导读:本文包含了蛋白质印迹方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:质谱联用,固相萃取,目标蛋白,联用方法
蛋白质印迹方法论文文献综述
刘震,别子俊,邢荣荣[1]（2017）在《分子印迹固相萃取-质谱联用方法用于目标蛋白质分析》一文中研究指出分子印迹聚合物(MIP)是具有抗体或酶的专一识别能力的化学合成材料,已在仿生识别、仿生催化和亲和分离等领域获得重要应用。基于分子印迹聚合物的固相萃取是重要的样品处理和样品富集技术,可有效降低样品复杂度并富集待测组分,是处理复杂样品的有效手段。质谱是蛋白质组学及蛋白质分析中的结构鉴定的重要方法,由于蛋白(本文来源于《第叁届全国质谱分析学术报告会摘要集》期刊2017-12-09）
刘震,别子俊,陈阳,潘祥华[2]（2015）在《分子印迹固相萃取-质谱联用方法用于蛋白质组学及蛋白质分析研究》一文中研究指出分子印迹聚合物(MIP)是具有抗体或酶的专一识别能力的化学合成材料,已在仿生识别、仿生催化和亲和分离等领域获得重要应用。基于分子印迹聚合物的固相萃取是重要的样品处理和样品富集技术,可有效降低样品复杂度并富集待测组分,是处理复杂样品的有效手段。质谱是蛋白质组学(本文来源于《中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集》期刊2015-10-16）
曾粒[3]（2014）在《基于直接蓝71免洗脱染色的蛋白质免疫印迹内参方法学研究》一文中研究指出研究背景近30年来，蛋白质免疫印迹（Western Blotting）一直作为一项常规实验技术，在生命科学研究领域中被广泛应用。其包括凝胶电泳分离，及后续的免疫检测两个主要步骤。Western Blotting主要用于蛋白质定性和半定量分析，即检测样品中目标蛋白的有无、或不同样品中目的蛋白的差异表达水平。在定性分析中，需首先检测泳道中是否存在蛋白，以排除系统非正常工作所导致的假阴性；而半定量分析时，则需要校正不同样品的上样量以及转印效率的差别造成的系统误差。为此，实验过程中往往需要引入合适内参（loading control）来作为体系对照。目前使用的内参主要有两种趋势，一种是采用传统的管家基因所表达的蛋白即管家蛋白进行免疫反应，将其发光灰度值作为体系内参；另一种则是采用全蛋白染色法，即将全部上样蛋白染色后的灰度值作为体系内参。直接蓝71（Direct Blue71，DB71）是一种工业常用的偶氮染料，2000年Hee-Youn Hong首次发现该染料在酸性环境下能进行蛋白染色，并且在弱碱性环境下易于洗脱。那么，DB71染色是否能作为一种Western Blotting内参，这种染色方法是否会影响后续的免疫反应，其在天然样本中的染色范围与线性程度等，这些问题均需进一步实验研究。目的本实验通过与传统的单一蛋白免疫内参和全蛋白染色内参进行比较，建立基于直接蓝71免洗脱染色的蛋白质免疫印迹内参。方法采用叁种常见的神经科学研究样本（人血浆，人少突胶质瘤细胞，大鼠脑组织）系统评估DB71染色法作为Western Blotingt内参的可行性。其中，考马斯亮蓝作为传统的全蛋白膜染色内参法，β-tubulin作为传统的蛋白印记免疫内参法，维他命D结合蛋白作为日常实验中的目的蛋白来与DB71染色法进行对照试验。每种样本重复上样6次，采用相关系数评估其精确性；2.5-40μg的线性蛋白上样，采用R2来评估方法的线性及线性范围；共3次技术重复，采用独立样本T检验来评估DB71染色法与两组对照内参法的差异和可重复性。结果（1）在少突胶质瘤细胞组中，DB71染色法的精确性和可重复性较考马斯亮蓝膜染色内参法有统计学差异，而大鼠脑组织和人血浆组并未表现明显差异。（2）在少突胶质瘤细胞组和大鼠脑组织组中，直接蓝71染色法的精确性性和可重复性较β-tubulin免疫内参法有明显优势，差异有统计学意义。（3）在少突胶质瘤细胞组和大鼠脑组织组中，未洗脱的直接蓝71染色法的精确性和可重复性较未染色的β-tubulin组和维他命D结合蛋白组无统计学差异，结果表明未洗脱的直接蓝71对后续的免疫反应不会造成太大干扰。（4）在叁组样本的2.5-40μg上样范围内，直接蓝71染色法线性好，与考马斯亮蓝染膜法和β-tubulin免疫内参法无统计学差异。在血浆样本中，直接蓝71染色法较维他命D结合蛋白组有统计学差异，而维他命D结合蛋白组线性较差，推测其可能在20μg已达到免疫线性上限。（5）在叁组样本2.5-40μg上样范围内，未洗脱的直接蓝71染色法的线性范围较未染色的β-tubulin组和维他命D结合蛋白组无统计学差异，证明了未洗脱的直接蓝71不会影响常规上样范围内免疫动力学。结论DB71免洗脱染色法具有良好的线性范围，可以作为一种方便快捷且价格低廉的Western Blotting内参。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2014-05-01）
