导读:本文包含了家蝇抗菌肽基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:家蝇,抗菌肽,大肠杆菌,抑菌效果
家蝇抗菌肽基因论文文献综述
白杰,卫瑞阳,白鹭,卢敏,李绍钰[1]（2016）在《家蝇6个抗菌肽基因对大肠杆菌抑菌效果的研究》一文中研究指出抗菌肽(antibacterial peptide)是生物体内具有免疫作用的一类多肽,是天然免疫系统中不可缺少的重要组成部分。本研究从课题组前期转录组测序中获得的家蝇抗菌肽基因中挑选了Muscin,Sarcotoxin-1c-like,Uncharacterized protein,SarcotoxinⅡ-1-like,Cecropin 1和Diptericin共6个基因,研究其对大肠杆菌的抗菌效果。从家蝇幼虫体内克隆Muscin、Sarcotoxin-1clike、Uncharacterized protein、SarcotoxinⅡ-1-like、Cecropin 1和Diptericin共6个基因,与Plex载体连接后,在细胞模型mHEK293中得到表达,根据我们前期建立的在真核细胞中检测抗菌肽抗菌功能的方法,用大肠杆菌刺激mHEK293细胞中表达抗菌肽的细胞和未表达抗菌肽基因的细胞,通过检测mHEK293细胞中免疫因子IL-8、TNFα、IL-1β、NFκB-1和NFκB-2的表达水平,推断以上抗菌肽对大肠杆菌的抗菌效果,为后续筛选可以高效表达抗菌肽的基因工程菌提供基础。结果表明:在大肠杆菌刺激表达抗菌肽基因和未表达抗菌肽基因后,细胞中的免疫因子IL-8和TNFα基因的表达量差异显著。具体来说,未表达抗菌肽基因的细胞受到大肠杆菌刺激后,免疫因子IL-8增加了20.68(3 h)和20.63(6 h)倍,TNFα基因增加了23.82(3 h)和23.71(6 h)倍,而表达Uncharacterized protein基因的细胞株受到大肠杆菌刺激后,IL-8表达水平为原来的0.72(3 h)和0.88(6 h)倍,TNFα基因增加了1.45(3 h)和0.91(6 h)倍;表达SarcotoxinⅡ-1-like的细胞株受到大肠杆菌刺激后,IL-8增加了0.61(3 h)和1.32(6 h)倍,TNFα基因增加了0.68(3 h)和1.75(6 h)倍;表达Diptericin的细胞株受到刺激后,IL-8增加了1.56(3 h)和1.15(6 h)倍,TNFα基因增加了1.56(3 h)和1.15(6 h)倍;和对照相比,抗菌肽极显着的抑制了大肠杆菌对细胞的刺激。而Muscin,Sarcotoxin-1c-like和Cecropin基因早期(3 h)也有抑制大肠杆菌的作用,但随着时间推移(6 h),免疫因子的表达量逐渐提高,说明抗菌肽的抗菌作用逐渐降低。具体表现为:表达Muscin基因的细胞在大肠杆菌刺激后,免疫因子IL-8增加了3.97(3 h)和14.15(6 h)倍,TNFα基因增加了3.58(3 h)和23.43(6 h)倍;表达Sarcotoxin-1c-like基因的细胞在大肠杆菌刺激后,IL-8增加了8.46(3 h)和9.06(6 h)倍,TNFα基因增加了7.26(3 h)和8.11(6 h)倍;表达Cecropin基因的细胞在大肠杆菌刺激后,IL~8增加了1.44(3 h)和6.06(6 h)倍,TNFα基因增加了1.44(3 h)和7.01(6 h)倍。以上结果提示,Uncharacterized protein,SarcotoxinⅡ-1-like和Diptericin具有强大的抗大肠杆菌功能,适合作为基因工程菌进行开发生产。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会论文集》期刊2016-10-21）
