导读:本文包含了上皮间质转分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:足细胞,上皮间质转分化,信号通路,慢性肾脏病
上皮间质转分化论文文献综述
崔方强[1]（2019）在《足细胞上皮间质转分化研究》一文中研究指出足细胞是肾小球滤过膜的重要组成部分,在维持肾小球正常滤过功能方面起着至关重要的作用。足细胞上皮间质转分化(EMT)是多种慢性肾脏疾病蛋白尿产生及疾病进展的重要病理机制。减轻足细胞EMT已经成为慢性肾脏疾病防治研究的热点。基于此,本文主要就足细胞的生理特点、EMT病理过程及相关信号通路作一综述。(本文来源于《医学信息》期刊2019年22期）
孙翼,高永棣,董蓉,俞佳丽,查艳[2]（2019）在《SOCS2在1型糖尿病肾病肾小管上皮细胞间质转分化中的作用》一文中研究指出目的:研究细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)2在1型糖尿病肾病(T1DN)肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)的作用。方法:28只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组(n=7)和T1D组(n=21)。T1D组单次空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100 mg/kg,48 h后随机血糖测定结果≥16.7 mmol/L,确诊为1型糖尿病(T1D)。建模成功后,将21只T1D小鼠随机分为3组:T1DN组(n=7)、联合组(贝那普利联合胰岛素用药,n=7)、胰岛素组(胰岛素单独用药,Insulin,n=7)。持续给药8周后处死小鼠,收集血清、尿和肾组织,分别进行生化、病理和相关蛋白与mRNA的检测。结果:与对照组[(3.81±0.24)mmol/L,(32±4.68)μg/24 h]相比,T1DN组血糖、尿蛋白[(21.70±2.26)mmol/L,(286±42.41)μg/24 h]均明显增高(P<0.001),联合组血糖、尿蛋白[(11.84±0.69)mmol/L,(173±17.83)μg/24 h]均明显下降(P<0.001),而Insulin组[(13.05±0.81)mmol/L]血糖明显下降(P<0.001),但对尿蛋白[(262±34.40)μg/24 h]作用不明显。天狼星红染色结果显示对照组肾组织结构完整,肾间质未见胶原纤维沉积;T1DN组肾组织结构破坏,间质胶原纤维沉积明显增多(P<0.001);联合组上述病变明显减轻(P<0.001),Insulin组减轻效果不明显。T1DN组肾组织中FN和SOCS2表达明显增加,E-cadherin表达明显减少(P<0.001);联合组E-cadherin表达明显增加,FN和SOCS2表达明显减少(P<0.001);Insulin组的效果不明显。Pearson相关性分析显示,T1DN小鼠肾组织中SOCS2的表达水平与肾组织胶原纤维沉积量和FN呈正相关,与E-cadherin呈负相关。结论:SOCS2在T1DN肾组织的EMT过程中发挥重要作用。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年19期）
胡成芳,李艺,刘军辉,王小龙,侯世会[3]（2019）在《Slit2对高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制》一文中研究指出目的探讨Slit2/ROBO1信号通路在高糖诱导肾小管上皮细胞上皮间质细胞转分化(EMT)中的作用及机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,进行高糖浓度梯度实验,随机分为正常组、对照组1、对照组2和高糖组1、高糖组2;同时进行高糖时间梯度实验,随机分为正常组、对照组、高糖24 h组、高糖36 h组和高糖48 h组,采用Western blotting检测HK-2细胞中Slit2、ROBO1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白的表达变化,筛选出最佳高糖刺激浓度和时间。采用Slit2过表达质粒及阴性对照质粒转染HK-2细胞,验证转染成功后,随机分为正常组、对照组、高糖组、高糖+空载组及高糖+Slit2组,经最佳高糖浓度及时间刺激后提取总蛋白,Western blotting检测纤维连接蛋白及α-SMA的表达变化。结果在高糖浓度梯度实验中,与正常组相比,高糖组1、高糖组2的Slit2表达明显下降(分别为0.647±0.048、0.210±0.023 vs. 1.000±0.050),ROBO1表达明显下降(分别为0.703±0.041、0.303±0.022vs.1.000±0.057),纤维连接蛋白表达明显增加(分别为1.953±0.042、2.997±0.078vs.0.990±0.059),α-SMA表达明显增加(分别为1.767±0.012、2.427±0.059 vs. 1.033±0.067),差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖组1相比,高糖组2的Slit2、ROBO1表达下降,纤维连接蛋白和α-SMA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在高糖时间梯度实验中,与正常组相比,高糖36 h组、高糖48 h组的Slit2表达明显下降(分别为0.557±0.020、0.450±0.055 vs. 0.943±0.032),ROBO1表达下降(分别为0.600±0.023、0.227±0.028 vs. 1.000±0.058),高糖24 h组、高糖36 h组、高糖48 h组纤维连接蛋白表达增加(分别为1.247±0.052、1.733±0.084、2.780±0.090 vs. 0.970±0.040),α-SMA表达增加(分别为1.277±0.041、1.767±0.120、2.537±0.078vs.1.033±0.067),差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖24 h组相比,高糖36 h组、高糖48 h组的Slit2表达下降(分别为0.557±0.020、0.450±0.055vs.0.893±0.034),ROBO1表达下降(分别为0.600±0.023、0.227±0.028vs. 0.930±0.025),纤维连接蛋白及α-SMA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖36 h组相比,高糖48 h组的Slit2和ROBO1表达下降,纤维连接蛋白和α-SMA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。