导读:本文包含了上皮间质细胞转分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:糖尿病肾脏病,上皮-间质细胞转分化,胰岛素样生长因子-1,锌指转录因子1
上皮间质细胞转分化论文文献综述
董蓉,达静静,查艳[1]（2017）在《阻断IGF-1R/IGF-1信号通路抑制Snail1诱导的糖尿病肾病肾小管上皮-间质细胞转分化》一文中研究指出目的:探讨IGF-1R抑制剂对DKD小鼠EMT的发生及预防肾组织纤维化作用。方法:体内实验,30只C57/BL6小鼠,随机分为对照组、DKD组、DKD药物干扰:IGF-1R组、ACEI组和胰岛素组5个组。检测血糖、尿肌酐、24h蛋白排泄率。16周时麻醉处死小鼠,收集肾组织样本,常规石蜡包埋。苏木精-伊红染色和天狼星红染色检测小鼠肾组织病理变化。原位杂交和免疫组化分别检测肾组Snail、IGF-1、E-钙黏蛋白和纤维连接蛋白的mRNA和蛋白表达。体外实验,大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E,ATCCCRL-1571~(TM))分为四个组,对照组、高糖组、NT组、siRNA组。分别于相应处理48 h用原位杂交检测Snail1、IGF-1、ED-1和FN mRNA,72 h免疫荧光分别检测蛋白的表达。结果:体内实验,DKD组随机小鼠血糖与对照组相比,明显增高(P<0.05),与DKD组相比,胰岛素组明显下降(P<0.05)。DKD组小鼠尿蛋白肌酐比,与对照组明显升高(P<0.05),与DKD组相比,IGF-1R组为和胰岛素组明显下降(P<0.01)。DKD组小鼠蛋白排泄率,与对照组相比明显增高(P<0.001),IGF-1组和胰岛素组与DKD组相比明显降低(P<0.05)。与对照组相比,DKD组小鼠肾组织中IGF-1、Snail 1和FN的mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05),与DKD组相比,IGF-1R组和明显增加(P<0.05)。与对照组相比,DKD组ED-1的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),与DKD组相比,,IGF-1R组明显增加(P<0.05)。体外实验,与对照组相比,高糖组细胞IGF-1、Snail 1和FN的mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01),与高糖组相比,siRNA沉默IGF-1后明显下降(均P<0.01)。与对照组相比,ED-1的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01),与高糖组相比,siRNA沉默IGF-1后明显增加(P<0.01)。结论:IGF-1R拮抗剂通过IGF-1/Snail1信号通路抑制DKD的EMT,为DKD的治疗提供新的治疗靶点。(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2017-10-26）
潘祉谕[2]（2017）在《IGF-1R抑制剂通过IGF-1/Snail1信号通路抑制糖尿病肾病肾小管上皮—间质细胞转分化》一文中研究指出目的:研究胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor 1receptor,IGF-1R)抑制剂对糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)肾小管上皮细胞向间质细胞转分化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用,并探讨是否通过调节Snail家族锌指蛋白1(Snail family zinc finger 1 protein,Snail1)信号通路发挥作用。方法:体内实验:1.30只C57/BL6小鼠,随机平均分为5组:(1)对照组小鼠普通饲料喂养;(2)DKD组小鼠高脂高糖饲料喂养8周,单次腹腔注射链尿佐菌素(Streptozocin,STZ)100mg/kg体重,继续高脂高糖喂养8周;(3)IGF-1R组小鼠成模后,给予30mg/(kg·48h)IGF-1R抑制剂灌胃8周;(4)ACEI组[血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin-converting enzyme inhibitors,ACEI)]小鼠成模后,给予10 mg/(kg·48h)体重贝那普利灌胃8周;(5)胰岛素组小鼠成模后,给予皮下注射1-2U/(kg·48h)胰岛素8周。2.常规生化法检测血糖、尿肌酐(Urine creatinine,Ucr)、24h蛋白排泄率。