导读:本文包含了化疗抵抗论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:结直肠癌,扭曲因子,上皮细胞-间充质转化,肿瘤干细胞
化疗抵抗论文文献综述
邓君健,张帆,包文婷,熊琳,刘远识[1]（2019）在《Twist对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化、肿瘤干细胞表型转化、化疗抵抗的影响》一文中研究指出目的研究Twist对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)、肿瘤干细胞表型转化、化疗抵抗的影响。方法选取人结肠癌HCT116细胞,分为空载体组及Twist过表达组(Twist组),空载体组及Twist组分别将2μg的空载体pcDNA3.1或pcDNA3.1-Twist载体转染至HCT116细胞。通过形态学观测、Transwell实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法、免疫荧光法检测EMT标志物E-钙黏蛋白、波形蛋白表达,Western blotting法检测肿瘤干细胞标志物Bmi-1、Nanog、CD44表达,给予HCT116细胞化疗药物奥沙利铂(0～10μmol/L梯度浓度)刺激,于570 nm波长处测定细胞活力。Western blotting法检测P-gp蛋白表达。采用荧光定量PCR法检测化疗抵抗相关分子ABCB1、ABCC1、ABCC2、ABCC3、ABCC4、ABCC5、ABCG2、ERCC1、XRCC1、MSH2、TUBB3、POLH、GSTπ、γ-GT1表达。结果 Twist组HCT116细胞的形态由圆形向长梭形态分化,空载体组与Twist组HCT116细胞穿膜细胞数分别为(6.24±0.89)、(26.83±1.02)个/HP,两组比较,P<0.05。空载体组与Twist组EMT相关分子蛋白E-钙黏蛋白相对表达量分别为0.82±0.09、0.24±0.04,波形蛋白相对表达量分别为0.12±0.02、1.05±0.12,两组E-钙黏蛋白、波形蛋白表达比较,P均<0.05。空载体组与Twist组HCT116细胞成球数量分别为(2.43±0.14)、(10.19±0.58)个/HP,两组比较,P<0.05。空载体组与Twist组肿瘤干细胞相关分子Nanog相对表达量分别为0.06±0.01、0.88±0.07,Bmi1相对表达量分别为0.23±0.04、1.26±0.88,CD44相对表达量分别为1.45±0.09、8.92±0.89,两组Nanog、Bmi1、CD44表达比较,P均<0.05。Twist组在奥沙利铂浓度0、0.1、1、5、10μmol/L刺激HCT116细胞后细胞活力分别为1.00±0.08、0.84±0.09、0.70±0.10、0.53±0.07、0.48±0.06,空载体组分别为1.00±0.07、0.76±0.08、0.58±0.05、0.27±0.04、0.08±0.04,奥沙利铂各浓度刺激HCT116细胞后两组细胞活力比较,P均<0.05。奥沙利铂刺激HCT116细胞后,Twist组肿瘤化疗抵抗相关调控分子ABCB1、ABCC1、ABCC2、ABCC3、ABCC4、ABCC5、ABCG2、ERCC1、XRCC1、MSH2、TUBB3、POLH、GSTπ、γ-GT1相对表达量分别为3.20±0.35、1.10±0.11、1.14±0.18、1.09±0.09、0.88±0.09、1.09±0.12、1.30±0.14、0.98±0.10、1.02±0.13、1.13±0.08、1.42±0.25、1.09±0.08、0.92±0.10、1.29±0.35,空载体组分别为1±0.10、1±0.14、1±0.13、1±0.15、1±0.09、1±0.12、1±0.11、1±0.15、1±0.14、1±0.13、1±0.15、1±0.09、1±0.15、1±0.17,两组ABCB1表达比较,P<0.05。结论 Twist可促使结直肠癌HCT116细胞发生EMT、干细胞表型转换,上调HCT116细胞的化疗抵抗能力。(本文来源于《山东医药》期刊2019年28期）
彭琳[2]（2019）在《BDE-47慢性暴露促进子宫内膜癌细胞恶性进展及化疗抵抗》一文中研究指出目的随着生殖模式的改变和环境雌激素暴露增加,子宫内膜癌发病率不断升高。具有内分泌干扰作用的2,2’,4,4’-四溴联苯醚(BDE-47)是环境和生物样本中最常见的多溴联苯醚同系物,,其与子宫内膜癌的关联至今不明确。本研究旨在探讨持续BDE-47暴露对子宫内膜癌演进及化疗敏感性的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1B,连续45天暴露于10μM BDE-47建立慢性暴露细胞模型Ishikawa-BDE-47、HEC-1B-BDE-47。