在高糖环境下,Slit2过表达及阴性对照质粒转染成功后,观察Slit2过表达对肾小管EMT的影响发现,与正常组相比,高糖组、高糖+空载组、高糖+Slit2组的纤维连接蛋白表达增加(分别为2.760±0.012、2.667±0.027、1.460±0.034 vs. 1.000±0.058),α-SMA表达水平增加(分别为2.487±0.048、2.557±0.037、1.270±0.017 vs. 1.000±0.050),差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖+空载组相比,高糖+Slit2组的纤维连接蛋白和α-SMA表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Slit2和ROBO1的表达下降参与了高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT过程,过表达Slit2可显着抑制高糖诱导的EMT。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2019年08期）
樊晴伶,王景杰,窦维佳[4]（2019）在《Ano1在TGF-β1介导的肠道上皮细胞上皮间质转分化中的作用》一文中研究指出目的探讨Ano1在TGF-β1诱导大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC6)上皮间质转分化(EMT)中的作用。方法 TGF-β1组采用10 ng/ml TGF-β1刺激IEC6 72 h,以无血清培养为正常对照组,观察细胞形态。RT-PCR法检测Ano1 mRNA水平,Western blot检测E-cadherin、Vimentin、Fribronectin、α-SMA及Ano1蛋白表达。应用慢病毒转染技术建立过表达Ano1细胞系(IEC6-Ano1),以空载体为对照组(IEC6-NC)。再次利用10 ng/ml TGF-β1刺激IEC6-Ano1 72 h后建立IEC6-Ano1+TGF-β1组,观察该组与正常对照组、IEC6-NC组的细胞形态,Western blot检测E-cadherin、Vimentin、Fribronectin、α-SMA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1组IEC6细胞形态出现间质化改变,E-cadherin表达降低,Vimentin、Fribronectin、α-SMA蛋白表达升高(P <0.001),Ano1 mRNA及蛋白表达降低(P <0.05)。与正常对照组及IEC6-NC组比较,IEC6-Ano1+TGF-β1组细胞形态无明显改变,E-cadherin、Vimentin、Fribronectin及α-SMA蛋白表达水平无统计学差异。结论研究显示Ano1可通过抑制TGF-β1介导的IEC6细胞EMT过程,从而缓解肠道纤维化。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2019年07期）
胡超[5]（2019）在《lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮—间质转分化过程中的验证及功能研究》一文中研究指出目的:研究lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达并初步探讨其分子功能。方法:本课题组前期通过应用10ng/ml的TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,然后应用基因芯片技术筛选出差异表达的lncRNAs,并筛选出上调的前10位lncRNAs。本实验选择其中一种lncRNAs—lnc-PCK1-2:1进行验证和功能研究。利用qRT-PCR验证lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达。应用10ng/ml TGF-β2的DMEM培养基,再转染siRNA-lnc-PCK1-2:1质粒,此为siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组。加入10ng/ml TGF-β2的DMEM培养基,再转染siRNA-NC质粒,此为siRNA-NC+TGF-β2组。只加入DMEM培养基,再转染siRNA-lnc-PCK1-2:1质粒,此为siRNA-lnc-PCK1-2:1组。只加入DMEM培养基,再转染siRNA-NC质粒,此为siRNA-NC组。应用细胞免疫荧光和Western blot方法观察各组细胞中EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、钙黏附蛋白E(E-Cadherin)在蛋白水平的表达;应用qRT-PCR检测各组细胞中mRNA的表达变化。结果:证实lnc-PCK1-2:1在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中表达。在siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组、siRNA-NC+TGF-β2组中细胞胞浆中a-SMA荧光强度逐渐增强,蛋白表达逐渐增加;E-Cadherin荧光强度逐渐减弱,蛋白表达逐渐减少;在siRNA-lnc-PCK1-2:1组、siRNA-NC组中细胞胞浆中a-SMA荧光强度逐渐增强,蛋白表达逐渐增加;E-Cadherin荧光强度逐渐减弱,蛋白表达逐渐减少;a-SMA的荧光强度、蛋白表达量siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组大于siRNA-lnc-PCK1-2:1组,siRNA-NC+TGF-β2组大于siRNA-NC组,siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组的E-Cadherin荧光强度、蛋白表达量小于siRNA-lnc-PCK1-2:1组,siRNA-NC+TGF-β2组小于siRNA-NC组;lnc-PCK1-2:1的表达量siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组大于siRNA-NC+TGF-β2组,siRNA-lnc-PCK1-2:1组大于siRNA-NC组,siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2组大于siRNA-lnc-PCK1-2:1组,siRNA-NC+TGF-β2组大于siRNA-NC组。结论:人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化过程中lnc-PCK1-2:1高表达并且沉默lnc-PCK1-2:1的表达可抑制晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化。(本文来源于《桂林医学院》期刊2019-06-01）
吴建波,张志明[6]（2019）在《补气健脾益肾法对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化及肾间质纤维化影响》一文中研究指出目的:分析补气健脾益肾法对糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞的间充质转分化(EMT)及肾间质纤维化影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机数字表法将分成叁组,正常组、模型组和观察组,每组各15只,观察组和模型组制备DN模型,观察组大鼠使用补气健脾益肾法灌胃,剂量为1.4g/kg,正常组和模型组大鼠使用同剂量生理盐水灌胃,每天1次,共灌胃8周。末次给药后大鼠置入代谢笼内,采集其24小时排泄尿液,计算其24小时尿量,全自动生化分析仪检测24小时尿蛋白、血尿素氮及血肌酸酐含量,血糖仪检测其血糖含量,肾组织常规行HE染色,在光镜下查看大鼠肾脏组织的病理状况,免疫组化检测肾组织内转化生长因子-β(TGF-β)、骨成形蛋白(BMP-7)及α-平滑肌肌蛋白(α-SMA)表达状况。结果:模型组大鼠24h尿蛋白、肾质量及24h尿量比正常组上升,观察组24h尿蛋白、肾质量及24h尿量比模型组下降,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组及观察组血糖、模型组血尿素氮、血肌酐酸含量比正常组上升,观察组血尿素氮、血肌酐酸比模型组下降,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠BMP-7表达量比正常组下降,TGF-β、α-SMA表达量比正常组上升,观察组BMP-7表达量比模型组上升,TGF-β、α-SMA表达量比模型组下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:补气健脾益肾法可降低DN大鼠尿蛋白含量,抑制肾小球EMT和肾间质纤维化发生发展。(本文来源于《四川中医》期刊2019年05期）
孙艳丽[7]（2019）在《miR-365-3p通过BMP7调控Ⅱ型肺泡上皮细胞向间质转分化及其机制的研究》一文中研究指出目的:BPD是早产儿严重的肺部并发症,早产儿的体重、胎龄越低,发病率越高。BPD不仅是超低出生体重早产儿早期死亡的主要原因,也是1岁以内频繁再入院的主要原因,更是生长不足及远期神经系统发育不良的独立危险因素,严重影响新生儿今后的生活质量。因此,探索其发病机制,寻求有效的预防措施和治疗手段,成为目前亟待解决的问题之一。AECⅡ是肺泡上皮细胞的干细胞,是肺损伤时最易受损的细胞,受损后其增殖分化过程均出现障碍,是肺发育过程中肺泡化障碍的重要因素。AECⅡ的异常转分化,即上皮-间质转化是肺泡化障碍的重要机制之一,研究AECⅡ上皮-间质转化的机制,如何能够抑制或逆转上皮间质转化,具有重要意义。BMP7是转化生长因子-β超家族成员之一,具有广泛的生物学功能,可调节多种细胞的分化、增殖和凋亡。研究显示BMP7可抑制和逆转上皮细胞转分化为间充质细胞。近年来发现BMP7在肺组织的病理生理过程中发挥了重要的调节作用。本人的前期研究发现BMP7在BPD新生鼠肺组织中存在差异表达。为了证实BPD中AECⅡ是否也存在BMP7的表达异常,异常表达的BMP7是否活化了下游的信号转导蛋白smad,我们对新生鼠BPD模型组和对照组肺组织原代提取的AECⅡ进行BMP7及其信号转导蛋白smad1,smad2/3的检测;为了证实BMP7可能通过调控smad2/3蛋白磷酸化调节肺泡上皮细胞EMT参与到BPD的发生、发展,我们应用美国ATCC公司的大鼠肺上皮细胞RLE-6TN细胞系,通过外源性BMP7进行干预,观察细胞生物学功能、转分化指标及BMP7下游的转导蛋白smad1,smad2/3的变化;为了能够更好地调节BMP7表达以避免或减少EMT的发生,结合本课题组前期通过基因芯片技术对BPD模型大鼠标本进行micoRNA筛选,我们筛选出差异表达的micoRNA,通过生物信息学预测差异miRNA能否靶向结合BMP7,并通过扩大样本量验证差异表达miRNA,过;在证实BMP7在BPD中表达丰度逐渐减低,miR-365-3p在BPD中表达丰度逐渐增高的基础上,应用大鼠肺泡上皮细胞系,利用双荧光素酶报告基因证明二者之间的结合关系,利用基因转染技术,观察EMT相关标志物、BMP7和下游信号转导蛋白smad的变化,明确miR-365-3p靶向下调BMP7表达调控上皮-间质转化的过程。