导读:本文包含了牛分枝杆菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:结核分枝杆菌,MPB70蛋白,单克隆抗体
牛分枝杆菌论文文献综述
周曼莉,周玉成,张海威,乔连江,杨艳玲[1]（2019）在《牛分枝杆菌MPB70蛋白单克隆抗体的制备及检测》一文中研究指出为了制备牛分枝杆菌的单克隆抗体,本试验利用制备的原核表达的牛分枝杆菌重要抗原蛋白MPB70作为免疫原皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术,经过5次亚克隆与筛选,取已免疫好的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG3500的作用下进行细胞融合。筛选得到了2株分泌抗牛分枝杆菌MPB70蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为Anti-B-MPB70:8和Anti-B-MPB70:12。采用间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行亲和常数检测、效价分析及亚类鉴定,通过SDS-PAGE凝胶试验对单克隆抗体进行纯度分析,并检测其浓度,通过Western blotting方法对单克隆抗体的反应特性进行鉴定。结果显示,纯化后的MPB70蛋白分子质量大小为20 ku,浓度为0.5 mg/mL。两株单克隆抗体的亲和常数分别为9.95×10~9和9.53×10~8;抗体效价分别为1∶102 400和1∶12 800;抗体亚类分别为IgG_(2b)和IgG_1,轻链类型均为κ型;纯度>90%;浓度分别为3.0和2.2 mg/mL;且具有良好的反应特性。以上研究结果表明,本试验成功制备了抗MPB70蛋白单克隆抗体,可为牛结核病病原和抗体检测技术研究奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
徐翩翩,唐亦然,杨杨[2]（2019）在《牛分枝杆菌PPE13蛋白激活NLRP3炎性复合体的作用机制研究》一文中研究指出研究目的:牛分枝杆菌是重要的人畜共患病原菌,在巨噬细胞内可通过炎症复合体介导IL-1β的分泌,这一过程依赖于ESX-1和ESX-5分泌系统。已存大量研究阐明了ESX-1介导的炎症复合体激活的作用机制,但ESX-5激活炎症复合体的作用机制知之甚少。我们在前期研究中发现ESX-5效应蛋白PPE13可以促进IL-1β分泌。介于IL-1β分泌受到炎症复合体的严格调控,因此,本试验将在前期研究基础上拟探讨PPE13是否激活NLRP3炎症复合体。如(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
廖轶,Tariq,Hussain,刘春法,崔永勇,赵德明[3]（2019）在《内质网应激在牛分枝杆菌介导的线粒体损伤和炎性体活化中的作用机制》一文中研究指出(目的)研究内质网应激(ERS)在感染牛分枝杆菌的巨噬细胞中线粒体损伤和IL-1β产生中的作用。(方法)用牛分枝杆菌感染BMDM,随后用蛋白免疫印迹方法、酶联免疫吸附法、透射电镜技术或RT-PCR等方法检测ERS标志物、IL-1β产生、NLRP3的线粒体转移、caspase-8与Bid活化以及mt DNA释放,并用ERS、线粒体损伤、caspase-8活化的抑制剂或NLRP3和Bid的si RNA处理细胞,观察内质网应激的活化、线粒体损伤、炎性体激活及其互作,确定信号通路上下游关系。(结果)我们发现牛分支杆菌感染时,ERS增加活性氧(ROS),促进炎性体NLRP3蛋白向线粒体的转移,转移到线粒体的NLRP3激活了caspase-8和Bid,引发线粒体损伤,进一步激活炎性体,产生成熟IL-1β。(结论)牛分枝杆菌通过ERS激发线粒体损伤和炎性体激活之间的正反馈效应,促进成熟IL-1β产生。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
窦燚萍,赵琰,平晓坤,罗静龙,贾坤[4]（2019）在《牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的调控机制》一文中研究指出【目的】研究牛分枝杆菌Mycobacterium bovis PtpA蛋白对免疫应答相关的NF-κB信号通路的影响,以揭示PtpA蛋白在机体免疫应答中的作用。【方法】构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,并将其转染到HEK293T中,进行SDS-PAGE分析及Western blot检测。激活NF-κB信号通路后,通过双荧光素酶试验和qPCR方法探究PtpA蛋白对NF-κB信号通路的影响。