导读:本文包含了盐藻细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:杜氏盐藻(Dunaliella,salina),氮源,生长,细胞物质组成
盐藻细胞论文文献综述
宋雨晴,靳翠丽,胡文峰,封克,周晓见[1]（2017）在《氮源对盐藻生长及细胞物质组成的影响》一文中研究指出杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞内含有大量的蛋白质、多糖、甘油、脂类、β-胡萝卜素等物质,不仅是水产养殖育苗常用的饵料,而且在食品、医药和保健品等日常生活用品中具有独特的经济价值。研究常见氮源形式和浓度对盐藻生长和细胞物质组成的影响,探索适宜于不同培养目的的氮源供给方式,可为盐藻的大量培养、开发应用提供依据。文章针对NaNO_3、NH_4Cl和CH_4N_2O等3种不同形式及200、600和1 800μmol·L~(-1)等3种不同浓度的氮源,研究了不同的氮源供给条件下杜氏盐藻的生长情况和细胞的物质组成。结果表明,盐藻生长可利用所测试的3种氮源。就氮源形式而言,最终生物量表现为CH_4N_2O≥NaNO_3>NH_4Cl,盐藻更偏好有机氮源CH_4N_2O;就氮源浓度而言,最终生物量表现为1 800μmol·L~(-1)≥600μmol·L~(-1)>200μmol·L~(-1),600μmol·L~(-1)以上的浓度上升对于进一步提高生物量没有显着性贡献。在200μmol·L~(-1)时,有机氮源CH_4N_2O比无机氮源NaNO_3、NH_4Cl更有利于盐藻生长。氮源形式对盐藻细胞中蛋白质含量的影响不显着,但显着地影响细胞中糖和脂肪的积累。有利于糖积累的氮源形式表现为NH_4Cl≥NaNO_3>CH_4N_2O,而有利于脂肪积累的氮源形式表现为NH_4Cl≥NaNO_3≥CH_4N_2O。高氮源浓度有利于盐藻细胞蛋白质的积累,但对糖和脂肪的积累效果不显着,对盐藻细胞糖和脂肪的积累最佳的氮源是200μmol·L~(-1) NH_4Cl。针对以脂肪为目标物质的盐藻培养,推荐采用二段培养方案,即在第一段培养时采用200μmol·L~(-1) CH_4N_2O为氮源,以获得较大的生物量;在第二段培养时采用200μmol·L~(-1) NH_4Cl,以提高单位细胞的脂肪含量。(本文来源于《生态环境学报》期刊2017年02期）
岳文静[2]（2015）在《盐藻DsMAPK的原核表达、反义表达和亚细胞定位分析》一文中研究指出盐生杜氏藻(Dunaliella salina,以下简称盐藻)无细胞壁,为天然原生质体,由于极强的耐盐能力,简单的细胞结构以及便利的培养条件使其成为研究植物耐盐机制最理想的模式生物。促有丝分裂活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)属于丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,存在于所有真核生物中,它在植物的生长发育调节及抗逆应答等生理过程中起重要作用。因此,深入探讨盐藻MAPK基因的功能对于阐明细胞高度复杂的分子机制具有重要科学意义。本论文在实验室已获得Ds MAPK基因的基础上,开展了盐藻Ds MAPK的原核表达、反义表达和亚细胞定位分析的研究。本实验的研究方法与结果如下:1.通过PCR技术扩增Ds MAPK基因的开放阅读框(ORF),并将其克隆至带有GST标签的原核表达载体p GS-21a上,成功构建重组表达载体p GS-21a-MAPK。将原核表达载体p GS-21a-MAPK导入E.coli.BL21(DE3)中,经IPTG诱导后融合蛋白在E.coli.BL21(DE3)中得到成功表达。