裴志花[2]（2016）在《新型家蝇抗菌肽基因MDAP-2的表达、生物学活性及抗菌机制研究》一文中研究指出近年来,随着抗生素在疾病防治、卫生保健品及动物饲料等方面的不规范使用,导致一些抗药的超级细菌、病毒不断涌现,抗生素的使用效果逐年下降,给疾病防治带来了极大困难。因此,寻找新型、安全、高效的抗菌制剂代替传统的抗生素,已成为当前甚至未来几十年国内外抗菌药物研究的热点。抗菌肽是生物体内产生的一类具有较强抗细菌、真菌、病毒、寄生虫、支原体、慢病毒乃至肿瘤细胞活性的小分子多肽,以具有较低免疫原性、抗菌谱广、毒副作用小和不易使细菌产生耐药性而着称,备受国内外学者关注。家蝇幼虫体内外常携带多种病原菌,并能向人、家畜和家禽传播多种疾病,而本身却很少发病,即使在高密度、大规模的人工养殖条件下,也极少出现集体发病的现象,其独特的抗病能力与其体内产生的多种抗菌肽有关。家蝇抗菌肽种类多、抗菌谱广、抗菌作用独特,具有传统抗菌药物无可比拟的优点,因此,家蝇抗菌肽有可能成为新一代的抗菌制剂,在一定程度上部分代替抗生素,并有效遏制细菌耐药性的蔓延。本研究在以鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)的基础上,采用RACE技术获得了一条大小为198bp的抗菌肽基因,命名为MDAP-2,并对该基因进行了克隆和生物学功能预测,结果显示其结构独特,与Genbank中收录的所有基因的核苷酸序列均无同源性,推断其可能是一个新的基因,基因序列已上传Genbank,登录号为KJ787648。生物信息学软件预测结果显示:MDAP-2的分子量为7.785Kda;理论等电点为10.61;亲水性较强,最大值达2.811;二级结构以α–螺旋为主。为了进一步确定MDAP-2的主要生物学功能,本研究将该基因与载体pET-32a(+)连接构建重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达,然后采用镍亲和层析柱对其表达产物进行了纯化,并对纯化产物的抗菌活性进行检测,发现MDAP-2对临床分离的部分G-菌(猪源大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌耐药株、牛巴氏杆菌)有抑制作用,对鸡源沙门氏菌的抑菌环直径可达25mm,但对受检的G+菌无抑制作用,该特性与以往发现的抗菌肽有所不同,结合其核苷酸/氨基酸序列的独特性,推测其可能是一个新的家蝇抗菌肽,并存在特殊的生物学活性和杀菌机制。为了研究MDAP-2的生物学活性,本研究采用圆二光谱技术对其在溶液中的二级结构进行了研究,并检测了其对家兔红细胞的溶血性、在Babl/c小鼠体内的生物安全性进行检测。二级结构检测结果显示,抗菌肽MDAP-2在5mM PBS溶液中(模拟水环境)和含有50%TFE及30mM SDS的PBS溶液中(模拟细胞膜结构)均在190nm和200nm处有很强的正吸收峰,在208nm、222nm处有很强的负吸收峰,表明MDAP-2二级结构中以α-螺旋为主,并存在少量β–折叠结构,与生物信息学预测结果基本吻合。体外溶血活性检测结果显示,当抗菌肽MDAP-2浓度达到1600μg/ml时,溶血率仅为6.6%,低于文献报道中的猪乳铁蛋白肽LFP-20(256μg/ml)和八肽菌素(320μg/ml),由此可见MDAP-2具有较低的体外溶血活性,对哺乳动物细胞毒性很低。采用小鼠尾静脉单次给药的方法检测了抗菌肽MDAP-2对小鼠的急性毒性,LD50为37.564 mg/kg,95%的可信限为34.537和42.813mg/kg,其毒性低于报道中的多种抗菌肽,表明抗菌肽MDAP-2对小鼠具有较低的毒性。为了研究MDAP-2的抗菌机制,本研究采用荧光探针技术、透射电子显微镜技术及流式细胞术等试验方法研究了抗菌肽MDAP-2对鸡沙门菌生长曲线的影响,对细菌微观结构的影响,对细菌细胞膜的通透性、完整性的影响,对细菌细胞质膜的去极化能力及其DNA结合能力进行了检测。