为miR-365-3p作为未来BPD治疗的特定靶标提供证据。研究方法:按照我们课题组以往的方法建立新生鼠BPD模型。将自然分娩的200只新生SD大鼠随机分到BPD组和对照组。BPD组新生鼠吸入80%的氧气,对照组新生鼠吸入空气,于实验后的3、7、14天,分别随机选取10只新生大鼠分离肺组织。行HE染色观察肺组织形态学,按照我们课题组以往的方法进行原代AECⅡ的提取、纯化培养和鉴定。纯化的AECⅡ细胞应用细胞免疫荧光定位BMP7、smad1、smad2/3蛋白的表达,Western blot测定AECⅡ细胞中BMP7、smad2/3、p-smad2/3蛋白的表达,qRT-PCR测定AECⅡ细胞中BMP7、smad1、smad2、smad3 mRNA的表达。从液氮中取出冻存的RLE-6TN细胞进行复苏、培养和传代,将生长良好的细胞进行消化,接种于6孔板中,细胞按照不同的处理因素分为4组:control组:正常RLE-6TN单层细胞。BMP7组:用10ng/ml的BMP7作用RLE-6TN单层细胞。EGF组:用20ng/ml的EGF作用RLE-6TN单层细胞。BMP7+EGF组:分别加入10ng/ml的BMP7和20ng/ml的EGF共同作用RLE-6TN单层。48小时收集细胞。于光镜下观察细胞形态学变化,细胞划痕实验观察细胞水平迁移情况,免疫荧光双染定位RLE-6TN细胞中E-cad/N-cad、Spb/vimentin的蛋白表达,免疫细胞化学染色定位RLE-6TN细胞中信号转导蛋白smad1、smad2/3的蛋白表达,Western blot测定RLE-6TN细胞中E-cad、N-cad、vimentin、smad1、p-smad1、smad2/3、p-smad2/3蛋白的表达,qRT-PCR测定RLE-6TN细胞中E-cad、N-cad、vimentin、smad1、smad2、smad3 mRNA的表达。通过TargetScan生物学信息预测网站,结合课题组前期采用基因芯片检测获得的结果,筛选出差异表达的micoRNA。行miRNAs qRT-PCR测定BPD肺组织和AECⅡ中miR-365-3p的表达。RLE-6TN细胞转染过表达miR-365-3p,行miRNAs qRT-PCR检测转染效率。于光镜下观察转染miR-365-3p mimics后RLE-6NT细胞的形态学观察变化。Western blot测定转染miR365-3p mimics后间质标志物N-cad和上皮标志物E-cad蛋白表达。qRT-PCR测定转染miR365-3p mimics后间质标志物N-cad和上皮标志物E-cad mRNA的表达。Western blot测定转染miR365-3p mimics后BMP7、smad2/3、p-smad2/3蛋白表达变化。qRT-PCR测定转染miR365-3p mimics后BMP7、smad2、smad3 mRNA表达变化。应用双荧光素酶报告基因验证miR-365-3p与BMP7的结合。结果:1、肺组织形态学观察可见随时间延长,BPD组肺泡数量减少,次级分隔减少,RAC值降低,提示出现肺泡发育停滞。免疫荧光结果显示BPD组BMP7表达明显高于对照组,细胞胞浆和胞核均可见。随日龄增加BMP7荧光强度逐渐减弱,14dBPD组胞核中基本看不到BMP7红色荧光。对照组基本恒定表达BMP7,并且表达主要定位于胞浆。Western blot显示实验第3天和第7天,BPD组BMP7蛋白表达较对照组增高,随日龄增加BPD组BMP7蛋白表达逐渐减低趋势。qRT-PCR显示BPD组中BMP7 mRNA表达较对照组明显增高,但呈现随日龄增加BMP7 mRNA表达逐渐减低趋势。2、免疫荧光结果显示smad1绿色荧光主要定位在细胞胞浆,胞核未见绿色荧光表达。smad2/3表达BPD组高于对照组,绿色荧光主要定位在细胞胞浆和胞核。7天BPD组smad2/3增高最明显,并且绿色荧光均定位在细胞胞核,胞质中仅有少量绿色荧光。14天BPD组smad2/3表达下降,绿色荧光主要集中在胞浆。略低于对照组的荧光强度。BPD组组间smad2/3的表达经历了在胞核表达先增多后减少的过程。Western blot显示BPD组组间呈现随日龄增加p-smad2/3蛋白表达明显增高然后减低趋势。smad2/3总蛋白表达逐渐减低趋势。qRT-PCR显示BPD组smad1mRNA表达呈现先减低后增高的变化,BPD组中smad2 mRNA表达较对照组明显增高,BPD组组间呈现随日龄增加smad2 mRNA表达逐渐增加趋势,smad3 mRNA的变化趋势同smad2。3、倒置相差显微镜下可见BMP7组细胞仍维持上皮样形态,细胞与细胞之间连接较紧密。EGF组细胞之间连接松散,间隙变大并有明显的丝状伪足形成,呈现出成纤维细胞样。而BMP7+EGF组细胞间细胞连接较EGF组紧密,丝状伪足减少。BMP7组不影响细胞的迁移能力,EGF组可导致细胞迁移能力增加,BMP7+EGF组细胞的迁移能力减低,一定程度抑制了细胞的迁移。免疫荧光双染定位可见EGF组E-cad表达较弱,N-cad表达较强;BMP7+EGF组E-cad明显增多,N-cad明显减少。EGF组Spb表达较弱,Vimentin表达较强;BMP7+EGF组Spb明显增多,Vimentin明显减少。Western blot显示control组和BMP7组N-cad和Vimentin均较EGF组表达量低,BMP7+EGF组较EGF组表达量低,但高于control组和BMP7组。control组和BMP7组E-cad表达量较EGF组增高,BMP7+EGF组较EGF组表达量高,但低于control组和BMP7组。qRT-PCR显示control组和BMP7组N-cad和Vimentin mRNA均较EGF组表达量低,BMP7+EGF组较EGF组表达量低。control组和BMP7组E-cad表达量较EGF组增高,BMP7+EGF组较EGF组表达量高,但低于control组和BMP7组。4、免疫细胞化学染色显示control组少量表达smad1蛋白,BMP7组、EGF组和BMP7+EGF组均未使smad1蛋白表达有明显增高,且定位主要在细胞胞浆,胞核仅见量少smad1表达。免疫细胞化学染色显示BMP7组和BMP7+EGF组均可见大量的smad2/3蛋白定位于细胞核,细胞核与细胞质均可见染成棕黄色的颗粒。