通过SDS-PAGE检测融合蛋白的表达形式,结果在上清和包涵体中均有存在。上清蛋白经过GST-SefinoseTM Kit纯化后获得了纯度较高的可溶性融合蛋白,Western blot检测结果显示该融合蛋白能被抗GST单克隆抗体特异性识别,初步证明得到了纯化的GST-MAPK蛋白。2.将Ds MAPK基因的开放阅读框反向插入到植物表达载体35S启动子的下游,成功构建了反义表达载体,采用Li Ac/PEG介导法将其导入盐藻细胞。通过氯霉素筛选得到具有相应抗性的转基因盐藻,用半定量RT-PCR的方法分析高盐胁迫不同时间下转基因盐藻中Ds MAPK表达水平的变化情况,结果显示盐藻Ds MAPK基因在转录水平的表达受到明显的抑制。3.将构建成功的亚细胞定位重组载体p MDCMGN-Cat转化农杆菌GV3101感受态细胞,筛选阳性单克隆,采用农杆菌介导法转染洋葱内表皮细胞,荧光显微镜下观察Ds MAPK瞬时表达,发现融合蛋白GFP-Ds MAPK在洋葱内表皮细胞中成功表达,并且主要分布于细胞核及细胞质中。(本文来源于《大连海洋大学》期刊2015-06-01）
陶晓迎[3]（2014）在《盐藻DsSTPK基因的载体构建、原核表达及亚细胞定位分析》一文中研究指出盐生杜氏藻（Dunaliella salina，以下简称盐藻）是公认的能够耐受高盐的低等真核生物，是研究植物高盐适应的模式生物。多年以来，许多学者从盐藻适应高盐环境的渗透调节、耐盐相关基因的克隆及质膜、胞浆蛋白质等方面进行了研究，取得了一定的进展。但到目前为止，对其耐盐的分子机制和信号转导途径仍不清楚。细胞应对各种外界刺激的主要调节机制是对通路蛋白的磷酸化。蛋白激酶通过对底物蛋白的磷酸化参与细胞信号转导，是细胞信号转导过程中起重要作用的信号分子。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine protein kinase, STPK)是其中最重要的一类蛋白激酶，可催化多种功能蛋白(如酶、受体、运输蛋白、调节蛋白、核内蛋白等)的磷酸化，从而调节细胞多种生命活动过程。因此，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的研究对于阐明盐藻复杂的耐盐机制具有重要的科学意义。本研究构建了原核表达载体pGS-21a-DsSTPK，真核表达载体pMDCSGN和pBI121-DsSTPK，对已经获得的盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因进行了原核表达和亚细胞定位的分析，为进一步研究STPK在盐藻耐盐过程中的作用及分子机制提供了新的信息。主要的实验方法和结果如下：1.应用PCR技术扩增了盐藻DsSTPK基因，并将其克隆到pMDTM18-T Simple Vector上。DNA测序结果表明，该核苷酸序列未发生突变。利用限制性内切酶分别酶切克隆载体与表达载体， T4DNA连接酶连接目的片段与载体大片段，成功构建了原核表达载体pGS-21a-DsSTPK，真核表达载体pMDCSGN和pBI121-DsSTPK，经测序验证读码框正确。2.将原核表达载体pGS-21a-DsSTPK导入E. coli. BL21(DE3)中，经IPTG诱导在E.coli BL21中得到成功表达。通过SDS-PAGE检测，融合蛋白在上清和包涵体中均有存在。将上清蛋白经过GST标签蛋白纯化柱纯化后获得了纯度较高的可溶性融合蛋白，Western blot显示该融合蛋白能被抗GST单克隆抗体特异性识别，证明得到了纯化的P-GST-DsSTPK蛋白。3.将真核表达载体pMDCSGN导入农杆菌LBA4404感受态细胞中，用氨苄霉素进行转化子筛选。采用农杆菌介导法转染洋葱表皮细胞，荧光显微镜下观察DsSTPK的表达情况。结果表明，融合蛋白GFP-DsSTPK在洋葱表皮细胞膜及细胞质均有表达。证明盐藻DsSTPK分布在细胞膜及细胞质。(本文来源于《大连海洋大学》期刊2014-06-01）
