导读:本文包含了内膜基质细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:奶牛,子宫内膜,基质细胞,原代培养优化
内膜基质细胞论文文献综述
张晴越,王亨,崔璐莹,陶璐瑶,李建基[1]（2019）在《奶牛子宫内膜基质细胞原代培养方法的改进与细胞鉴定》一文中研究指出为了优化奶牛子宫内膜基质细胞的分离培养方法,以提高奶牛子宫内膜基质细胞的培养效率和细胞纯度,试验采用常规胰蛋白酶和胶原酶交替消化过筛法分离细胞,在样本选择、消化酶配方和筛网孔径方面进行了优化改进并传代纯化,通过细胞形态学观察、细胞生长曲线、免疫组化鉴定进行细胞鉴别。结果表明:处于发情期的子宫样本采用0.25%胰蛋白酶和0.25%Ⅱ型胶原酶及0.15 g/L DNaseⅠ的次序消化,经大孔径筛网过筛后获得基质细胞,纯度较高,且细胞活力更好;采用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA传代消化可缩短传代时间;基质细胞贴壁后呈长梭形和多角形两种形态;经免疫组化鉴定该细胞具有波形蛋白免疫反应性,与子宫内膜切片中波形蛋白组织化学结果一致,表明其为来源于内膜基质层的基质细胞。奶牛子宫内膜基质细胞生长曲线呈"S"型,符合细胞生长的规律。说明优化培养方法后可更便捷、高效地分离培养较高纯度的奶牛子宫内膜基质细胞。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年18期）
王莉,侯俐,王海燕[2]（2019）在《叶酸缺乏孕鼠子宫内膜基因组甲基化模式改变及对基质细胞蜕膜化的抑制作用研究》一文中研究指出目的研究叶酸缺乏孕鼠子宫内膜基因组甲基化模式改变及对基质细胞蜕膜化的抑制作用。方法取30只性成熟SPF级小鼠,随机分为两组,实验组(15只)小鼠采用无叶酸饲料喂养,对照组(15只)小鼠给予正常饮食,均喂养4周。通过电化学发光法对小鼠血清叶酸含量进行检测,建立小鼠正常妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型,检测子宫内膜蜕膜化的情况。通过免疫荧光法对蜕膜化分子标志物Desmin蛋白的表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对小鼠dt PRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量进行检测。通过简化代表性亚硫酸氢盐测序法检测小鼠基因组甲基化模式。结果实验组小鼠血浆叶酸水平较对照组的水平明显下降(P <0. 01)。实验组小鼠蜕膜鼓包数目少于对照组,直径小于对照组(P <0. 05)。实验组小鼠人工诱导蜕膜化造模成功率仅为33. 33%(3/15),而对照组人工诱导蜕膜化成功率为100. 00%(15/15);诱导一侧宫角湿重轻于对照组(P <0. 01);经HE染色结果可见实验组小鼠无明显变化,而对照组小鼠诱导侧体积增大,且出现双核或多核的蜕膜细胞。实时荧光定量PCR法检测结果发现,实验组小鼠经人工诱导蜕膜化后,其蜕膜化分子标志物dt PRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量明显低于对照组(P <0. 01)。体外功能实验结果发现,经激素作用3 d后,实验组小鼠基质细胞仍呈现成纤维细胞样,而对照组小鼠基质细胞形态改变,即由长梭形变为多角形,细胞增大明显。实时荧光定量PCR法检测结果发现,经激素诱导后,实验组小鼠基质细胞中dt PRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量明显低于对照组(P <0. 01)。经简化代表性亚硫酸氢盐测序法检测结果发现,甲基化胞嘧啶mC多数处在启动子区或CpG岛(CGI)中的CG位点,部分mC处在非CG位点,即mCHG与m CHH(H代表T、C或A)。两组小鼠在妊娠第6～7天时不同类型m C分布比较并无显着差异;妊娠第8天时,实验组小鼠mCG在启动子区与CGI中的比率明显高于对照组,而mCHH在启动子区与CGI中的比率低于对照组。结论叶酸缺乏不仅可阻滞小鼠子宫内膜基质细胞的蜕膜化进程,而且可改变子宫内膜基因组甲基化模式,如各类型的mC分布与平均甲基化水平等,进一步对关键基因的表达及功能造成影响,提示叶酸缺乏可损害小鼠孕早期子宫内膜功能,这可能是叶酸缺乏抑制蜕膜化进程的潜在分子机制。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2019年11期）