3.16周时麻醉处死小鼠,收集肾组织样本,常规石蜡包埋。进行组织病理学检测:(1)过碘酸希夫(Periodic acid schiff,PAS)染色和天狼星红(Sirius Red,SR)染色检测小鼠肾组织病理变化。(2)原位杂交和免疫组化分别检测肾组织Snail1、IGF-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin,ED-1)和纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)的mRNA和蛋白表达。体外实验:1.大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E,ATCC?CRL-1571?)分为四个组:(1)对照组肾小管上皮细胞含5mmol/L glucose的DMEM培养;(2)高糖组肾小管上皮细胞含25mmol/L glucose DMEM培养;(3)NT组肾小管上皮细胞25mmol/L glucose DMEM培养48h后25nmol非靶向si RNA干扰;(4)IGF-1 siRNA组肾小管上皮细胞25mmol/L glucose DMEM培养48h后25nmol IGF-1 siRNA干扰。2.原位杂交和免疫荧光法分别于相应处理48 h和72 h检测Snail1、IGF-1、ED-1和FN mRNA和蛋白的表达。分析数据用单因素方差。结果:体内实验:1.与对照组相比,DKD组小鼠血糖(23.14±2.04 mmol/L vs7.33±0.92 mmol/L)、尿蛋白肌酐比(697.67±168.78μg/mg vs 97.69±10.68μg/mg)和尿蛋白排泄率(257±47.56μg/24h vs 25±2.44μg/24h)均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);与DKD组相比,IGF-1R组尿蛋白肌酐比(130.89±27.86μg/mg)和尿蛋白排泄率(93±7.98μg/24h)均明显下降(P<0.001);胰岛素组血糖(9.65±0.74 mmol/L)、尿蛋白肌酐比(269.40±13.98μg/mg)和尿蛋白排泄率(204±35.98μg/24h)较DKD组亦明显下降(P<0.05)2.对照组小鼠肾小管上皮细胞彼此紧密相连,排列整齐,基底膜完整,肾小管间质未见炎症细胞浸润和胶原纤维沉积。DKD组肾小管肥大增生、肾小管上皮损伤、肾小管结构破坏,间质见多量胶原纤维沉积(P<0.01)。与DKD组比较,IGF-1R组肾小管结构基本完整,肥大程度明显减轻,间质胶原沉积量明显减少(P<0.01),ACEI组和胰岛素组变化无显着差异(P>0.05)。3.与对照组相比,DKD组小鼠肾组织中IGF-1、Snail1和FN的m RNA及蛋白表达明显增加(P<0.05),ED-1的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05);与DKD组相比,IGF-1R组Snail1和FN的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),ED-1的mRNA及蛋白表达明显增加。体外实验:1.IGF-1的沉默效率为61.1%;2.DKD组肾小管上皮细胞IGF-1、Snail1、FN和ED-1的mRNA及蛋白表达趋势同DKD组小鼠组织一致。3.与高糖组相比,IGF-1siRNA组Snail1的mRNA及蛋白表达明显下降(均P<0.01),FN的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),ED-1的mRNA及蛋白表达明显增加。结论:1.IGF-1R抑制剂可减轻DKD肾小管上皮细胞EMT;2.干预IGF-1或IGF-1R可通过下调Snail1表达减轻肾小管上皮细胞EMT;3.调控IGF-1/Snail1信号通路可能成为阻止DKD进展的有效治疗靶点。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2017-05-01）