control组和EGF组少量表达smad2/3蛋白,且smad2/3蛋白主要表达于细胞胞浆。Western blot显示BMP7组、EGF组和BMP7+EGF组smad1总蛋白的表达较control组均有不同程度下降。和control组相比,p-smad1蛋白在BMP7组表达略有升高,在EGF组和BMP7+EGF组的表达均有不同程度下降。smad2/3总蛋白在control组和BMP7组的表达基本一致,在EGF组的表达较control组明显下降,在BMP7+EGF组表达较EGF组有所升高。p-smad2/3蛋白在BMP7组表达明显升高,EGF组和BMP7+EGF组较control组均有不同程度增高,BMP7+EGF组增高的更明显。qRT-PCR显示各处理组smad1 mRNA表达较control组均有所减少。和control组比较,BMP7组smad2 mRNA的表达明显增高。EGF组smad2 mRNA的表达与control组无差异,BMP7组smad2 mRNA的表达和EGF组比较明显增高。BMP7+EGF组的smad2 mRNA的表达较control组增多,但较BMP7组减低。smad3 mRNA的表达变化趋势与smad2 mRNA基本一致。5、通过TargetScan生物学信息预测网站,结合课题组前期采用基因芯片检测获得的结果,筛选出24个差异表达的micoRNA,其中miR-365-3p与BMP7可能存在靶向结合位点。miRNAs qRT-PCR显示在肺组织和AECⅡ中,miR-365-3p在BPD组中的表达水平高于同日龄对照组中的表达。通过miRNAs qRT-PCR验证过表达miR-365-3p的效率,过表达效率显着。转染miR-365-3p后细胞形态学观察可见control组和NC组细胞为上皮样细胞形态,细胞具有明显的极性,细胞与细胞之间紧密连接,miR-365-3p组细胞之间连接松散,间隙变大并有明显的丝状伪足形成,呈现出成纤维细胞样改变。Western blot显示转染miR365-3p mimics后,N-cad蛋白表达增高,E-cad蛋白表达下降。qRT-PCR显示转染miR365-3p mimics后,N-cad mRNA表达增高,E-cad mRNA表达下降。Western blot显示转染miR365-3p mimics后BMP7、p-smad2/3、smad2/3蛋白表达较对照组均下降。qRT-PCR显示转染miR365-3p mimics后BMP7、smad2、smad3 mRNA表达较对照组和NC组均下降。双荧光素酶报告基因检测结果显示共转染BMP7-wt和miR-365-3p mimics能引起293T工具细胞荧光素酶活性显着下降,miR-365-3p能与BMP7的结合。结论:1、以往研究已证实在BPD肺组织中,BMP7表达增高,且随时间延长逐渐下降。本研究发现在Ⅱ型肺泡上皮细胞中,BMP7表达变化发生的时间与组织同步,并且其下游信号转导蛋白smad2/3出现转运活化,表明该通路在BPD的发生中发挥作用。2、体外实验证实,EGF诱导肺上皮细胞后,BMP7通过活化信号转导蛋白smad2/3抑制肺泡上皮细胞转分化,此发现为临床应用提供新途径。3、分别在组织水平和细胞水平验证miRNA-365-3p在BPD中高表达。miR-365-3p能够靶向结合BMP7,下调BMP7及减少下游信号转导蛋白smad2/3活化,是肺上皮细胞向间质转分化的重要机制,为未来BPD的防治提供新途径。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-05-01）
张菁慧[8]（2019）在《Sonic hedgehog信号通路对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞上皮-间质转分化的影响》一文中研究指出研究背景腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是肾病末期进行一体化治疗的方式之一,操作简便,经济负担较轻,治疗时间灵活,并且能有效保护残存的肾功能,已逐渐成为大多数终末期肾病患者(End-stage renal disease,ESRD)的首选。腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)是在PD过程中发挥主要作用的细胞,但腹膜长期与非生理的高糖透析液接触,高糖环境损害了PMCs,引起腹膜结构及功能的异常,并出现炎性细胞的大量增殖,最终通过一系列病理生理改变致使发生腹膜纤维化(Peritoeneal Fibrosis,PF),引起滤过功能持续下降直至衰竭,这也成为腹膜透析的患者退出腹透的主要原因,大大降低终末期肾脏病患者的生存质量。Sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是一组在正常生长发育过程中广泛表达、用来调节细胞生长的基因,生理状态下管控器官的起源与发育,主要通过级联反应调控下游核转录因子Gli1、Gli2、Gli3基因的表达,其中Gli1位于Hedgehog信号通路最末端,只有转录激活的功能,所以认为Gli1的表达水平直接反映了Hedgehog信号通路的活性状态。在正常发育过程中,Shh信号通路处于一种低活性的状态,但某些病理因素刺激后可出现再活化。现有的研究多集中在Shh通路在肝肺及肾脏等脏器纤维化中的作用,有关Shh通路在腹膜上的表达鲜有报道。本例研究旨在通过建立大鼠模型,探究Shh信号通路在PMCs的上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的潜在作用,并探讨阻断Shh信号转导通路的激活,能否避免腹膜的损伤,从而提高长期腹膜透析的疗效,为临床上减少EMT及防治腹膜纤维化提出新思路。研究方法1.利用胰酶消化法原代培养大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCs),并应用免疫组织化学技术方法鉴定培养出的RPMCs。2.