李秀娟[4]（2014）在《盐藻DsRab基因的载体构建、原核表达及亚细胞定位分析》一文中研究指出盐生杜氏藻（Dunaliella salina）是一类单细胞海藻，无细胞壁，是只有一层膜包被的原生质体结构。盐藻作为耐盐模式生物，其短时间耐盐方式已有深入了解，主要是离子泵调节和甘油合成，但长时间盐胁迫下，相关基因被诱导表达及信号通路被激活的具体过程仍不清楚。Rab蛋白是小G蛋白家族中最大的亚家族，作为分子开关，在细胞骨架的重组、胞内囊泡的转运、细胞的增值、信号传导等重要的细胞生理活动中起关键作用。目前已在多种生物中发现了耐盐相关的Rab蛋白。研究盐藻中Rab蛋白，对揭秘盐藻应答盐胁迫过程的分子机制有重要意义。本实验的研究方法与结果如下：1．将DsRab蛋白基因的开放阅读框连接入带有GST标签的原核表达载体pGS-21a，构建原核表达重组载体pGS-21a-DsRab。将DsRab的编码序列与带有绿色荧光蛋白（GFP）基因载体pMDCMGN连接，构建亚细胞定位载体pMDCGGN。DsRab开放阅读框与植物表达载体pBI121连接，构建植物表达载体pBI121-DsRab。2.将构建好的原核表达重组载体pGS-21a-DsRab导入表达菌BL21(DE3)中进行原核表达及表达形式分析，融合蛋白成功表达并以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在。对温度、诱导剂浓度等表达条件进行优化，在28℃，0.01mol/L IPTG诱导培养下，上清中融合蛋白表达量最大。利用GST标签蛋白纯化柱纯化上清中融合蛋白。经Western blot鉴定该融合蛋白与抗GST的单克隆抗体有特异的免疫原性，初步证明该融合蛋白为GST-DsRab。3.将构建成功的亚细胞定位重组载体pMDCGGN转化农杆菌LBA4404感受态细胞，筛选阳性单克隆，采用农杆菌介导法转染洋葱内表皮细胞，荧光显微镜下观察DsRab瞬时表达，发现融合蛋白GFP-DsRab在洋葱内表皮细胞中表达，并且主要分布于膜上。本实验成功构建了，原核表达重组载体pGS-21a-DsRab，亚细胞定位重组载体pMDCGGN和植物表达重组载体PBI121-DsRab。经原核表达及纯化后获得了较纯的可溶性融合蛋白。DsRab在洋葱内表皮细胞中主要分布于膜上。该实验为进一步研究DsRab蛋白，筛选该蛋白在信号通路中的上下游互作蛋白做准备，也为研究该蛋白对高等转基因植物耐盐能力的影响奠定基础。(本文来源于《大连海洋大学》期刊2014-06-01）
[5]（2013）在《盐藻 可以吃的“干细胞”》一文中研究指出盐藻是什么样的神奇生物?盐藻可以说是地球上最古老的单细胞生物,诞生于38亿年前,在+57℃酷暑中活、-27℃严寒中下繁衍,在96%的盐水中生生不息,历经五次生物大灭绝而不死,这就是盐藻的实力。(本文来源于《老同志之友》期刊2013年18期）
[6]（2013）在《盐藻素,可以吃的“干细胞”享受健康 获得长寿》一文中研究指出盐藻是什么样的神奇生物?盐藻可以说是地球上最古老的单细胞生物之一,诞生于38亿年前,在+57℃酷暑中活、-27℃严寒中下繁衍,在96%的盐水中生生不息,历经五次生物大灭绝而不死,这就是盐藻的实力。值得一提的是,前苏联切尔诺贝利核事故发生后,709名受灾儿童和658名老年人被送入耶鲁撒冷医院,医生给他们服用3个月盐藻,然后间断叁个月,如此反(本文来源于《老年人》期刊2013年07期）
