导读:本文包含了脐带基质论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人脐带基质干细胞,小鼠原始生殖细胞,细胞共培养,分化
脐带基质论文文献综述
王茜[1]（2016）在《脐带基质干细胞的分离、鉴定及其向生殖细胞分化的研究》一文中研究指出研究背景与目的传统理论均认为人卵母细胞是不可再生细胞,免疫、环境、遗传等多种因素及妇科肿瘤的疾病进展、治疗过程均可损害卵母细胞、导致卵巢功能明显降低,甚至衰竭,丧失生育功能,在神经、骨骼、内分泌等多方面影响女性的身心健康~[1-3]。这一类患者即使通过辅助生殖技术也无法获得有功能的卵子。因此,获得再生卵母细胞,是真正有助于解决这类患者无法生育及恢复其生殖-内分泌功能的重要途径~[4]。近年来,国内外研究发现,干细胞具备发育全能性,在一定条件下于体内或体外均可诱导分化为功能细胞~[5-7]。有关胚胎干细胞的研究发现:胚胎原始生殖细胞经体外培养及体内移植可产生有功能的卵母细胞和精子,并成功生育子代~[8]。但胚胎干细胞无法做到自体移植,取材不便、有致瘤性等诸多问题使其研究受到限制~[9]。因此,人们将研究重点转向成体干细胞。其中脐带基质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs),来源于新生儿脐带,不需要任何侵入性的过程就可以在废弃的脐带当中获取它,不存在伦理学争议等优势,均使其成为再生卵母细胞的重要种子来源~[10]。根据目前的研究发现,该细胞具有分化为卵母样细胞的潜能,可表达原始生殖细胞标记物,且能在卵巢局部存活并生长。但均尚未获得功能性配子~[11]。究其原因,与体外使用卵巢卵泡液等诱导方式尚无法完全模拟体内微环境有关。研究显示性腺来源的体细胞更有助于生殖细胞分化~[12],且同步化的卵巢体细胞才能促进原始生殖细胞(Primordial germ cell,PGCs)进一步减数分裂~[13]。由此我们认为减数分裂前期的胚胎卵巢与干细胞进行共培养,有望更好地模拟体内卵巢卵子发生的微环境,同时充分利用卵巢细胞分泌细胞因子等微环境对干细胞进行环境诱导,可能更有助于观察卵巢微环境在卵子发生中的作用,探索成体干细胞向生殖细胞分化的可能机制。因此我们拟对UCMSCs进行分离培养及鉴定,再与原始生殖细胞共培养,诱导UCMSCs向卵母细胞样细胞进行分化,探索其体外诱导生殖细胞的可能机制,为完全卵母细胞再生的研究提供思路。1实验方法1.1 UCMSCs的分离培养及鉴定采用机械分离方法提取新生儿脐带胶质、进行剪碎后行组织块直接贴壁培养UCMSCs,运用流式细胞学技术检测UCMSCs的免疫表型,进行干细胞鉴定,将P3代UCMSCs作为种子细胞。1.2 PGCs的分离培养及鉴定采用机械分离12.5dpc(days posteoltum,发现阴栓的当天记为0.5dpc)的Balb/c小鼠的胎鼠生殖嵴,剪碎后行组织块直接贴壁培养PGCs,运用AP染色初步鉴定细胞、运用流式细胞学技术检测P3代PGCs的免疫表型,进一步进行细胞鉴定。1.3 PGCs的生物学特性研究取P3代PGCs,细胞免疫荧光染色,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术进行PGCs的生物学特性研究。1.4诱导UCMSCs向原始生殖细胞样细胞(Primordial germ cell-like cells,PGCLCs)分化及鉴定取P3代UCMSCs,实验组使用PGCLCs诱导培养液培养,对照组继续使用UCMSCs培养液,采取置于37℃,5%CO_2及饱和湿度下培养,隔日换液,并观察培养液有无浑浊。及倒置显微镜下对照两组细胞形态变化。运用流式细胞学技术检测诱导分化后UCMSCs的免疫表型鉴定。1.5共培养诱导分化UCMSCs取PGCLCs+P0代PGCs为实验组1,P4代UCMSCs+P0代PGCs为实验组2,P4代UCMSCs+P4代UCMSCs为对照组,均利用0.4μm孔径的Transwell小室共培养,置于37℃,5%CO_2及饱和湿度下培养,隔日换液,并观察培养液有无浑浊。1.6 Western blot检测UCMSCs向卵母细胞分化情况取共培养14d后的UCMSCs进行Western blot检测SCP3表达情况,评估其向卵母细胞的分化情况。1.7统计学分析统计学分析应用SPSS18.0统计软件,计量资料以(?)表示,组间比较采用单因素x~2检验,P<0.05为差异。2实验结果2.1 UCMSCs的分离培养及鉴定倒置显微镜下观察组织块贴壁培养3-5天后开始有少量长梭形细胞爬出,培养7d后细胞融合达90%,呈漩涡状或者平行排列贴壁生长,杂细胞较少,传代后细胞较均一,形态规则,呈长梭形,增殖快,常于传代后2d再次接近融合状态。流式细胞学技术检测UCMSCs表达中胚层来源分子CD73及分子CD29,阳性率分别为62.9%、95.5%,表达内皮细胞特征分子CD31,阳性率为0.221%,表达造血干细胞系特征分子CD45,阳性率为0.186%,表达阶段特异性胚胎抗原SSEA-1,阳性率为0.946%,符合UCMSCs的特征。