本文主要研究内容
作者殷怡云（2019）在《米曲霉耐盐蛋白酶的分离、纯化及其耐盐机制初步研究》一文中研究指出：米曲霉蛋白酶的耐盐性与酱油蛋白质利用率和氨基酸含量密切相关,目前对米曲霉3.042（Aspergillus oryzae 3.042）蛋白酶的耐盐性及其耐盐机理研究较少且不够深入。因此,选育高产蛋白酶米曲霉并研究其所产蛋白酶的耐盐机制具有重要意义。本文以米曲霉3.042（Aspergillus oryzae 3.042）为原始菌株,利用常压室温等离子体诱变（ARTP）技术得到一株高产蛋白酶诱变菌株,从诱变菌株中分离、纯化和鉴定出两种耐盐蛋白酶—天冬氨酰氨肽酶（AAP）与碱性蛋白酶（AP）,并在分子水平上初步阐明了两种蛋白酶的耐盐机制。（1）利用ARTP技术选育出一株高产蛋白酶米曲霉诱变菌株H8。采用ARTP诱变技术选育到一株高产蛋白酶、遗传稳定（传代15次）、孢子颜色发生变化的诱变菌株H8,其中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和天冬氨酰氨肽酶酶活比原始菌株分别提高了31.82%、19.36%、20.76%和24.77%。诱变菌株H8生物量比原始菌株提高2.9%。应用RT-qPCR方法进一步证实,高产蛋白酶菌株H8中AAP和AP基因转录水平分别高于原始菌株米曲霉27%和30%,说明AAP基因与AP基因转录水平提高是引起种曲发酵酶活提高的因素之一。ARTP处理可能加强了米曲霉AAP和AP基因的转录表达,进而提高了两种酶的酶活。（2）从诱变菌株H8中分离纯化出耐盐天冬氨酰氨肽酶（AAP）并阐明了其初步耐盐分子机制。利用磷酸盐缓冲液提取、现代色谱和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）等技术从诱变菌株H8中分离纯化和鉴定出耐盐蛋白酶—AAP。结合理化特性分析可知该酶分子量约57 kDa含有Zn2+,其最佳和最稳定的pH值和温度分别为7和50°C。蛋白质同源建模、分子动力学模拟、二级结构、酸性残基和内部残基疏水性分析表明,与对照蛋白酶相比,该酶在高盐环境下有序二级结构含量较高、水合表面酸性残基与特定碱性残基之间形成的盐桥较多、内部残基疏水性较强,这是该酶可能的耐盐机制。（3）从诱变菌株H8中分离纯化出耐盐碱性蛋白酶（AP）并阐明了其初步耐盐分子机制。利用磷酸盐缓冲液提取、现代色谱和MALDI-TOF-MS等技术从诱变菌株H8中分离纯化和鉴定出耐盐蛋白酶—AP。结合理化特性分析可知,该酶分子量约29 kDa、是一种不依赖金属离子的丝氨酸蛋白酶,其最佳和最稳定的pH值和温度分别为9和40°C。蛋白质同源建模、分子动力学模拟及蛋白质二级结构、酸性残基和内部残基疏水性分析表明,与对照相比,该酶在高盐环境下有序二级结构含量较高、水合表面酸性残基与特定碱性残基之间形成的盐桥较多、内部残基疏水性较强,这是该酶可能的耐盐机制。本研究结果将对酱油发酵工艺优化和调控及新菌种选育提供方法参考和依据。
Abstract
mi qu mei dan bai mei de nai yan xing yu jiang you dan bai zhi li yong lv he an ji suan han liang mi qie xiang guan ,mu qian dui mi qu mei 3.042（Aspergillus oryzae 3.042）dan bai mei de nai yan xing ji ji nai yan ji li yan jiu jiao shao ju bu gou shen ru 。yin ci ,shua yo gao chan dan bai mei mi qu mei bing yan jiu ji suo chan dan bai mei de nai yan ji zhi ju you chong yao yi yi 。ben wen yi mi qu mei 3.042（Aspergillus oryzae 3.042）wei yuan shi jun zhu ,li yong chang ya shi wen deng li zi ti you bian （ARTP）ji shu de dao yi zhu gao chan dan bai mei you bian jun zhu ,cong you bian jun zhu zhong fen li 、chun hua he jian ding chu liang chong nai yan dan bai mei —tian dong an xian an tai mei （AAP）yu jian xing dan bai mei （AP）,bing zai fen zi shui ping shang chu bu chan ming le liang chong dan bai mei de nai yan ji zhi 。（1）li yong ARTPji shu shua yo chu yi zhu gao chan dan bai mei mi qu mei you bian jun zhu H8。cai yong ARTPyou bian ji shu shua yo dao yi zhu gao chan dan bai mei 、wei chuan wen ding （chuan dai 15ci ）、bao zi yan se fa sheng bian hua de you bian jun zhu H8,ji zhong xing dan bai mei 、suan xing dan bai mei 、jian xing dan bai mei he tian dong an xian an tai mei mei huo bi yuan shi jun zhu fen bie di gao le 31.82%、19.36%、20.76%he 24.77%。you bian jun zhu H8sheng wu liang bi yuan shi jun zhu di gao 2.9%。