任志涛[3]（2015）在《小檗碱对TGF-β1诱导A549细胞上皮间质转化和MRC-5细胞转分化及细胞信号通路相关蛋白的影响》一文中研究指出目的探讨小檗碱(BBR)在转化生长因子(TGF-β1)诱导的人肺癌上皮细胞A549上皮间质转化(EMT)过程中和人胚肺成纤维细胞MRC-5转分化过程中,对细胞外羟脯氨酸和细胞内表征蛋白钙粘蛋白(E-cadherin)、纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及MAPK信号通路相关蛋白磷酸化水平、Akt信号通路相关蛋白磷酸化水平和锌指转录因子Snail表达的影响。方法体外培养A549细胞和MRC-5细胞,采用MTT法检测不同浓度BBR对细胞增殖的抑制作用,确定适合的实验用药浓度；Western blot法检测不同浓度TGF-β1诱导A549细胞EMT和MRC-5细胞转分化表征蛋白E-cadherin、FN、α-SMA表达水平,确定适宜的TGF-β1诱导浓度。不同浓度BBR预处理的A549细胞和MRC-5细胞,TGF-β1刺激后,采用比色法测定细胞外羟脯氨酸水平,对于细胞内E-cadherin、 FN、α-SMA表达水平以及MAPK信号通路相关蛋白p38、ERK1/2、JNK和Akt的磷酸化水平,以及Snail的表达水平,均采用Western blot法进行检测。同时采用半定量PCR和Real-time PCR法,检测了BBR对TGF-β1诱导的相应细胞表征蛋白mRNA转录水平的影响。结果参考MTT法检测结果,选定BBR适宜浓度(20,40,80μmol/L)进行研究。Western blot结果显示2ng/mL浓度TGF-β1可明显诱导A549细胞EMT,诱导MRC-5细胞转分化。BBR预处理的A549细胞,较单纯TGF-β1诱导细胞,培养液中羟脯氨酸水平明显降低。Western blot法检测结果显示,高浓度BBR (80μmol/L)预处理细胞较单纯TGF-β1诱导细胞,在一定程度抑制了FN的高表达水平,但不能逆转E-cadherin的表达降低。BBR叁个浓度(20、40、80μmol/L)预处理细胞较单纯TGF-β1诱导细胞,对MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2(Thr202/Tyr204)的磷酸化水平均存在一定抑制作用,BBR(20μmol/L)对Snail存在一定抑制作用,但对p38、JNK磷酸化水平变化没有明显影响；另外,高浓度BBR(80μM)对p-Akt(Ser473)存在较明显的促进作用,使其表达量恢复至接近正常水平。BBR预处理的MRC-5细胞,较单纯TGF-β1诱导细胞,培养液中羟脯氨酸水平明显降低。Western blot法检测结果显示,BBR预处理细胞较单纯TGF-β1诱导细胞,α-SMA、FN表达水平受抑较明显,MAPK信号通路相关蛋白p38、ERK1/2、JNK磷酸化水平亦受到不同程度抑制,Akt磷酸化水平和Snail表达水平也明显受到抑制。结论BBR预处理对TGF-β1诱导的A549细胞的EMT过程有一定抑制作用,但不是很显着,其抑制机制可能与上调Akt的磷酸化水平和抑制ERK1/2的磷酸化水平有关；BBR预处理对TGF-β1诱导的MRC-5转分化过程有较明显抑制作用,其机制可能与BBR下调MAPK信号通路相关蛋白的磷酸化水平、Akt信号通路蛋白磷酸化水平和Snail表达有关。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2015-06-01）
周艳[4]（2015）在《基于“疏通肺络法”研究艾灸对肺纤维化大鼠上皮细胞-间质细胞转分化机制的影响》一文中研究指出研究目的：肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是呼吸系统最严重的疾病之一,临床上主要表现为进行性呼吸困难、喘息、气短、咳嗽咯痰,以限制性通气功能障碍,低氧血症为主,最终导致呼吸衰竭。上皮细胞-间质细胞(epithelial-mesenchymal transition,EMT)理论是近年国际研究器官纤维化的主要成果之一。因此本课题拟在前期研究成果的基础之上,采用疏通肺络治法,选取(肺俞、膏育俞)艾灸(moxibustion),观察由博来霉素复制的经典肺纤维化大鼠模型在艾灸治疗疗程中上皮细胞蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad),间质细胞蛋白α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)的mRNA表达的动态改变,初步阐明疏通肺络法调控肺纤维化EMT关键位点与调控规律。方法：8周龄健康SPF级大鼠81只,体重180士20g,雌雄各半。将大鼠随机分组：空白对照(C)组9只；模型(B)组：模型7天(B7)组9只、模型11天(B11)组9只、模型23天(B23)组9只、模型35天(B35)组9只：艾灸(M)组：艾灸11天(M11)组9只、艾灸23天(M23)组9只、艾灸35天(M35)组9只；阳性对照(泼尼松,P)组9只。造模采用Thrall等方法气管内一次性注入博来霉素复制肺纤维化模型,空白对照组同样按造模方法予以气管内一次性注射等体积的生理盐水。各组造模均于第二天开始治疗及干预,艾灸组交替艾灸双侧肺俞、膏育俞；泼尼松组以泼尼松灌胃；空白组和所有模型组与艾灸组采取同样的抓取固定,不给予任何治疗。