2.2 PGCs的分离培养及鉴定倒置显微镜下观察生殖嵴组织块3-5天开始爬出贴壁细胞,5-7天细胞能生长至70%~80%融合,细胞轮廓清楚,排列紧密,大部分细胞形态为核质比较大的圆形或者椭圆形细胞。至80%左右融合状态时进行传代,传代后细胞增殖迅速,常于传代后3天再次接近融合状态。AP染色细胞持续阳性,表明为含有碱性磷酸酶活性阳性的胚胎原始生殖细胞。流式细胞学技术检测PGCs表达阶段特异性胚胎抗原SSEA-1,阳性率为92.5%,表达阶段特异性胚胎抗原SSEA-4,阳性率为0.71%,符合小鼠PGCs的特征。2.3 PGCs的生物学特性研究通过细胞免疫荧光染色及RT-PCR检测可发现,Oct4、Stra8、Vasa、Scp3、Zp3均为阳性表达,表明我们所培养的PGCs是一种来自小鼠胚胎早期的胚胎生殖细胞,处于未分化状态,而且在体外培养过程中可进入减数分裂I期。2.4诱导UCMSCs向PGCLCs分化及鉴定倒置显微镜下观察实验组:经过向PGCLCs诱导7d-9d后,开始出现部分核质比大的圆形或椭圆形细胞,对照组细胞仍然保持长梭形形态。贴壁培养14d后,实验组细胞稳定表达阶段特异性胚胎抗原SSEA-1,阳性率为73.83%,且表达阶段特异性胚胎抗原SSEA-3,阳性率为66.66%,对照组细胞表达阶段特异性胚胎抗原SSEA-1及SSEA-3,阳性率分别为0.69%、0.45%,证明实验组细胞已部分向PGCLCs分化。2.5 Western blot检测UCMSCs向卵母细胞分化情况结果显示,共培养14d后,实验组1的SCP3蛋白表达水平为0.566622±0.008407,实验组2的SCP3蛋白表达水平为0.271562±0.041784,对照组的SCP3蛋白表达水平为0.130108±0.022316,叁组间差异有统计学意义(P<0.05),其中任意两组分别对比也均有统计学意义(P<0.05)。3结论1.分离培养了纯度较高的UCMSCs;2.分离培养了纯度较高的PGCs;3.PGCs于体外可进行持续培养,体外培养过程中可进入减数分裂I期;4.UCMSCs于体外可诱导分化为PGCLCs;5.共培养可体外诱导UCMSCs向卵母细胞方向进行分化。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2016-05-01）
艾民,颜昌福,夏福纯,周双陆,贺剑[2]（2013）在《Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因编程脐带基质间充质细胞》一文中研究指出目的探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞(UMC)编程为多潜能干细胞(iPS)。方法原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化。对编程后细胞进行碱性磷酸酶(AP)染色、检测细胞内源多能基因表达量和体内分化畸胎瘤实验。结果原代获得UMC细胞,被编程细胞形态类似于胚胎干细胞,AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,体内分化为畸胎瘤。结论利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因可将UMC细胞编程为iPS细胞。(本文来源于《四川医学》期刊2013年12期）
汪照静[3]（2013）在《分化的人脐带基质干细胞:研究HBV感染早期过程的一种新兴体外模型》一文中研究指出【据Hepatology 2013年1月报道】题:分化的人脐带基质干细胞可用于研究HBV感染的早期过租以及细胞分化对这个过程的影响(作者Paganelli M等)目前,细胞分化状态对HBV复制的作用这一课题已经得到了很好的研究与探讨,然而其如何影响受侵细胞对于HBV感染的易感性尚需进一步研究。比利时鲁汶天主教大学圣-卢克医院的Paganelli等之前的研究表明脐带基质干细胞(umbilical cord matrix strm cells,UCMSCs)可以在体外分化为肝细胞样细胞(本文来源于《肝脏》期刊2013年10期）
蒋知新,艾民,张清华,沙杭,高毅[4]（2012）在《体外原代培养脐带基质间充质细胞和人皮肤成纤维细胞》一文中研究指出目的探讨体外原代培养脐带基质间充质细胞(UMC)和人皮肤成纤维细胞(HSF)的方法。方法用Ⅳ型胶原蛋白酶、Ⅰ型脱氧核糖核酸酶和0.25%胰蛋白酶消化法原代分离培养UMC细胞,用组织块贴壁法原代分离培养HSF细胞,镜下观察细胞的培养过程和生长状态。结果脐带组织分离培养第3天,有少量UMC贴壁生长,细胞膜周围有折光性,形态类似于成纤维细胞;皮肤组织块贴壁培养第7天,有HSF爬出,呈长梭形、不规则叁角形。随着细胞培养时间延长,UMC和HSF数量逐渐增多,细胞生长状态良好。结论应用酶消化法和组织块贴壁法可成功分离培养出UMC和HSF。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2012年19期）