ying yong RT-qPCRfang fa jin yi bu zheng shi ,gao chan dan bai mei jun zhu H8zhong AAPhe APji yin zhuai lu shui ping fen bie gao yu yuan shi jun zhu mi qu mei 27%he 30%,shui ming AAPji yin yu APji yin zhuai lu shui ping di gao shi yin qi chong qu fa jiao mei huo di gao de yin su zhi yi 。ARTPchu li ke neng jia jiang le mi qu mei AAPhe APji yin de zhuai lu biao da ,jin er di gao le liang chong mei de mei huo 。（2）cong you bian jun zhu H8zhong fen li chun hua chu nai yan tian dong an xian an tai mei （AAP）bing chan ming le ji chu bu nai yan fen zi ji zhi 。li yong lin suan yan huan chong ye di qu 、xian dai se pu he ji zhi fu zhu ji guang jie xi dian li fei hang shi jian zhi pu （MALDI-TOF-MS）deng ji shu cong you bian jun zhu H8zhong fen li chun hua he jian ding chu nai yan dan bai mei —AAP。jie ge li hua te xing fen xi ke zhi gai mei fen zi liang yao 57 kDahan you Zn2+,ji zui jia he zui wen ding de pHzhi he wen du fen bie wei 7he 50°C。dan bai zhi tong yuan jian mo 、fen zi dong li xue mo ni 、er ji jie gou 、suan xing can ji he nei bu can ji shu shui xing fen xi biao ming ,yu dui zhao dan bai mei xiang bi ,gai mei zai gao yan huan jing xia you xu er ji jie gou han liang jiao gao 、shui ge biao mian suan xing can ji yu te ding jian xing can ji zhi jian xing cheng de yan qiao jiao duo 、nei bu can ji shu shui xing jiao jiang ,zhe shi gai mei ke neng de nai yan ji zhi 。（3）cong you bian jun zhu H8zhong fen li chun hua chu nai yan jian xing dan bai mei （AP）bing chan ming le ji chu bu nai yan fen zi ji zhi 。li yong lin suan yan huan chong ye di qu 、xian dai se pu he MALDI-TOF-MSdeng ji shu cong you bian jun zhu H8zhong fen li chun hua he jian ding chu nai yan dan bai mei —AP。jie ge li hua te xing fen xi ke zhi ,gai mei fen zi liang yao 29 kDa、shi yi chong bu yi lai jin shu li zi de si an suan dan bai mei ,ji zui jia he zui wen ding de pHzhi he wen du fen bie wei 9he 40°C。dan bai zhi tong yuan jian mo 、fen zi dong li xue mo ni ji dan bai zhi er ji jie gou 、suan xing can ji he nei bu can ji shu shui xing fen xi biao ming ,yu dui zhao xiang bi ,gai mei zai gao yan huan jing xia you xu er ji jie gou han liang jiao gao 、shui ge biao mian suan xing can ji yu te ding jian xing can ji zhi jian xing cheng de yan qiao jiao duo 、nei bu can ji shu shui xing jiao jiang ,zhe shi gai mei ke neng de nai yan ji zhi 。ben yan jiu jie guo jiang dui jiang you fa jiao gong yi you hua he diao kong ji xin jun chong shua yo di gong fang fa can kao he yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自江苏大学的殷怡云，发表于刊物江苏大学2019-09-19论文，是一篇关于米曲霉论文,酶学性质论文,基因表达论文,耐盐机制论文,江苏大学2019-09-19论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自江苏大学2019-09-19论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：米曲霉论文; 酶学性质论文; 基因表达论文; 耐盐机制论文; 江苏大学2019-09-19论文;