模型组第7、11、23、35天,分别选对应时间点组大鼠；艾灸组第11、23、35天(每疗程后一天),分别选取对应时间点大鼠：泼尼松组、空白组于35天后全部选取。各组称取体重,采取股动脉放血处死大鼠,打开胸腔,观察肺大体颜色、体积、有无出血点、结节等。取左肺组于10%中性甲醛固定,再选取左肺上叶固定、包埋、切片行HE、Masson染色后,按照Szapie法进行肺泡炎分级评分和肺纤维化分级评分。取右肺上叶组织用于进行实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR)检测E-cadherin mRNA、α-SMA mRNA、vimentin mRNA的表达。实验过程中所得数据均采用SPSS 19.0进行统计学分析,所有计量数据都用均数土标准差来表示,采用多因素方差分析进行统计学分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果：1.各组大鼠一般情况观察：空白对照组大鼠呼吸均匀平稳,毛发润泽光亮,反应灵敏,大便成形,体重正常增长；模型组大鼠呼吸急促,胸廓起伏增大加快,鼻部及爪甲呈青紫色,精神萎靡不振,弓背蜷缩,毛发稀疏无光泽,大便糖稀,体重明显下降：治疗后,艾灸组与模型组相比一般情况有较大的改善；阳性对照组同艾灸组无明显差异。2.肺系数模型组、艾灸组和阳性对照组各组肺系数均显着大于空白对照组(P<0.01)；模型组11d与艾灸组11d无统计学差异(P>0.05),模型组23d肺系数较艾灸组23d、模型组35d肺系数较艾灸组35d均升高,有显着性差异(P<0.01)；模型组35d肺系数较阳性对照组高,有统计学差异(P<0.05)；艾灸35d组与阳性对照组肺系数无统计学意义(P>0.05)3.病理学观察3.1模型组：模型组第7、lld肺泡炎程度较空白对照组均显着升高(P<0.01),模型组7d肺纤维化程度与空白对照组无明显区别,统计学无差异(P>0.05),模型组lld肺纤维化明显较空白对照组严重(P<0.01)；模型组第23、35d肺泡炎程度减轻但较空白对照组仍严重(P<0.05),模型组23、35d肺纤维化程度较空白对照组严重,有显着性差异(P<0.01)。3.2艾灸组：艾灸组11d肺泡炎程度较空白对照组严重(P<0.01),艾灸组23、35d肺泡炎程度有所减轻,较空白对照组仍有差异(P<0.05)；艾灸组lld较模型组lld肺泡炎症有所减轻,有统计学差异(P<0.05),模型组23与艾灸组23d无明显差异(P>0.05),艾灸35d较模型35d肺泡炎明显减轻有显着性差异(P<0.01)；艾灸组11、23、35d肺纤维化程度较空白对照组严重(P<0.01),艾灸组11、23d分别与模型组11、23d无明显差异(P>0.05),艾灸组35d较模型35d肺纤维化程度减轻,有显着性差异(P<0.01)。3.3阳性对照组：阳性对照组肺泡炎程度和肺纤维化较空白对照组严重,有显着性差异(P<0.01),阳性对照组肺泡炎症程度与模型组35d、艾灸组35d均无统计学差异(P>0.05)；阳性对照组纤维化程度较模型组35d有所减轻,有统计学差异(P<0.05),阳性对照组和艾灸组35d纤维化程度无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。4.各组肺组织蛋白mRNA的表达4.1E-钙黏蛋白mRNA表达的影响与空白对照组相比,模型组、艾灸组、阳性对照组E-cad的mRNA表达量均有不同程度的下降,以模型组35d最低；艾灸治疗干预后艾灸组E-cad的mRNA表达量其下降趋势明显比同期模型组缓慢,尤其是第35d与模型组同期相比,艾灸组35dE-cad mRNA表达量明显增多,有显着差异(P<0.01)；而阳性对照组与模型组35d相比,阳性对照组E-cad mRNA表达量增多,有统计学差异(P<0.05)；4.2 α-平滑肌蛋白mRNA表达的影响与空白对照组相比,模型组、艾灸组、阳性对照组a-SMA的mRNA表达量均有不同程度的上升,以模型组35d最高；艾灸治疗干预后艾灸组a-SMA的mRNA表达量其上升势明显比同期模型组缓慢,第11天与模型组相比,艾灸组11d α-SAM mRNA表达量明显减少,有显着差异(P<0.01);第35天与模型组相比,艾灸组35dα-SAM mRNA表达量有所减少,有差异(P<0.05)。阳性对照组和模型组35d、艾灸组35d均无明显差异,统计学无意义(P>0.05)。4.3波形蛋白mRNA表达的影响与空白对照组相比,模型组、艾灸组、阳性对照组vimentin的mRNA表达量均有不同程度的上升,以模型组35d最高；艾灸治疗干预后艾灸组vimentin的mRNA表达量其上升势明显比同期模型组缓慢,第23天与模型组相比,艾灸组23d vimentin mRNA表达量明显减少,有显着差异(P<0.01)；第35天与模型组相比,艾灸组35dvimentin mRNA表达量有所减少,有差异(P<0.01)；阳性对照组和模型组35d、艾灸组35d均无明显差异,统计学无意义(P>0.05)。