通过MTT、Transwell实验及裸鼠移植瘤试验分别测定细胞增殖、迁移侵袭及体内成瘤、转移能力,采用Western blot检测目的基因蛋白表达水平,利用siRNA技术沉默ERα、GPR30表达以及应用Erlotinib和PD98059分别抑制pEGFR和pERK。采用梯度浓度顺铂、紫杉醇处理细胞并利用MTT实验分析细胞对化疗药物的敏感性。结果暴露组细胞Shikawa-BDE-47和HEC-1BBDE-47体外和体内细胞生长、转移能力较亲本对照细胞均显着增强(P<0.05),顺铂、紫杉醇对暴露组的增殖抑制作用显着低于对照组(P<0.05)。暴露组细胞可见ERα和(或)GPR30与pEGFR、pERK协同高表达,通过siRNA沉默ERα、GPR30能逆转BDE-47对子宫内膜癌细胞恶性表型的促进作用,pEGFR抑制剂或pERK抑制剂能降低细胞增殖、转移能力。结论慢性BDE-47暴露促进子宫内膜癌细胞恶性生物学表型及化疗抵抗能力,ERα/GPR30-EGFR/ERK信号通路可能是其分子机制之一。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
邓君健,张帆,包文庭,熊琳,刘远识[3]（2019）在《Twist通过EMT促使结直肠癌SW480细胞获得干性及化疗抵抗能力的作用及机制研究》一文中研究指出目的研究Twist对结直肠癌SW480细胞的上皮-间质转化(EMT)、肿瘤干细胞表型及化疗抵抗能力的影响。方法收集2012年1～12月武汉大学人民医院结直肠癌患者临床样本共30例,分析Twist在结直肠癌组织及其癌旁组织中的表达差异;通过过表达手段,检测Twist对SW480细胞的EMT表型转换调控情况;分析Twist对SW480细胞的成球能力、干细胞标志物表达、化疗抵抗的影响。结果 Twist在结直肠癌组织中的表达显着高于癌旁组织(P <0.05)。体外实验证实Twist可促使SW480细胞EMT表型转换,表现为Twist促使SW480细胞形态变化及上调间质相关的N-钙黏蛋白表达,而显着抑制上皮相关的E-钙黏蛋白表达(P <0.05)。Twist上调SW480细胞的成球能力及肿瘤干细胞标志物Bmi-1、Nanog、CD44的表达(P <0.05);Twist可通过ABCB1/P-gp途径使SW480细胞获得化疗药物抵抗能力。结论 Twist可促使结直肠癌SW480细胞发生EMT、获得干细胞特性及耐药能力,Twist可作为潜在的结直肠癌化疗抵抗治疗靶点。(本文来源于《中国医药导报》期刊2019年18期）
党一凡[4]（2019）在《罗格列酮增强胰岛素抵抗肝癌HepG2/IR细胞对化疗药物敏感性研究》一文中研究指出研究背景与目的:肝癌是世界范围内第五大最常见的恶性肿瘤,尽管近年来肝癌的临床诊断及治疗都有了很大的进步,但其复发率仍然很高,存活率也较低,并且肝癌对大多数抗癌药物具有较低的敏感性,因此,迫切需要找到能够增加化疗敏感性的方法。此外,胰岛素抵抗可以促进肝癌的发生发展,是肝癌发病的风险因素之一。罗格列酮(Rosiglitazone,ROSI)是噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂,临床中主要用于治疗胰岛素抵抗的2型糖尿病。最近的研究表明,ROSI对人类恶性肿瘤细胞具有一定的抗癌活性,与某些化疗药合用可减少化疗药物的副作用。在本论文中,我们首先从细胞水平研究了胰岛素抵抗的肝癌HepG2/IR细胞耐药的具体机制,然后从细胞和动物两个方面研究了罗格列酮与化疗药物合用对胰岛素抵抗肝癌细胞的增殖、自噬、凋亡、周期、迁移以及肿瘤组织生长的影响,初步探究了两种药物合用协同抗胰岛素抵抗肿瘤作用的分子机制。实验方法:1.胰岛素抵抗细胞模型的建立采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法和Western blotting实验分别检测胰岛素诱导48小时后,肝癌HepG2细胞的葡萄糖消耗量和细胞表面胰岛素受体表达的变化,以确定胰岛素诱导胰岛素抵抗肝癌HepG2细胞模型的最佳浓度。通过检测HepG2细胞的甘油叁酯(TG)水平,来进一步确定胰岛素抵抗HepG2细胞(HepG2/IR)模型是否成功建立。2.检测ROSI和化疗药物对HepG2和HepG2/IR细胞的毒性作用采用MTT法测定ROSI和顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5FU)、索拉非尼(SOR)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)单用或合用对肝癌HepG2细胞和HepG2/IR细胞的增殖抑制作用,测定化疗药物的IC50确定HepG2/IR细胞对化疗药物的耐药倍数以及ROSI与化疗药合用产生协同抑制作用的最佳药物浓度。同时,检测了ROSI和ADM合用浓度下对人正常细胞HUVEC和HL-7702的细胞毒性作用。3.检测ROSI和ADM合用的抗肿瘤作用是否依赖于PPARγ通路加入PPARγ拮抗剂GW9662,利用MTT法检测GW9662是否会影响ROSI与ADM的协同抗肿瘤作用。