结果表明,MDAP-2对鸡沙门氏菌的生长具有明显的抑制作用,在MDAP-2浓度为0.24mM时即能杀灭细菌;透射电镜图片显示,MDAP-2能使鸡沙门氏菌的细胞膜严重变形、破损,内容物外泄,导致细菌死亡;β-半乳糖苷酶检测试验结果显示,MDAP-2能够使细菌细胞膜的通透性增加,把β-半乳糖苷酶释放到细胞外,分解ONPG,使得反应体系中A405nm的OD值升高;采用DiBAC4(3)膜电位敏感性探针对抗菌肽作用过的鸡沙门菌细胞进行染色,于流式细胞仪上检测其荧光强度变化,其荧光强度明显增加,可达35.9%,可见MDAP-2可使细菌细胞质膜去极化,导致细菌膜内外电势差增加,进而导致细菌死亡;采用PI对抗菌肽MDAP-2作用过的鸡沙门菌细胞进行染色,于流式细胞仪上检测其荧光强度变化,结果显示抗菌肽处理组的细菌细胞内的荧光强度明显增加,可达66.5%。说明抗菌肽MDAP-2能破坏细菌细胞膜的完整性,使细胞内离子外流,水分子内流,导致细菌死亡;MDAP-2能够抑制质粒DNA的电泳迁移率,使电泳速度变慢,证明抗菌肽MDAP-2具有DNA结合能力,可能通过进入细菌细胞内,阻碍DNA复制来发挥抗菌作用。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2016-06-01）
李文婷,闫恕,张丹丹,贾博岩,唐艳[3]（2015）在《一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测》一文中研究指出利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据。根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质粒pPIC9K-MDAP-2,将线性化的重组质粒电击转入毕赤酵母(P.pastoris)感受态GS115细胞内,将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-SDS-PGAE检测表达产物的大小,经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性。结果显示,重组质粒pPIC9K-MDAP-2获得高效表达,蛋白分子量为7.8 kD,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌与沙门氏菌均具有体外抑菌活性。MDAP-2基因的成功表达为进一步研究表达产物的生物学及免疫学活性奠定基础。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2015年11期）
裴志花,孙小宁,唐艳,高云航,马红霞[4]（2015）在《家蝇新型抗菌肽基因MDAP-2的克隆、表达与抗菌活性分析》一文中研究指出家蝇具有特殊的免疫防御能力,在细菌刺激下可产生多种抗菌肽。在采用抑制性消减杂交技术(SSH)构建的cDNA文库的基础上,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),从沙门氏菌诱导的家蝇幼虫体内扩增到一个大小为198bp的抗菌肽基因(命名为MDAP-2)。将MDAP-2全长基因克隆并与带有His标签的原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组表达质粒,使之在大肠杆菌BL21(DE3)中得以大量表达;采用Ni-NFA亲和层析法对原核表达的MDAP-2蛋白进行纯化,然后进行抗菌活性检测。结果显示,MDAP-2对受试的所有革兰氏阴性菌(包括1株沙门氏菌、1株大肠杆菌和1株多杀性巴士杆菌)均具有较强的抗菌作用;DNA测序和BLAST分析显示,MDAP-2抗菌肽基因与GenBank中的所有的抗菌肽基因都无同源性。其抗菌机制还有待于进一步研究。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集》期刊2015-10-20）