结论：(1)本实验通过一次性气管灌注博莱霉素所获得大鼠肺纤维化模型,其各时间点的病理形态改变与国内外文献报道基本一致,说明本实验由博来霉素复制的经典肺纤维化大鼠模型是成功的。(2)艾灸对肺纤维化发展各个阶段肺组织病理形态(肺泡炎和肺纤维化)有改善作用,说明艾灸对肺纤维化有一定的防治作用,其疗效与艾灸疗程的长短有关,疗程越长其治疗效果越佳。(3)艾灸对肺纤维化大鼠模型的干预治疗,可能与抑制EMT中间质细胞关键因子α-SMA、vimentin蛋白的mRNA表达,升高其上皮细胞关键因子E-cad蛋白mRNA的表达水平,从而延缓EMT发展进程有关。(4)疏通经络之法,达到了寓通于补,通不致虚,补不留邪,平和阴阳,调畅气血,恢复脏腑功能。此次实验论证了运用“补”与“通补兼施”治法去疏通肺络,为艾灸防治肺纤维化提供了实验理论依据。(本文来源于《成都中医药大学》期刊2015-05-30）
李望,高维强[5]（2014）在《与泌尿生殖窦间质细胞共培养诱导hUC-MSCs定向分化为前列腺上皮样细胞》一文中研究指出目的研究人的脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)与特异性的组织细胞在体外共培养,观察h UC-MSCs是否能够被诱导定向分化。方法原代培养h UC-MSCs和SD大鼠的泌尿生殖窦的间质细胞(r UGSSs)。将细胞消化传代、扩增、鉴定。将两种细胞混合在鼠尾胶中进行叁维体外共培养,加雄激素诱导两周后将含有细胞的鼠尾胶做冰冻切片免疫荧光分析前列腺细胞特异性的标志物。结果将h UC-MSCs联合r UGSSs在体外诱导培养两周后,一些细胞表达前列腺上皮的标志物。包括基底细胞的标志物细胞角蛋白5(CK5)和P63蛋白、腔细胞的标志物细胞角蛋白8(CK8)染色阳性。结论 UC-MSCs与r UGSSs在体外共培养后,可以诱导为前列腺上皮样细胞。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2014年09期）
王昌明,陈娟,蒋明,禤秀萍,黎洪秀[6]（2014）在《青蒿琥酯干预TGF-β1诱导的肺泡上皮-间质细胞转分化与肺纤维化的关系》一文中研究指出间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)是以肺泡壁为主,并包括肺泡周围组织及其相邻支撑结构病变的一组非肿瘤、非感染性疾病群[1]。ILD中最常见的疾病是特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF),有学者认为,IPF是病因未明的慢性进(本文来源于《药学学报》期刊2014年01期）
王昌明,陈娟,蒋明,周燕,陈军宁[7]（2013）在《青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化为间质细胞过程的影响》一文中研究指出目的探讨青蒿琥酯对TGF-β1诱导的EMT过程的影响。方法体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN);细胞分6组,①空白组;②TGF-β1组;③TGF-β1联合青蒿琥酯各浓度剂量组(1、2、4、8ug/ml)组,培养24小时后,观察细胞形态;收集细胞,RT-PCR法及Westernblotting法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim mRNA及蛋白表达情况。结果镜下示与正常组比较,TGF-β1组RLE-6TN细胞由铺路石状上皮形态变成梭形、纺锤形,青蒿琥酯干预后,细胞梭形结构减少,部分恢复铺路石状上皮形态;(本文来源于《中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编》期刊2013-09-18）
陈芳,成芳,项倩彤,郭思佳,查晓军[8]（2013）在《肾小管上皮-间质细胞转分化模型的建立》一文中研究指出目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用,建立肾小管上皮-间质细胞转分化(TEMT)模型。方法实验分为正常对照组和TGF-β1处理组,利用TGF-β1处理人肾小管上皮细胞(HK-2)24 h,分别应用Western blot和免疫荧光方法检测上皮细胞和间质细胞分子标记的表达变化;应用划痕和Transwell assay方法检测细胞迁移及侵袭能力。结果与正常对照组比较,TGF-β1处理组HK-2细胞呈梭形,上皮细胞标记分子E-cadherin表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01),间质细胞标记分子骨架蛋白Vimentin和β-catenin表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);细胞的迁移及侵袭能力亦明显增强。结论 TGF-β1刺激后HK-2细胞促进上皮细胞转化为间质细胞。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2013年06期）