【结果】成功构建PtpA基因真核表达载体FLAG-PtpA,转染HEK293T后经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为22 000处可见特异性蛋白条带。Western blot结果显示,表达产物可与一抗特异性结合,证明该蛋白是PtpA蛋白。双荧光素酶试验中,转染2～24 h,试验组与对照组萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的相对荧光强度的比值差异显着(P<0.05);转染2 h后,对照组萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的相对荧光值是试验组的2.93倍,说明PtpA蛋白对NF-κB信号通路激活早期具有显着的抑制作用。qPCR结果显示,转染2 h后,对照组的IL-6、GM-CSF、BIRC-2和BIRC-3的表达量分别是试验组的3.93、3.42、2.17和2.30倍(P<0.01);转染4 h后,对照组的IL-6、GM-CSF、BIRC-2和BIRC-3的表达量分别是试验组的4.26、3.93、2.36和2.50倍(P<0.01),说明PtpA蛋白对NF-κB信号通路相关的细胞因子(IL-6、GM-CSF、BIRC-2、BIRC-3)在免疫早期具有显着抑制作用。【结论】qPCR结果与双荧光素酶试验结果一致,表明牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的影响主要发生在早期。本研究为后续研究有效的结核病防控药物提供了理论基础。(本文来源于《华南农业大学学报》期刊2019年04期）
林伟东,隋修锟,王召阳,贾红,房立春[5]（2019）在《牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备》一文中研究指出为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,并加入饲养层细胞轻轻摇匀分装于96孔培养板,置于37℃、5%CO_2培养箱内培养10 d,通过IFA和间接ELISA筛选阳性细胞株进行亚克隆,制备能分泌针对MarP MAb的杂交瘤细胞株,并通过Western blotting和ELISA检测MAb与重组表达和天然的MarP蛋白的反应性。结果显示,重组表达的MarP具有良好的丝氨酸蛋白酶活性,能够在12 h内将30μg的β-casein酶解完全,DTT能够抑制MarP的酶活性。具有活性的MarP蛋白免疫小鼠后,获得5株针对MarP的MAb,均能够特异性识别重组和牛分枝杆菌天然表达的MarP蛋白的线性表位,而不与大肠杆菌(E.coli)和耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)的蛋白反应。本研究成功制备了MarP蛋白及MAb,为进一步研究MarP的作用底物及其在牛分枝杆菌抗酸胁迫中作用机制提供了必备材料。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年06期）
刘璐[6]（2019）在《转录因子HpoR对牛分枝杆菌PDIM合成基因簇表达及病原-宿主相互作用的调控》一文中研究指出结核分枝杆菌具有独特的细胞壁结构,与病原菌致病性息息相关。其中,最具代表性的成分是结核菌醇蜡分支酸酯(PDIM),它位于细菌细胞壁的表面,对维持细胞壁的完整性十分重要。同时,PDIM也是结核分枝杆菌重要的毒力因子之一,它的生物合成和转运对细菌感染宿主以及感染后在宿主胞内的存活发挥了不可或缺的重要作用。但是,目前我们对于PDIM代谢基因的表达调控了解得非常少,直接相关的转录调控因子尚未鉴定。本研究利用M.bovis BCG为模式菌株,首次发现和鉴定了转录因子HpoR可以直接调控PDIM合成基因簇的表达,具体结果如下:(1)利用凝胶阻滞实验(EMSA)以及染色质免疫沉淀实验(ChIP)证明了HpoR在M.bovis BCG细菌体内以及体外均能与PDIM操纵子的启动子bcg_2950p结合,而且这种结合具有明显的序列特异性;(2)通过设计、制备涵盖不同长度的bcg_2950p DNA片段,EMSA实验发现HpoR特异性结合在bcg_2950p的P1区段,进一步测序分析发现其中含有一个保守的反向回文结构;(3)β-半乳糖苷酶活性实验及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)证明了HpoR是一个转录抑制子,阻遏靶基因的表达;超表达HpoR时PDIM基因簇的表达下调,HpoR敲除则导致PDIM基因簇表达上调;(4)利用不同HpoR重组菌株感染巨噬细胞后发现,敲除HpoR会增强BCG菌株在巨噬细胞内的存活,相反HpoR超表达则导致细菌在巨噬细胞内存活率下降;(5)通过比较不同重组菌株感染巨噬细胞后细胞因子分泌水平,发现HpoR敲除菌株导致促炎细胞因子IL-6分泌明显上升;(6)检测感染后细胞表型,发现HpoR超表达BCG菌株感染的巨噬细胞凋亡率上升,ROS水平也相应上升。因此,本论文成功鉴定了一个直接参与调控PDIM基因簇表达的新转录因子HpoR,并初步发现了其在分枝杆菌感染宿主细胞过程中的重要作用,这些工作为后续进一步研究结核分枝杆菌的基因调控与致病机理提供了重要线索。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