杨雪[5]（2015）在《家蝇两种新型抗菌肽基因muscin和domesticin的鉴定》一文中研究指出本研究通过数字基因表达谱和生物信息学分析,在家蝇(Musca domestica)转录组中筛选得到2条抗菌肽基因,并将其命名为muscin和domesticin。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的组织分布和细菌刺激后的表达模式。对合成肽Muscin和Domesticin进行抑菌活性检测及溶血率测定。muscin基因c DNA序列全长379 nt,包含153 nt完整的开放阅读框。推导Muscin多肽序列由50个氨基酸残基组成,N端含有由25个氨基酸残基组成的信号肽。成熟肽中富含疏水性氨基酸残基和带正电荷的氨基酸残基,理论等电点为9.39。基因定量结果显示muscin基因在血细胞和脂肪体中表达量最高,细菌刺激后,幼虫体内该基因的表达水平明显上调,并在6 h达到高峰。抑菌和溶血实验显示Muscin对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抑菌活性,其中二硫键结构是抑菌功能的重要结构域。且溶血活性较低。domesticin基因c DNA序列全长364 nt,此序列包含198 nt完整的开放阅读框。推导的Domesticin多肽序列由65个氨基酸残基组成,N端含有由25个氨基酸残基组成的信号肽。Domesticin成熟肽富含疏水性氨基酸残基和带正电荷的氨基酸残基,理论等电点为11.0。Domesticin成熟肽主要是由3个较短的β-折迭和无规则卷曲组成的。Drosophila中的免疫因子与Domesticin同源。基因定量结果显示domesticin基因在血细胞中表达量最高;细菌刺激后,幼虫体内该基因的表达水平明显上调,并在12 h达到高峰。抑菌和溶血实验显示Domesticin具有广谱的抑菌活性,且溶血活性较低。总之,本文从家蝇体内克隆得到2条新的抗菌肽基因muscin和domesticin,推测可能参与家蝇抗菌免疫反应,其合成肽具有广谱抗菌活性,具有一定药物开发潜质。(本文来源于《河北大学》期刊2015-05-01）
杨小蓉,金小宝,朱家勇,丁彩屏[6]（2012）在《检测家蝇抗菌肽基因diptericin时间表达模式的实时荧光定量方法的建立》一文中研究指出目的建立荧光染料(SYBR Green I)实时荧光定量PCR(real-timePCR)方法检测的家蝇抗菌肽基因diptericin时间表达模式方法。方法基于已克隆出的diptericin基因,利用软件Prmier5.0设计上下游引物,对未诱导,诱导后2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h及不同发育阶段的家蝇叁龄幼虫进行real-timePCR设计引物,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。结果未刺激的叁龄幼虫diptericin基因表达量非常低,与诱导后2h的相比,差1个数量级,诱导后2h开始缓慢上升,12h后达到最高峰,24h后缓慢下降,36h后回到诱后2h的水平,在家蝇叁龄幼虫的卵、1龄及2龄期的表达量非常低,3龄期达到最高峰。结论实时荧光定量PCR检测家蝇抗菌肽基因diptericin的方法具有特异性好、灵敏度高,为进一步探讨家蝇抗菌肽生物活性,研究新的抗菌药物打下初步基础。(本文来源于《现代预防医学》期刊2012年22期）