4.检测HepG2和HepG2/IR细胞的P-gp功能和蛋白表达水平采用罗丹明123胞内蓄积实验和Western blotting方法分别检测HepG2细胞和HepG2/IR细胞的P-gp外排功能和P-gp蛋白表达。5.检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞自噬的影响采用吖啶橙染色法检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞酸性自噬泡的影响。通过Western blotting法检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞自噬相关蛋白MAPILC3B2和EGFR/ERK信号通路蛋白分子表达的影响。6.检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞凋亡的影响ROSI和ADM合用于HepG2/IR细胞48小时后,通过Hoechst 33342染色法观察各组细胞的细胞核形态,通过细胞核的染色情况判定发生凋亡的细胞数量。采用Annexin V-FITC/PI双染法(流式细胞仪)来定量检测ROSI和ADM合用诱导HepG2/IR细胞的凋亡率。同时,采用Western blotting方法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。7.检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞周期分布的影响通过PI单染色法(流式细胞术)检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞周期分布的影响。8.检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞迁移能力的影响采用划痕实验检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞的迁移率的影响,采用Western blotting实验测定ROSI和ADM合用对基质金属蛋白酶MMP-2表达量的影响。9.ROSI和ADM合用对HUVEC血管生成的影响采用划痕实验和小管形成实验检测ROSI和ADM合用对HUVEC迁移和管状结构形成的影响。10.检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞内Akt/mTOR信号通路的影响采用Western blotting实验检测ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞内Akt/mTOR信号通路的蛋白分子表达的影响。11.胰岛素抵抗动物模型的建立采用DXMS法和STZ法诱导胰岛素抵抗小鼠模型,通过检测昆明小鼠的体重、空腹血糖水平(FBG)、空腹胰岛素水平(FINS)、口服糖耐量(Oral glucose tolerance,OGTT)、胰岛素抵抗指数(HOMO-IR)来确定胰岛素抵抗动物模型的最佳诱导条件。12.检测ROSI和ADM合用对胰岛素抵抗昆明小鼠体内H22移植瘤的生长抑制作用建立H22细胞的小鼠移植瘤模型,连续给药6天[ROSI组(灌胃,4mg/kg)、ADM组(腹腔注射,2mg/kg)],观察ROSI和ADM合用对移植瘤生长的影响;同时检测ROSI能否提高ADM的抗肿瘤疗效以及对小鼠体重、肝脏指数和心脏指数的影响以确定ROSI能否降低ADM导致的肝脏毒性和心脏毒性。实验结果:1.胰岛素诱导胰岛素抵抗HepG2/IR细胞模型的建立0、0.1、0.5、1μmol/L胰岛素诱导HepG2细胞48小时后,使HepG2细胞的葡萄糖消耗量分别下降了 10.2%、22.8%、47.7%。Western blotting实验结果显示,1μmol/L胰岛素显着抑制HepG2细胞胰岛素受体(IR)表达。此外,1μmol/L胰岛素诱导48小时显着抑制HepG2细胞甘油叁酯(TG)水平。结果提示,1μmol/L胰岛素诱导HepG2细胞48小时成功建立胰岛素抵抗HepG2/IR细胞模型。2.ROSI和化疗药物合用产生协同抗HepG2/IR细胞体外增殖的作用与HepG2细胞相比,ADM、5FU、SOR、VCR、TAX单用于HepG2/IR细胞时,IC50均显着上升。HepG2/IR细胞对ADM的耐药倍数最大,达到7.03倍。不同浓度的ROSI与ADM合用时,均能协同增强ADM对HepG2/IR细胞的生长抑制作用,其中1Oμmol/LROSI与ADM合用,逆转耐药倍数最大,可使ADM对HepG2/IR细胞的IC50(μmol/L)由2.43±0.39下降到0.95±0.08。二者合用对正常细胞的MTT实验结果显示,在上述协同作用最明显的浓度下两药合用对人正常细胞HUVEC和HL-7702均未呈现明显的毒性和增殖抑制作用,说明ROSI与ADM能够选择性的杀伤肿瘤细胞。