陈娟[9]（2013）在《青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化为间质细胞过程的影响》一文中研究指出目的：特发性肺纤维化是以间充质细胞增生和细胞外基质异常沉积为特点的渐进性疾病，正常肺组织主要由肺泡上皮细胞组成，肺泡上皮细胞分Ⅰ型和Ⅱ型。肺泡Ⅱ型上皮细胞有干细胞特性，可在细胞因子TGF-β1的作用下转分化为间质细胞（EMT），表达间质细胞表型标志物肌动蛋白（ACTA2）和V-波形蛋白(Vim)，从而加快肺纤维化进程，其可能机制为活化TGF-β1底物Smad、P38MAPK。青蒿琥酯为传统的抗疟疾药，前期研究证实其有抗纤维化作用。本研究拟用青蒿琥酯为工具药，探讨在青蒿琥酯作用下对TGF-β1诱导的EMT过程的影响及其可能机制，从而研究青蒿琥酯与肺纤维化的关系。方法：实验分两部分。第一部分研究青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡上皮-间质细胞转分化过程中TGF-β1/smad通路影响的剂量效应及时间效应：体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）；预实验检测TGF-β1诱导浓度；MTT法检测青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞12小时、24小时、48小时后的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50），根据IC50选择青蒿琥酯干预浓度；细胞分6组（剂量效应），①空白组；②TGF-β1（3ng/ml）组；③TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(1ug/ml)组；④TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(2ug/ml)组；⑤TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(4ug/ml)组；⑥TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(8ug/ml)组，培养24小时后，在倒置显微镜下观察细胞形态；收集细胞，提取总RNA，RT-PCR法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim的mRNA表达情况；提取总蛋白，Western bloting法检测各组P-Smad3、Smad7、ACTA2、Vim蛋白表达情况；细胞分成4组（时间效应），①空白组（1%FBS）；②TGF-β组（3ng/ml）；③TGF-β（3ng/ml）联合青蒿琥酯（1ug/ml）组；④青蒿琥酯组（1ug/ml），培养12、24、48小时后；收集细胞，提取总RNA， RT-PCR法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim的mRNA表达情况；培养24小时后，提取总蛋白，Western bloting法检测各组P-Smad3、Smad7、ACTA2、Vim蛋白表达情况。第二部分研究不同剂量的青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转分化过程中TGF-β1/P38MAPK通路的影响：体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）；细胞分6组，①空白组；②TGF-β1（3ng/ml）组；③TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(1ug/ml)组；④TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(2ug/ml)组；⑤TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(4ug/ml)组；⑥TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(8ug/ml)组，培养24小时后，收集细胞，提取总RNA，RT-PCR法检测各组P38MAPK、ACTA2、Vim mRNA表达情况；提取总蛋白，Western bloting法检测各组P38MAPK、ACTA2、Vim蛋白表达情况。