养版中生长至2周,3周,4周(从细胞处于气-液交界面算起)的细胞分别常规做HE染色,光学显微镜下观察。2周的角质形成细胞大部分区域为单层结构,部分区域出现双层结构。3周的角质形成细胞大部分区域为双层结构。4周的角质形成细胞部分区域出现叁层结构。4.器官样培养的角质形成细胞免疫组化结果:将培养基液面下降使角质形成细胞处于气-液交界面上诱导分化并培养至2周,3周,4周的细胞连同高分子膜一块做免疫组化。结果显示:培养至2周,3周的角质形成细胞均未表达角蛋白10。培养至4周的角质形成细胞部分区域出现叁层细胞,最上面一层细胞表达了角蛋白10。5.器官样培养的角质形成细胞流式细胞仪检测结果:将培养基液面下降使角质形成细胞处于气-液交界面上诱导分化并培养至4周的细胞收集,所有细胞分为了叁份,一号管为空白管(一抗和二抗均未加),也即阴性对照管。二号管为对照管(只加二抗),也即阳性对照管。叁号管为试验管(加了一抗和二抗)。结果显示:一号管中阳性着色最低,数值最小;二号管中阳性着色居中,数值居中;此管显示的是非特异性着色。叁号管阳性着色最高,数值最大,充分说明部分细胞表达了角蛋白10。结论:1.将永生化的角质形成细胞(HaCaT)利用特殊的培养板套皿(TransWell培养板)进行气-液交界面培养,使其模拟在体的生长环境,细胞生长至一定时间可以进行分化和分层。2.DMEM/F12(叁份DMEM,一份F12)混合培养基更能促进角质形成细胞的贴壁并进行分化和分层,培养基中适当的添加因子和合适的钙离子浓度都对细胞的分化起了至关重要的作用。3.与在体的生长周期大体一致,角质形成细胞在气-液交界面上生长至2周,大部区域出现复层结构,生长至4周,表面部分细胞开始出现凋亡现象,这与在体状态的角质形成细胞生长状态基本一致。(本文来源于《河北医科大学》期刊2009-03-01）
聂祝湘,刘荣卿,叶庆佾,唐书谦,钟白玉[2]（1995）在《培养人表皮器官样结构的光镜及电镜观察》一文中研究指出培养的人角朊细胞在正常钙（１．２ｍｍｏｌ／Ｌ）或高钙条件下，达融合后即开始层化，一定时间后可生长至８～１０层［１，２］，成为表皮器官样结构。我们采用原位包埋、垂直切片的方法，对培养的表皮细胞进行了光镜和透射电镜观察，现报道如下。一、资料和方法１．表皮细(本文来源于《中华皮肤科杂志》期刊1995年06期）
器官样培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
培养的人角朊细胞在正常钙（１．２ｍｍｏｌ／Ｌ）或高钙条件下，达融合后即开始层化，一定时间后可生长至８～１０层［１，２］，成为表皮器官样结构。我们采用原位包埋、垂直切片的方法，对培养的表皮细胞进行了光镜和透射电镜观察，现报道如下。一、资料和方法１．表皮细
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
器官样培养论文参考文献
[1].焦建丽.体外角质形成细胞（HaCaT）的器官样（气—液交界面）培养[D].河北医科大学.2009
[2].聂祝湘,刘荣卿,叶庆佾,唐书谦,钟白玉.培养人表皮器官样结构的光镜及电镜观察[J].中华皮肤科杂志.1995