毛丽红[7]（2013）在《杜氏盐藻FLA8在鞭毛中的定位及其对食管鳞癌细胞的作用》一文中研究指出鞭毛／纤毛是细胞表面突起的亚细胞结构,主要由微管组成,它们在物种的进化过程中非常保守,从原生生物到脊椎动物细胞几乎都存在。由于纤毛与鞭毛在结构和组装机制上基本一致,所以认为它们是存在于不同类型细胞中的同一种细胞器。鞭毛／纤毛不仅在细胞的运动过程中发挥作用,而且还在细胞信号传导中行使一定的功能。比如,参与PDGF[1]、Hedgehog[2,3]、以及Wnt[4,5,6]等信号通路的多种关键因子都定位于纤毛上。纤毛还具有调控细胞分裂的作用,它通过自身的解聚来促成中心体形成纺锤体,并有利于中心粒的自由运动,从而保证纺锤体的取向以及细胞极性[7],使细胞完成正常的分裂活动。研究表明纤毛的结构或功能异常会造成多种相关疾病,如多囊肾[8]、Kartagener综合征、癌症等。杜氏盐藻是一种能够在高盐环境中繁殖生长的真核藻类,它具有一对等长的鞭毛,长约13μm,鞭毛具有典型的“9+2”结构[9]。由于其鞭毛相对较长,容易观察和分析,且在实验条件下可以去除并再生。因此,杜氏盐藻常作为研究鞭毛／纤毛长度调控及功能的模式生物。食管癌是我国发病率和致死率最高的癌症之一,尤其以河南林州为重。目前关于食管癌的治疗手段主要为手术治疗、化疗、放疗以及生物治疗相结合的方法,虽然在食管癌的诊断和治疗上取得了一定的进步,但患者的整体治愈率以及预后情况并不乐观。因此寻找新的方法和途径研究食管癌发生发展及恶变的分子机制成为食管癌早期预防和诊断的关键所在。杜氏盐藻FLA8是Kinesin-2的一个动力亚基,它在鞭毛的组装以及鞭毛内运输过程中发挥重要作用。本实验室先前的研究已经表明杜氏盐藻FLA8参与鞭毛的再生过程,但对于FLA8在杜氏盐藻中的具体定位以及它是否存在于鞭毛上目前还没有研究。在此基础上,本研究首先检测了FLA8在细胞中的分布情况,结果表明其主要定位于细胞核、鞭毛的基底部以及鞭毛上,进一步验证了FLA8在鞭毛长度调控及鞭毛内运输过程中的作用。目前,已有研究证明癌症的发生发展与鞭毛/纤毛的缺陷或异常有关。为了研究杜氏盐藻鞭毛相关基因FLA8对食管鳞癌细胞是否存在影响,我们将已构建好的重组pEGFP-N1-FLA8真核表达载体瞬时转染到食管鳞癌细胞株EC9706和Eca109细胞中,并检测了转染FLA8后细胞的增殖、凋亡、迁移、粘附能力以及细胞形态的变化。结果显示,外源的杜氏盐藻FLA8基因不仅能够成功转染食管鳞癌细胞,并且在细胞中获得了表达。而捕捉到的Eca109不同转染时期的图片则显示,FLA8在细胞的特殊位置有高度聚集的现象,我们推测这些特殊位置是有丝分裂过程中的中心体结构和纺锤体结构,提示FLA8可能参与细胞的有丝分裂过程。但这一推测还需要大量的研究来证实。另外,我们发现转染FLA8后Eca109细胞的增殖能力显着增高,而EC9706、Het-1A细胞的增殖能力却未受到影响。同样令人奇怪的是,FLA8能够增强Eca109细胞的迁移能力,却对EC9706和Het-1A细胞的迁移能力无明显作用。而E-cadherin的表达水平也只在Eca109细胞中受FLA8的影响下调,在另外两株细胞中没有显着的变化。那么为什么FLA8对食管鳞癌细胞的两个细胞株的影响不一致呢?我们推测,这可能与食管鳞癌细胞的分化程度有关系。一般我们认为EC9706细胞是低分化的食管鳞癌细胞,Eca109细胞是高分化的食管鳞癌细胞。只有高分化的Eca109细胞在转染FLA8后受到了影响,表现为增殖和迁移能力增强、粘附性下降等恶变性质。而EC9706细胞未受影响也有可能是在低分化的EC9706细胞中存在某种机制能够抵抗或消除外源蛋白对它的影响以维持自身特性。