结果：第一部分：青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞12小时后无抑制作用，24小时后的IC50为8.86ug/ml，48小时IC50为5.04ug/ml；镜下观察结果示与正常组相比，TGF-β1组RLE-6TN细胞由铺路石状上皮形态变成梭形、纺锤形，而且其细胞间隙略变大，青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞24小时后，与TGF-β1组比较，细胞的梭形结构减少，部分恢复铺路石状上皮形态，但细胞之间连接仍松散，其中TGF-β1联合青蒿琥酯1ug/ml组表现最明显；RT-PCR及Western bloting结果示与空白组比较，TGF-β1组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达增加（P<0.05）；与TGF-β1组比较，TGF-β1联合青蒿琥酯组Smad7mRNA及蛋白均表达增加（P<0.05）；Smad3、ACTA2、VimmRNA表达降低（P<0.05），P-Smad3、ACTA2、Vim蛋白表达降低（P<0.05），作用剂量为1ug/ml，作用24小时表达最明显。第二部分：RT-PCR及Western bloting结果示与空白组比较，TGF-β1组P38MAPK、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达增加（P<0.05）；与TGF-β1组比较，P38MAPK、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达降低（P<0.05）。结论：1.TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞转分化为间质细胞（EMT）。2.青蒿琥酯可在一定程度上抑制TGF-β1诱导的EMT过程，其可能机制为上调Smad7mRNA及蛋白表达，下调Smad3、P38MAPK mRNA及蛋白的表达，抑制Smad3蛋白磷酸化。3.青蒿琥酯具有抗纤维化作用，其可能机制为抑制TGF-β1诱导的EMT过程。(本文来源于《桂林医学院》期刊2013-04-01）
荣智利,马跃荣[10]（2012）在《巨噬细胞与肾小管上皮-间质细胞转分化》一文中研究指出巨噬细胞作为一种极具异质性的细胞群体,在体内复杂的微环境中表现出独特的表型和功能,在组织重塑、炎症、免疫调节、清除凋亡细胞及创伤愈合等中发挥作用[1]。在许多情况下,巨噬细胞浸润的轻重与肾间质纤维化(renal interstitial(本文来源于《泸州医学院学报》期刊2012年05期）
上皮间质细胞转分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor 1receptor,IGF-1R)抑制剂对糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)肾小管上皮细胞向间质细胞转分化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用,并探讨是否通过调节Snail家族锌指蛋白1(Snail family zinc finger 1 protein,Snail1)信号通路发挥作用。方法:体内实验:1.30只C57/BL6小鼠,随机平均分为5组:(1)对照组小鼠普通饲料喂养;(2)DKD组小鼠高脂高糖饲料喂养8周,单次腹腔注射链尿佐菌素(Streptozocin,STZ)100mg/kg体重,继续高脂高糖喂养8周;(3)IGF-1R组小鼠成模后,给予30mg/(kg·48h)IGF-1R抑制剂灌胃8周;(4)ACEI组[血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin-converting enzyme inhibitors,ACEI)]小鼠成模后,给予10 mg/(kg·48h)体重贝那普利灌胃8周;(5)胰岛素组小鼠成模后,给予皮下注射1-2U/(kg·48h)胰岛素8周。2.常规生化法检测血糖、尿肌酐(Urine creatinine,Ucr)、24h蛋白排泄率。3.16周时麻醉处死小鼠,收集肾组织样本,常规石蜡包埋。进行组织病理学检测:(1)过碘酸希夫(Periodic acid schiff,PAS)染色和天狼星红(Sirius Red,SR)染色检测小鼠肾组织病理变化。