刘慧尧
（昆明市精神病院650101）
【摘要】细菌内毒素检查是静脉、鞘内给药药物以及放射性药物等质量检查的一个重要方面，本文针对细菌内毒素检查方法进行论述。
【关键词】细菌内毒素检查法；机理；预实验；特殊值
【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】1671-8725（2014）12-0100-01
细菌内毒素检查是静脉、鞘内给药药物以及放射性药物等质量检查的一个重要方面。与家兔热原检查法比较,有劳动强度低、快捷、经济、灵敏和易于标准化等优点,作为家兔热原检查法的一种替代方法,已经十分成熟,美国药典迄今已收载680余种药品,《中国药典》自1990年版开始收载以来,每版药典运用细菌内毒素检查法品种也逐渐增多。此法已逐渐代替家兔热原法。对细菌内毒素检查法作一综述。
1方法、机理
美国药品食品管理局承认3种鲎试剂检测细菌内毒素含量的方法,即凝胶法、生色法和动态浊度法[1]。近年来较新的方法有水箭电泳免疫法,酶联免疫吸附法。后者所需鲎试剂仅相当于凝胶法的1/100,且灵敏度更高,抗干扰能力更好。凝胶法是将等体积的供试品溶液和新配制的鲎试剂(TAL)溶液在试管中混匀,一般各0.1ml,(37±1)℃反应(60±2)分钟。如果被检测的溶液不含干扰凝集反应的因素,且其含有内素素浓度等于或大于所用鲎试剂的灵敏度(λ)时,就会在试管中显示阳性反应,即形成凝胶;否则呈阴性反应,即呈澄明溶液或轻度混浊,视内毒素的浓度而定[2]。该反应极其灵敏,凝胶形成速率与内毒素浓度成正比，并受温度、反应物中Ca2+/Mg2+离子浓度和pH等因素的影响。
2影响细菌内毒素检查的因素
2.1检品的干扰pH值、离子浓度以及某些干扰成分,都会影响到检查结果的准确性,只有证实检品对凝集反应无干扰之后,检查的结果才是可信的。判断检品是否有干扰要做检品的干扰实验。鲎试剂的非特异性内毒素不是唯一能激活鲎试剂凝集系统的物质,还有其他物质可以通过G因子这个“旁路”激活鲎试剂的凝集系统。
2.2影响鲎实验的因素混合液的pH6.0~8.0;保温温度:(37±1)℃;保温时间:(60±2)min;在鲎试验过程中防止试管受到振动;所用器皿均应彻底洗涤干净;阳性对照存在。
3特殊值的确定
3.1药品的内毒素限值(L)药品细菌内毒素检查是一种限度实验,首先确定供试品的细菌内毒素限值。当供试品含内毒素低于L值时,按规定给药途径用药,就不会引起热原反应;相反就有可能引起热原反应。细菌内毒素限值确定方法有三种。
3.1.1药典给出药典规定细菌内毒素检查的品种,在药典正文可以查到相应的L值。
3.1.2根据热原检查的兔剂量计算L=K/M,M规定家兔注射剂量,ml/kg等表示;K为规定临床无任何不良反应的内毒素阈值,以Eu/kg表示。
3.1.3根据人的最大注射剂量计算L=K·W/M,M为规定人的最大注射剂量同样以ml/kg等表示;W为人的平均体重,中国成人按60kg计算。
3.2药品的最大有效稀释(MVD)用MVD表示。其计算公式如下:MVD=L/λ。
4重要的实验-预实验
4.1鲎试剂标示灵敏度的复核实验鲎试剂是一种有生物活性的试剂,稳定性受多种因素的影响,因此各国的细菌内毒素检查法都规定:每批鲎试剂在用于细菌内毒素检查前都必须对该批试剂标示的灵敏度进行复核。当复核的灵敏度值λ0在标示值λ的0.5-2.0λ范围,方可用于细菌内毒素检查。
4.2检品的干扰实验
4.2.1干扰实验的目的判断某个品种在某种浓度状态下是否宜作细菌内毒素检查,就需要对其作干扰实验。
4.2.2干扰实验的方法干扰实验是由两部分实验组成其一是鲎试剂与内毒素在水溶液中的反应实验,这部分与鲎试剂的灵敏度复核实验完全相同。其二是鲎试剂与内毒素在检品溶液中的反应实验。
4.2.3阳性产品对照
用SMVD复溶鲎试剂,然后加2λ浓度的标准内毒素溶液与之反应,若反应结果为阴性说明检品对检查有抑制作用。若反应结果为阳性说明检品对检查无抑制作用,但并未能表示无增强作用。细菌内毒素检查法它具有方法多样化、自动化、微量化的特点。细菌内毒素检查法所具有的优点表明它比家免热原检查法更适应现代制药工业的发展。它可以应用于药检,也可以用于药品生产质量控制、临床诊断及其它领域。该法用于药品成品的检查,属于一种事前控制的质控手段,对提高药品质量,避免造成药品成批报废有重要意义;在临床上可作为快速诊断革兰氏阴性细菌感染的疾病的一种辅助方法,但对革兰阴性菌以外的内毒素不够灵敏，因此尚不能代替家兔法。
参考文献
[1]王茂林.鲎试剂法检查热原的应用范围[J].中国医院药学杂志,1990,10(4):41.
[1]黄清泉,夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药学杂志,1997,32(2):72.