另外Eca109细胞扫描电镜结果表明,转染后细胞膜的形态发生了明显的变化。最后,我们还检测了FLA8对叁株细胞凋亡水平的影响,发现叁株细胞转染FLA8后凋亡能力均无明显变化,说明FLA8不参与食管鳞癌细胞的凋亡过程。材料与方法1藻株、细胞株与载体杜氏盐藻UTEX LB-1644购自美国德州大学,采用改良型PKS液体培养基于26℃、60μmol光量子·m-2s-1光照强度下培养,光暗周期各为12h。食管鳞癌细胞株EC9706由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室惠赠,Eca109为本实验室保存,正常食管上皮细胞Het-1A由郑州大学医药科学研究院惠赠。叁株细胞均在含有10%FBS的RPMI-1640培养基中于37℃,5%CO2的条件下培养。细胞转染所用pEGFP-N1空载体和pEGFP-N1-FLA8重组载体均为本实验室保存。2杜氏盐藻FLA8在鞭毛中的定位采用间接细胞免疫荧光方法检测FLA8在杜氏盐藻中的定位,其中所用一抗为本实验室制备的FLA8兔抗血清,二抗为购买的FITC标记的山羊抗兔IgG。3杜氏盐藻FLA8转染食管鳞癌细胞及其表达根据LipofectamineTM2000和X-tremeGENE HP DNA转染试剂操作说明,将已构建好的pEGFP-N1-FLA8重组载体分别转染食管鳞癌细胞株EC9706、Eca109细胞以及正常食管上皮细胞Het-1A。荧光显微镜下观察转染效果,然后提取细胞总蛋白,热水中煮沸变性后,采用Western Blot方法鉴定FLA8在叁株细胞中的表达情况。4杜氏盐藻FLA8对食管鳞癌细胞增殖、凋亡、粘附及迁移能力的影响以转染后的叁株细胞为研究对象,分别将它们接入96孔板中,待细胞贴壁后,分别采用EdU荧光显微镜法检测细胞增殖能力的变化,TUNEL法检测细胞凋亡水平的变化。另外,通过Transwell小室实验检测细胞的迁移能力、WesternBlot方法检测粘附因子E-cadherin和凋亡蛋白caspase-3的表达量的变化。并应用扫描电子显微镜观察转染后Eca109细胞在形态上的变化。结果1杜氏盐藻FLA8在鞭毛中的定位细胞免疫荧光结果显示,在激光共聚焦显微镜下可观察到杜氏盐藻FLA8主要定位于藻体的细胞核、鞭毛基体部以及鞭毛中,提示FLA8可能与鞭毛的再生和组装以及鞭毛内物质运输有关,这与本实验室先前的研究一致。2杜氏盐藻FLA8转染食管鳞癌细胞及其表达转染后的细胞在荧光显微镜下可检测到绿色荧光,并且具有较高的转染效率,表明杜氏盐藻FLA8能够在Eca109、EC9706以及Het-IA细胞中获得表达。采用Western Blot方法也检测到了FLA8蛋白,进一步证明FLA8在这叁株细胞中分别获得了表达。另外,观察转染后不同时期的Eca109细胞发现FLA8蛋白可能在食管鳞癌细胞的中心体样及纺锤体样结构区域存在高表达的现象,推测其可能与细胞的有丝分裂有关。3杜氏盐藻FLA8对食管鳞癌细胞增殖、凋亡、粘附及迁移能力的影响与对照组相比,FLA8能够增强Eca109细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05),但对EC9706、Het-IA细胞却没有明显的作用(P>0.05)。另外,E-cadherin的表达水平在Eca109细胞中也受FLA8的影响明显下降(P<0.05),而在另外两株细胞中没有显着的变化(P>0.05)。扫描电镜结果显示,Eca109细胞转染FLA8后细胞的形状发生明显的改变,细胞变得圆而立体,细胞核隐晦不可见,膜四周伸出许多“天线”样的触手。以上结果表明,FLA8对高分化的食管鳞癌细胞Eca109存在一定的影响,加强了其恶变的性质。