邱云,郑青,萧树东,汪铮[5]（2012）在《体外模拟干细胞微环境培养扩增脐血及脐带基质源性间充质干细胞》一文中研究指出背景:建立稳健的扩增体系,在体外扩增时最大限度地获得治疗剂量的干细胞数,同时保存干细胞的特性是临床实验室亟待解决的问题。目的:建立体外模拟干细胞微环境细胞外基质扩增脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞的方法,并与传统的2-D培养体系比较。方法:建立体外模拟干细胞微环境细胞外基质,体外分离脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞后分别接种到细胞外基质及传统的2-D塑料培养体系,分别从细胞计数及细胞表面标志物的变化,评估两种扩增体系对脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞体外扩增的优劣。结果与结论:使用骨髓源性的细胞外基质培养体系单位时间脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞产量是2-D体系的4～6倍,并且流式细胞仪检测显示细胞外基质体系能更好地保持干细胞的表面标记。因此,3-D较2-D培养系更接近生理环境,已建立的骨髓源性细胞外基质培养体系能保持间充质干细胞的特性,为短时间内快速获取更大数目同质、高活性的间充质干细胞提供了可能。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年10期）
艾民,张清华,蒋知新,沙杭,高毅[6]（2011）在《利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞编程为多潜能干细胞》一文中研究指出目的:探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞(UMC)编程为多潜能干细胞(iPS)的可能性。方法:原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染UMC细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化。对编程后细胞进行碱性磷酸酶(AP)染色、检测细胞基因表达量和体内分化畸胎瘤实验。结果:获得原代UMC细胞,细胞被编程后形态类似于胚胎干细胞,细胞AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,外源编程基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc表达沉默,细胞体内分化为畸胎瘤。结论:利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因能将UMC细胞编程为iPS细胞。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2011年21期）
艾民,张清华,蒋知新,沙杭,高毅[7]（2011）在《携带GFP基因逆转录病毒感染原代培养脐带基质间充质细胞》一文中研究指出目的应用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒感染原代培养脐带基质间充质细胞,为细胞重编程实验提供有效基因转移载体。方法利用酶消化法在体外分离培养脐带基质间充质细胞。应用磷酸钙法将GFP基因转染到293T细胞内,包装生产携带GFP基因的逆转录病毒。收集病毒上清液感染脐带基质间充质细胞,应用倒置荧光显微镜观察逆转录病毒感染脐带基质间充质细胞情况。结果体外分离培养出脐带基质间充质细胞;293T细胞包装生产携带GFP基因逆转录病毒;包装生产后的逆转录病毒成功地感染脐带基质间充质细胞。结论逆转录病毒可作为有效载体将外源性基因转染入脐带基质间充质细胞内,并且细胞能够稳定表达被导入的外源性基因。(本文来源于《山东医药》期刊2011年21期）
李彩霞,王凤英,梁志清,李玉艳,俞炽阳[8]（2010）在《人脐带基质干细胞体外向雌性生殖细胞分化的潜能(英文)》一文中研究指出背景:骨髓间充质干细胞具有向卵母细胞分化的潜能,但是其免疫排斥和来源的有限性限制了其应用。研究表明,脐带间质干细胞也具有分化为卵母样细胞的潜能。目的:建立分离培养人脐带间质干细胞的方法,观察其在体外向生殖细胞分化的潜能。方法:无菌条件下取正常足月分娩新生儿的脐带,用Ⅰ型胶原酶消化,分离单个核细胞,DMEM培养,获得贴壁细胞,流式细胞仪检测其免疫表型。采用不同条件培养基诱导细胞向成脂、成骨、成软骨方向分化。通过RT-PCR检测脐带间质干细胞中生殖系特异性标记物的表达,采用卵泡液作为条件培养基,体外诱导脐带间质干细胞向生殖细胞分化。结果与结论:①分离的脐带单核细胞培养后呈纺锤体样,体外增殖达10代以上,其分子免疫表型为:CD29、CD44、CD73(SH3)、CD90、CD105(SH2)阳性;SSEA-4弱阳性;CD31、CD34、CD45、HLA-DR阴性,与骨髓间充质干细胞的免疫表型相似。在不同的诱导条件下,脐带间质干细胞可形成脂滴、骨结节、软骨结节等结构,并表达脂肪、骨及软骨细胞相关的特异性基因。②脐带间质干细胞表达OCT4、Stella、Ifitm3等生殖系标记物,在含5%,10%,20%等不同浓度卵泡液的诱导条件下细胞可聚集分化形成卵母细胞样结构。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2010年40期）