高笑荷[7]（2011）在《家蝇抗菌肽基因的克隆重组表达及其活性研究》一文中研究指出随着人们对抗生素的耐药性、药物副作用的研究越来越深入,开发新型的天然抗菌药物成为当前抗菌药物的研究热点。抗菌肽作为一大类新型抗菌的天然多肽抗生素,能杀死耐药菌株,且其杀菌机制使病原菌不易产生耐药性突变,从而具有广泛的应用前景。但目前抗菌肽的来源主要为天然提取,成本相对较高。使用分子生物学方法,将目的基因转入菌体进行大量表达,降低纯化的技术难度和成本。本文重点研究家蝇抗菌肽基因Md-Cec在大肠杆菌中的表达,并对表达产物进行分离纯化和活性检测。以家蝇(Musca domestica)蛹的总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得家蝇抗菌肽基因Md-Cec,目的基因插入质粒pMAL-c2x重组后转入表达菌株进行诱导表达。通过提取和纯化诱导表达蛋白,得到了纯品。最后初步测定纯化蛋白的抑菌活性。实验结果表明：以家蝇蛹总RNA为模板,RT-PCR得到了家蝇抗菌肽基因Md-Cec,成功构建了克隆载体pMAL-Md-Cec,且Md-Cec基因测序结果与Genebank一致。根据家蝇抗菌肽核酸序列和编码的氨基酸序列对蛋白质的理化性质和结构进行了分析预测。构建的重组载体pMAL-Md-Cec最终选择BL21(DE3)PlysS为最适表达菌株,IPTG浓度0.5mM,诱导时间4小时为最佳诱导条件,诱导后表达量较高。表达菌体破碎提取经直链淀粉树脂柱纯化,得到纯度较高且浓度较高的表达蛋白(对照蛋白pMAL (P)的含量为：7.565mg/mL重组蛋白；pMAL-Cec(A)的含量为：6.170mg/mL)。菌内抑菌生长曲线的测定,重组菌株相比对照菌株对自身均有一定的抑制作用；纯化蛋白结果表明对枯草芽孢杆菌和沙门氏菌具有一定的抑菌活性。(本文来源于《天津科技大学》期刊2011-12-01）
马艳,朱家勇,金小宝,卢雪梅,李小波[8]（2010）在《家蝇抗菌肽基因在家蝇幼虫中的空间转录模式》一文中研究指出目的研究家蝇抗菌肽基因attacin、cecropin、defensin在家蝇幼虫体内的空间转录情况。方法采用体外转录方法合成地高辛标记的cRNA探针,通过原位杂交方法检测微生物诱导前后家蝇幼虫体内attacin、cecropin、defensin变化情况。结果在未诱导的家蝇幼虫体内,体壁、中肠组织均没有检测到attacin、cecropin和defensin转录,在脂肪体中仅检测到cecropin和defensin的弱转录信号;在诱导后的家蝇幼虫中,体壁上检测到attacin和defensin强转录信号,cecropin没有转录,脂肪体中检测到attacin、cecropin和defensin强转录信号,而在中肠组织中检测到cecropin和defensin转录,没有attacin转录。结论经微生物诱导后,家蝇幼虫体内抗菌肽基因转录水平大大提高,为进一步研究家蝇抗菌肽在机体免疫中的作用及其机制打下了基础。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2010年07期）
杨小蓉,金小宝,曾爱华,朱家勇[9]（2009）在《全长家蝇抗菌肽基因diptericin的克隆及生物信息学分析》一文中研究指出目的克隆新的家蝇抗菌肽基因双翅肽(diptericin)的全长序列并对其进行相关生物信息学分析。方法根据本实验室已经克隆的家蝇抗菌肽基因diptericin片段设计1对引物,运用cDNA末端快速扩增技术(GeneRacer)、T-A克隆和序列测定,将所得序列与GenBank中已知的diptericin基因进行同源性分析。结果成功地从免疫诱导的3龄幼虫中得到一个全长433bp的基因cDNA,该全长cDNA具有完整的编码框,编码99个氨基酸,相关生物信息学分析结果表明,其与厩蜇蝇diptericinA基因的同源性最高,为77%。结论初步推断此全长cDNA是家蝇抗菌肽的一个新基因,可能广泛存在于蝇类昆虫中,为进一步研究其生物活性奠定基础。(本文来源于《中国媒介生物学及控制杂志》期刊2009年05期）
