本文主要研究内容
作者郭望（2019）在《利用BmNPV Bac-to-Bac系统在家蚕体内表达狂犬病毒M蛋白及抗体制备》一文中研究指出：杆状病毒表达载体系统(Baculovirus Expression Vector System,BEVS)是将外源目的基因导入杆状病毒基因组,获得重组病毒,然后以此作为载体感染昆虫幼虫或其培养细胞。Bac-to-Bac表达系统通过位点特异性转座,在大肠杆菌内完成杆状病毒基因组的重组。BmNPV Bac-to-Bac杆状病毒表达系统由于能够以家蚕为载体大量表达外源蛋白,且省时省力,是制备生物活性蛋白的优良选择。狂犬病毒(Rabies Virus,RV)M基因ORF为609个核苷酸,编码202个氨基酸残基的基质蛋白,分子量约25 KD,其在子代病毒的装配、出芽和形态形成中起重要作用。本研究利用BmNPV Bac-to-Bac表达系统表达了重组的RVM(rRV-M)蛋白,将纯化的rRV-M蛋白作为抗原免疫小鼠,对制备出的血清抗体进行间接ELISA效价测定。本研究结果可以为RVM蛋白的功能探索提供抗原和抗体来源,也能为家蚕生物反应器的开发利用提供参考。研究的具体内容及结果如下:1、通过将RV M基因的ORF定向克隆到供体质粒pFastBacHTA上,构建重组供体质粒pFastBacHTA-M;然后转化至含有BmNPV Bacmid的大肠杆菌DH10BmBac,在辅助载体表达的转座酶作用下,RVM基因转座并插入到Bacmid DNA中,由多角体蛋白基因启动子控制其转录与表达。最后将重组杆粒rBacmid-M与脂质体混合注射五龄起蚕,得到重组杆状病毒rBmNPV-M。2、采集rBmNPV-M病毒感染的家蚕血淋巴细胞进行间接免疫荧光试验,结果显示,rBmNPV-M感染的血淋巴细胞发出特异性的亮绿色荧光,荧光集中分布在细胞质膜周围。对家蚕的血淋巴和脂肪体进行Western-blot试验,鉴定rRV-M蛋白在蚕体内的表达情况,结果显示,rRV-M蛋白在家蚕体内获得大量表达,重组蛋白的相对分子量约为25 KD。3、通过镍离子亲和层析从蚕体中纯化表达的rRV-M蛋白,纯化的蛋白条带单一,纯度良好。纯化的rRV-M蛋白与弗氏佐剂混合,以此为抗原免疫小鼠并分离血清得到多克隆抗体,对血清抗体进行间接ELISA效价测定,效价为1:2560。
Abstract
gan zhuang bing du biao da zai ti ji tong (Baculovirus Expression Vector System,BEVS)shi jiang wai yuan mu de ji yin dao ru gan zhuang bing du ji yin zu ,huo de chong zu bing du ,ran hou yi ci zuo wei zai ti gan ran kun chong you chong huo ji pei yang xi bao 。Bac-to-Bacbiao da ji tong tong guo wei dian te yi xing zhuai zuo ,zai da chang gan jun nei wan cheng gan zhuang bing du ji yin zu de chong zu 。BmNPV Bac-to-Bacgan zhuang bing du biao da ji tong you yu neng gou yi jia can wei zai ti da liang biao da wai yuan dan bai ,ju sheng shi sheng li ,shi zhi bei sheng wu huo xing dan bai de you liang shua ze 。kuang quan bing du (Rabies Virus,RV)Mji yin ORFwei 609ge he gan suan ,bian ma 202ge an ji suan can ji de ji zhi dan bai ,fen zi liang yao 25 KD,ji zai zi dai bing du de zhuang pei 、chu ya he xing tai xing cheng zhong qi chong yao zuo yong 。ben yan jiu li yong BmNPV Bac-to-Bacbiao da ji tong biao da le chong zu de RVM(rRV-M)dan bai ,jiang chun hua de rRV-Mdan bai zuo wei kang yuan mian yi xiao shu ,dui zhi bei chu de xie qing kang ti jin hang jian jie ELISAxiao jia ce ding 。ben yan jiu jie guo ke yi wei RVMdan bai de gong neng tan suo di gong kang yuan he kang ti lai yuan ,ye neng wei jia can sheng wu fan ying qi de kai fa li yong di gong can kao 。yan jiu de ju ti nei rong ji jie guo ru xia :1、tong guo jiang RV Mji yin de ORFding xiang ke long dao gong ti zhi li pFastBacHTAshang ,gou jian chong zu gong ti zhi li pFastBacHTA-M;ran hou zhuai hua zhi han you BmNPV Bacmidde da chang gan jun DH10BmBac,zai fu zhu zai ti biao da de zhuai zuo mei zuo yong xia ,RVMji yin zhuai zuo bing cha ru dao Bacmid DNAzhong ,you duo jiao ti dan bai ji yin qi dong zi kong zhi ji zhuai lu yu biao da 。zui hou jiang chong zu gan li rBacmid-Myu zhi zhi ti hun ge zhu she wu ling qi can ,de dao chong zu gan zhuang bing du rBmNPV-M。2、cai ji rBmNPV-Mbing du gan ran de jia can xie lin ba xi bao jin hang jian jie mian yi ying guang shi yan ,jie guo xian shi ,rBmNPV-Mgan ran de xie lin ba xi bao fa chu te yi xing de liang lu se ying guang ,ying guang ji zhong fen bu zai xi bao zhi mo zhou wei 。dui jia can de xie lin ba he zhi fang ti jin hang Western-blotshi yan ,jian ding rRV-Mdan bai zai can ti nei de biao da qing kuang ,jie guo xian shi ,rRV-Mdan bai zai jia can ti nei huo de da liang biao da ,chong zu dan bai de xiang dui fen zi liang yao wei 25 KD。3、tong guo nie li zi qin he ceng xi cong can ti zhong chun hua biao da de rRV-Mdan bai ,chun hua de dan bai tiao dai chan yi ,chun du liang hao 。chun hua de rRV-Mdan bai yu fu shi zuo ji hun ge ,yi ci wei kang yuan mian yi xiao shu bing fen li xie qing de dao duo ke long kang ti ,dui xie qing kang ti jin hang jian jie ELISAxiao jia ce ding ,xiao jia wei 1:2560。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自广西大学的郭望，发表于刊物广西大学2019-10-14论文，是一篇关于杆状病毒表达系统论文,狂犬病毒蛋白论文,家蚕生物反应器论文,广西大学2019-10-14论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自广西大学2019-10-14论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。