导读:本文包含了异源蛋白表达系统论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:杆状病毒,多角体,异源包埋
异源蛋白表达系统论文文献综述
郭建军,袁林,曾静,魏国汶,杨一兵[1]（2016）在《多角体包埋异源蛋白杆状病毒表达系统的构建》一文中研究指出[目的]探索多角体病毒的包装特性,构建能形成多角体包裹外源蛋白的polyh+Bac-to-Bac表达系统。[方法]通过酶切连接的方式,将4个元件片段:作为标记的绿色荧光基因EGFP,Bm CPV自身的多角体蛋白基因,用于基因表达的H1信号肽柔性连接肽,插入到质粒Fast Bac Dual中,利用Ac MNPV Bac-to-Bac系统,得到整合表达重组Bacmid:Ac-polyh/EGFP。将其感染Sf9细胞后,检测蛋白表达情况。[结果]利用该系统构建了一种能大量表达绿色荧光蛋白(EGFP)和能在胞质形成多角体的重组病毒v Bm Bac(polyh+)-EGFP。感染的Sf9细胞在荧光显微镜下观察发现EGFP与多角体可以在同一细胞中同时表达;从感染的Sf9细胞中收集纯化多角体,观察到多角体能被激发出绿色荧光,进一步利用Western blot证实多角体中含有EGFP。[结论]该表达系统为解决活性蛋白长期保存提供了新方法,同时拓宽了杆状病毒在开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂和新型疫苗的转运载体等领域的应用前景。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2016年02期）
苏涛[2]（2009）在《甲烷氧化菌（Methylosinus trichosporium）OB3b异源蛋白表达系统的初步研究》一文中研究指出Methylosinus trichosporium OB3b是以甲烷为碳源和能源进行代谢的革兰氏阴性细菌,其含有有甲烷单加氧酶(Methane monooxygenase,MMO),其不仅可以用来生产很多高附加值的化工产品,而且可以用于治理环境中难降解污染物,被认为是一种多功能的生物催化剂。MMO酶活不高,催化氧化过程NADH再生不足等因素限制了其应用,对Methylosinus trichosporium OB3b进行基因工程改造是目前普遍采用的方法,但是这些改造方法缺少在M. trichosproium OB3b中表达异源蛋白的研究。本论文以Methylosinus trichosporium OB3b为材料,探索建立该菌的异源蛋白表达系统,旨在为更好的对甲烷氧化菌进行改造奠定基础。目前对于甲烷氧化菌的基因操作只能依靠接合转导和同源重组来实现,本文通过M. trichosporium OB3b和S17-1(pTJS175)的接合实验,优化了两菌最佳接合细胞密度,结果显示M. trichosporium OB3b的OD540为0.3-0.4,E. coli S17-1的OD600为0.6-0.7为两菌的最佳接合细胞密度。选择pMMO基因簇下游约500bp基因片段做为异源基因的插入位点,以M. trichosporium OB3b染色体DNA为模版,PCR扩增了该区域并构建了含有卡那霉素抗性基因的自杀载体pSHK,酶切验证显示,pSHK通过电转化的方法成功转入E. coli S17-1中,通过卡那霉素筛选E. coli S17-1 (pSHK)和M. trichosporium OB3b的接合子,未得到期望的突变体,无法通过pSHK在该500bp基因区域引入异源基因,推测是由于所设计的pSHK的同源臂太短或该500bp基因为M. trichosporium OB3b生长关键基因所致。选择sMMO基因簇上游约5200bp区域做为异源蛋白基因插入位点,以整合型载体pTJS175为出发质粒,构建了含有绿色荧光蛋白gfp基因的表达质粒pJSG,电转化入S17-1中。通过接合的方法,pJSG成功转入到了M. trichosporium OB3b中,PCR验证结果说明,pJSG通过同源臂Arm1和M. trichosporium OB3b的染色体发生了同源单交换,使整个质粒整合到了M. trichosporium OB3b染色体上的sMMO基因簇上游区域。荧光分析结果显示,整合了pJSG的突变体能够表达gfp基因,进一步通过不同Cu2+浓度的条件下培养结果表明,突变体GFP的表达受PmmoX(mmoX启动子)调控,不添加Cu2+时,可以检测到荧光,当添加Cu2+浓度为10μM时,检测不到荧光。通过以上研究在M. trichosporium OB3b中初步建立了异源蛋白表达系统,为该菌的基因工程改造和异源蛋白表达研究提供了技术支撑。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2009-06-01）
姜天一,朱平[3]（2007）在《丝状真菌异源蛋白表达系统研究进展》一文中研究指出丝状真菌,俗称霉菌,在食品工业中被用于生产多种生物酶和有机酸。近年来,人们发现丝状真菌具有分泌量大、表达的蛋白有天然活性等特点,非常适合作为同源和异源重组蛋白的表达宿主,因此被广泛研究和探讨。简要综述了以黑曲霉为代表的几种常被用作蛋白表达宿主的丝状真菌的特点、应用中的主要问题和基本解决方案,以及近年关于丝状真菌表达系统的最佳培养条件和发酵条件的研究进展。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2007年06期）