张晴越[3]（2019）在《孕酮对山羊子宫内膜基质细胞增殖机制的影响研究》一文中研究指出产后子宫感染是奶牛常见的生殖疾病,导致子宫蓄脓、子宫炎或子宫内膜炎等,造成母牛淘汰率升高,对养殖业造成巨大经济损失。正常情况下母牛产后子宫在多种因素的调控下进行再生修复,以恢复正常的组织结构和生理功能。但产后子宫感染可延迟奶牛子宫内膜的恢复,导致子宫复旧延迟。大肠杆菌(Escherichia coli,E.Coli)是导致子宫感染的主要病原体之一,主要通过内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)发挥致病作用。孕酮作为重要的性激素,在奶牛发情与妊娠周期中发生动态变化,与雌激素共同调节子宫内膜的增殖与分化。孕酮水平升高可增加奶牛子宫感染风险。尽管有研究发现孕酮参与调节细胞增殖,但孕酮对子宫内膜细胞的影响报道较少。山羊与奶牛的生殖机制相似,经历类似的子宫修复过程。为揭示孕酮对子宫内膜修复的影响机制,本试验以山羊子宫内膜基质细胞(goat endometrial stromal cells,gESC)为研究对象,探索在LPS作用下孕酮对内膜基质细胞活力、细胞周期、细胞增殖相关因子和信号通路的影响。试验分为四组,空白对照组,细胞不做任何处理;LPS处理组,以1μg/mLLPS处理细胞;孕酮处理组,分别以1、3、5 ng/mL浓度的孕酮单独处理细胞;孕酮与LPS共处理组,分别以1、3、5ng/mL浓度的孕酮与1 μg/mLLPS共处理细胞。试验结果如下:(1)孕酮对gESC细胞增殖与细胞周期的影响:用上述方法处理细胞24 h,通过CCK-8和流式细胞术分别测量细胞活力和细胞周期。结果显示:不同浓度孕酮处理组或LPS组,其细胞增殖活力均上调(p<0.01);与LPS组相比,不同浓度孕酮与LPS共处理组的细胞增殖均下降p<0.01)。不同浓度孕酮处理gESC,其S期细胞数目均上升(p<0.01),细胞增殖指数(PI)均升高(p<0.01),其中3 ng/mL或5 ng/mL孕酮处理增加了 G0/G1期的细胞数量(p<0.05);LPS组细胞的G0/G1期下调,S期的细胞数量增加(p<0.01),细胞PI上调(p<0.01)。与LPS组相比,采用不同浓度孕酮与LPS共处理gESC,其G0/G1期的细胞数量均升高(p<0.01),S期细胞数量减少(p<0.01),PI下调(p<0.01)。因此,单纯孕酮处理或LPS处理均可促进子宫内膜基质细胞的细胞周期向S期发展,使细胞整体增殖水平升高;孕酮可抑制LPS诱导的细胞增殖和细胞周期发展,使细胞阻滞于G0/G1期。(2)孕酮对gESC修复相关基因表达的影响:采用上述方法处理细胞,于3、12和18 h后检测PR、VEGF、EGFR、Cx-43和b-FGF的mRNA表达量。结果显示:不同浓度孕酮处理组上述各增殖因子的mRNA表达量均升高,处理3 h其mRNA表达量较其它时间点增加明显(p<0.01)。LPS组,除18h时EGFR mRNA表达量无显着变化外(p>0.05),在其它时间点的其它增殖因子的mRNA表达量均升高(p<0.05)。与LPS组相比,孕酮与LPS共处理组在3h时PR、VEGF、EGFR和b-FGF的mRNA表达均降低(p<0.05);在12h 时 EGFR、Cx-43 和 b-FGF mRNA 表达量均下降(p<0.01);在 18h 时,PR、VEGF和Cx-43 mRNA表达均下降(p<0.01)。因此,单纯孕酮处理或LPS处理可上调PR、VEGF、EGFR、Cx-43 和 b-FGF 的 mRNA 表达;孕酮可抑制 LPS 诱导的 PR、VEGF、EGFR、Cx-43和b-FGF的mRNA表达。(3)孕酮对gESC增殖相关信号通路的影响:采用上述方法处理细胞30 min,采用Westernblot检测β-catenin、c-Myc和cyclin-D1的蛋白表达,以及PI3K/Akt通路的磷酸化水平;通过免疫荧光检测β-catenin入核情况。结果显示:在单纯孕酮处理组,β-catenin和cyclin-D1的蛋白表达显着升高(p<0.05);11ng/mL或3 ng/mL孕酮处理组c-Myc蛋白表达上调(p<0.05);3ng/mL或5ng/mL孕酮处理组的Akt磷酸化水平升高(p<0.05);不同浓度孕酮处理组的PI3K磷酸化水平显着上升(p<0.01)。