本文主要研究内容
作者李华,杨玲玲,杜红旗（2019）在《重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定》一文中研究指出：Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.
Abstract
Tth DNAju ge mei ju you ju ge mei yu fan zhuai lu mei liang chong gong neng ,er ju nai gao wen ,dan shi guo nei bing wei shi xian gao xiao sheng chan .ben yan jiu yi cu di de shi re qi re jun Thermus thermophilusji yin zu wei mo ban ,cai yong PCRfen duan kuo zeng he mei qie lian jie de fang fa huo de Tth DNAju ge mei ji yin quan chang xu lie ;ran hou gou jian chong zu zhi li pXT99b/Tthbing zhuai hua biao da jun E.coli DH5α,li yong IPTGyou dao Tthji yin biao da ,bing cai yong re chu li 、Ni2+zhu chun hua rong ge His-tagde Tth DNAju ge mei ,zui hou li yong PCR、RT-PCRjian ding ji huo xing .jie guo xian shi ,ben yan jiu huo de Tth DNAju ge mei ji yin quan chang 2 505bp,cheng gong biao da bing huo de gao chun du gao huo xing de chong zu Tth DNAju ge mei ,1Lfa jiao ye suo de cu mei ye zhong ,mei huo xing yao you 800 000U,mei de bi huo yao wei 6 315U/mg.ben yan jiu zui zhong shi xian le Tth DNAju ge mei de gao xiao guo chan hua bing jiang di le shi yan cheng ben .
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自河南大学学报(自然科学版)的李华,杨玲玲,杜红旗，发表于刊物河南大学学报(自然科学版)2019年03期论文，是一篇关于基因克隆论文,酶活论文,河南大学学报(自然科学版)2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自河南大学学报(自然科学版)2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。