张凯[7]（2019）在《丁酸钠对宿主抵抗牛分枝杆菌感染的作用机理研究》一文中研究指出结核病(Tuberculosis)是一种慢性消耗性人畜共患传染病,每年引发全球1000万人,5000万头牛感染结核病,对社会公共卫生安全及畜牧业存在巨大的威胁。结核病的病原菌主要为结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)及牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)。在牛分枝杆菌入侵宿主的过程中,受到宿主体内多种免疫机制的围剿,但其主要被巨噬细胞吞噬。牛分枝杆菌进入巨噬细胞后可以通过自身毒力因子抑制巨噬细胞内的免疫机制,在巨噬细胞中潜伏,从而使其发生免疫逃避。在巨噬细胞与牛分枝杆菌互作的过程中,宿主细胞多种免疫机制发挥着重要作用,其中就包括组蛋白的乙酰化调节。因此,本研究通过探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对于THP-1巨噬细胞和C57BL/6小鼠抵抗牛分枝杆菌感染的影响,为探究结核病致病机理及其新药物研发提供新的思路及理论基础。具体试验方法及结果如下:1.为了探究丁酸钠对THP-1细胞抵抗牛分枝杆菌的影响,本试验用牛分枝杆菌感染THP-1细胞3h后,移除胞外牛分枝杆菌之后分别用0.5mM、1.0mM 丁酸钠处理24h,收取总蛋白、总RNA及上清液。进行胞内菌落形成单位(CFU)检测,并用实时荧光定量PCR及WB检测LL37、Ⅰ型HDAC、NFκB信号通路及凋亡相关蛋白的表达,同时ELISA检测细胞因子IL1β、IL10、TNF-α的分泌。结果显示牛分枝杆菌感染后,丁酸钠能够促进THP-1细胞LL37的表达,抑制HDAC1、HDAC2及HDAC3的表达并抑制NFκB信号通路,促进细胞凋亡,细胞因子IL1β、TNF-α分泌减少,增强THP-1细胞清除胞内牛分枝杆菌。2.为研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对于C57BL/6小鼠感染牛分枝杆菌的保护作用,本试验分别用丁酸钠进行预防及治疗试验,在牛分枝杆菌感染C57BL/6小鼠前后,两天一次进行两个浓度的丁酸钠腹腔注射。之后通过观察小鼠生存率及体重变化、脏器病理变化,并对小鼠进行肺内CFU、肺内炎性细胞的聚集以及血清细胞因子进行检测。结果显示注射500 mg/kg 丁酸钠后,受感染的小鼠存活率升高,肺内细菌负担比未注射丁酸钠组减少,丁酸钠注射组肺内炎性细胞聚集降低,并且各脏器病变程度也较轻。综上所述,本研究结果表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠能够促进THP-1巨噬细胞及C57BL/6小鼠抵抗牛分枝杆菌感染。这一结果证实组蛋白的乙酰化调节能够影响机体对牛分枝杆菌的抵抗作用,为抗结核新药研发提供了思路。(本文来源于《宁夏大学》期刊2019-04-01）
王振玲,李淼煊,孙欣,程广宇,刘春法[8]（2019）在《呼吸道感染牛分枝杆菌对肝脏和肠道影响的病理组织学观察》一文中研究指出为了对牛结核分支杆菌引起的牛消化道如肝、肠道的病理变化进行研究。本试验采用滴鼻吸入的方式感染犊牛,七个月后进行剖检和显微镜下的病理组织学观察。结果发现,肝脏可观察到肉芽肿结节,中心为干酪样坏死或者钙化,外周为上皮样细胞和郎罕氏细胞,最外层是淋巴细胞和成纤维细胞;肠道病变不明显,多为局灶性炎性细胞聚集。此次试验可为牛分枝杆菌对消化道的影响提供参考。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2019年02期）