LPS组的β-catenin、c-Myc和cyclin-D1表达量升高(p<0.05),β-catenin入核增多;Akt和PI3K磷酸化水平升高(p<0.05)。与LPS组相比,不同浓度孕酮与LPS共处理组的β-catenin蛋白表达均下降(p<0.01),β-catenin入核减少;5 ng/mL孕酮与LPS共处理组的cyclin-D1表达量下降(p<0.01);1 ng/mL或3ng/mL孕酮与LPS共处理后,c-Myc表达量下降(p<0.05)。孕酮与LPS共处理组的Akt和PI3K磷酸化水平均下降(p<0.05)。由此可见,单纯孕酮处理或LPS处理可激活Wnt/β-catenin 和 PI3K/Akt 通路;孕酮可抑制 LPS 激活的 Wnt/β-catenin 和 PI3K/Akt 通路。综上所述,孕酮或LPS单独处理gESC,可促进细胞增殖和细胞周期进程,促进细胞各种修复相关因子的表达和增殖相关通路的激活。孕酮与LPS共处理细胞,可抑制LPS诱导的细胞增殖和细胞周期进程以及Wnt/β-catenin和PI3K/Akt通路的活化,下调PR、VEGF、EGFR、Cx-43和b-FGF的mRNA表达。因此,孕酮可抑制LPS诱导的细胞增殖效应,该效应可能通过Wnt/β-catenin和PI3K/Akt通路介导。(本文来源于《扬州大学》期刊2019-06-01）
王倩[4]（2019）在《组氨酸叁聚体核苷结合蛋白1（Hint1）在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用》一文中研究指出目的:胚胎植入,也可称胚胎着床,启动于囊胚和子宫上皮细胞发生黏附之后,成功的胚胎植入依赖于活化良好的囊胚和具有容受性的子宫之间的相互作用。随着胚胎黏附至子宫后,其周围的子宫内膜基质细胞进一步增殖并分化形成蜕膜细胞,为胚胎的发育提供合适的环境。据统计,约有20%的失败妊娠是由胚胎植入时蜕膜化进程异常而导致。因此,蜕膜化进程的正常进行对于妊娠的建立和维持至关重要。已有研究发现组氨酸叁聚体核苷结合蛋白1(Hint1)在基因转录途径和代谢的调节中起重要作用,但其在蜕膜化过程中的作用仍不清楚。为了探讨Hint1在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用。我们收集了昆明小鼠的正常妊娠、假孕和人工诱导蜕膜化的组织,采用免疫组化、Western blot、原位杂交和RT-qPCR的方法,探究Hint1在小鼠早期妊娠过程中的表达模式。分离并培养小鼠子宫内膜基质细胞,在体外诱导蜕膜化条件下siRNA干扰Hint1表达,采用Western blot、RT-qPCR和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)方法,探究Hint1对子宫内膜基质细胞蜕膜化的调控作用。方法:(1)应用免疫组化、原位杂交、Western blot和RT-qPCR检测Hint1在早期妊娠、假孕和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达。(2)siRNA敲低分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞中Hint1的表达,通过基质细胞体外功能试验检测Hint1对蜕膜化过程的影响。(3)LC-MS分析Hint1对基质细胞蜕膜化过程中脂质组学的影响。结果:(1)在妊娠的第一至第八天Hint1表达逐渐升高,且在胚胎植入部位的表达显着高于着床旁。(2)人工诱导蜕膜化模型的小鼠子宫内膜Hint1的表达显着高于未发生蜕膜化的对照子宫。(3)利用siRNA干扰小鼠子宫内膜基质细胞中Hint1的表达可显着影响体外诱导的蜕膜化过程及脂质代谢。结论:Hint1在基质细胞蜕膜化过程中表达升高,并可能与蜕膜化过程中基质细胞的脂质代谢相关。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