王艳,金小宝,朱家勇,曾爱华,褚夫江[10]（2009）在《家蝇抗菌肽基因的表达模式研究》一文中研究指出本研究曾报道过家蝇生长过程中的3个基因attacin,defensin,cecropin的转录体.通过运用实时定量PCR定量分析家蝇不同发育阶段和诱导后不同时间点的叁龄幼虫mRNA水平,结果显示3个基因在叁龄幼虫和成虫期转录水平较高.同时分析发现,在诱导后mRNA水平显着增加,3个抗菌肽基因在敏感菌诱导后转录水平相对诱导前分别有cecropin805倍、attacin1009倍、defensin2500倍的增强.结果提示,家蝇抗菌肽基因的转录在不同发育阶段和诱导后的不同时期是有差异的.(本文来源于《中国科学(C辑:生命科学)》期刊2009年07期）
家蝇抗菌肽基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近年来,随着抗生素在疾病防治、卫生保健品及动物饲料等方面的不规范使用,导致一些抗药的超级细菌、病毒不断涌现,抗生素的使用效果逐年下降,给疾病防治带来了极大困难。因此,寻找新型、安全、高效的抗菌制剂代替传统的抗生素,已成为当前甚至未来几十年国内外抗菌药物研究的热点。抗菌肽是生物体内产生的一类具有较强抗细菌、真菌、病毒、寄生虫、支原体、慢病毒乃至肿瘤细胞活性的小分子多肽,以具有较低免疫原性、抗菌谱广、毒副作用小和不易使细菌产生耐药性而着称,备受国内外学者关注。家蝇幼虫体内外常携带多种病原菌,并能向人、家畜和家禽传播多种疾病,而本身却很少发病,即使在高密度、大规模的人工养殖条件下,也极少出现集体发病的现象,其独特的抗病能力与其体内产生的多种抗菌肽有关。家蝇抗菌肽种类多、抗菌谱广、抗菌作用独特,具有传统抗菌药物无可比拟的优点,因此,家蝇抗菌肽有可能成为新一代的抗菌制剂,在一定程度上部分代替抗生素,并有效遏制细菌耐药性的蔓延。本研究在以鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)的基础上,采用RACE技术获得了一条大小为198bp的抗菌肽基因,命名为MDAP-2,并对该基因进行了克隆和生物学功能预测,结果显示其结构独特,与Genbank中收录的所有基因的核苷酸序列均无同源性,推断其可能是一个新的基因,基因序列已上传Genbank,登录号为KJ787648。生物信息学软件预测结果显示:MDAP-2的分子量为7.785Kda;理论等电点为10.61;亲水性较强,最大值达2.811;二级结构以α–螺旋为主。为了进一步确定MDAP-2的主要生物学功能,本研究将该基因与载体pET-32a(+)连接构建重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达,然后采用镍亲和层析柱对其表达产物进行了纯化,并对纯化产物的抗菌活性进行检测,发现MDAP-2对临床分离的部分G-菌(猪源大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌耐药株、牛巴氏杆菌)有抑制作用,对鸡源沙门氏菌的抑菌环直径可达25mm,但对受检的G+菌无抑制作用,该特性与以往发现的抗菌肽有所不同,结合其核苷酸/氨基酸序列的独特性,推测其可能是一个新的家蝇抗菌肽,并存在特殊的生物学活性和杀菌机制。为了研究MDAP-2的生物学活性,本研究采用圆二光谱技术对其在溶液中的二级结构进行了研究,并检测了其对家兔红细胞的溶血性、在Babl/c小鼠体内的生物安全性进行检测。二级结构检测结果显示,抗菌肽MDAP-2在5mM PBS溶液中(模拟水环境)和含有50%TFE及30mM SDS的PBS溶液中(模拟细胞膜结构)均在190nm和200nm处有很强的正吸收峰,在208nm、222nm处有很强的负吸收峰,表明MDAP-2二级结构中以α-螺旋为主,并存在少量β–折叠结构,与生物信息学预测结果基本吻合。