应用免疫印迹试验(Western blot)以及逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定培养细胞中Shh、GLi1的蛋白质及mRNA的表达,观察高糖环境刺激对RPMCs中Shh及GLi1表达的影响。3.应用不同剂量的Shh信号通路拮抗剂-环杷明(cyclopamine,CPN)干预后,通过Western blot法和RT-PCR法检测RPMCs中的Shh、GLi1以及纤维化相关标志物α-SMA等的表达情况,观察阻断Shh信号通路的表达给高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞纤维化带来的影响。实验结果1.RPMCs的培养及鉴定倒置光镜下可见培养出的细胞融合后是一种不规则的多边形,类似于鹅卵石的形状,免疫组化后可表达细胞角蛋白及波状蛋白,不能表达第Ⅷ因子相关抗原及白细胞CD45抗原,与文献记载PMCs表型一致,鉴定为RPMCs。2.高浓度的葡萄糖作用下,Shh和GLi1在RPMCs中的表达以时间及剂量依赖方式显着增加应用浓度为2.5%的葡萄糖培养液分别刺激RPMCs不同时间后,应用RT-PCR和Western blot法检测Shh、Gli1的mRNA及蛋白质的表达,发现与对照组相比,高糖组的表达呈现出明显的随时间增加而增长的趋势,时间越久,增长幅度越明显(P<0.05)。而在同样的作用时间下(24小时),分别用葡萄糖浓度5.4mmol/L、83.3mmol/L(1.5%)、150.0mmol/L(2.5%)、236.1mmol/L(4.25%)的培养液同样方式刺激RPMCs后,与对照组相比,高糖组RPMCs中Shh和Gli1mRNA及蛋白质的表达也明显增多,且所用的葡萄糖浓度越高,增多的越显着(P<0.05),呈现出剂量依赖性。3.CPN可以抑制高糖诱导RPMCs的Shh信号通路,同时伴有PMCs纤维化因子的表达下降。用不同浓度的CPN(2.5uM,5uM)分别预处理RPMCs,然后均用2.5%葡萄糖孵育24小时,之后通过RT-PCR和Western blot法研究发现,CPN不能抑制Shh的mRNA和蛋白质表达,但Gli1的mRNA和蛋白质表达较高糖组却有明显下降,这说明CPN有效地阻断了Shh的信号转导(P<0.05);CPN阻断Shh信号通路后,与单纯高糖组比较,RPMCs中相关纤维化因子α-SMA等的表达下降,E-cadherin的表达增加,并且这一作用呈现出剂量依赖的趋势。结论1.高糖以剂量和时间依赖的方式诱导大鼠腹膜间皮细胞Shh信号通路的活化;2.Shh信号通路的抑制剂环杷明可抑制高糖诱导的大鼠Shh信号通路的活化。3.环杷明以剂量依赖的方式使α-SMA、collagern1、fibronectin的表达下降,E-cadherin的表达增强;从而有效地抑制高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞的EMT,延缓腹膜纤维化进展。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-05-01）
蒋蓉[9]（2019）在《外周血单个核细胞（PBMCs）通过分泌IL-8诱导人腹膜间皮细胞（HPMCs）上皮间质转分化（EMT）的研究》一文中研究指出背景与目的腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)作为肾脏替代治疗的方法之一,用于治疗终末期肾病患者。与血液透析(Hemodialysis,HD)相比,PD有利于对残余肾功能的保护,且其具有对血流动力学影响小,治疗费用相对较低,可居家操作等优势。而越来越多的证据表明:长期接触含高浓度葡萄糖的腹膜透析液(Peritoneal dialysis fluid,PDF)可导致PD患者慢性并发症的发生,例如增加心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)的发病率,以及导致残余肾功能(Residual renal function,RRF)丧失。长期PD可能会使腹腔发生明显的炎症反应,包括巨噬细胞和白细胞侵入腹膜。除了高糖腹透液的影响,炎性细胞因子的释放是腹膜结构和功能恶化的另一个主要驱动因素。腹膜炎以腹腔中性粒细胞浸润为特征,最终导致腹膜相关性腹膜炎的发生,使患者不得不退出腹膜透析治疗。研究证明IL-8是中性粒细胞分泌的一种强有力趋化细胞因子,之前有研究表明,IL-6和IL-8等炎症因子在腹膜炎患者的透析液中呈明显升高的趋势。当PD患者置管手术和患者发生腹膜炎的时候,IL-6浓度均会明显升高。然而,IL-8浓度只有在患者发生腹膜感染时才会升高。这些结果提示了透析液中IL-8浓度的测定可作为追踪PD患者发生腹膜炎的特异性指标。NF-κB作为一种常见转录因子,它可以介导多在不同的生物学过程中多种基因的表达,包括细胞生长、细胞存活,以及多种免疫反应和炎症反应。NF-κB也是多种主要炎症细胞因子(如TNF-α和IL-1)刺激信号转导的关键介质,从而参与炎症的效应期。EMT是由促纤维化和炎性刺激细胞因子触发的,人腹膜间皮细胞(Human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)中的EMT被认为是腹膜纤维化的早期阶段。预防PD患者的EMT可减轻腹膜周围的纤维化,从而保护腹膜间皮层。本研究的目的在于讨论,高糖环境下,人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)可以通过分泌IL-8,促进人腹膜间皮细胞发生EMT。用含葡萄糖的培养基培养PBMCs,收集培养后的上清,将其稀释10倍,继续培养HPMCs,采用Westernblot以及荧光定量PCR等方法检测与EMT相关的标志物。使用不同浓度以及不同时间的IL-8刺激HPMCs,观察EMT相关标记物的改变;以及IL-8对NF-κB信号通路的影响。将NF-κB特异性抑制剂PDTC加入至含IL-8的培养基,观察NF-κB信号通路被阻断之后,HPMCs的EMT过程是否受到抑制。由此我们可以得出结论,在高糖环境中,PBMCs分泌IL-8通过NF-κB信号通路促进HPMCs发生EMT,最终导致腹膜透析相关性腹膜炎的发生。方法1.