马景红,颜贺欣,李俊娇,单铁英,李伟[5]（2019）在《血管紧张素Ⅱ促进子宫内膜基质细胞的增殖并增强其活性的研究》一文中研究指出目的 探讨血管紧张素Ⅱ对子宫内膜组织中的基质细胞(ESCs)数量和分泌功能的影响。方法 刮取人正常子宫内膜组织并分离其基质细胞。将细胞分为正常组(只加培养液)和实验组[培养液和不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)],采用噻唑兰染色反映活细胞的数量;用酶联免疫法测出各组细胞悬液中Ⅰ型胶原和纤黏连蛋白的分泌情况。免疫印迹法比较各组细胞胞质中的金属基质蛋白酶9(MMP-9)和金属基质蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果 AngⅡ可以促进ESCs增殖,并呈剂量依赖性;使细胞分泌Ⅰ型蛋白(ColⅠ,0.741 2±0.052 1)和纤连蛋白(FN,0.723 6±0.032 8)的量增多,AngⅡ(10-5 mol/L)组细胞内MMP-9(0.397±0.047)含量明显减低,而TIMP-1(0.723±0.035)含量明显升高;与对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ能使子宫内膜ESCs增殖,并增加其活性。(本文来源于《职业与健康》期刊2019年08期）
Amira,Abdalla,AbdelShafi,Mohamed[6]（2019）在《脂多糖和玉米赤霉烯酮介导的内质网应激对山羊子宫内膜基质细胞的作用》一文中研究指出繁殖障碍,特别是怀孕早期胚胎丢失会造成严重的经济损失。导致早期胚胎丢失的原因很多,如环境中的细菌感染和玉米赤霉烯酮污染。脂多糖(LPS)是革兰式阴性菌的主要毒力因子,是由脂质和由O-抗原组成的多糖组成的大分子,外核和内核通过共价键连接。有证据表明LPS导致家畜流产。玉米赤霉烯酮(ZEA)是由一些镰刀菌属和赤霉属物种产生的一种的雌激素类似物,具有热稳定性,并且在世界范围内的许多谷类作物中发现了赤霉烯酮,例如玉米,大麦,燕麦,小麦,水稻和高粱。玉米赤霉烯酮已经被证明是主要的毒素,会导致不育、流产或其他繁殖问题。进一步揭示和分析LPS和ZEA对子宫内膜细胞作用的机制具有重要意义。据报道,有几个因素在胚胎着床阶段起着关键作用,包括激素、血管活性基因、细胞因子、生长因子和环境因素。然而,在胚胎植入过程中,胚胎植入前的发育和胚胎-子宫相互作用的分子途径仍不清楚。在本研究中,我们关注植入阶段并研究脂质多糖和玉米赤霉烯酮感染的山羊子宫内膜基质细胞(GESCs)的病理生理变化。LPS和/或ZEA用作影响细胞氧化应激的模型。1.内质网应激参与脂多糖诱导的山羊子宫内膜基质细胞的炎症反应和细胞凋亡内质网应激(ER)参与调节细胞代谢、细胞凋亡、自噬以及细胞存活。然而,对内质网应激是否参与LPS诱导的子宫细胞的凋亡以及细胞炎性因子分泌的作用还不够清楚。在本研究中,我们发现LPS诱导GESC的凋亡和炎性反应。LPS处理后会抑制细胞活力和细胞增殖。其次,与增殖相关的基因PCNA和MKI67也受到LPS的影响。此外,LPS处理GESCs增加了IL-1β和IL-8的分泌,促进MYD88、Caspase1和TRL4的表达。而4-苯基丁酸(4-PBA)预处理的细胞,会抑制LPS诱导的未折迭蛋白反应(UPR)相关蛋白表达和细胞炎性因子的分泌。然而,IRE1和ATF6的阻断并未显着减少LPS诱导的细胞凋亡和细胞炎性因子分泌。总的来说,在山羊子宫内膜基质细胞中,内质网应激参与LPS诱导的细胞凋亡并增加了细胞炎性因子的分泌。2.干扰IRE1抑制玉米赤霉烯酮诱导的山羊子宫内膜基质细胞的炎症反应和细胞凋亡玉米赤霉烯酮(ZEA)是由镰刀菌产生的广泛存在于环境中的雌激素样毒素。已经发现ZEA在雌性和雄性动物中均会引起生殖功能障碍,但其潜在的机制仍不清楚。本研究检测了低,中,高叁种不同浓度的ZEA对山羊子宫内膜基质细胞的增殖、凋亡、噬蛋白表达以及IL-1β和IL-8等细胞炎性因子的影响。流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot和ELISA法检测内质网应激相关蛋白表达和细胞炎性因子分泌。结果显示ZEA诱导细胞增殖并且低浓度和中浓度的ZEA会抑制细胞凋亡。高浓度的ZEA引起了山羊子宫内膜基质细胞的凋亡。另外,ZEA可以诱导ATF6,IRE1α,EIf-2α和ATF4等内质网应激蛋白的表达。自噬标志物LC3在所有ZEA浓度处理下表达均上调。低浓度ZEA处理抑制IL-1β和IL-8分泌,但在中浓度和高浓度的ZEA处理促进其分泌。干扰ERN1表达可以抑制自噬和内质网应激相关标志蛋白表达。这些结果表明ERN1途径可以降低山羊子宫内膜基质细胞中凋亡蛋白的表达,降低ERN1活性可以抑制内质网应激标志蛋白和LC3的表达。此外,干扰ERN1促进IL-1β和IL-8表达。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-04-01）