体外溶血活性检测结果显示,当抗菌肽MDAP-2浓度达到1600μg/ml时,溶血率仅为6.6%,低于文献报道中的猪乳铁蛋白肽LFP-20(256μg/ml)和八肽菌素(320μg/ml),由此可见MDAP-2具有较低的体外溶血活性,对哺乳动物细胞毒性很低。采用小鼠尾静脉单次给药的方法检测了抗菌肽MDAP-2对小鼠的急性毒性,LD50为37.564 mg/kg,95%的可信限为34.537和42.813mg/kg,其毒性低于报道中的多种抗菌肽,表明抗菌肽MDAP-2对小鼠具有较低的毒性。为了研究MDAP-2的抗菌机制,本研究采用荧光探针技术、透射电子显微镜技术及流式细胞术等试验方法研究了抗菌肽MDAP-2对鸡沙门菌生长曲线的影响,对细菌微观结构的影响,对细菌细胞膜的通透性、完整性的影响,对细菌细胞质膜的去极化能力及其DNA结合能力进行了检测。结果表明,MDAP-2对鸡沙门氏菌的生长具有明显的抑制作用,在MDAP-2浓度为0.24mM时即能杀灭细菌;透射电镜图片显示,MDAP-2能使鸡沙门氏菌的细胞膜严重变形、破损,内容物外泄,导致细菌死亡;β-半乳糖苷酶检测试验结果显示,MDAP-2能够使细菌细胞膜的通透性增加,把β-半乳糖苷酶释放到细胞外,分解ONPG,使得反应体系中A405nm的OD值升高;采用DiBAC4(3)膜电位敏感性探针对抗菌肽作用过的鸡沙门菌细胞进行染色,于流式细胞仪上检测其荧光强度变化,其荧光强度明显增加,可达35.9%,可见MDAP-2可使细菌细胞质膜去极化,导致细菌膜内外电势差增加,进而导致细菌死亡;采用PI对抗菌肽MDAP-2作用过的鸡沙门菌细胞进行染色,于流式细胞仪上检测其荧光强度变化,结果显示抗菌肽处理组的细菌细胞内的荧光强度明显增加,可达66.5%。说明抗菌肽MDAP-2能破坏细菌细胞膜的完整性,使细胞内离子外流,水分子内流,导致细菌死亡;MDAP-2能够抑制质粒DNA的电泳迁移率,使电泳速度变慢,证明抗菌肽MDAP-2具有DNA结合能力,可能通过进入细菌细胞内,阻碍DNA复制来发挥抗菌作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
家蝇抗菌肽基因论文参考文献
[1].白杰,卫瑞阳,白鹭,卢敏,李绍钰.家蝇6个抗菌肽基因对大肠杆菌抑菌效果的研究[C].中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会论文集.2016
[2].裴志花.新型家蝇抗菌肽基因MDAP-2的表达、生物学活性及抗菌机制研究[D].吉林农业大学.2016
[3].李文婷,闫恕,张丹丹,贾博岩,唐艳.一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测[J].中国兽药杂志.2015
[4].裴志花,孙小宁,唐艳,高云航,马红霞.家蝇新型抗菌肽基因MDAP-2的克隆、表达与抗菌活性分析[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十叁次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集.2015
[5].杨雪.家蝇两种新型抗菌肽基因muscin和domesticin的鉴定[D].河北大学.2015
[6].杨小蓉,金小宝,朱家勇,丁彩屏.检测家蝇抗菌肽基因diptericin时间表达模式的实时荧光定量方法的建立[J].现代预防医学.2012
[7].高笑荷.家蝇抗菌肽基因的克隆重组表达及其活性研究[D].天津科技大学.2011
[8].马艳,朱家勇,金小宝,卢雪梅,李小波.家蝇抗菌肽基因在家蝇幼虫中的空间转录模式[J].免疫学杂志.2010
[9].杨小蓉,金小宝,曾爱华,朱家勇.全长家蝇抗菌肽基因diptericin的克隆及生物信息学分析[J].中国媒介生物学及控制杂志.2009
[10].王艳,金小宝,朱家勇,曾爱华,褚夫江.家蝇抗菌肽基因的表达模式研究[J].中国科学(C辑:生命科学).2009