3.ROSI对ADM细胞毒性的协同作用不依赖于PPARγ通路MTT实验结果显示,PPARγ拮抗剂GW9662不影响ROSI与ADM的协同抗肿瘤作用。4.HepG2/IR细胞P-gp功能和表达未发生明显变化罗丹明123胞内蓄积实验和Western blotting实验结果显示,与HepG2细胞相比,HepG2/IR细胞P-gp功能和表达未见明显变化。5.ROSI与ADM合用抑制HepG2/IR细胞自噬水平吖啶橙染色实验结果显示,HepG2/IR细胞自噬水平显着上升,ROSI与ADM合用后HepG2/IR细胞酸性自噬泡数量明显减少。Western blotting实验结果显示,ROSI与ADM合用显着抑制HepG2/IR细胞内自噬相关蛋白MAP1LC3B2和EGFR/ERK信号通路蛋白分子的表达,与HepG2/IR细胞空白对照组相比有显着性差异。6.ROSI与ADM合用促进HepG2/IR细胞凋亡Hoechst染色实验结果显示,HepG2/IR细胞空白对照组细胞核呈饱满椭圆形,染色质均匀着色,而ADM加药组Hochest染色观察到不规则的细胞核形态,可见凋亡小体,出现明显的细胞凋亡形态,ROSI与ADM合用组的凋亡细胞数量明显高于ADM单用组。Annexin V-FITC/PI双染法实验结果显示,ROSI与ADM合用引起的细胞凋亡率明显高于ADM单药组和空白对照组,从ADM单药组的14.69%提高到两药合用组的23.51%。Western blotting实验结果显示,ROSI与ADM合用后上调了 HepG2/IR细胞内Bax/Bcl-2比率,从而产生协同促进HepG2/IR细胞凋亡的效应。7.ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞周期分布的影响与ADM单用相比,ROSI和ADM合用对HepG2/IR细胞周期分布无显着影响。8.ROSI与ADM合用抑制HepG2/IR细胞迁移划痕实验结果显示,HepG2/IR细胞迁移率较HepG2细胞显着上升。ROSI与ADM合用组比ADM单药组更加明显地抑制了 HepG2/IR细胞的迁移,迁移率在24小时时从ADM单药组的30.42%下降到ROSI与ADM合用组的16.92%。Western blotting实验结果显示,ROSI与ADM合用组与空白组和ADM单药组相比,MMP-2的表达水平显着下降。说明ROSI与ADM合用可能通过降低MMP-2蛋白表达来抑制HepG2/IR细胞的迁移能力。9.ROSI和ADM合用对HUVEC血管生成的影响划痕实验和小管形成实验结果显示,ROSI不能增加ADM对HUVEC迁移和管状结构生成的抑制作用。10.ROSI与ADM合用下调HepG2/IR细胞内AKT/mTOR信号通路ROSI和ADM合用能协同地下调HepG2/IR细胞中的Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平,提示两药合用后通过抑制Akt/mTOR通路来增强ADM抑制HepG2/IR细胞增殖的作用。11.胰岛素抵抗动物模型的建立与DXMS诱导组相比,高糖高脂饲料喂养4周并腹腔注射80mg/kg STZ通过增加小鼠体重、FBG、FINS、OGTT、HOMO-IR水平成功诱导小鼠胰岛素抵抗模型。12.ROSI与ADM合用显着抑制胰岛素抵抗小鼠体内H22细胞移植瘤的生长小鼠体内实验结果表明,单用ROSI(4mg/kg)和ADM(2mg/kg)6天的抑瘤率分别为23.18%和58.54%,两药合用组的抑瘤率增至76.14%,同时,两药合用还可明显降低胰岛素抵抗小鼠的FBG水平。小鼠移植瘤实验结果表明,两药合用可协同抑制胰岛素抵抗小鼠体内H22的生长,同时降低胰岛素抵抗小鼠空腹血糖水平;另外,各实验组中小鼠给药后均未影响小鼠的体重、心脏、肝脏指数,说明药物对小鼠无明显的毒副作用。实验结论:1.11μmol/L胰岛素诱导HepG2细胞48小时可建立胰岛素抵抗HepG2/IR细胞模型。2.与HepG2细胞相比,HepG2/IR细胞对化疗药物的敏感性降低,其中对ADM的敏感性下降最大。ROSI和ADM合用可协同抑制HepG2/IR细胞的增殖。并且对人正常细胞HUVEC和HL-7702无明显细胞毒作用。ROSI显着增强ADM抑制细胞增殖作用可能与抑制HepG2/IR细胞Akt/mTOR通路有关。3.与HepG2细胞相比,HepG2/IR细胞中的酸性自噬泡数量明显增多,说明细胞自噬水平显着提高。ROSI和ADM合用可抑制HepG2/IR细胞中的酸性自噬泡数量,并降低HepG2/IR细胞内自噬相关蛋白MAP1LC3B2和EGFR/ERK信号通路分子蛋白的表达水平。4.ROSI增强了ADM诱导HepG2/IR细胞凋亡的作用,可能与诱发线粒体凋亡通路中Bcl-2的下调和Bax的上调有关;两药合用通过下调MMP-2协同抑制HepG2/IR细胞迁移。5.对昆明小鼠高糖高脂饲料喂养4周并腹腔注射80mg/kg STZ可诱导胰岛素抵抗动物模型。两药合用对胰岛素抵抗状态下的小鼠肝癌H22移植瘤有明显的协同生长抑制作用,同时降低了胰岛素抵抗小鼠的空腹血糖水平。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-23）