陈韶慧,李兆艾[7]（2019）在《人参皂苷Rg3促进子宫内膜异位基质细胞凋亡机制的研究》一文中研究指出子宫内膜异位症是临床常见的妇科疾病,占育龄期妇女20%～30%,目前的主要治疗方式是手术和激素类药物治疗,但是激素类药物的不良反应明显,术后复发率高。郎景和院士~([1])认为子宫内膜异位症的发病要经历黏附,侵袭,生长3A模式的过程,因此抑制子宫内膜黏附,血管生长,促进细胞凋亡成为治疗子宫内膜异位症的研究热点~([2])。人参皂苷Rg3是(本文来源于《中国药物与临床》期刊2019年05期）
骆晓荣[8]（2019）在《盐酸小檗碱对脂多糖诱导的人子宫内膜基质细胞炎症作用的研究》一文中研究指出目的:子宫内膜炎是病原微生物感染引起的子宫内膜炎性病变,其主要致病菌是常见菌,如大肠杆菌,链球菌,其次为支原体。盐酸小檗碱(Berberine,BBR)又名小檗碱,是一种异喹啉类生物碱,一直被认为是清热解毒和抗肠道细菌感染的传统良药。小檗碱治疗人子宫内膜炎的研究暂时还无相关报道,鉴于其广谱的抗菌作用,本实验通过建立体外人子宫内膜基质细胞炎症模型,检测小檗碱的治疗效果,并从分子层面研究BBR的抗炎机制。方法:本研究采用体外原代细胞培养,采用二次网筛法提取人子宫内膜基质细胞(hESCs),在此基础上建立脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的hESCs炎症模型。首先用CCK8法检测不同浓度梯度LPS和BBR在不同时间作用下对hESCs的促增殖作用,并用ELISA鉴定LPS诱导的炎症模型。为了研究BBR的体外抗炎效果,用ELISA方法检测炎性因子IL-1β、TNF-α的分泌,qRT-PCR方法检测炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平。并用qRT-PCR方法检测NF-κB经典炎性通路相关蛋白TLR4、IKKβ和NF-κB p65的mRNA表达,同时用Western-Blot方法检测NF-κB p65的蛋白表达。结果:CCK8法测得50μg/mL LPS对hESCs的促增殖作用最为显着,≤40μg/mL BBR浓度范围内对hESCs均无抑制作用;50μg/mL LPS诱导hESCs 24h后,ELISA法检测上清液IL-1β、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.001),证明炎症模型建立成功;BBR抑制LPS诱导的hESCs炎性因子IL-1β、TNF-α分泌,并下调IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA转录水平(P<0.05);BBR的抗炎机制研究,BBR下调LPS诱导的TLR4/IKKβ/NF-κB p65炎症信号通路相关蛋白TLR4、IKKβ、NF-κB p65的mRNA表达(P<0.005),Western-Blot方法表明BBR抑制NF-κB p65的蛋白表达(P<0.005)。结论:BBR可下调LPS诱导的NF-κB炎症信号通路相关蛋白TLR4、IKKβ、NF-κB p65的基因水平,以及抑制关键蛋白NF-κB p65的蛋白表达,减少炎性因子的基因表达(IL-1β,TNF-α,IL-6)及分泌(IL-1β,TNF-α),说明BBR可以改善LPS诱导的人子宫内膜基质细胞炎症,为临床治疗子宫内膜炎提供新的治疗思路。(本文来源于《兰州大学》期刊2019-03-01）
陆月梅,王秀美,刘娅,周建云,王琛琛[9]（2018）在《基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4对子宫内膜异位症患者子宫内膜组织MMP-9和VEGF表达的影响》一文中研究指出目的分析基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4对子宫内膜异位症(EMs)患者子宫内膜组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法选取南通大学附属海安医院40例EMs患者,取其40份在位内膜组织标本(A组)与40份异位内膜组织标本(B组),并选择同期40例正常子宫内膜组织标本(C组)。