李彩霞,王凤英,冷少华,梁志清,李玉艳[9]（2010）在《脐带基质干细胞移植在卵巢早衰模型小鼠体内的分布》一文中研究指出目的观察人脐带基质干细胞(umbilical cord-matrix stem cells,UC-MSCs)移植后在卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠模型中的分布与生长情况。方法用环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)和白消安(busulfan,BUS)处理,建立小鼠POF模型;分离扩增UC-MSCs,采用腺病毒介导Ad-GFP转染方式对其进行标记;将GFP阳性细胞移植入POF小鼠体内,分别于移植后1、10、20 d留取组织,通过激光共聚焦显微镜观察UC-MSCs在小鼠卵巢及其他组织中的定位与生长情况。结果腺病毒介导Ad-GFP转染UC-MSCs效率达95%左右。POF小鼠经尾静脉接受UC-MSCs移植后1 d,卵巢可见GFP阳性细胞,移植后10 d及20 d的卵巢GFP阳性细胞明显增加,而小鼠骨髓、大脑、肝脏、肾脏、胰腺等组织无明显GFP阳性细胞存在。结论人UC-MSCs经尾静脉移植可向POF小鼠卵巢归巢,并能在局部存活生长,提示其可能具有卵巢损伤修复的作用。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2010年01期）
熊娟,邓宇斌[10]（2009）在《脐带基质细胞:一种新型的干细胞来源》一文中研究指出本文综述了脐带基质细胞的基本性质,与成体和胚胎间充质干细胞的比较,体内外多向分化潜能的研究进展,揭示脐带基质细胞具有介于成体干细胞和胚胎干细胞之间的干细胞活性,是一种新的更好的干细胞来源。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2009年12期）
脐带基质论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞(UMC)编程为多潜能干细胞(iPS)。方法原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化。对编程后细胞进行碱性磷酸酶(AP)染色、检测细胞内源多能基因表达量和体内分化畸胎瘤实验。结果原代获得UMC细胞,被编程细胞形态类似于胚胎干细胞,AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,体内分化为畸胎瘤。结论利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因可将UMC细胞编程为iPS细胞。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脐带基质论文参考文献
[1].王茜.脐带基质干细胞的分离、鉴定及其向生殖细胞分化的研究[D].第叁军医大学.2016
[2].艾民,颜昌福,夏福纯,周双陆,贺剑.Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因编程脐带基质间充质细胞[J].四川医学.2013
[3].汪照静.分化的人脐带基质干细胞:研究HBV感染早期过程的一种新兴体外模型[J].肝脏.2013
[4].蒋知新,艾民,张清华,沙杭,高毅.体外原代培养脐带基质间充质细胞和人皮肤成纤维细胞[J].中国老年学杂志.2012
[5].邱云,郑青,萧树东,汪铮.体外模拟干细胞微环境培养扩增脐血及脐带基质源性间充质干细胞[J].中国组织工程研究.2012
[6].艾民,张清华,蒋知新,沙杭,高毅.利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞编程为多潜能干细胞[J].实用医学杂志.2011
[7].艾民,张清华,蒋知新,沙杭,高毅.携带GFP基因逆转录病毒感染原代培养脐带基质间充质细胞[J].山东医药.2011
[8].李彩霞,王凤英,梁志清,李玉艳,俞炽阳.人脐带基质干细胞体外向雌性生殖细胞分化的潜能(英文)[J].中国组织工程研究与临床康复.2010
[9].李彩霞,王凤英,冷少华,梁志清,李玉艳.脐带基质干细胞移植在卵巢早衰模型小鼠体内的分布[J].第叁军医大学学报.2010
[10].熊娟,邓宇斌.脐带基质细胞:一种新型的干细胞来源[J].中国优生与遗传杂志.2009