朱哈[5]（2019）在《RNA结合蛋白ZCCHC4在肝癌化疗抵抗中的作用及表观机制研究》一文中研究指出肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是威胁人类健康的重大疾病,在我国具有发病率高、预后不良、五年生存率短等特点。目前,常规治疗肝癌的方法是手术切除和放疗、化疗。但由于肿瘤大小和生长部位以及肿瘤易复发和转移等诸多因素,许多患者难以施行切除手术,只能借助其他方法加以治疗,最常用的方法便是化疗。常用的治疗肝癌的化疗药物包括雌激素受体拮抗剂、血管生长因子受体与生长因子受体拮抗剂、DNA损伤类药物。然而,肝癌的化疗抵抗效应显着,单独使用这些化疗药物、甚至联合用药在肝癌的治疗中仍收效甚微,因此,探索并揭示肝癌中化疗抵抗的关键机制具有重要的临床意义。RNA结合蛋白(RBP)是转录后修饰的重要参与者。RBP-RNA相互作用网络在肿瘤发生发展中的重要作用已被广泛报道。RBP功能的异常可以改变多种肿瘤标志性特征进而影响肿瘤发生发展,如调节肿瘤细胞增殖和转移、改变肿瘤细胞死亡抵抗能力、影响肿瘤细胞代谢水平和基因组不稳定性、调节肿瘤细胞免疫逃逸等。RBP功能复杂且重要,即使是微小的改变也能造成重大的生理病理影响,目前,关于RBP-RNA相互作用在肿瘤发生发展中的作用和机制研究仍有许多未解问题,值得进一步探索。ZCCHC4是锌指蛋白家族成员之一,属于RBP,关于它的功能目前鲜有报道。我们实验室前期的研究结果表明ZCCHC4参与调节机体抗乙型肝炎病毒的免疫反应,因此推测ZCCHC4有可能参与肝癌发生发展。本研究旨在研究ZCCHC4在肝癌发生发展中的作用及其机制,探讨ZCCHC4能否成为辅助化疗的靶标,为肝癌临床治疗提供参考。第一部分ZCCHC4参与肝癌化疗抵抗的功能研究为了研究ZCCHC4在肝癌发生发展中的作用,我们首先利用人肝癌组织芯片,检测ZCCHC4蛋白在肝癌组织中的表达水平,发现ZCCHC4在肝癌癌组织中表达量显着高于相应的癌旁组织,且ZCCHC4高表达的患者总体生存时间显着缩短。进一步,我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了叁株ZCCHC4敲除的HepG2细胞株(ZCCHC4_KO),并利用该细胞株进行裸鼠皮下荷瘤实验。发现荷ZCCHC4_KO细胞株的小鼠肿瘤生长速度显着低于荷HepG2正常细胞系的小鼠,且荷ZCCHC4_KO细胞系的小鼠生存时间显着长于荷HepG2正常细胞系的小鼠。以上结果说明ZCCHC4具有促进肝癌生长的作用。进一步,我们通过RNA测序比较野生型HepG2细胞和ZCCHC4_KO细胞的差异转录组,发现ZCCHC4敲除导致368个基因表达上调以及851个基因表达下调。GO分析结果提示上调的差异基因主要参与细胞分化发育和细胞死亡,下调的差异基因主要参与细胞分化、细胞迁移和细胞增殖。KEGG信号通路富集分析发现下调的基因主要参与PI3K-AKT信号通路、p53信号通路以及肿瘤相关信号。以上结果提示ZCCHC4对细胞生存、细胞活力可能发挥重要作用。接着,我们在肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721细胞中干扰ZCCHC4,发现干扰ZCCHC4后奥沙利铂诱导凋亡细胞的百分比显着增高,且凋亡相关信号通路Cleaved PARP和Cleaved caspase3表达水平显着上调,奥沙利铂诱导的细胞杀伤作用以及克隆生长抑制作用也更加显着。而在HepG2和SMMC-7721细胞中过表达ZCCHC4,可以显着抑制奥沙利铂诱导的凋亡。我们又利用阿霉素重复了类似实验。阿霉素的实验结果与奥沙利铂一致,干扰ZCCHC4增加了肝癌细胞对阿霉素的敏感性,过表达则相反。此外,我们利用稳定高表达ZCCHC4的HepG2细胞株进行小鼠皮下荷瘤实验,研究奥沙利铂的抗肿瘤效果,结果发现奥沙利铂能够显着抑制荷HepG2细胞系的小鼠肿瘤生长,但对荷稳定高表达ZCCHC4的HepG2细胞株的小鼠肿瘤生长没有显着影响。以上结果说明ZCCHC4在肝癌生长与化疗中发挥了凋亡抵抗的作用。为了探究ZCCHC4的凋亡抵抗效应是否具有普遍意义,我们进一步通过不同类型的肿瘤组织芯片分析ZCCHC4的表达情况。结果发现,ZCCHC4在肺癌、胰腺癌、结肠癌的癌组织中表达显着高于对应癌旁组织,且ZCCHC4高表达与肺癌、胰腺癌患者短的总体生存时间相关。在肺癌细胞系A549、胰腺癌细胞系BXPC-3、结肠癌细胞系HCT116中干扰ZCCHC4后,奥沙利铂诱导的凋亡百分比显着增加。说明ZCCHC4在肿瘤细胞中具有广泛的凋亡抵抗作用。通过第一部分研究,我们揭示了ZCCHC4是肝癌的促癌基因,参与肝癌对奥沙利铂和阿霉素的凋亡抵抗作用,且ZCCHC4的凋亡抵抗作用在肺癌、胰腺癌、结肠癌中普遍存在,提示ZCCHC4有可能作为辅助化疗的潜在靶点,其作用的分子机制如何?