通过免疫组织化学法与RT-PCR技术对基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4、MMP-9及VEGF的表达情况进行检测。结果基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4、MMP-9及VEGF在3组标本中腺上皮细胞和间质细胞中均存在表达,且主要表达于腺上皮细胞。基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4、MMP-9及VEGF平均光密度值在B组中最高,其次是A组,而C组最低;3组组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),且基质细胞衍生因子-1 mRNA、趋化因子受体-4 mRNA、MMP-9 mRNA及VEGF mR-NA表达量在B组中最高,其次是A组,而C组最低;3组组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4、MMP-9及VEGF过高表达与EMs疾病发生、发展密切相关,提示基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4过高表达可能利用其他相关通路对MMP-9、VEGF造成影响,进而能够在EMs侵袭与血管的形成中发挥着重要的作用,故此基质细胞衍生因子-1、趋化因子受体-4过高表达可能是诊治EMs患者的重要靶点。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2018年22期）
赵璠[10]（2018）在《Luman在小鼠颗粒细胞和子宫内膜基质细胞功能调节中的作用研究》一文中研究指出Luman又称CREB3或LZIP,属于基础亮氨酸拉链(basic leucine-zipper,bZIP)转录因子。在结构上它与转录激活因子6(Activating transcription factor 6,ATF6)相似,具有跨膜结构域,能够与内质网膜结合,且同时具有转录激活结构域和bZIP结构域。Luman广泛表达于动物的多种组织器官,在雌性小鼠的卵巢、输卵管和子宫中以及雄性小鼠的睾丸间质细胞和精子中均有Luman的表达。研究表明,在雌性小鼠卵巢和子宫中Luman的表达随着发情周期呈现规律性变化,且Luman干扰后雌性小鼠母性下降且产仔数下降,因此Luman可能在卵巢功能以及早期妊娠过程中起到重要作用。本研究利用RNAi干扰技术,实时荧光定量PCR,western blot,细胞免疫荧光技术,CCK-8细胞计数,ELISA和流式细胞术,对Luman在卵巢和子宫中颗粒细胞及子宫内膜基质细胞功能调节中的作用进行研究。得到以下结果:1.设计3对针对Luman基因的干扰片段,并分别构建其慢病毒干扰载体pCD513B-U6-Luman 1、2、3。将3对目的载体分别和包装质粒一起转染293T细胞,分别包装出3个Luman基因干扰载体的慢病毒,测定其滴度在5~10×10~8 TU/mL。将3个Luman干扰慢病毒分别转导NIH 3T3细胞,经western blot检测Luman蛋白在NIH 3T3细胞中的表达变化,筛选出最有效的干扰载体pCD513B-U6-Luman 3,蛋白水平的干扰效率达到80%以上。2.慢病毒shLuman-3转导原代小鼠颗粒细胞,能够有效抑制其Luman蛋白的表达,通过细胞免疫荧光技术、western blot和RT-qPCR检测其干扰效率达到80%以上。干扰Luman能够通过下调Star,Cyp19a1和Cyp1b1基因的表达,降低颗粒细胞中雌激素和孕酮的分泌。同时,可使Cyclin A1,Cyclin B1,Cyclin D2和Cyclin E表达水平显着升高,颗粒细胞在G1期的比例也有所上升。通过检测发现,干扰Luman对体外培养的正常生长的颗粒细胞凋亡没有显着影响。此外,干扰Luman后对卵泡发生,排卵和黄体化相关基因Has2和Ptgs-2有影响。3.为了研究Luman在蜕膜化中的作用,从妊娠第4天小鼠子宫分离基质细胞,构建体外诱导蜕膜化模型。检测表明,Luman的表达量随着体外蜕膜化进程逐步提高。干扰Luman后,蜕膜化标志因子Prl8a2和Prl3c1的表达量显着下调,G1期细胞比例增加,同时也对蜕膜化基质细胞的转录组有显着影响,其中,对内质网蛋白加工相关基因的表达具有显着影响,对蜕膜化相关的骨形态蛋白,细胞周期相关基因,生长因子等一系列蜕膜化相关基因的表达有显着的调节作用。