徐波,曹郁生,陈燕,郭兴华[4]（2007）在《乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达》一文中研究指出以α-aga基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞壁锚定表达系统,并用这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H。首先以pRAF800和pNZ8048构建了含有α-aga、PnisA-MCS-TpepN和θ复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体pRNA48,再以pRNA48和pVE5524为出发载体构建了含有α-aga、PnisA-SPUsp45-nucA-CWAM6-t1t2和θ复制子的乳酸乳球菌细胞壁锚定诱导表达载体pRNV48。然后以食品级载体pRNA48和pRNV48为基础,构建了不含抗生素抗性选择标记的铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因的表达质粒pRNA48-OprF/H和pRNV48-OprF/H。利用nisin进行重组乳酸乳球菌菌株的诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,检测到表达蛋白分别占细胞内可溶蛋白的9.6%和细胞壁锚定蛋白的9.8%,表达产物具有免疫原性,可与含OprF/H的乳球菌以及铜绿假单胞菌发生特异性的凝集反应。(本文来源于《微生物学报》期刊2007年04期）
徐波,曹郁生,陈燕,郭兴华[5]（2006）在《乳酸乳球菌食品级诱导表达系统构建及异源蛋白的表达》一文中研究指出构建乳酸菌食品级诱导表达载体,可集益生菌本身生物功能和外源基因表达产物活性于一体,在食品和医药方面有着很好的应用前景。本研究以a-aga基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞外分泌表达系统,并用这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF／H。研究中首先构建了含有a-aga、PnisA-MCS-TpepN和θ复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体pRNA48,再以pRNA48和pVE5524为出发(本文来源于《2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集》期刊2006-10-01）
异源蛋白表达系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
Methylosinus trichosporium OB3b是以甲烷为碳源和能源进行代谢的革兰氏阴性细菌,其含有有甲烷单加氧酶(Methane monooxygenase,MMO),其不仅可以用来生产很多高附加值的化工产品,而且可以用于治理环境中难降解污染物,被认为是一种多功能的生物催化剂。MMO酶活不高,催化氧化过程NADH再生不足等因素限制了其应用,对Methylosinus trichosporium OB3b进行基因工程改造是目前普遍采用的方法,但是这些改造方法缺少在M. trichosproium OB3b中表达异源蛋白的研究。本论文以Methylosinus trichosporium OB3b为材料,探索建立该菌的异源蛋白表达系统,旨在为更好的对甲烷氧化菌进行改造奠定基础。目前对于甲烷氧化菌的基因操作只能依靠接合转导和同源重组来实现,本文通过M. trichosporium OB3b和S17-1(pTJS175)的接合实验,优化了两菌最佳接合细胞密度,结果显示M. trichosporium OB3b的OD540为0.3-0.4,E. coli S17-1的OD600为0.6-0.7为两菌的最佳接合细胞密度。选择pMMO基因簇下游约500bp基因片段做为异源基因的插入位点,以M. trichosporium OB3b染色体DNA为模版,PCR扩增了该区域并构建了含有卡那霉素抗性基因的自杀载体pSHK,酶切验证显示,pSHK通过电转化的方法成功转入E. coli S17-1中,通过卡那霉素筛选E. coli S17-1 (pSHK)和M. trichosporium OB3b的接合子,未得到期望的突变体,无法通过pSHK在该500bp基因区域引入异源基因,推测是由于所设计的pSHK的同源臂太短或该500bp基因为M. trichosporium OB3b生长关键基因所致。选择sMMO基因簇上游约5200bp区域做为异源蛋白基因插入位点,以整合型载体pTJS175为出发质粒,构建了含有绿色荧光蛋白gfp基因的表达质粒pJSG,电转化入S17-1中。通过接合的方法,pJSG成功转入到了M. trichosporium OB3b中,PCR验证结果说明,pJSG通过同源臂Arm1和M. trichosporium OB3b的染色体发生了同源单交换,使整个质粒整合到了M. trichosporium OB3b染色体上的sMMO基因簇上游区域。荧光分析结果显示,整合了pJSG的突变体能够表达gfp基因,进一步通过不同Cu2+浓度的条件下培养结果表明,突变体GFP的表达受PmmoX(mmoX启动子)调控,不添加Cu2+时,可以检测到荧光,当添加Cu2+浓度为10μM时,检测不到荧光。通过以上研究在M. trichosporium OB3b中初步建立了异源蛋白表达系统,为该菌的基因工程改造和异源蛋白表达研究提供了技术支撑。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
异源蛋白表达系统论文参考文献
[1].郭建军,袁林,曾静,魏国汶,杨一兵.多角体包埋异源蛋白杆状病毒表达系统的构建[J].安徽农业科学.2016
[2].苏涛.甲烷氧化菌（Methylosinustrichosporium）OB3b异源蛋白表达系统的初步研究[D].中国农业科学院.2009
[3].姜天一,朱平.丝状真菌异源蛋白表达系统研究进展[J].生物技术通讯.2007
[4].徐波,曹郁生,陈燕,郭兴华.乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达[J].微生物学报.2007
[5].徐波,曹郁生,陈燕,郭兴华.乳酸乳球菌食品级诱导表达系统构建及异源蛋白的表达[C].2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集.2006