值得深入研究。第二部分:ZCCHC4参与肝癌化疗抵抗的表观机制研究为了进一步研究ZCCHC4参与凋亡抵抗的作用机制,我们首先分析了ZCCHC4的亚细胞定位情况,通过免疫印迹和免疫荧光实验发现ZCCHC4在肝癌细胞中主要定位于细胞核。接着,我们检测了肝癌细胞的DNA损伤相关信号,发现在HepG2细胞和SMMC-7721细胞中干扰ZCCHC4后,奥沙利铂诱导的DNA损伤相关信号pATM、pATR、pCHK1、pCHK2、gH2AX表达上调,过表达后则相反,说明ZCCHC4可以抑制奥沙利铂诱导的DNA损伤。接着,通过免疫共沉淀(Co-IP)实验,我们发现ZCCHC4与gH2AX直接结合,且结合的强度随着奥沙利铂刺激时间延长而增强。通过IP后蛋白质谱分析也证实IP下来的条带含有H2AX。此外,免疫荧光实验也发现奥沙利铂刺激24h后ZCCHC4和gH2AX存在共定位。以上结果表明,DNA损伤诱导的细胞凋亡情况下ZCCHC4和gH2AX存在相互作用。ZCCHC4包含锌指结构域,属于RBP,是否有可能ZCCHC4结合RNA并由所结合的RNA参与了ZCCHC4发挥上述生物学功能?我们通过PAR-CLIP-seq寻找与ZCCHC4相结合的基因间长链非编码RNA(lincRNA)。通过对测序得到的107个lincRNA进行筛选,最终发现了拮抗ZCCHC4凋亡抵抗作用的lincRNA—AL133467.2。AL133467.2在胞浆胞核中均有定位,目前尚未有关于AL133467.2的报道。在干扰ZCCHC4的基础上干扰AL133467.2降低了肝癌细胞对奥沙利铂的敏感性,抑制gH2AX上调,单独干扰AL133467.2对奥沙利铂敏感性和gH2AX变化的作用不明显。通过RIP实验、RNA pulldown实验、FISH实验,证实胞核中存在ZCCHC4/AL133467.2/gH2AX复合物。通过第二部分研究,我们发现了新的核内复合物ZCCHC4/AL133467.2/gH2AX复合物,该复合物能通过调节化疗药物的DNA损伤反应进而影响化疗效果,更具体的分子机制尚待更深入的研究。综上所述,通过本课题的研究,我们发现了RNA结合蛋白ZCCHC4可以促进肝癌生长,参与肝癌对DNA损伤类化疗药物的凋亡抵抗,且ZCCHC4的凋亡抵抗作用在肺癌、胰腺癌、结肠癌中普遍存在。ZCCHC4发挥凋亡抵抗作用是通过抑制DNA损伤实现的,且与ZCCHC4/AL133467.2/gH2AX复合物的功能密不可分。该研究结果不仅发现了新的与DNA损伤相关的核内复合体,丰富了我们对核内复合物网络与功能的认知,还揭示了在化疗抵抗中发挥重要功能的RNA结合蛋白及其新机制,为肿瘤治疗提供了新的潜在靶点。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
刘殿星[6]（2019）在《HBV相关肝癌外泌体通过激活CMA途径诱导肝癌细胞化疗抵抗的机制研究》一文中研究指出目的原发性肝癌(Primary liver cancer,PLC)是我国常见的恶性肿瘤之一,目前肝癌患者化疗抵抗现象十分严重。本研究将初步明确肝癌患者对奥沙利铂(Oxaliplatin,Oxa)治疗敏感性降低和乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关,并证实HBV相关肝癌细胞分泌的外泌体通过激活分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)途径诱导肝癌细胞凋亡抵抗的分子学机制,从而为提高肝癌患者的化疗敏感性的研究提供相关理论基础。方法1收集华北理工大学附属医院HBV相关原发性肝癌患者(HbsAg阳性、HBV DNA复制的肝癌患者)及非HBV相关原发性肝癌患者(HBV、HCV均阴性的肝癌患者)经奥沙利铂(TACE:130mg/m~2)治疗前后的资料,进行统计学分析,比较两组患者治疗后肿瘤体积的变化情况;2体外培养肝癌细胞HepG2细胞;收集我院HBV阳性患者的血清(HBV DNA复制量>1.0×10~9拷贝/ml)和健康体检者血清(HBV、HCV均阴性)分别作用HepG2细胞48h,弃去上清液后,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)清洗8-10遍,加入纯DMEM培养基继续培养,分别取0h、12h、24h、48h、72h和96h等不同时间段细胞上清液,实时荧光定量PCR仪检测上述上清液中HBV DNA含量;留取上述血清作用后的细胞上清液,采用外泌体提取试剂盒提取细胞上清液中的外泌体,利用Western Blot、透射电镜和Nanosight纳米颗粒跟踪分析仪对外泌体进行鉴定;3将上述提取外泌体分别作用肝癌细胞12h后,奥沙利铂继续作用细胞24h,收集细胞,提取蛋白,利用Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;同时采用Western Blot检测CMA途径关键分子Lamp2a的表达情况;4 shRNA干扰技术沉默HepG2细胞内Lamp2a基因,外泌体作用sh-Lamp2a HepG2细胞12h后,加入Oxa继续作用细胞24h,流式细胞术检测细胞凋亡水平;5采用SPSS17.0软件进行统计学分析,采用t检验或者单因素方差分析进行组间比较。