最后,TUNEL检测结果和caspase-3凋亡蛋白表达水平显示,在叁株细胞中,细胞的凋亡水平都未受到FLA8的影响而发生改变,提示FLA8不参与细胞凋亡过程。结论1.杜氏盐藻FLA8主要分布于藻体的细胞核、鞭毛基体部及鞭毛上,其真核表达载体能够成功转染EC9706、Eca109细胞和Het-1A细胞,并在叁株细胞中瞬时表达。2.转染后的Eca109细胞形态发生改变,细胞膜周围“触手”样结构增多。3.杜氏盐藻FLA8能够促进Eca109细胞的增殖能力和迁移能力,降低Eca109细胞中E-cadherin蛋白的表达水平,使细胞的粘附能力下降。(本文来源于《郑州大学》期刊2013-05-01）
杨晓玲,郭金耀,王志龙[8]（2013）在《V_(B6)对盐藻色素形成、细胞生长和蛋白积累的影响》一文中研究指出将盐藻接入不同质量浓度的VB6培养液中,检测其对盐藻色素形成、细胞生长与蛋白质积累的影响。试验结果表明,VB6对盐藻的作用效应表现为低质量浓度促进高质量浓度抑制。能够使盐藻β-胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b形成最多、细胞繁殖最快、蛋白质积累量最大的VB6质量浓度为250μg/L。在此质量浓度下,每个细胞中的蛋白质含量相对较低,这可能是由于盐藻细胞快速繁殖所致。(本文来源于《水产科学》期刊2013年03期）
卢俊,卢庆华,张冬艳,张丽红[9]（2012）在《活性盐藻细胞计数法的研究》一文中研究指出研究了盐藻细胞在存活的情况下用血细胞计数法对其进行计数,通过加入几种不同浓度的羧甲基纤维素钠的计数比较,找出了血细胞计数法计数藻细胞的最佳羧甲基纤维素钠加入浓度;计数后继续加入培养液培养,发现藻细胞生长良好,未发现异常。(本文来源于《盐业与化工》期刊2012年10期）
崔柳青,张璐,张磊,薛乐勋[10]（2012）在《杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶在真核细胞中的表达》一文中研究指出目的:分别构建杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶(DsGPI)绿色荧光蛋白表达载体和真核表达载体。方法:PCR扩增得到上、下游分别添加EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的DsGPI基因,双酶切后与绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1连接,得到重组载体pEGFP-C1-DsGPI,转染狗肾细胞MDCK,观察绿色荧光蛋白在细胞中的定位;同理将上、下游分别添加BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的DsGPI基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,得到pcDNA3.1-DsGPI,转染食管癌EC9706细胞,分别应用RT-PCR法和Westernblot法检测DsGPI mRNA和蛋白的表达。结果:DsGPI在MDCK细胞中定位于细胞核,在EC9706细胞中被有效表达。结论:成功构建了DsGPI的绿色荧光蛋白表达载体和真核表达载体。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2012年04期）
盐藻细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