周靖[4]（2014）在《新型磁性蛋白质印迹材料用于重大疾病早期筛查的分析方法研究》一文中研究指出本论文制备了一系列用于模拟生物探针的蛋白质印迹材料，在此基础上结合夹心免疫分析方法，开发了多种低成本、简单、高灵敏、高特异性的电化学发光(ECL)免疫分析方法；实现了对多种重大疾病诊断相关标志物(血红蛋白，HIV-1抗体，癌胚抗原CEA和糖类抗原CA199)的高灵敏痕量检测。具体如下：血红蛋白分析方法的构建是基于磁性分子印迹聚合物(MMIPs)模拟血红蛋白抗体，去除模板蛋白质后，实现对痕量模板蛋白质的富集和分离，通过构建的单抗体夹心ECL免疫传感器实现其超灵敏的检测，有望用于对心血管疾病的早期筛查。HIV-1抗体分析方法的构建是基于抗原决定基印迹技术，利用与HIV-1抗体具有相同Fc区的人免疫球蛋白(HIgG)作为模板分子合成MMIPs，去除模板蛋白后实现对血清中痕量HIV-1抗体的富集和分离，进而与HRP酶标记的HIV抗原发生夹心免疫反应，生成的免疫复合物可催化鲁米诺-双氧水体系的ECL，由此构建的ECL免疫传感器，有望用于艾滋病的早期筛查。癌胚抗原CEA和糖类抗原CA199的近同时分析方法是基于空间分辨技术，在两个工作电极上电聚合多巴胺分子印迹膜，通过构成的ECL免疫传感器实现两种肿瘤标志物的近同时分析，有望用于癌症的早期筛查。上述分析方法大大降低了实验成本，简化了实验步骤，增强了检测灵敏度，并且解决了蛋白质印迹材料结合待测物特异性受限的问题，为临床医学中重大疾病的早期筛查提供了技术支持。本论文主要从下述方面开展研究工作：1.基于蛋白质磁性分子印迹聚合物模拟捕获探针的单抗夹心电化学发光免疫传感器本章采用血红蛋白作为模板分子，制备了代替一抗作为捕获探针的MMIPs，以及作为信号标签的Au纳米粒子包覆的Ru(bpy)32+掺杂的二氧化硅(Ru@SiO2@Au)纳米复合物，进而构建了一种基于分子印迹-抗体标记探针夹心反应策略的ECL免疫传感器，可用于痕量血红蛋白检测。用MMIPs作为捕获探针有助于大批量制备，极大地降低了成本，并提高了免疫传感器的稳定性。此外，磁性分离可大大简化制备过程，传感器可再生使用。再者， MMIPs能富集样液中超痕量的抗原，从而实现对血红蛋白的超灵敏分析。得到的血红蛋白线性范围为0.1~4×104pg mL1，检测限为0.023pg mL1。与其它免疫传感器相比，该方法具有低成本，高灵敏度和高稳定性的优势，因此为临床蛋白质的快速超灵敏检测提供了解决方案。2.用磁性分子印迹聚合物作为捕获探针超灵敏检测HIV-1抗体的低成本电化学发光夹心免疫传感器本章通过抗原决定基印迹技术，用人免疫球蛋白HIgG(与人免疫缺陷病毒-1抗体anti-HIV-1具有相同的Fc区但不同的Fab区)作为模板分子制备了MMIPs。以MMIPs作为捕获探针并用辣根过氧化物酶标记的抗原(HRP-HIV-1)作为信号标签，构建了一种快速和低成本的超灵敏检测anti-HIV-1的ECL夹心免疫传感器。首先，间氨基苯硼酸(APBA)被用作功能单体和交联剂，在模板分子HIgG存在下，加入引发剂过硫酸铵后，APBA在Fe3O4@SiO2NPs表面聚合，由此获得了MMIPs。洗脱模板后MMIPs被用来识别和富集不同浓度的anti-HIV-1，再通过免疫反应结合HRP-HIV-1，形成夹心型免疫复合物，由此构建了一种新型的ECL夹心免疫传感器。通过固定在HRP-HIV-1上的HRP对Luminol-H2O2体系的ECL催化作用，anti-HIV-1稀释比例(标准阳性血清)在1:20,000~1:50范围内呈现线性响应，检测限为1:60,000(S/N=3)。该研发的方法为感染HIV病人的早期诊断提供了一种低成本，简单和灵敏的方式。3.基于空间分辨技术近同时检测癌胚抗原和糖类抗原199的新型分子印迹电化学发光夹心免疫传感器阵列本章制备了一种新型的含2个包覆分子印迹聚合物的丝网印刷碳工作电极，进而构建ECL夹心免疫传感器阵列，通过该阵列实现了肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)和糖类抗原199(CA199)的近同时免疫分析。将用作不同抗原(模板分子)功能单体的多巴胺与模板分子在丝网印刷电极的2个碳工作电极表面上电聚合，形成分子印迹聚多巴胺膜。利用它作为捕获探针，并用聚赖氨酸(PLL)与Au纳米粒子包覆的Ru(bpy)32+掺杂的二氧化硅(Ru@Si@PLL-Au)纳米复合物作为信号标签。构建的免疫传感器阵列的ECL信号借助自制的单刀双掷开关，由光电倍增管(PMT)近同时测得。得到的对CEA和CA199浓度的线性范围分别为0.05~100pg mL-1和0.03~80pg mL-1，检测限分别为0.02和0.01pg mL-1。该新型的ECL免疫方法将空间分辨技术与分子印迹技术结合起来，为CEA和CA199的复合免疫分析提供了一种简单，低成本，快速和灵敏的途径。(本文来源于《宁波大学》期刊2014-04-15）