结果1通过收集肝癌患者资料,选取Child-Pugh分级和BCLC分期相同的两组肝癌患者,统计学分析两组患者分别在性别、年龄方面无明显差异。统计分析非HBV相关肝癌患者和HBV相关肝癌患者经Oxa(TACE:130mg/m~2)治疗3个月后肿瘤体积的减小程度分别为(61.45±14.35)%和(36.81±15.27)%,P<0.05,差异有统计学意义;2 HBV感染HepG2细胞后,实时荧光定量PCR分析上清液HBV DNA含量在96h达到1.5×10~4 copies/ml,收集该时间段上清液提取外泌体;透射电镜观察外泌体大量分布且形态为椭圆形囊泡,同时Western Blot测得外泌体中CD63、CD9明显表达,利用Nanosight纳米颗粒跟踪分析仪检测HepG2细胞分泌外泌体粒径为150nm左右,同时测得HBV相关肝癌组和非HBV相关肝癌组外泌体浓度分别为(5.25±0.63)×10~100 particle/ml和(4.95±0.87)×10~100 particle/ml,两组外泌体浓度分布无统计学意义。3 HBV相关肝癌外泌体作用肝癌细胞,通过Western Blot检测显示凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3表达下调而抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上调;流式细胞术检测HBV相关肝癌外泌体作用肝癌细胞后的细胞凋亡率为(45.21±7.69)%,较对照组(54.21±7.69)%明显减低;同时Western Blot表明CMA途径关键分子Lamp2a的表达较对照组明显上调。4成功干扰细胞内Lamp2a基因,HBV相关肝癌外泌体联合Oxa作用sh-Lamp2a HepG2细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡率(71.34±12.98)%较对照组(56.16±11.62)%明显上调。结论1 HBV相关肝癌细胞通过外泌体介导肝癌细胞对奥沙利铂的化疗抵抗;2HBV相关肝癌外泌体通过激活CMA途径下调肝癌细胞对奥沙利铂的化疗敏感性。图7幅;表1个;参41篇。(本文来源于《华北理工大学》期刊2019-04-04）
白冰,赵文飞[7]（2019）在《化疗对小细胞肺癌患者血糖、胰岛素抵抗的影响》一文中研究指出目的:探讨小细胞肺癌患者化疗前后空腹血糖(FPG)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平、胰岛素抵抗(IR程度的变化。方法:选取郑州大学第五附属医院2016年1月1日至2018年1月1日收治的小细胞肺癌患者共44例,分别在化疗前、化疗后3个月、化疗后6个月抽血静脉血,测定FPG、HbA1c、空腹C肽(FCP)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA–IR),并比较化疗前后指标的变化。结果:(1)患者FPG、HbA1c水平在化疗后升高,且化疗后6个月水平高于3个月。(2)HOMA–IR在化疗前后无明显差异。结论:化疗可引起小细胞肺癌患者FPG水平增高,HbA1c增高。(本文来源于《深圳中西医结合杂志》期刊2019年06期）
王安凤,潘晨,童晓文[8]（2019）在《TLR4/MyD88信号通路在卵巢癌紫杉醇化疗抵抗中的研究进展》一文中研究指出妇科恶性肿瘤是危害妇女健康的重要疾患之一。卵巢癌作为恶性程度最高、死亡率居第一位的妇科恶性肿瘤,70%-80%的患者在初次就诊时已经是Ⅲ～Ⅳ期,尽管现在治疗方法不断改善,仍有80%的卵巢癌患者在1～2年内复发,国际妇产科联盟(FIGO)临床分期Ⅳ期卵巢癌患者的5年总体生存(OS)率<5%。有研究显示,作为免疫源性肿瘤的卵巢癌,其一线用药紫杉醇有效率仅为30%。紫杉醇是TOLL样受体4(TLR4)的主要配体之一,TLR4在卵巢组织中均有表达,在恶性肿瘤细胞中的染色强度明显增高,MyD88在卵巢癌组织中的表达率为77.1%,但在正常卵巢上皮组织中却不表达,MyD88的高表达是影响卵巢癌患者无瘤生存期与总生存期的独立预后因素。对MyD88阳性的卵巢上皮癌患者,TLR4/MyD88信号通路激活后,能通过促进各类炎症细胞因子增殖、抑制癌细胞凋亡及抑制免疫功能叁个方面导致紫杉醇化疗抵抗和复发,甚至促进癌细胞增殖。(本文来源于《外科研究与新技术》期刊2019年01期）