收集普通外科手术相对正常的腹膜(如胆结石,阑尾炎等疾病)以及PD腹膜超滤衰竭拔管时的腹膜组织,利用免疫组化方法,使用巨噬细胞标记物CD68对腹膜组织进行染色。利用正置显微镜观察组织炎症细胞浸润并拍摄照片。2.用5.5mM正常糖浓度的RPMI-1640培养基作为对照组,和60mM高糖浓度的RPMI-1640培养PBMCs 24h后,收集上清液培养HPMCs,24h后收集总蛋白,采用Western Blot和荧光定量PCR方法检测EMT相关标志物的蛋白及mRNA水平。3.用60mM高糖培养基培养PBMCs24h后,以1:10稀释上清,并以此上清刺激HPMCs12h,24h,48h后,采用Western Blot和荧光定量PCR方法检测EMT相关标志物的蛋白及mRNA水平。4.用5.5mM正常糖浓度的RPMI-1640培养基作为对照组,和60mM高糖浓度的RPMI-1640培养PBMCs 24h后,提取RNA,以荧光定量PCR方法检测PBMCs中IL-8mRNA的表达水平。5.用正常培养基,浓度为10ng/ml和30ng/ml的IL-8分别刺激HPMCs24h,提取腹膜间皮细胞总蛋白,采用Western Blot方法检测EMT相关标志物的蛋白表达量,包括E-cadherin,Vimentin和α-SMA蛋白的表达水平。6.用30ng/mlIL-8分别刺激HPMCs12h,24h,48h,提取细胞蛋白,采用Western Blot方法检测EMT相关标志物的蛋白表达量。7.用正常培养基,浓度为10ng/ml和30ng/ml的IL-8分别刺激HPMCs24h,提取总蛋白,采用Westernblot方法,检测NF-κBP65蛋白的磷酸化水平。8.用30ng/ml IL-8分别刺激HPMCs 12h,24h,48h,提取细胞蛋白,采用Westernblot方法,检测NF-κBp65蛋白的磷酸化水平的改变。9.用正常培养基,30ng/mlIL-8,30ng/mlIL-8+1μM PDTC刺激HPMCs24h后,提取细胞总蛋白,采用Westernblot方法检测EMT标志物的蛋白水平的改变。结果1.使用CD68对腹膜透析超滤衰竭患者的腹膜组织进行染色,发现大量CD68阳性细胞浸润。2.以60mM的葡萄糖浓度刺激PBMC24h,收集上清液稀释后培养HPMCs,24h后收集总蛋白,Western Blot显示:与对照组及5.5mM葡萄糖浓度组相比,E-cadherin的蛋白和mRNA表达水平降低,α-SMA和Vimentin的蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(*#P<0.05)。3.以60mM的葡萄糖浓度刺激PBMCs24小时后,收集上清液稀释后培养HPMCs12h,24h,48h,提取总蛋白,WesternBlot结果显示:随着刺激时间的延长,上皮表型E-cadherin的蛋白表达水平逐渐下调,间质表型蛋白α-SMA以及波形蛋白Vimentin的蛋白表达水平逐渐上调。差异有统计学意义(*P<0.05)。4.分别用正常培养基和60mM葡萄糖培养基刺激PBMCs24h后,提取细胞RNA,采用荧光定量PCR方法检测得出:60mM的葡萄糖刺激PBMCs24h后,IL-8的mRNA表达呈现明显上调趋势,差异有统计学意义(*P<0.05)。5.当IL-8的刺激浓度逐渐升高,E-cadherin的蛋白表达量呈现逐渐降低的趋势。间质表型蛋白α-SMA和波形蛋白Vimentin的蛋白表达水平呈逐渐上调的趋势。(*P<0.05)。6.用30ng/ml IL-8分别刺激HPMCs 12h,24h,48h,提取细胞蛋白,Western Blot结果显示:随着IL-8刺激时间的延长,上皮表型蛋白E-cadherin的蛋白表达量逐渐下调;相反,间质表型蛋白α-SMA和Vimentin的蛋白表达水平呈逐渐上调的趋势(*P<0.05)。7.随着IL-8刺激浓度的升高,NF-κBP65蛋白的磷酸化水平成逐渐上调的趋势(*P<0.05)。8.随着30ng/mlIL-8刺激时间的延长,NF-κBP65蛋白的磷酸化水平逐渐升高(*P<0.05)。9.阻断NF-κB信号通路后,Westernblot结果显示,抑制剂PDTC组的Ecadherin表达相较于IL-8刺激组,明显上调;而α-SMA和Vimentin的蛋白表达量下调(*P<0.05)。结论1.高糖刺激PBMCs可间接诱导HPMCs发生EMT。2.PBMCs可以分泌IL-8,促进HPMCs的EMT过程。且随着IL-8浓度和时间的延长,EMT相关标志物的表达上调。3.IL-8可通过NF-κB信号通路诱导HPMCs发生EMT。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
吴文丽[10]（2019）在《PRL-3在糖尿病肾病足细胞上皮间质转分化中的作用》一文中研究指出背景糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病累及微血管所引起的主要并发症之一,临床上以进行性增多的蛋白尿和持续的肾功能损伤为重要特点,现已成为终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)最主要的原因之一。足细胞是构成肾小球滤过屏障的关键结构,以足细胞异常为主的肾脏疾病,临床上往往以大量蛋白尿为突出表现。目前研究认为,DN也是一种“足细胞病”,主要表现为足细胞肥大、足突融合、足细胞发生原位上皮-间质转分化(Epithelial to mesenchymal transition,EMT)以及足细胞数目的减少。当足细胞发生EMT时,将失去成熟足细胞原有的蛋白标记分子转而表达间充质细胞样表型标志物。研究表明,体内和体外的高血糖环境均可通过Snail诱导足细胞发生EMT,影响足细胞特异性蛋白的表达,扰乱足细胞骨架结构及足突形态,进而造成滤过屏障破坏甚至足细胞凋亡从而DN进展。肝再生磷脂酶-3(Phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3)属于非跨膜型蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员,首次被发现在直肠癌细胞中过表达且与直肠癌细胞的侵袭、转移能力相关。