冯爱平,扎拉嘎胡,李威,刘英富[5]（2014）在《高灵敏的蛋白质免疫印迹新方法用于β-淀粉样蛋白检测》一文中研究指出目的:对抗体进行改进,降低传统蛋白质免疫印迹方法的检出限。方法:在传统蛋白质免疫印迹方法的基础上,将一抗和二抗分别与纳米金和氧化石墨烯结合,以提高其对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。结果:优化后的方法对β-淀粉样蛋白的检测限从原来的432 pg/mL降低至16 pg/mL,为原来的1/27。结论:改进后的蛋白质免疫印迹新方法性能稳定,重复性好,可用于生物样本中痕量被检测物的测定。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2014年02期）
王尧尧,税朝祥,方秋红[6]（2007）在《Western印迹中蛋白质定量分析的替代方法》一文中研究指出Western印迹广泛采用显像密度计法对特异性蛋白质表达进行定量,但是仍然存在敏感性的问题尚未解决。同时,昂贵的试剂与复杂的设备限制了其应用。建立了一种改良定量检测法,使用碱性磷酸酶标记的第二抗体,以萘酚磷酸盐和快红作反应底物。吸附膜上的终末显色用有机溶剂洗脱,通过测定光吸收值定量。结果显示该法更简便、快速、经济而不失其敏感性。(本文来源于《细胞生物学杂志》期刊2007年02期）
王乔,程蓓,潘伯群,宋健[7]（2007）在《免疫组化和蛋白质印迹中抗原-抗体反应方法的改进》一文中研究指出免疫组化和蛋白质印迹(Western blotting)是生物医学科研和教学中鉴定目的蛋白表达的最常用手段。二者的原理基本一致,即通过抗原与抗体的特异性免疫反应来检测目的蛋白质。由于抗体的价格昂贵,因此免疫反应的效率是决定实验成本的至关因素。传统的方法是(本文来源于《解剖学杂志》期刊2007年01期）
陈沙力,刘树铮[8]（1997）在《蛋白质酪氨酸磷酸化-免疫沉淀及Western印迹两种方法的比较》一文中研究指出为了深入了解在细胞信息传递中蛋白质酪氨酸磷酸化研究的较佳方法，采用免疫沉淀法及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法对电离辐射诱导的小鼠胸腺细胞蛋白质磷酸化进行了比较分析。免疫沉淀结果表明，照射后１７５００、２２０００、２８０００、３２０００、４００００、４３０００及５３０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果表明，照射后２８０００、３２０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。提示在蛋白质酪氨酸磷酸化的研究中，免疫沉淀法优于Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。(本文来源于《白求恩医科大学学报》期刊1997年06期）
蛋白质印迹方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
分子印迹聚合物(MIP)是具有抗体或酶的专一识别能力的化学合成材料,已在仿生识别、仿生催化和亲和分离等领域获得重要应用。基于分子印迹聚合物的固相萃取是重要的样品处理和样品富集技术,可有效降低样品复杂度并富集待测组分,是处理复杂样品的有效手段。质谱是蛋白质组学
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白质印迹方法论文参考文献
[1].刘震,别子俊,邢荣荣.分子印迹固相萃取-质谱联用方法用于目标蛋白质分析[C].第叁届全国质谱分析学术报告会摘要集.2017
[2].刘震,别子俊,陈阳,潘祥华.分子印迹固相萃取-质谱联用方法用于蛋白质组学及蛋白质分析研究[C].中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集.2015
[3].曾粒.基于直接蓝71免洗脱染色的蛋白质免疫印迹内参方法学研究[D].重庆医科大学.2014
[4].周靖.新型磁性蛋白质印迹材料用于重大疾病早期筛查的分析方法研究[D].宁波大学.2014
[5].冯爱平,扎拉嘎胡,李威,刘英富.高灵敏的蛋白质免疫印迹新方法用于β-淀粉样蛋白检测[J].生物技术通讯.2014
[6].王尧尧,税朝祥,方秋红.Western印迹中蛋白质定量分析的替代方法[J].细胞生物学杂志.2007
[7].王乔,程蓓,潘伯群,宋健.免疫组化和蛋白质印迹中抗原-抗体反应方法的改进[J].解剖学杂志.2007
[8].陈沙力,刘树铮.蛋白质酪氨酸磷酸化-免疫沉淀及Western印迹两种方法的比较[J].白求恩医科大学学报.1997