何萍,赵孟成,王灵,黄增帅,陈堡[9]（2018）在《利用酵母双杂交系统筛选TRADD的互作牛分枝杆菌蛋白》一文中研究指出为研究牛分枝杆菌抑制肿瘤坏死因子介导的细胞凋亡来逃避宿主免疫反应的机制,本试验采用酵母双杂交系统在牛分枝杆菌中筛选可与肿瘤坏死因子受体1相关死亡域蛋白(TRADD)相互作用的蛋白。通过限制性内切酶Sau3AⅠ部分消化牛分枝杆菌基因组,回收片段随机插入pGADT7载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建牛分枝杆菌基因组文库。PCR扩增人tradd基因,将扩增产物克隆于pGBKT7载体上,构建重组诱饵质粒pGBKT7-tradd,转化酵母菌Y2HGold。用诱饵质粒pGBKT7-tradd对牛分枝杆菌基因组文库进行筛选,以获得与TRADD互作的阳性候选克隆;提取阳性候选克隆中的质粒,经测序和同源性比对分析,获得与TRADD互作的牛分枝杆菌蛋白的生物学信息。结果显示,构建的文库滴度为2×10~6 CFU,平均插入片段在1.5kb左右,文库重组率>95%。经Western blotting验证,诱饵质粒pGBKT7-tradd可在酵母菌中表达诱饵蛋白TRADD,且TRADD的表达对酵母菌无毒性,不会在酵母菌中自激活。应用酵母双杂交系统初步筛选出20个与TRADD互作的阳性克隆,经复筛、测序和BLAST对比,最终发现7个基因序列。本研究应用酵母双杂交技术成功筛选到7个与TRADD互作的牛分枝杆菌蛋白,为进一步研究牛分枝杆菌对细胞凋亡的抑制机制提供线索。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年11期）
李明,张雅娜,林伟东,隋修锟,贾红[10]（2019）在《牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用》一文中研究指出为筛选和评估牛分枝杆菌毒力菌株与卡介苗(BCG)基因差异区域(region ofdifferences,RD)蛋白在牛结核病诊断中的效果,本研究表达了牛分枝杆菌RD1区的PPE68、RD9区的Mb1230、R11区的PPE57和RD2区的PE-PGRS35,并纯化得到纯度大于90%的重组蛋白。通过优化条件建立了间接ELISA检测方法,并采用该方法检测了结核病阳性牛和健康牛血清中针对PPE68、Mb1230、PPE57和PE-PGRS35的IgM和IgG抗体水平,评价其在牛结核病血清学诊断中的潜力。结果显示,在结核病阳性牛中,针对PPE68、Mb1230、PPE57和PE-PGRS35的IgG抗体检出率分别为13.3%、43%、50%和30%,IgM抗体检出率分别为30%、10%、36%和33%。结果表明,R11区的PPE57和RD2区的PE-PGRS35有潜力作为牛结核病血清学检测的候选抗原,用于牛结核病的诊断。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年01期）
牛分枝杆菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究目的:牛分枝杆菌是重要的人畜共患病原菌,在巨噬细胞内可通过炎症复合体介导IL-1β的分泌,这一过程依赖于ESX-1和ESX-5分泌系统。已存大量研究阐明了ESX-1介导的炎症复合体激活的作用机制,但ESX-5激活炎症复合体的作用机制知之甚少。我们在前期研究中发现ESX-5效应蛋白PPE13可以促进IL-1β分泌。介于IL-1β分泌受到炎症复合体的严格调控,因此,本试验将在前期研究基础上拟探讨PPE13是否激活NLRP3炎症复合体。如
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛分枝杆菌论文参考文献
[1].周曼莉,周玉成,张海威,乔连江,杨艳玲.牛分枝杆菌MPB70蛋白单克隆抗体的制备及检测[J].中国畜牧兽医.2019
[2].徐翩翩,唐亦然,杨杨.牛分枝杆菌PPE13蛋白激活NLRP3炎性复合体的作用机制研究[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[3].廖轶,Tariq,Hussain,刘春法,崔永勇,赵德明.内质网应激在牛分枝杆菌介导的线粒体损伤和炎性体活化中的作用机制[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[4].窦燚萍,赵琰,平晓坤,罗静龙,贾坤.牛分枝杆菌PtpA蛋白对NF-κB信号通路的调控机制[J].华南农业大学学报.2019
[5].林伟东,隋修锟,王召阳,贾红,房立春.牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医.2019
[6].刘璐.转录因子HpoR对牛分枝杆菌PDIM合成基因簇表达及病原-宿主相互作用的调控[D].华中农业大学.2019
[7].张凯.丁酸钠对宿主抵抗牛分枝杆菌感染的作用机理研究[D].宁夏大学.2019
[8].王振玲,李淼煊,孙欣,程广宇,刘春法.呼吸道感染牛分枝杆菌对肝脏和肠道影响的病理组织学观察[J].中国兽医杂志.2019
[9].何萍,赵孟成,王灵,黄增帅,陈堡.利用酵母双杂交系统筛选TRADD的互作牛分枝杆菌蛋白[J].中国畜牧兽医.2018
[10].李明,张雅娜,林伟东,隋修锟,贾红.牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用[J].中国兽医科学.2019