肿瘤细胞的形态改变在其侵袭、转移过程中发挥着重要的作用,而参与肿瘤细胞形态改变的重要作用机制之一就是EMT,EMT使细胞间粘附性降低,极性逐渐丧失而转变为间质样状态,从而使细胞更具有侵袭、移动能力。近年来,PRL-3已被证实在多种肿瘤细胞中高度表达,且可通过Snail诱导肿瘤细胞EMT的发生。然而,PRL-3在肾脏组织中的表达是否受高糖环境的影响,其与足细胞EMT的发生是否相关暂无研究。目的探讨PRL-3在肾脏组织中的表达情况、高糖环境对PRL-3表达量的影响以及PRL-3在足细胞EMT中的作用。方法(1)SPF标准条件下饲养db/db及db/m小鼠1-2周,监测体重、血糖、尿点式总蛋白等相关指标,判断糖尿病肾病小鼠是否造模成功。(2)于造模成功后的0周、4周、8周、12周随机取3只小鼠取肾脏组织。以正常小鼠为对照组,免疫组织化学染色法检测糖尿病肾病小鼠肾组织中PRL-3的表达情况;Western blot法再次检测糖尿病肾病小鼠肾组织中PRL-3的表达量。(3)体外培养永生化人肾小球足细胞,分成四组后分别以正常糖浓度(5.6mmol/L葡萄糖)、低浓度葡萄糖(20mmol/L葡萄糖)、高浓度葡萄糖(40mmol/L葡萄糖)、高渗透压(5.6mmol/L葡萄糖+34.4mmol/L甘露醇)为条件刺激24h。收集细胞提取蛋白,通过Western blot法检测各组中PRL-3及足细胞EMT相关蛋白(Nephrin、Podocin、α-SMA)的表达量。(4)以预混后的Lipofectamine2000+特异性shRNA(3:1)转染液转染永生化人肾小球足细胞,以正常糖浓度组为对照,Western blot法检测空载体转染组、shRNA干扰组中PRL-3的表达量。(5)特异性shRNA沉默PRL-3表达后,分成四组:正常糖浓度组(5.6mmol/L葡萄糖)、高浓度葡萄糖组(40mmol/L葡萄糖)、shRNA+高糖组(shRNA干扰+40mmol/L葡萄糖)、空载体+高糖组(scramble序列+40mmol/L葡萄糖),共同培养24h后,Western blot法检测足细胞EMT相关蛋白(Nephrin、Podocin、α-SMA)的表达量。结果(1)PRL-3主要表达在肾脏组织的肾小球部位,糖尿病肾病小鼠中PRL-3的表达量较正常小鼠显着增加(P<0.05),且具有时间依赖性。(2)与正常组相比,低浓度葡萄糖组及高浓度葡萄糖组中PRL-3的表达量显着增高(P<0.05),且该效应具有浓度依赖性。高渗组中PRL-3的表达量较正常组无明显改变。(3)与正常组相比,低浓度葡萄糖组及高浓度葡萄糖组中Nephrin、Podocin的表达量降低(P<0.05),α-SMA的表达量增高(P<0.05),该效应具有浓度依赖性。高渗组中Nephrin、Podocin、α-SMA的表达较正常组均无明显改变。(4)特异性shRNA转染足细胞后,分子水平显示PRL-3的表达量显着减少(P<0.05),空载体组中PRL-3的表达量较正常组无明显变化。(5)特异性shRNA干扰PRL-3表达后,shRNA+高糖组中α-SMA的表达量较高糖组显着减少,同时Nephrin、Podocin的表达量增加(P<0.05)。而空载体+高糖组中PRL-3、Nephrin、Podocin、α-SMA的表达量与高糖组相比均无明显的改变,排除scramble序列对实验结果的影响。结论PRL-3主要在肾脏组织的肾小球部位表达,高糖环境可通过上调PRL-3的表达从而促进足细胞EMT的发生,抑制PRL-3的表达可减轻足细胞的损伤。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
上皮间质转分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)2在1型糖尿病肾病(T1DN)肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)的作用。方法:28只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组(n=7)和T1D组(n=21)。T1D组单次空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100 mg/kg,48 h后随机血糖测定结果≥16.7 mmol/L,确诊为1型糖尿病(T1D)。建模成功后,将21只T1D小鼠随机分为3组:T1DN组(n=7)、联合组(贝那普利联合胰岛素用药,n=7)、胰岛素组(胰岛素单独用药,Insulin,n=7)。持续给药8周后处死小鼠,收集血清、尿和肾组织,分别进行生化、病理和相关蛋白与mRNA的检测。结果:与对照组[(3.81±0.24)mmol/L,(32±4.68)μg/24 h]相比,T1DN组血糖、尿蛋白[(21.70±2.26)mmol/L,(286±42.41)μg/24 h]均明显增高(P<0.001),联合组血糖、尿蛋白[(11.84±0.69)mmol/L,(173±17.83)μg/24 h]均明显下降(P<0.001),而Insulin组[(13.05±0.81)mmol/L]血糖明显下降(P<0.001),但对尿蛋白[(262±34.40)μg/24 h]作用不明显。天狼星红染色结果显示对照组肾组织结构完整,肾间质未见胶原纤维沉积;T1DN组肾组织结构破坏,间质胶原纤维沉积明显增多(P<0.001);联合组上述病变明显减轻(P<0.001),Insulin组减轻效果不明显。T1DN组肾组织中FN和SOCS2表达明显增加,E-cadherin表达明显减少(P<0.001);联合组E-cadherin表达明显增加,FN和SOCS2表达明显减少(P<0.001);Insulin组的效果不明显。Pearson相关性分析显示,T1DN小鼠肾组织中SOCS2的表达水平与肾组织胶原纤维沉积量和FN呈正相关,与E-cadherin呈负相关。结论:SOCS2在T1DN肾组织的EMT过程中发挥重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
上皮间质转分化论文参考文献
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