(2)原位杂交和免疫组化分别检测肾组织Snail1、IGF-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin,ED-1)和纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)的mRNA和蛋白表达。体外实验:1.大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E,ATCC?CRL-1571?)分为四个组:(1)对照组肾小管上皮细胞含5mmol/L glucose的DMEM培养;(2)高糖组肾小管上皮细胞含25mmol/L glucose DMEM培养;(3)NT组肾小管上皮细胞25mmol/L glucose DMEM培养48h后25nmol非靶向si RNA干扰;(4)IGF-1 siRNA组肾小管上皮细胞25mmol/L glucose DMEM培养48h后25nmol IGF-1 siRNA干扰。2.原位杂交和免疫荧光法分别于相应处理48 h和72 h检测Snail1、IGF-1、ED-1和FN mRNA和蛋白的表达。分析数据用单因素方差。结果:体内实验:1.与对照组相比,DKD组小鼠血糖(23.14±2.04 mmol/L vs7.33±0.92 mmol/L)、尿蛋白肌酐比(697.67±168.78μg/mg vs 97.69±10.68μg/mg)和尿蛋白排泄率(257±47.56μg/24h vs 25±2.44μg/24h)均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);与DKD组相比,IGF-1R组尿蛋白肌酐比(130.89±27.86μg/mg)和尿蛋白排泄率(93±7.98μg/24h)均明显下降(P<0.001);胰岛素组血糖(9.65±0.74 mmol/L)、尿蛋白肌酐比(269.40±13.98μg/mg)和尿蛋白排泄率(204±35.98μg/24h)较DKD组亦明显下降(P<0.05)2.对照组小鼠肾小管上皮细胞彼此紧密相连,排列整齐,基底膜完整,肾小管间质未见炎症细胞浸润和胶原纤维沉积。DKD组肾小管肥大增生、肾小管上皮损伤、肾小管结构破坏,间质见多量胶原纤维沉积(P<0.01)。与DKD组比较,IGF-1R组肾小管结构基本完整,肥大程度明显减轻,间质胶原沉积量明显减少(P<0.01),ACEI组和胰岛素组变化无显着差异(P>0.05)。3.与对照组相比,DKD组小鼠肾组织中IGF-1、Snail1和FN的m RNA及蛋白表达明显增加(P<0.05),ED-1的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05);与DKD组相比,IGF-1R组Snail1和FN的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),ED-1的mRNA及蛋白表达明显增加。体外实验:1.IGF-1的沉默效率为61.1%;2.DKD组肾小管上皮细胞IGF-1、Snail1、FN和ED-1的mRNA及蛋白表达趋势同DKD组小鼠组织一致。3.与高糖组相比,IGF-1siRNA组Snail1的mRNA及蛋白表达明显下降(均P<0.01),FN的mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),ED-1的mRNA及蛋白表达明显增加。结论:1.IGF-1R抑制剂可减轻DKD肾小管上皮细胞EMT;2.干预IGF-1或IGF-1R可通过下调Snail1表达减轻肾小管上皮细胞EMT;3.调控IGF-1/Snail1信号通路可能成为阻止DKD进展的有效治疗靶点。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
上皮间质细胞转分化论文参考文献
[1].董蓉,达静静,查艳.阻断IGF-1R/IGF-1信号通路抑制Snail1诱导的糖尿病肾病肾小管上皮-间质细胞转分化[C].第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编.2017
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[3].任志涛.小檗碱对TGF-β1诱导A549细胞上皮间质转化和MRC-5细胞转分化及细胞信号通路相关蛋白的影响[D].北京协和医学院.2015
[4].周艳.基于“疏通肺络法”研究艾灸对肺纤维化大鼠上皮细胞-间质细胞转分化机制的影响[D].成都中医药大学.2015
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[10].荣智利,马跃荣.巨噬细胞与肾小管上皮-间质细胞转分化[J].泸州医学院学报.2012
标签：糖尿病肾脏病; 上皮-间质细胞转分化; 胰岛素样生长因子-1; 锌指转录因子1;