干扰Luman对细胞外基质-受体相互作用(ECM-receptor interaction)信号通路,细胞焦点粘连(Focal Adhesion),细胞内吞(endocytosis)通路,以及PI3K-Ak信号通路影响最为显着。另外,分析数据发现STMN4,CNN2,MLP3B,TRPA1,NPTX2,TRFL,IOD3等基因可能是Luman的潜在下游基因。4.将小鼠子宫内膜基质细胞暴露在不同浓度的BPA中,通过CCK-8以及实时荧光定量PCR技术检测,发现低浓度BPA对细胞活性和增殖没有显着影响,但能够引起基质细胞蜕膜相关基因的紊乱。同时,低浓度的BPA还能够引起内质网应激相关蛋白GRP78和Luman的显着上调。干扰Luman的表达,在一定程度上能够逆转BPA引起的蜕膜功能基因的紊乱。提示,低浓度BPA引起的的内质网应激反应可能是通过Luman介导的。综上结果所述,本研究在细胞水平上研究了Luman在小鼠颗粒细胞和子宫内膜基质细胞中的功能以及调节机制。为揭示Luman在卵泡发育及胚胎植入中的作用提供了新的依据和理论基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-10-01）
内膜基质细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究叶酸缺乏孕鼠子宫内膜基因组甲基化模式改变及对基质细胞蜕膜化的抑制作用。方法取30只性成熟SPF级小鼠,随机分为两组,实验组(15只)小鼠采用无叶酸饲料喂养,对照组(15只)小鼠给予正常饮食,均喂养4周。通过电化学发光法对小鼠血清叶酸含量进行检测,建立小鼠正常妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型,检测子宫内膜蜕膜化的情况。通过免疫荧光法对蜕膜化分子标志物Desmin蛋白的表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对小鼠dt PRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量进行检测。通过简化代表性亚硫酸氢盐测序法检测小鼠基因组甲基化模式。结果实验组小鼠血浆叶酸水平较对照组的水平明显下降(P <0. 01)。实验组小鼠蜕膜鼓包数目少于对照组,直径小于对照组(P <0. 05)。实验组小鼠人工诱导蜕膜化造模成功率仅为33. 33%(3/15),而对照组人工诱导蜕膜化成功率为100. 00%(15/15);诱导一侧宫角湿重轻于对照组(P <0. 01);经HE染色结果可见实验组小鼠无明显变化,而对照组小鼠诱导侧体积增大,且出现双核或多核的蜕膜细胞。实时荧光定量PCR法检测结果发现,实验组小鼠经人工诱导蜕膜化后,其蜕膜化分子标志物dt PRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量明显低于对照组(P <0. 01)。体外功能实验结果发现,经激素作用3 d后,实验组小鼠基质细胞仍呈现成纤维细胞样,而对照组小鼠基质细胞形态改变,即由长梭形变为多角形,细胞增大明显。实时荧光定量PCR法检测结果发现,经激素诱导后,实验组小鼠基质细胞中dt PRP-mRNA、Bmp2-mRNA的相对表达量明显低于对照组(P <0. 01)。经简化代表性亚硫酸氢盐测序法检测结果发现,甲基化胞嘧啶mC多数处在启动子区或CpG岛(CGI)中的CG位点,部分mC处在非CG位点,即mCHG与m CHH(H代表T、C或A)。两组小鼠在妊娠第6～7天时不同类型m C分布比较并无显着差异;妊娠第8天时,实验组小鼠mCG在启动子区与CGI中的比率明显高于对照组,而mCHH在启动子区与CGI中的比率低于对照组。结论叶酸缺乏不仅可阻滞小鼠子宫内膜基质细胞的蜕膜化进程,而且可改变子宫内膜基因组甲基化模式,如各类型的mC分布与平均甲基化水平等,进一步对关键基因的表达及功能造成影响,提示叶酸缺乏可损害小鼠孕早期子宫内膜功能,这可能是叶酸缺乏抑制蜕膜化进程的潜在分子机制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内膜基质细胞论文参考文献
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