盐生杜氏藻(Dunaliella salina,以下简称盐藻)无细胞壁,为天然原生质体,由于极强的耐盐能力,简单的细胞结构以及便利的培养条件使其成为研究植物耐盐机制最理想的模式生物。促有丝分裂活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)属于丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,存在于所有真核生物中,它在植物的生长发育调节及抗逆应答等生理过程中起重要作用。因此,深入探讨盐藻MAPK基因的功能对于阐明细胞高度复杂的分子机制具有重要科学意义。本论文在实验室已获得Ds MAPK基因的基础上,开展了盐藻Ds MAPK的原核表达、反义表达和亚细胞定位分析的研究。本实验的研究方法与结果如下:1.通过PCR技术扩增Ds MAPK基因的开放阅读框(ORF),并将其克隆至带有GST标签的原核表达载体p GS-21a上,成功构建重组表达载体p GS-21a-MAPK。将原核表达载体p GS-21a-MAPK导入E.coli.BL21(DE3)中,经IPTG诱导后融合蛋白在E.coli.BL21(DE3)中得到成功表达。通过SDS-PAGE检测融合蛋白的表达形式,结果在上清和包涵体中均有存在。上清蛋白经过GST-SefinoseTM Kit纯化后获得了纯度较高的可溶性融合蛋白,Western blot检测结果显示该融合蛋白能被抗GST单克隆抗体特异性识别,初步证明得到了纯化的GST-MAPK蛋白。2.将Ds MAPK基因的开放阅读框反向插入到植物表达载体35S启动子的下游,成功构建了反义表达载体,采用Li Ac/PEG介导法将其导入盐藻细胞。通过氯霉素筛选得到具有相应抗性的转基因盐藻,用半定量RT-PCR的方法分析高盐胁迫不同时间下转基因盐藻中Ds MAPK表达水平的变化情况,结果显示盐藻Ds MAPK基因在转录水平的表达受到明显的抑制。3.将构建成功的亚细胞定位重组载体p MDCMGN-Cat转化农杆菌GV3101感受态细胞,筛选阳性单克隆,采用农杆菌介导法转染洋葱内表皮细胞,荧光显微镜下观察Ds MAPK瞬时表达,发现融合蛋白GFP-Ds MAPK在洋葱内表皮细胞中成功表达,并且主要分布于细胞核及细胞质中。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
盐藻细胞论文参考文献
[1].宋雨晴,靳翠丽,胡文峰,封克,周晓见.氮源对盐藻生长及细胞物质组成的影响[J].生态环境学报.2017
[2].岳文静.盐藻DsMAPK的原核表达、反义表达和亚细胞定位分析[D].大连海洋大学.2015
[3].陶晓迎.盐藻DsSTPK基因的载体构建、原核表达及亚细胞定位分析[D].大连海洋大学.2014
[4].李秀娟.盐藻DsRab基因的载体构建、原核表达及亚细胞定位分析[D].大连海洋大学.2014
[5]..盐藻可以吃的“干细胞”[J].老同志之友.2013
[6]..盐藻素,可以吃的“干细胞”享受健康获得长寿[J].老年人.2013
[7].毛丽红.杜氏盐藻FLA8在鞭毛中的定位及其对食管鳞癌细胞的作用[D].郑州大学.2013
[8].杨晓玲,郭金耀,王志龙.V_(B6)对盐藻色素形成、细胞生长和蛋白积累的影响[J].水产科学.2013
[9].卢俊,卢庆华,张冬艳,张丽红.活性盐藻细胞计数法的研究[J].盐业与化工.2012
[10].崔柳青,张璐,张磊,薛乐勋.杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶在真核细胞中的表达[J].郑州大学学报(医学版).2012
标签：杜氏盐藻(Dunaliella; salina); 氮源; 生长; 细胞物质组成;