汪圣毅,张永红,闫亚飞,李旭升,程彦[9]（2019）在《胃癌化疗抵抗基因PMP22下游的生物信息学机制》一文中研究指出目的探寻外周髓磷脂蛋白22(PMP22)的下游关联基因及其通路,为揭示胃癌化疗(CTx)抵抗的分子机制提供基础。方法基因表达数据库(GEO)获取短发夹核糖核酸敲减和未敲减PMP22的数据库系列(GSE)数据GSE94714,数据库R语言(GEO2R)分析差异表达基因,筛选后行富集和通路分析,互作基因检索工具(STRING)数据库建立蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,细胞图景(Cytoscape)的分子复合物探测(MCODE)模块分析,细胞核心插件(CytoHubba)筛选网络中的关键基因,癌症药物敏感性基因组学(GDSC)数据库分析基因与药物敏感性的关系。结果 PMP22下游10倍变化的差异基因314个,上调283个,下调31个,主要富集于细胞黏着连接、细胞-细胞黏附、多聚腺嘌呤核糖核苷酸结合和细胞周期通路。PPI中4个亚模块主要与剪接体、泛素介导的蛋白水解通路(P<0.01)和3个反应组学(REACTOME)通路(P<0.05)关联,最大集团中心性(MCC)算法得到包括肽基脯氨酰异构酶E(PPIE)、核内不均一性核糖核蛋白A1(HNRNPA1)、Y框结合蛋白1(YBX1)的关键基因10个,富含腺嘌呤胸腺嘧啶(AT)蛋白质1A交互域(ARID1A)、死亡盒(DExH)解旋酶9(DHX9)与癌细胞对顺铂的敏感性有关。结论 PMP22主要通过多种细胞组分、分子功能、生物过程和通路参与胃癌CTx抵抗,ARID1A等关键基因和细胞周期、剪接体、泛素介导的蛋白水解通路是治疗胃癌PMP22相关CTx抵抗的潜在靶点。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年04期）
周经纬,朱潇宽,程然,杨欣慧,徐佳倩[10]（2019）在《Nrf2在肿瘤化疗抵抗和耐药中的作用》一文中研究指出核转录因子Nrf2[nuclear factor erythroid 2 (NFE2) related factor 2]是细胞内重要的调节因子。在细胞内, Nrf2主要通过Keap1(Kelch-like ECH-associated protein 1)-Nrf2-ARE(antioxidant response element)信号通路调控下游基因的转录,通过对抗氧化应激、防御有害物质的作用来保护细胞,而这种保护作用在肿瘤细胞内则体现为对细胞生长的促进与帮助其抵抗化疗药物。近年来,Nrf2相关的肿瘤耐药性给临床肿瘤治疗带来不少困难,越来越多的研究者开始关注此领域并进行了深入探索。该文在总结近年来相关研究成果的基础上,重点阐述了Nrf2导致的肿瘤化疗抵抗和耐药及分子机制,旨在为今后的研究与临床实践提供更多的信息。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年07期）
化疗抵抗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的随着生殖模式的改变和环境雌激素暴露增加,子宫内膜癌发病率不断升高。具有内分泌干扰作用的2,2’,4,4’-四溴联苯醚(BDE-47)是环境和生物样本中最常见的多溴联苯醚同系物,,其与子宫内膜癌的关联至今不明确。本研究旨在探讨持续BDE-47暴露对子宫内膜癌演进及化疗敏感性的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1B,连续45天暴露于10μM BDE-47建立慢性暴露细胞模型Ishikawa-BDE-47、HEC-1B-BDE-47。通过MTT、Transwell实验及裸鼠移植瘤试验分别测定细胞增殖、迁移侵袭及体内成瘤、转移能力,采用Western blot检测目的基因蛋白表达水平,利用siRNA技术沉默ERα、GPR30表达以及应用Erlotinib和PD98059分别抑制pEGFR和pERK。采用梯度浓度顺铂、紫杉醇处理细胞并利用MTT实验分析细胞对化疗药物的敏感性。结果暴露组细胞Shikawa-BDE-47和HEC-1BBDE-47体外和体内细胞生长、转移能力较亲本对照细胞均显着增强(P<0.05),顺铂、紫杉醇对暴露组的增殖抑制作用显着低于对照组(P<0.05)。暴露组细胞可见ERα和(或)GPR30与pEGFR、pERK协同高表达,通过siRNA沉默ERα、GPR30能逆转BDE-47对子宫内膜癌细胞恶性表型的促进作用,pEGFR抑制剂或pERK抑制剂能降低细胞增殖、转移能力。结论慢性BDE-47暴露促进子宫内膜癌细胞恶性生物学表型及化疗抵抗能力,ERα/GPR30-EGFR/ERK信号通路可能是其分子机制之一。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
化疗抵抗论文参考文献
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标签：结直肠癌; 扭曲因子; 上皮细胞-间充质转化; 肿瘤干细胞;